CN102294015A - 一种用于肿瘤靶向治疗的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明专利涉及一种可用于肿瘤靶向治疗的含有抗肿瘤抗生素-二肽衍生物的药用组合物及其制备方法，属于药物制剂技术领域。该药物组合物是由抗肿瘤抗生素-二肽衍生物、磷脂、稳定剂、有机溶剂、抗氧化剂、表面活性剂、pH值调节剂组成的注射液，如添加赋形剂可以进一步成为注射用冻干粉针。该药物组合物极大地增加了具有靶向抗肿瘤作用的抗肿瘤抗生素-二肽衍生物在水溶液中的溶解性和稳定性，可有效地用于恶性上皮性肿瘤(如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、皮肤黑色素瘤)和其他实体性肿瘤的靶向治疗。

Description

一种用于肿瘤靶向治疗的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，特别是涉及一种用于肿瘤靶向治疗的含有抗肿瘤抗生素-二肽衍生物的药物组合物及其制备方法

背景技术

在目前的肿瘤临床治疗中，抗肿瘤抗生素类药物发挥了极大的作用，特别是蒽环类结构的抗肿瘤抗生素药物，诸多品种已经发展成为肿瘤临床治疗的一线用药，如柔红霉素(Daunorubicin)、多柔比星(Doxorubicin)、表柔比星(Epirubicin)、吡柔比星(Pirarubicin)等。该类蒽环类结构的抗肿瘤抗生素的抗肿瘤作用机制都是直接嵌入DNA双螺旋分子之间，干扰转录过程，阻止mRNA的形成以发挥抗肿瘤作用。但上述蒽环类结构抗肿瘤抗生素药物在发挥显著的抗肿瘤效果的同时，其毒副作用同样显著，主要表现在三个方面：骨髓抑制、胃肠道反应和心脏毒性。这些毒副作用的存在严重地限制了该类药物在临床使用中的剂量及疗程，最终影响到该类药物对肿瘤病人的治疗效果。基于此，致力于规避和降低蒽环类结构抗肿瘤抗生素药物的毒副作用的研究和探索相继开展，如阿霉素的脂质体制剂、阿霉素的化学衍生物等。

在针对降低抗肿瘤药物毒副作用的研究中，前药-靶向释药是一个热门的研究方向，研究者们试图以各种不同的方式来实现一种在正常组织中没有毒副作用的抗肿瘤药物的前药，然后该药物靶向地在肿瘤组织中释放，发挥抗肿瘤活性。如中国专利(00807538.7)公开了一种基于肿瘤间质细胞的成纤维细胞激活蛋白(FAPα)的酶激活式抗肿瘤小分子药物前药设计思路。该思路系将抗肿瘤小分子药物与FPAα蛋白的酶切位点多肽相链接，形成一种抗肿瘤小分子药物的多肽衍生物，该多肽衍生物可在相关肿瘤组织特异地被FAPα所酶切还原，发挥抗肿瘤作用。中国专利(200810026383.4)更进一步公开了一种阿霉素-二肽衍生物的合成与应用方法。该方法基于FAPα的二肽内切酶活性，在阿霉素分子的自由氨基上链接了一个苄基-甘氨酸-脯氨酸二肽基团，获得了一种阿霉素-二肽衍生物，以期实现该化合物靶向抗肿瘤的作用。

根据中国专利(00807538.7)公开的靶向抗肿瘤小分子药物-多肽衍生物的设计思路，为解决抗肿瘤抗生素的毒副作用提供了一个很有意义的方向。目前所有临床使用的抗肿瘤抗生素药物在分子结构上都存在一个自由氨基基团，可以与预期的多肽基团进行缩合反应而形成抗肿瘤抗生素-二肽衍生物。但由此面临的一个问题是，较多的抗肿瘤抗生素药物都是利用其分子结构的氨基与相关无机盐成盐，形成水溶性盐解决制剂的水溶性问题。如盐酸阿霉素、盐酸表柔比星、盐酸吡柔比星等。若该类抗肿瘤抗生素药物分子的自由氨基因衍生反应被封闭后，就不具备成盐的可能，导致所得的抗肿瘤抗生素-二肽衍生物化合物不具备水溶性的尴尬，目前已知的研究文献及专利文献都没有涉及该类新型化合物的药物制剂解决问题。

发明内容

本发明专利创造性地解决了抗肿瘤抗生素-二肽衍生物化合物的制剂水溶性问题，基于本发明专利所公开的药物组合物及其制备方法，可获得一种能用于临床相关肿瘤治疗的注射制剂。

本发明专利所公开的是一种符合式(I)结构的抗肿瘤抗生素-二肽衍生物为主药，包含有磷脂、有机溶剂、抗氧化剂、附加剂、表面活性剂、赋形剂、pH值调节剂的药物组合物；本发明还公开了该药物组合物的制备方法；本发明同时公布了该药物组合物主要用于临床上普遍的恶性上皮性肿瘤，如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、皮肤黑色素瘤的治疗，及其他细胞间质有成纤维细胞激活蛋白(FAP α)表达的实体性肿瘤的治疗。

本发明专利所公开的药物组合物，其主药为抗肿瘤抗生素-二肽衍生物，特别优选蒽环类结构的抗肿瘤抗生素，涉及柔红霉素(Daunorubicin)、多柔比星(Doxorubicin)、表柔比星(Epirubicin)、吡柔比星(Pirarubicin)。这类抗肿瘤抗生素药物都是脂溶性药物，在水溶液中难溶，因此该类药物在临床使用时都是用的其盐酸盐为原料。该类化合物分子结构都含有一个非酰胺键的自由氨基，可以与相关有机酸或无机酸成盐而呈水溶性。但当该类化合物衍生为二肽衍生物后，自由氨基被封闭，使得化合物分子不具备与有机酸或无机酸成盐的可能性，同时，因为蒽环类化合物在碱性条件下不稳定，也不具备与碱性化合物成盐的可能性。因此，只能考虑一种合适的药物组合物及其制备工艺的方式来解决制剂及给药的问题。

磷脂和胆固醇或磷脂与脱氧胆酸的配合往往能形成一种水溶性的微囊或胶束，基于这个原理，本发明专利解决了脂溶性的式(I)机构化合物原料的水溶性制剂问题。

抗肿瘤抗生素主要选自蒽环类结构化合物，特别优选柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、吡柔比星四种化合物；二肽衍生基团特别优选苄基-甘氨酸-脯氨酸基团；因此本专利所公开的药物组合物的原料药特别优选以下四种化合物：

苄基-甘氨酰-脯氨酰-柔红霉素(式III)

苄基-甘氨酰-脯氨酰-阿霉素(式IV)

苄基-甘氨酰-脯氨酰-表柔比星(式V)

苄基-甘氨酰-脯氨酰-吡柔比星(式VI)

磷脂的作用在于其在水溶液环境中的成膜趋势，更明确讲是磷脂中磷脂酰胆碱分子的膜性作用。因此，药物组合物中的磷脂可以是天然磷脂、合成磷脂或两者混合物，更优选磷脂酰胆碱含量不低于80％的磷脂。基于注射制剂对辅料的要求，可满足上述磷脂要求的商品化原料，天然磷脂可以是蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、氢化蛋黄磷脂-PEG₂₀₀₀、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、氢化大豆磷脂-PEG₂₀₀₀中的一种或多种混合物；合成磷脂可以是二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二豆蔻酰酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二硬脂磷脂酰乙醇胺-PEG₂₀₀₀、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-PEG₂₀₀₀、二肉豆蔻酰酰磷脂酰乙醇胺-PEG₂₀₀₀中的一种或多种。

磷脂分子普遍存在不饱和的C＝C双键，因此需要在药物组合物中加入一定量的抗氧化剂来进行保护，抗坏血酸棕榈酸酯、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚、没食子酸内酯、α-生育酚、α-生育酚琥珀酰酯等各脂溶性化合物中的一种都是优选。

配合磷脂酰胆碱形成稳定结构的微囊或胶束需要掺入一定量的胆固醇或脱氧胆酸盐作为稳定剂。

符合注射制剂要求的一些表面活性剂增溶剂的掺入更利于增加药物组合物的水溶解性和稳定性，优选聚乙二醇硬脂酸酯15(Solutol HS15)、泊洛沙姆F68中的一种

药物原料药、磷脂、胆固醇、脱氧胆酸、抗氧化剂等都是脂溶性化合物，因此需要预先溶解在合适的有机溶剂中，考虑注射制剂对辅料的要求，溶解相关药物组合物的有机溶剂可选自乙醇、丙二醇、异丙醇、叔丁醇、甘油、正辛醇、PEG200、PEG300、PEG400、PEG600中的一种或多种。

药物组合物最终需要分散溶解于水相体系中，成为水相体系的注射液或可溶解于水相体系的注射用冻干粉针。因此药物组合物需要掺入调节pH值的盐，可选自氢氧化钠、盐酸、乙酸、乙酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或几种。

药物组合物的冻干制剂需要掺入冻干赋形剂，可选自甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、蔗糖、水解明胶、甘氨酸、甘氨酸钠中的一种，优选甘露醇、右旋糖酐。

基于抗肿瘤抗生素-二肽衍生物、磷脂、有机溶剂、抗氧化剂、稳定剂、表面活性剂、赋形剂、pH值调节剂的药物组合物的制备方法如下：

取处方量的原料药(抗肿瘤抗生素-二肽衍生物)、磷脂、抗氧化剂、稳定剂、表面活性剂，溶解在有机溶剂中，于10℃～50℃充分搅拌溶解。

取处方量的pH值调节剂和赋形剂，溶解在注射用水中。

在搅拌条件下，往有机溶剂相中缓缓加入水相，充分搅拌混匀，施以超声或高压均质处理，0.22μm无菌过滤等半成品溶液。

半成品溶液无菌分装即得注射液成品；半成品溶液分装后置-40℃～-80℃预冻12～24小时，然后在0℃～20℃温度范围内程序性升温进行冷冻干燥48～72小时得注射用冻干粉针；

基于抗肿瘤抗生素-二肽衍生物、磷脂、有机溶剂、抗氧化剂、稳定剂、表面活性剂、赋形剂、pH值调节剂的药物组合物的注射液的各组分重量比例关系如下：

注射液溶液中原料药(抗肿瘤抗生素-二肽衍生物)浓度为0.1～5.0mg/ml，最优浓度为0.5～2.0mg/ml。

注射液中原料药(抗肿瘤抗生素-二肽衍生物)与磷脂的重量比例为1∶1～1∶50，最优选1∶5～1∶20。

注射液中原料药磷脂与稳定剂的重量比例为为1∶10～10∶1，最优选1∶3～3∶1。

注射液中抗氧化剂占药物组合物重量比例为0.01％～0.2％，最优选0.1％。

注射液中表面活性剂聚乙二醇硬脂酸酯15(Solutol HS15)或泊洛沙姆F68占药物组合物重量比例为0％～50％，最优选0.1％～20％。

注射液中pH值调节剂摩尔浓度为0～50mmol/L，最优摩尔浓度为0～20mmol/L，pH值范围为6.0～9.0，最优pH值范围为7.0～8.0。

注射液中不添加赋形剂。

基于抗肿瘤抗生素-二肽衍生物、磷脂、有机溶剂、抗氧化剂、稳定剂、表面活性剂、赋形剂、pH值调节剂的药物组合物的注射用冻干粉针的各组分重量比例关系如下：

冻干制剂半成品溶液中原料药(抗肿瘤抗生素-二肽衍生物)浓度为0.1～5.0mg/ml，最优浓度为0.5～2.0mg/ml。

冻干制剂中原料药(抗肿瘤抗生素-二肽衍生物)与磷脂的重量比例为1∶1～1∶50，最优选1∶5～1∶20。

冻干制剂中原料药磷脂与稳定剂的重量比例为为1∶10～10∶1，最优选1∶3～3∶1。

冻干制剂中抗氧化剂占药物组合物重量比例为0.01％～0.2％，最优选0.1％。

冻干制剂中表面活性剂聚乙二醇硬脂酸酯15(Solutol HS15)或泊洛沙姆F68占药物组合物重量比例为0％～50％，最优选0.1％～20％。

冻干制剂半成品溶液中pH值调节剂摩尔浓度为0～50mmol/L，最优摩尔浓度为0～20mmol/L，pH值范围为6.0～9.0，最优pH值范围为7.0～8.0。

冻干制剂半成品溶液中赋形剂含量(w/w)为0％～10％，最优含量为3％～5％。

本专利所公开的药物组合物的注射液或冻干粉针，制剂规格为每支5～100mg，经生理盐水、葡萄糖溶液、脂肪乳等合适溶液稀释后可用于临床上相关肿瘤的治疗。

本专利所公开的药物组合物的原料药为可被成纤维细胞激活蛋白(FAPα)特异酶解的抗肿瘤抗生素药物的前药，鉴于FAPα广泛表达于恶性上皮性肿瘤和其他实体瘤细胞间质，因此本专利所公开的药物组合物主要用于临床上乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、皮肽黑色素瘤和其他相关实体性肿瘤的治疗

附图说明

图1.Z-GP-Epi高分辨率质谱测定元素组成图谱，测定及解析结果为C₄₂H₄₅N₃O₁₅，与理论设计一致，见实施例1。

图2.Z-GP-Epi冻干曲线，显示产品在72小时内由-45℃程序性升温至25℃，见实施例2。

图3.Z-GP-Epi冻干粉针影响因素考察有关物质分析，在高温和光照条件下，冻干制剂中有关物质没有显著变化，主药色谱峰一致，见实施例3。

图4.Z-GP-Epi对4T1细胞毒性作用的比较，施加Z-GP-Epi组细胞未见明显死亡趋势，但施加Epi组细胞迅速死亡，显示Z-GP-Epi细胞毒性远低于Epi，见实施例4。

图5.Z-GP-Epi对乳腺癌4T1移植瘤模型小鼠体重的影响，见实施例4。

图6.Z-GP-Epi对4T1乳腺癌移相对肿瘤体积(RTV)的影响，(

n＝10)，见实施例4；

图7.Z-GP-Epi对4T1乳腺癌移植瘤小鼠相对肿瘤增殖率(T/C)的影响，见实施例4；

图8.不同处理组小鼠乳腺癌4T1移植瘤的肿瘤病理切片，(HE染色，×100，×400)，A为Z-GP-Epi低剂量；B为Epi低剂量；C为NS对照组，见实施例4。

具体实施方式

实施例1：甘脯酰表柔比星的合成与表征

选用表柔比星(Epi)为抗肿瘤抗生素代表进行实例说明。参照中国专利(00807538.7)所公开的合成思路，以Epi为起始化合物进行苄基-甘氨酰-脯氨酰-表柔比星化合物的(以下简称为甘脯酰表柔比星，简写式为Z-GP-Epi)合成，并对合成的新化合物的结构进行表征分析。

1.Z-GP-Epi的合成反应步骤如下：

(1)苄基-甘氨酰-脯氨酸(Z-Gly-Pro-OH)的合成

固体苄基-甘氨酸(Z-Gly-OH)2.10g，置于100mL圆底烧瓶中，加入25mL丙酮溶解固体，加入1.27g(1.2eq)N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)。2.10g N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于10mL丙酮中，通过滴液漏斗缓慢滴加，1h后撤去冰浴，反应15h(反应过夜)。减压过滤，滤液装入滴液漏斗中。取1.15g脯氨酸(H-Pro-0H)置于100mL圆底烧瓶中，加入10mL蒸馏水溶解固体，加入三乙胺600μL及NaHC030.84g，补加10mL丙酮，缓慢滴加滤液，常温下反应4h。减压蒸去丙酮，用6N HCl调节pH至7.0，加入300mL乙酸乙酯，剧烈搅拌，用2N HCl调节pH至1.5。液体置于分液漏斗中，分出水层；有机层用饱和NaCl溶液萃取，100mL×3。最后分出有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，减压蒸去乙酸乙酯，得米黄色固体。固体再用乙酸乙酯重结晶，最终得白色晶体即为Z-Gly-Pro-OH。结果：得白色固体3.08g，产率75.7％。

(2)琥珀酰化苄基-甘氨酰-脯氨酸(Z-Gly-Pro-Osu)的合成

固体Z-Gly-Pro-OH 275.4mg，置于50mL圆底烧瓶中，加入2mL丙酮溶解固体，加入113.8mg(1.2eq)HOSu，搅拌。185.4mg DCC溶解于4mL丙酮中，通过滴液漏斗缓慢滴加，反应18h(反应过夜)。减压过滤，滤液减压蒸去溶剂，得粗产物。粗产物用乙酸乙酯重结晶，得白色固体即为Z-Gly-Pro-Osu。结果：白色固体335mg，产率92.4％。

(3)Z-Gly-Pro-Dox的合成

表柔比星(Epi)407mg置于50mL圆底烧瓶中，缓慢加入乙醇使固体完全溶解，共计加入4mL乙醇，加入DIEA 24μL(30mg)。室温搅拌。303mg Z-Gly-Pro-OSu溶解于0.5mL乙醇中，缓慢加入反应。TLC监测反应，直至阿霉素斑点不再减弱(约反应5h)，停止反应，减压蒸去DIEA。柱层析分离纯化产物(200～300目硅胶H，甲醇∶乙酸乙酯＝3∶20)即得甘脯酰表柔比星。结果：得到红色粉末380mg，产率61.0％。

2.Z-GP-Epi的结构表征

根据Z-GP-Epi的设计思路，其化合物的结构信息应如式(V)所示：

合成反应所得产物经RP-HPLC纯度测定显示，有关物质低于0.5％，经高分辨率质谱进行元素组成分析显示(图1)，新型化合物分子式为C₄₂H₄₅N₃O₁₅，与Z-GP-Epi理论值完全吻合；ESI(+)测定结果，主峰值为854.27[M+Na]⁺，与Z-Gly-Pro-Epi理论分子量831.29一致。

实施例2：注射用甘脯酰表柔比星冻干粉针的制备、分析及稳定性考察

1.注射用Z-GP-Epi冻干粉针的制备

按以下制剂处方(1)准备原料药与辅料，混匀，充分溶解得有机溶剂相溶液样品；同时按制剂处方(2)准备水相溶液样品。

处方(1)

处方(2)

在搅拌条件下把水相溶液样品缓缓加入有机溶液相样品中，室温搅拌30分钟，间歇性超声处理30分钟，用0.220μm无菌过滤，分装至15ml透明西林瓶中，每支分装10.0ml。

分装后的样品至冻干机中，设置预冻温度为-45℃，预冻时间20小试。然后程序性升温(图2)进行冷冻干燥72小时，压上胶塞，匝盖，得注射用甘脯酰表柔比星冻干粉针。

2.注射用Z-GP-Epi冻干粉针的稳定性影响因素考察

取注射用Z-GP-Epi冻干粉针若干，按化学药稳定性影响因素考察的技术指导原则分别于60℃和光照条件下进行影响因素考察，分别于考察的0天、5天、10天检测三个方面主要质量指标：外观(复溶后溶液澄明度、pH值)、装量、有关物质。检测结果见下表和图3。Z-GP-Epi冻干粉针的稳定性影响因素考察结果显示，在一定高温和光照条件下，Z-GP-Epi主药性质稳定，Z-GP-Epi冻干粉针主要质量标准稳定。

Z-GP-Epi冻干粉针的稳定性影响因素考察结果

实施例3：甘脯酰表柔比星冻干粉针对肿瘤细胞的细胞毒性考察

本试验以FAP α阴性表达的肿瘤细胞株4T1作为细胞模型，考察Epi和Z-GP-Epi对肿瘤细胞的细胞毒性，以了解经Z-GP修饰后Epi的细胞毒性变化。

1.主要材料

表柔比星注射液(浙江海正药业)；注射用Z-GP-Epi冻干粉针；小鼠乳腺癌细胞株4T1(购自中科院上海细胞库)；CCK-8试剂盒(规格200次/盒，购于碧云天公司)；MTT(规格200mg/瓶，购于Sigma)

酶标仪(680型)，由Bio-Rad公司生产；CO₂培养箱(2323-2)，由SHEL-LAB公司生产；倒置生物显微镜(TS-100)，由Nikon公司生产。

2.试验方法

用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基对4T1细胞进行常规培养及传代。将胰酶消化的4T1细胞悬浮液(5000个)以100μL/孔浓度接种于96孔板中，在5％C02及37℃条件培养24h后，按Epi与Z-GP-Epi分别在设定药物浓度范围内(0.01～10μM)设置6个加药浓度梯度：0.01μM、0.1μM、0.5μM、1μM、5μM和10μM，同时设置等体积药物溶媒的空白对照组。经加药处理48h后，采用CCK-8法检测细胞的存活率。

3.试验结果

结果图4所示，在5％CO₂和37℃体外培养条件下，经0.01～10μM Epi处理48h，4T1细胞的存活率呈明显下降趋势，其IC₅₀约为0.43μM。当Epi浓度达到10μM时，4T1细胞的存活率趋近于2.8％。然而，在相同条件下，经10μM Z-GP-Epi处理的4T1细胞，其存活率达到86％，由此可见，Z-GP-Dox对4T1细胞的IC₅₀远大于10μM。上述试验结果明显提示，Epi经修饰成为Z-GP-Epi后细胞毒性非常显著降低。

实施例4：甘脯酰表柔比星冻干粉针对小鼠乳腺癌4T1移植瘤的体内抗肿瘤作用

本试验采用小鼠乳腺癌4T1移植瘤模型，经静脉给药Z-GP-Epi后考察Z-GP-Epi的体内抗乳腺癌肿瘤效应。

1.主要材料

表柔比星注射液(浙江海正药业)；注射用Z-GP-Epi冻干粉针；小鼠乳腺癌细胞株4T1(购自中科院上海细胞库)；BALB/c小鼠(SPF级雌性，18～22g)；C0₂培养箱(2323-2)，由SHEL-LAB公司生产；倒置生物显微镜(TS-100)，由Nikon公司生产。

2.试验方法

取对数生长期的4T1细胞，胰酶消化并制成细胞悬液，调整细胞数为5×10⁶个/mL，将细胞移植至小鼠前肢腋下，每只小鼠接种0.1mL，以建立BALB/c小鼠4T1移植瘤模型。当肿瘤结节形成且可用游标卡尺进行测量时，随机将4T1移植瘤模型小鼠分为Z-GP-Epi高剂量组(27.54μmol/kg)、低剂量组(13.77μmol/kg)，设置等摩尔给药剂量的Epi高低剂量组及生理盐水阴性对照组，每组10只(见下表)。各组均经尾静脉注射给药，连续3周，每周2次。每日观察并记录动物摄食、饮水、活动等一般情况，每周测量瘤体大小及小鼠体重3次，绘制肿瘤生长曲线和体重变化曲线。给药结束后处死动物，剥离瘤块，称取瘤重计算抑瘤率，并取瘤块用10％福尔马林固定以做病理学分析。

Z-GP-Epi体内抗4T1肿瘤试验的剂量设计与分组

3.试验结果

(1)Z-GP-Dox对小鼠乳腺癌4T1移植瘤模型体重的影响

结果如图5所示，与NS对照组相比，高、低剂量Epi组小鼠体重在给药后第4天即呈现显著差异(P＜0.01)。Epi高剂量组小鼠均在给药后14天内全部死亡。而与NS对照组比较，Z-GP-Epi低剂量组小鼠体重无明显的差异(P＞0.05)；Z-GP-Epi高剂量组小鼠体重尽管出现一定程度降低，但与对照组相比无显著性的差异(P＞0.05)。

(2)Z-GP-Dox对小鼠乳腺癌4T1移植瘤模型的抑瘤作用

结果如图6所示，Z-GP-Epi高、低剂量组均表现显著的抑瘤作用，与Epi低剂量组相比，Z-GP-Dox低剂量组的相对肿瘤增殖率无显著差异，可见前体药物Z-GP-Epi具有与Epi相似的抗肿瘤效应。在给药期间(见图7)，Z-GP-Epi高、低剂量组的相对肿瘤增殖率(T/C)均随给药天数增加呈一定下降趋势。且在同一时间点下，Z-GP-Epi高剂量组T/C值均高于低剂量组，显示一定剂量依赖性。给药结束时，Z-GP-Epi高、低剂量的相对肿瘤增殖率分别为25.64％、16.05％，Epi低剂量组的相对肿瘤增殖率为17.49％，提示Z-GP-Epi高剂量组的相对肿瘤增殖率明显优于Dox低剂量组。

(3)Z-GP-Epi对小鼠乳腺癌4T1移植瘤模型的肿瘤病理学观察

如图8所示，与NS对照组相比，Z-GP-Epi低剂量和Epi低剂量组均对4T1整体肿瘤具有不同程度的破坏作用。进一步比较等摩尔Z-GP-Epi与Epi对整体肿瘤的病理学影响(见下表)，与Epi和对照组，Z-GP-Epi对肿瘤组织表现为显著破坏肿瘤组织周围的薄膜包裹。

不同处理组小鼠乳腺癌4T1移植瘤的病理学表现

综上所述，Z-GP-Epi对FAPα阳性的小鼠乳腺癌4T1移植瘤增殖生长具有显著的抑制作用，其作用与原药Epi相当。而且由病理学观察发现，与Epi相比，Z-GP-Epi对移植瘤组织膜有明显破坏作用，提示其对肿瘤间质存在的靶向破坏性。

Claims (17)

1.一种可供注射的药物组合物，该组合物由抗肿瘤抗生素-二肽衍生物、磷脂、稳定剂、抗氧化剂、有机溶剂、表面活性剂、pH值调节剂、赋形剂组成。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于抗肿瘤抗生素-二肽衍生物是满足式(I)结构的化合物：

其中R₁是代表选自苄氧羰基、苯乙酰基、苯甲磺酰基和苄氨羰基中的一个封端基；R₂是代表选自-H、-CH₃和-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-NH₂中的一个基团；-NH-Abt是代表选至放线菌素D、丝裂霉素、平阳霉素、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、吡柔比星等分子结构中含有自由氨基的抗肿瘤抗生素分子的残基；R1最优选自式(II)化合物的基团；R2最优选自-H；-NH-Abt最优选自式柔红霉素(Daunorubicin)、多柔比星(Doxorubicin)、表柔比星(Epirubicin)、吡柔比星(Pirarubicin)中的一种的基团。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于抗肿瘤抗生素-二肽衍生物，最优选自式(III)、(IV)、(V)、(VI)的化合物。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于磷脂选自天然磷脂、合成磷脂或其混合物；最优选磷脂酰胆碱含量不低于80％的天然磷脂、合成磷脂或其混合物。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于天然磷脂选自蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、氢化蛋黄磷脂-PEG₂₀₀₀、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、氢化大豆磷脂-PEG₂₀₀₀中的一种或多种混合物；合成磷脂选自二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二豆蔻酰酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二硬脂磷脂酰乙醇胺-PEG₂₀₀₀、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-PEG₂₀₀₀、二肉豆蔻酰酰磷脂酰乙醇胺-PEG₂₀₀₀中的一种或多种，式(I)化合物与磷脂的重量比为1∶1～1∶50，最优选1∶5～1∶20。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于有机溶剂选自乙醇、丙二醇、异丙醇、叔丁醇、甘油、正辛醇、PEG200、PEG300、PEG400、PEG600中的一种或多种，式(I)化合物与有机溶剂的重量比为1∶20～1∶500，最优选1∶70～1∶200。

7.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于抗氧化剂选自抗坏血酸棕榈酸酯、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚、没食子酸内酯、α-生育酚、α-生育酚琥珀酰酯中的一种，抗氧化剂在药物组合物中的重量为0.01％～0.2％。

8.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在稳定剂选自胆固醇、脱氧胆酸钠中的一种或几种，稳定剂与磷脂的重量比为1∶10～10∶1，最优选1∶3～3∶1。

9.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在表面活性剂选自聚乙二醇硬脂酸酯15(Solutol HS15)、泊洛沙姆F68中的一种，表面活性剂在药物组合物中的重量为0％～50％，最优选0.1％～20％。

10.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在赋形剂选自甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、蔗糖、水解明胶、甘氨酸、甘氨酸钠中的一种。

11.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在pH值调节剂选自下列中的一种或几种：氢氧化钠、盐酸、乙酸、乙酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠。

12.一种含有权利要求1所述的药物组合物的注射剂的制备方法，其特征在于将权利要求2、4、7、8、9所述各组分加入到权利要求6所述的有机溶剂中，于10℃～50℃充分搅拌溶解。

13.一种含有权利要求1所述的药物组合物的注射剂的制备方法，，其特征在于将权利要求10、11所述各组分用注射用水溶解中，其中赋形剂含量(w/w)为0％～10％，最优含量为3％～5％；pH值调节剂摩尔浓度为0～50mmol/L，最优摩尔浓度为0～20mmol/L，pH值范围为6.0～9.0，最优pH值范围为7.0～8.0。

14.一种含有权利要求1所述的药物组合物的注射剂的制备方法，其特征在于将权利要求13所述水溶液缓慢加入权利要求12所述的有机溶剂体系中，使权利要求2所述式(I)结构化合物的浓度为0.1～5.0mg/ml，最优浓度为0.5～2.0mg/ml，经过搅拌、超声或高压均质处理后，0.22μm无菌过滤、分装得式(I)结构化合物注射液，制剂规格为每支5～100mg，临床使用时用生理盐水、葡萄糖溶液、脂肪乳等稀释后进行静脉滴注。

15.一种含有权利要求1所述的药物组合物的注射剂的制备方法，，其特征在于还可以将权利要求14所述的注射液溶液分装，置-40℃～-80℃预冻12～24小时，然后在0℃～20℃温度范围内程序性升温进行冷冻干燥48～72小时得式(I)结构化合物注射用冻干粉针，制剂规格为每支5～100mg，临床使用时用注射用水复溶，再用生理盐水、葡萄糖溶液、脂肪乳等稀释后进行静脉滴注。

16.一种权利要求1所述的药物组合物，该药物在正常组织中没有细胞毒性，到达细胞间质有成纤维细胞激活蛋白(FAP α)表达的肿瘤组织部位因FAP α的特异酶切作用而释放对应的抗肿瘤抗生素，实现低毒和靶向抗肿瘤效果。

17.一种权利要求1所述的药物组合物，临床上可用于普遍的恶性上皮性肿瘤，如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、皮肤黑色素瘤的治疗，及其他细胞间质有成纤维细胞激活蛋白(FAP α)表达的实体性肿瘤的治疗。

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