CN102526038A - 替莫唑胺的脑靶向药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了替莫唑胺的药物组合物及其应用，本发明的药物组合物包含治疗有效量的替莫唑胺、吸收促进剂、和药用载体。本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的替莫唑胺、稳定剂、和药用载体。本发明进一步提供了本发明药物组合物在制备用于鼻腔给药的药物中的用途。本发明的组合物可用作鼻粉剂。本发明的替莫唑胺鼻粉剂是由替莫唑胺与药用载体、以及稳定剂和或吸收促进剂组成，通过鼻粘膜吸收到达脑部治疗脑肿瘤的制剂。

Description

替莫唑胺的脑靶向药物组合物及其应用

技术领域

本发明属医药技术领域，更具体地说，涉及替莫唑胺的脑靶向粉末药物组合物及其应用。本发明的粉末组合物制成鼻粉剂，经鼻腔黏膜吸收达到替莫唑胺的脑靶向给药。

背景技术

成人原发性脑肿瘤中有60％以上为脑胶质瘤、恶性黑色素瘤。这是一类危害性极大的恶性肿瘤，发病率高、死亡率也高，从最初诊断开始计算的存活期仅为9-12个月。它使病人丧失多种功能，如运动障碍、癫痫、视觉障碍、语言障碍等，生活质量极差。病人尽管经手术、放疗和化疗治疗，但病人几乎无一例外地会出现肿瘤复发。

替莫唑胺(temozolomide，TMZ)是由英国癌症研究战略技术公司开发，并由Schering-Plough公司生产，是一类称之为咪唑四嗪新型物质的第一个化合物，口服的细胞毒性烷化剂，其口服后可被完全吸收，组织分布好，可透过血脑屏障，生物利用度高，是用于治疗经常规治疗后病情出现发展或复发的恶性神经胶质瘤及作为已转移的晚期黑素瘤的一线治疗药物。

替莫唑胺为白色或浅棕色或淡粉色粉末，无臭，微溶于水和二甲基亚砜，溶于热水。在pH＜5的条件下稳定，在pH＞7时易分解。替莫唑胺胶囊剂及其注射用冻干粉针剂分别于1999年和2009年通过FDA批准在美国上市。目前中国市售仅有替莫唑胺的胶囊剂，其服用剂量大，可产生致癌、致畸及生殖器官毒性，且治疗成本昂贵，给患者经济和身心上带来沉重的负担。

替莫唑胺市售剂型为胶囊剂、冻干粉针剂，有关替莫唑胺其他剂型的研究根据公开的文献报道中主要有如下几种：替莫唑胺聚乳酸纳米微球(中国专利CN200610161653.3)、替莫唑胺缓释植入剂(中国专利CN200710203056.7)、替莫唑胺控释给药系统(中国专利CN03134852.1)、替莫唑胺多聚体局部缓释药(中国专利CN200410043908.7)、替莫唑胺脑部缓释植入剂(中国专利200510024953.2)及替莫唑胺脂质体、分散片等，以上剂型实用性差、成本昂贵、不利于工业化生产、且患者使用不便。

替莫唑胺的直接作用部位是脑部，而鼻腔给药与其他给药方式相比，是无侵入性地将药物导入脑脊液，使得达到脑部的药物浓度增大，降低了药物对周围器官的毒副作用，这一非侵入性给药方法更简单、安全、生物利用度高、节省费用、患者顺应性好。

目前脑靶向常采用如下三种方式来实现：(1)破坏血脑屏障，一般通过颈动脉中注射甘露醇溶液来实现。(2)脑室内给药，应用一种植入头皮内的塑料贮库式药物，通过导管从脑部的开口进入脑室内并释放。(3)鼻腔给药，如果经鼻腔给予足够剂量的药物，药物通过嗅球神经直接吸收经神经细胞进入到大脑或脑脊液中，绕过血脑屏障，从而达到高集聚于脑部的药物实现靶向性的治疗。

鼻腔给药不仅可以用于鼻腔局部疾病的治疗，药物还能通过鼻腔发挥全身作用。近年来研究发现，鼻腔给药可为脑部疾病治疗提供有效的给药途径，它与其他方法如脑室给药相比，是无侵入性地将药物导入脑脊液，其给药方法方便、快捷、吸收迅速，生物利用度高，患者顺应性好。对于目标受体位于中枢神经系统，且疗效与脑功能有关的药物及在常规给药途径下脑内浓度极低的药物，优势显著。然而本领域技术人员清楚，并非所有的药物都适合于鼻腔给药，不同的药物经鼻给药后的吸收情况并无规律可循。鼻腔给药在药物吸收方面以及药物的理化性质例如稳定性等方面是非常令人关注的。

本领域仍然需要有适用于替莫唑胺的新治疗方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种质量稳定、吸收快、具有脑靶向作用、毒副作用小、和/或使用方便的替莫唑胺的药物组合物，其特别是可以通过鼻粘膜给药，例如以鼻粉剂的形式给药。

发明人经研究现已发现，一方面，替莫唑胺与吸收促进剂组合用于鼻腔给药可以获得良好的吸收效果；另一方面，替莫唑胺与稳定剂组合可以提高药物组合物的稳定性。本发明基于上述发现而得以完成。

发明概述：

本发明第一方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的替莫唑胺、吸收促进剂、和药用载体。

本发明第二方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的替莫唑胺、稳定剂、和药用载体。

本发明第三方面提供了替莫唑胺或者本发明药物组合物在制备用于鼻腔给药的药物中的用途。

发明详述：

本发明第一方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的替莫唑胺、吸收促进剂、和药用载体。根据本发明，该药物组合物是脑靶向给药的药物组合物。根据本发明，该药物组合物是经鼻给药的药物组合物。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其包含5～60wt％替莫唑胺、1～25wt％的吸收促进剂、和药用载体。在本发明中，所述的药用载体可以是以用于平衡该药物组合物至100％全量的量加入的，亦可称为平衡量或余量，即是在替莫唑胺和吸收促进剂以及任选的其它辅料计入到组合物中之后，再加入药用载体，以便使组合物的总量到达100wt％。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其包含20～60wt％替莫唑胺、1～15wt％的吸收促进剂、和药用载体。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其包含30～60wt％替莫唑胺、1～10wt％的吸收促进剂、和药用载体。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其还包含稳定剂。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其包含5～60wt％替莫唑胺、1～25wt％的吸收促进剂、1～10wt％的稳定剂、和药用载体。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其包含20～60wt％替莫唑胺、1～15wt％的吸收促进剂、1～5wt％的稳定剂、和药用载体。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其包含30～60wt％替莫唑胺、1～10wt％的吸收促进剂、1～3wt％的稳定剂、和药用载体。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其为粉末组合物，并且该粉末的颗粒粒径为60-250μm，优选100-250μm，优选150-250μm。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其中所述的吸收促进剂是选自下列的一种或多种：(1)α、β、γ-环糊精的环糊精类和取代的环糊精类(如α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精等)；(2)胆酸盐类：例如甘胆酸盐、胆酸盐、去氧胆酸盐等(3)金属离子螯合物类：乙二胺四乙酸钠、水杨酸盐等。在一个实施方案中，所述的吸收促进剂是β-环糊精和取代的β-环糊精(例如β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精)。在一个实施方案中，所述的吸收促进剂是选自下列的一种或多种：β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其中所述的药用载体选自：乳糖、甘露醇、微晶纤维素、氯化钠、葡萄糖。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其中所述的稳定剂是有机酸或其盐。在一个实施方案中，所述的稳定剂是选自下列的一种或多种：柠檬酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸钠。在一个实施方案中，所述的稳定剂用量为1％～10％，优选用量为1～3％。

根据本发明第一方面任一项的药物组合物，其为鼻粉剂，其中所述的鼻粉剂含5～300mg(例如约20mg)替莫唑胺/单位剂量。

本发明第二方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的替莫唑胺、稳定剂、和药用载体。根据本发明第二方面，该药物组合物是脑靶向给药的药物组合物。根据本发明，该药物组合物是经鼻给药的药物组合物。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其包含5～60wt％替莫唑胺、1～10wt％的稳定剂、和药用载体。在本发明中，所述的药用载体可以是以用于平衡该药物组合物至100％全量的量加入的，亦可称为平衡量或余量，即是在替莫唑胺和吸收促进剂以及任选的其它辅料计入到组合物中之后，再加入药用载体，以便使组合物的总量到达100wt％。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其包含20～60wt％替莫唑胺、1～5wt％的稳定剂、和药用载体。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其包含30～60wt％替莫唑胺、1～3wt％的稳定剂、和药用载体。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其还包含吸收促进剂。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其包含5～60wt％替莫唑胺、1～25wt％的吸收促进剂、1～10wt％的稳定剂、和药用载体。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其包含20～60wt％替莫唑胺、1～15wt％的吸收促进剂、1～5wt％的稳定剂、和药用载体。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其包含30～60wt％替莫唑胺、1～10wt％的吸收促进剂、1～3wt％的稳定剂、和药用载体。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其为粉末组合物，并且该粉末的颗粒粒径为60-250μm，优选100-250μm，优选150-250μm。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其中所述的稳定剂是有机酸或其盐。在一个实施方案中，所述的稳定剂是选自下列的一种或多种：柠檬酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸钠。在一个实施方案中，所述的稳定剂用量为1％～10％，优选用量为1～3％。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其中所述的吸收促进剂是选自下列的一种或多种：(1)α、β、γ-环糊精的环糊精类和取代的环糊精类(如α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精等)；(2)胆酸盐类：例如甘胆酸盐、胆酸盐、去氧胆酸盐等(3)金属离子螯合物类：乙二胺四乙酸钠、水杨酸盐等。在一个实施方案中，所述的吸收促进剂是β-环糊精和取代的β-环糊精(例如β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精)。在一个实施方案中，所述的吸收促进剂是选自下列的一种或多种：β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其中所述的药用载体选自：乳糖、甘露醇、微晶纤维素、氯化钠、葡萄糖、环糊精类(例如α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精)。在一个实施方案中，所述的药用载体为乳糖或甘露醇或羟丙基-β-环糊精或其组合。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其为鼻粉剂，其中所述的鼻粉剂含5～300mg(例如约20mg)替莫唑胺/单位剂量。

根据本发明第二方面任一项的药物组合物，其具有如实施例所述的配方组成。在一个实施方案中，所述药物组合物中包含20重量份的替莫唑胺细粉、16重量份的乳糖、3重量份的羟丙基-β-环糊精、和1重量份的稳定剂。在一个实施方案中，所述药物组合物中包含20重量份的替莫唑胺细粉、18重量份的乳糖、1重量份的β-环糊精、和0.5g重量份的稳定剂。在一个实施方案中，所述药物组合物中包含15重量份的替莫唑胺细粉、24重量份的羟丙基-β-环糊精、和0.5g重量份的稳定剂。在一个实施方案中，所述稳定剂是枸橼酸。

本发明第三方面提供了替莫唑胺，或者本发明第一方面任一项所述的药物组合物，或者本发明第二方面任一项所述的药物组合物在制备用于鼻腔给药的药物中的用途。本发明第三方面提供了替莫唑胺，或者本发明第一方面任一项所述的药物组合物，或者本发明第二方面任一项所述的药物组合物在制备用于脑靶向给药的药物中的用途。

根据本发明第三方面的用途，其中所述药物是鼻粉剂。

根据本发明第三方面的用途，其中所述药物每单位剂量含替莫唑胺的量为5～300mg(例如约20mg)。

在本发明的任一方面，例如在本发明的第一方面，其中任意两个或更多个实施方案之间所具有的特征可以相互组合，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间组合时，必要的话可对相应特征作适当修饰。

下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

如本文所述的，术语“药物组合物”，其还可以是指组合物，可用于在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症或不良健康状况。

在本发明中，如未另外指明，％是指重量/重量的百分数。对于本发明配方而言，如果未另外说明，以％表示的配方可以用药用载体来平衡至100％的量。

本发明提供了一种由替莫唑胺与药用载体及稳定剂、吸收促进剂组成的，通过鼻粘膜吸收到达脑部治疗脑肿瘤的鼻粉剂及其制备方法。

实验通过比较含不同稳定剂的鼻粉剂处方在高温(60℃)高湿(25℃，RH92.5％)及光照(4500Lx)条件下放置10天的含量变化及各种稳定剂在高湿(25℃，RH92.5％)条件下的吸湿性，筛选出了稳定性最好的替莫唑胺鼻粉剂处方。

实验通过比较不同种类的吸收促进剂及其用量对替莫唑胺经离体羊鼻粘膜的促渗作用的影响，筛选出促渗效果最好的吸收促进剂。

实验中发现，羟丙基-β-环糊精和β-环糊精均对替莫唑胺有促渗作用，与未加促渗剂的处方相比，分别增加了1.66倍和1.18倍，因此选择羟丙基-β-环糊精或β-环糊精为吸收促进剂，其用量为1％～25％。此外，在本发明的一个实施方案中，所述的药用载体可以是羟丙基-β-环糊精，此时羟丙基-β-环糊精同时具备吸收促进剂和药用载体的作用。

与药用载体、稳定剂、吸收促进剂组成新的鼻腔给药的鼻粉剂，本发明的药物组合物例如鼻粉剂与已知的替莫唑胺药物制剂相比，具有吸收快、脑靶向性、使用方便、顺应性好、毒副作用低、和/或稳定性好的特点。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。

A、制备实施例部分

实施例1：替莫唑胺粉末组合物的制备

称取已粉碎过120目筛的替莫唑胺细粉30g，备用。另将精密称取且粉碎过120目的乳糖65g，羟丙基-β-环糊精3.5g，柠檬酸1.5g，备用。将替莫唑胺与乳糖、羟丙基-β-环糊精、稳定剂采用等量递增法混合均匀，研磨，再次过200目筛3次，得本发明的替莫唑胺粉末组合物，可用作替莫唑胺鼻粉剂例如分装在胶囊中或者分装在带有粉末定量阀的容器中。测得颗粒平均粒度185微米。

实施例2：替莫唑胺粉末组合物的制备

称取已粉碎过120目筛的替莫唑胺细粉60g，备用。另将精密称取且粉碎过100目的乳糖38g，β-环糊精1g，酒石酸1g，备用。将替莫唑胺与乳糖、β-环糊精、稳定剂采用等量递增法混合均匀，研磨，再次过200目筛3次，得本发明的替莫唑胺粉末组合物，可用作替莫唑胺鼻粉剂例如分装在胶囊中或者分装在带有粉末定量阀的容器中。测得颗粒平均粒度215微米。

实施例3：替莫唑胺粉末组合物的制备

称取已粉碎过140目筛的替莫唑胺细粉45g，备用。另将精密称取且粉碎过140目的甘露醇42g，羟丙基-β-环糊精10g，柠檬酸3g，备用。将替莫唑胺与羟丙基-β-环糊精、稳定剂采用等量递增法混合均匀，研磨，再次过200目筛3次，得本发明的替莫唑胺粉末组合物，可用作替莫唑胺鼻粉剂，例如分装在胶囊中或者分装在带有粉末定量阀的容器中。测得颗粒平均粒度185微米。

实施例4：替莫唑胺粉末组合物的制备

参考实施例1方法制备，配方组成为：替莫唑胺细粉40g、二甲基-β-环糊精8g、苹果酸2g、乳糖加至100g。

实施例5：替莫唑胺粉末组合物的制备

参考实施例1方法制备，配方组成为：替莫唑胺细粉50g、羟丙基-β-环糊精3g、马来酸2g、乳糖加至100g。

实施例6：替莫唑胺粉末组合物的制备

参考实施例1方法制备，配方组成为：替莫唑胺细粉45g、磺丁基醚-β-环糊精6g、柠檬酸2g、甘露醇加至100g。

对照例1：除了将柠檬酸改为柠檬酸钠外，其它与实施例1相同，制得替莫唑胺粉末组合物。

对照例2：除了将β-环糊精替换为去氧胆酸钠外，其它与实施例2相同，制得替莫唑胺粉末组合物。

对照例3：除了不用柠檬酸外，其它与实施例3相同，制得替莫唑胺粉末组合物。

对照例4：除了将苹果酸改为苹果酸钠外，其它与实施例4相同，制得替莫唑胺粉末组合物。

对照例5：除了将马来酸改为磷酸二氢钠外，其它与实施例5相同，制得替莫唑胺粉末组合物。

对照例6：除了不用柠檬酸外，其它与实施例6相同，制得替莫唑胺粉末组合物。

B、实验例部分

实验例1：实施例1、2、3制剂对鼻腔纤毛的影响

本发明以纤毛持续运动时间为指标，通过离体蟾蜍上颚实验考察了实施例1、2、3替莫唑胺鼻粉剂给药系统的鼻纤毛毒性。实验结果显示：三个制剂样品对纤毛运动有一定影响，但经生理盐水淋洗后，纤毛均可恢复摆动，且摆动时间较长，说明对纤毛的毒性是可逆的。

实验例2：实施例1制剂鼻腔给药药效学实验

参考以下文献进行：张煜辉，岳志健，刘建民等.替莫唑胺缓释微球局部植入治疗大鼠脑胶质瘤的疗效[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2009，16(4)：396-400。

SD大鼠C6脑胶质瘤模型的建立：C6胶质瘤细胞以含10％小牛血清的DMEM液培养。手术前12小时大鼠禁食和水，用3％戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉后，俯卧位固定于立体定向仪上，沿头皮正中略偏右纵向切开头皮，暴露前囟和矢状缝。于前囟前1mm、矢状缝右旁开3mm处，用牙钻钻一骨孔，深达硬脑膜表面而不损及脑组织。用静脉注射套管针抽取50μLC₆细胞混悬液，垂直固定于立体定向仪上，经骨孔垂直于颅骨板进针6mm，回退1mm，待细胞基本沉淀后，缓慢注射10μLC₆细胞混悬液，注射时间10分钟，注射完毕后，留置15分钟，拔出内芯，再留置5分钟，塞住套管口，缓慢拔出套管，缝合头皮。肌注青霉素1万U。

实验方法：接种C6胶质瘤细胞后观察大鼠活动，6d后将80只SD大鼠随机分为4组，每组20只。分组具体如下：(1)假手术组：切除肿瘤组织表面脑组织。(2)替莫唑胺灌胃组：切除肿瘤组织表面脑组织，每天50mg/kg替莫唑胺(用实施例1的配方加水溶解、过滤配制而成)灌胃给药连续5d。(3)替莫唑胺静脉注射组：切除肿瘤组织表面脑组织，每天50mg/kg替莫唑胺(用实施例1的配方加水溶解、无菌过滤配制而成)静脉注射连续5d。(4)替莫唑胺鼻腔给药组：切除肿瘤组织表面脑组织，每天100mg/mL TMZ的混悬液(用实施例1配制成)鼻腔给药100μL，连续5d。分组后各组进行相应的治疗，治疗14d后。行冠状面和矢状面T1WI和增强扫描，扫描后各组处死10只，剩余10只用于观察生存期。结果显示，各试验组造模成功，灌胃组和静脉注射组的生存期分别为16.5天和19.3天，与生存期为26.7天的鼻腔给药组相比有显著差异p＜0.05。

实验例3：实施例3制剂鼻腔给药药动学实验

参考以下文献进行：张奇志.尼莫地平鼻腔给药的脑内递药特性研究.上海复旦大学博士毕业论文，2003，P11-12、P25-26。

实验方法：将SD大鼠随机分为3组，空腹8h，鼻腔、静脉给药组称重后，按1.2g/kg腹腔注射20％乌拉坦进行麻醉，将大鼠仰卧，作气管插管，并暴露小脑延髓池以备抽取CSF。手术完成后约15min分别进行鼻腔、静注(两种给药方式所用试药均使用实施例3的配方)给药实验，剂量均为50mg/kg。于5、10、15、30、45min、和1、1.5、2、3、4、6、8h采集CSF，随后立即处死大鼠，断头，收集血样和分离脑组织，血浆、CSF和脑组织置于-20℃储存备用，48h内测定。每个时间点重复做4只大鼠。灌胃组大鼠因不抽取CSF，故不麻醉直接灌注药液，剂量50mg/kg。于上述相同时间尾静脉取血和分离脑组织。

血液样品预处理：取0.5mL酸化血浆，加入提取溶剂乙酸乙酯3mL，涡旋混合1min，往复振荡10min，离心5min，分取上层液于另一试管中，40℃氮气流下吹干，残留物加入200μL流动相溶解，涡旋混合，取20μL注入色谱仪。脑脊液样品预处理：取酸化脑脊液0.2mL，加入提取溶剂乙酸乙酯1.5mL，涡旋混合1min，往复振荡10min，离心5min，分取上层液于另一试管中，40℃氮气流下吹干，残留物加入100μL流动相溶解，涡旋混合，取20μL注入色谱仪。脑组织样品预处理：从低温冰箱取出待测脑组织，放置于室温，解冻，以脑组织：生理盐水＝1∶2(w/v)的比例匀浆。取0.4mL脑匀浆，加入提取溶剂乙酸乙酯1.5mL，涡旋混合1min，往复振荡10min，离心5min，分取上层液于另一试管中，40℃氮气流下吹干，残留物加入200μL流动相溶解，涡旋混合，取20μL注入色谱仪。结果显示，在脑脊液和脑组织两种组织中的替莫唑胺浓度，鼻给药组均显著高于静注给药组(p＜0.05)；而对于血液中的替莫唑胺浓度，两种给药方式无明显区别。

实验例4.稳定性考察

取实施例1～6的试样和对照例1～6的试药，封装在安瓿瓶中，在50℃烘箱中放置1个月后，测定各样品在加热处理1月时与其未经加热处理时粉末中的活性成分的残余率(％)。结果显示，实施例1～6的试样残余率均在94～98％之间的范围内，而对照例1～6的试样残余率均在82～88％之间的范围内。例如实施例1的残余率为97.1％，而对照例1的残余率为86.2％；实施例3的残余率为98.6％，而对照例3的残余率为83.7％。此外，各对照例样品与其相似的相应实施例配方样品的残余率相比均至少低6％。

实验例5：替莫唑胺鼻腔脑靶向对大鼠体内抗脑胶质瘤效应的研究

本研究目的是替莫唑胺鼻腔脑靶向在大鼠体内的抗脑胶质瘤效应进行评价。为了评价该系统对脑胶质瘤的治疗效果，本研究建立了荷脑胶质瘤的Wistar大鼠模型，进行生存曲线实验，肿瘤体积抑制率实验以及肿瘤HE染色常规病理检查。各试验所用替莫唑胺试药均是替莫唑胺原料药，必要时用生理盐水溶解/混悬制成。

1、实验材料与仪器

鼠脑胶质瘤C6细胞系购自中国医学科学院药物所；马血清购自北京拜尔迪生物科技有限公司；胎牛血清(FBS)购自中美合资兰州民海生物工程有限公司；Ham’s F10培养基以及双抗均购自GIBCO/BRL公司(Germany)北京代理迈晨科技有限公司；脑立体定位仪购自深圳瑞沃德生命科技有限公司。健康雄性Wistar大鼠(200±10％g)购自军事医学科学院实验动物中心。所有动物实验均按照国际动物实验的指导标准进行。

2、实验方法

(1)荷脑胶质瘤Wistar大鼠模型的建立

在实验前，雄性Wistar大鼠首先适应生存环境7天，并给与标准的鼠粮和饮水。室温和相对湿度分别保持在25℃和50％。

为了构建荷脑胶质瘤大鼠模型，所有的实验用Wistar大鼠均用20％乌拉坦(0.6ml/100g)腹腔注射麻醉后，去头顶毛发并将其固定于脑立体定位仪上，用酒精消毒。沿内眦连线中点向后纵向切开头皮暴露出颅骨。利用大鼠脑立体定位仪确定植入肿瘤的立体定位靶点：前囟后1.0mm，矢状缝旁侧3.5mm，硬膜下深5.0mm。

待植入的肿瘤细胞液的细胞处于对数生长期，其细胞浓度为每10μl含1×10⁶个脑胶质瘤C6细胞，将细胞悬液放入37℃水浴保存。使用20uL微量注射器吸入10ul含1×10⁶个脑胶质瘤C6细胞的细胞悬液，垂直进针深5mm(距硬脑膜)，以1μl/min速率将细胞悬液注入靶区。注射完毕后留针5min，缓慢拔针，骨孔立即用无菌骨蜡封闭，术后切口用线逢合。

(2)荷脑胶质瘤Wistar大鼠的常规观察

术后的Wistar大鼠每两天测体重一次，定时检查其生理行为，观察有无病理反应，比如有无偏瘫、苍老和癫痫发作，同时进食减少伴饮水增多，体重逐渐减轻等。

(3)荷脑胶质瘤Wistar大鼠的生存曲线实验

在术后一周后，部分Wistar大鼠用于做生存曲线实验。将大鼠分为四组，每组10只。四组Wistar大鼠分别进行尾静脉给药，给药量为每千克大鼠给50mg替莫唑胺，生理盐水组(作为空白对照)，口服灌胃给药替莫唑胺每千克大鼠给50mg(0.1ml混悬液)组，替莫唑胺鼻腔给药组每千克大鼠给50mg(0.1ml混悬液)，每天给药一次，持续给药5次。定时记录大鼠的体重，生理行为以及是否死亡，从而绘制出各给药组的Wistar大鼠的生存曲线。

(4)荷脑胶质瘤Wistar大鼠的肿瘤体积抑制率实验

在术后一周后，部分Wistar大鼠用于做肿瘤体积抑制率实验。将大鼠分为六组，每组三只。给药方案同生存曲线实验。在术后第16天，所有的Wistar大鼠被处死，采用4％PBS多聚甲醛液固定并解剖出肿瘤，固定一天。用游标卡尺测量解剖的完整肿瘤最大层面直径，从而计算出肿瘤的体积。其计算公式为：

V(体积，mm³)＝d₁(mm)×d₂(mm)×d₃(mm)，其中d₁是肿瘤的最大前后径，d₂是肿瘤的最大左右径，d₃是肿瘤的最大上下径。脑肿瘤体积的抑制率是利用各制剂组的肿瘤体积大小与生理盐水组(空白对照组)的肿瘤体积大小进行比较得到的，其公式如下：

(5)荷脑胶质瘤Wistar大鼠肿瘤HE染色常规病理检查

取上述大鼠全脑，沿肿瘤中心做冠状切面，固定于4％PBS多聚甲醛液，取材后作4mm冠状切片，然后进行常规脱水，石蜡包埋，连续切片并进行HE染色。

3、实验结果

(1)荷脑胶质瘤Wistar大鼠的生存曲线实验

在连续5次给药后，各替莫唑胺组的Wistar大鼠的生存曲线。结果显示，各组的大鼠生存时间分别是：生理盐水组(作为空白对照)为9-16天，口服灌胃给药替莫唑胺13-18天，替莫唑胺鼻腔给药组为18-27天，尾静脉给药组为15-21天。而各组的平均存活时间结果显示，替莫唑胺鼻腔给药组(23天)显著地长于生理盐水组(12天，P＝0.001)，灌胃给药替莫唑胺组(15天，P＝0.002)，尾静脉给药组(18天，P＝0.016)。

(2)荷脑胶质瘤Wistar大鼠的肿瘤体积抑制率实验

结果显示，在术后第16天，各实验组的Wistar大鼠的肿瘤体积抑制率分别为：灌胃给药替莫唑胺组为36.8±5.8％，尾静脉给药组为46.8±4.8％，替莫唑胺鼻腔给药组为62.3±2.8％。结果证明了与其他组相比，替莫唑胺鼻腔给药组显示了最强的抑制Wistar大鼠模型的脑肿瘤体积的作用。

(3)荷脑胶质瘤Wistar大鼠肿瘤HE染色常规病理检查

对接种过脑胶质瘤C6细胞的Wistar大鼠脑部进行解剖，可见有肿瘤团块形成。对该肿瘤进行HE染色，结果显示，HE切片在光镜下可清晰看见脑胶质瘤C6细胞较正常组织细胞(密集成群，并向脑组织呈侵袭性生长，符合胶质瘤的形态特征。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其包含治疗有效量的替莫唑胺、吸收促进剂、和药用载体。

2.权利要求1的药物组合物，其包含5～60wt％替莫唑胺、1～25wt％的吸收促进剂、和药用载体。

3.权利要求1-2任一项的药物组合物，其还包含稳定剂；优选地，该药物组合物含有1～10wt％、1～5wt％、或1～3wt％的稳定剂。

4.一种药物组合物，其包含治疗有效量的替莫唑胺、稳定剂、和药用载体。

5.权利要求4的药物组合物，其包含5～60wt％替莫唑胺、1～10wt％的稳定剂、和药用载体。

6.权利要求4-5任一项的药物组合物，其还包含吸收促进剂；优选地，该药物组合物含有1～25wt％、1～15wt％、或1～10wt％的吸收促进剂。

7.权利要求1-6任一项的药物组合物，其中所述的吸收促进剂是选自下列的一种或多种：(1)α、β、γ-环糊精的环糊精类和取代的环糊精类(如α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精等)；(2)胆酸盐类：例如甘胆酸盐、胆酸盐、去氧胆酸盐等(3)金属离子螯合物类：乙二胺四乙酸钠、水杨酸盐等。在一个实施方案中，所述的吸收促进剂是β-环糊精和取代的β-环糊精(例如β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精)。在一个实施方案中，所述的吸收促进剂是选自下列的一种或多种：β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精。

8.权利要求1-7任一项的药物组合物，其中所述的药用载体选自：乳糖、甘露醇、微晶纤维素、氯化钠、葡萄糖、环糊精类(例如α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精)。在一个实施方案中，所述的药用载体为乳糖或甘露醇或羟丙基-β-环糊精或其组合。

9.权利要求1-8任一项的药物组合物，其中所述的稳定剂是有机酸或其盐。在一个实施方案中，所述的稳定剂是选自下列的一种或多种：柠檬酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸钠。

10.替莫唑胺或者权利要求1-9任一项的药物组合物在制备用于鼻腔给药的药物中的用途。