CN109998996A - 脂质组合物及提高药物抗肿瘤活性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及脂质组合物及提高药物抗肿瘤活性的方法。具体地说，一方面提供了一种脂质组合物，其包含式(I)化合物或其药用盐、磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和赋形剂。式(I)化合物如下所示，其中各取代基如说明书所述。还提供了制备该脂质组合物的方法，通过将式(I)化合物制备成脂质组合物从而提高抗肿瘤药物的抗肿瘤活性的方法，还提供了此类脂质组合物作为抗肿瘤药剂的用途。本发明方法和脂质组合物可以有效地提高药物的抗肿瘤活性。

Description

脂质组合物及提高药物抗肿瘤活性的方法
技术领域
本发明属于医药化学领域，涉及提高吉西他滨抗肿瘤活性的方法，尤其是涉及一组具有抗肿瘤活性的吉西他滨酯化物及其脂质组合物、制备方法，以及在抗肿瘤方面的应用。
背景技术
吉西他滨，英文名gemcitabine，中文化学名：4-氨基-1-(3,3-二氟-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮)，英文化学名：2′-deoxy-2′,2′-difluorocytidine，分子式：C9H11F2N3O4，是一种新型氟代核苷类似物，吉西他滨的化学结构如以下式(J)所示：
吉西他滨本身并无药理活性，进入人体内后经脱氧胞嘧啶激酶活化，由胞嘧啶核苷脱氨酶代谢为相应的单磷酸酯、双磷酸酯和三磷酸酯而发挥药效。吉西他滨可用于治疗多种实体瘤(例如，非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌等)，临床用其盐酸盐，但目前仅限于静脉给药治疗胰腺癌和非小细胞肺癌。该疗法的患者依从性差并存在若干不良反应，典型的不良反应包括，①血液系统：有骨髓抑制作用，可出现贫血、白细胞降低和血小板减少。②胃肠道；约2/3的患者出现肝脏转氨酶异常，多为轻度、非进行性损害；约1/3的患者出现恶心和呕吐反应，20％的患者需要药物治疗。③肾脏：约1/2的患者出现轻度蛋白尿和血尿，有部分病例出现不明原因的肾衰。④过敏：约25％的患者出现皮诊，10％的患者出现瘙痒，少于1％患者可发生支气管痉挛。⑤其他：约20％的患者有类似于流感的表现；水肿/周围性水肿的发生率约30％；脱发、嗜睡、腹泻、口腔毒性及便秘发生率则分别为13％，10％，8％，7％和6％。这些不良反应将严重影响吉西他滨临床用药的效益/风险比。此外，本品在静注后可广泛分布于各组织，能被胞苷脱氨酶在肝脏、肾、血液和其他组织中快速代谢，故血浆半衰期短(t1/2：8-17min)，需多次给药(Gang Wang，等.J.Med.Chem.2017,60,2552；Tang Li，等.DRUG DEVELOPMENT AND INDUSTRIAL PHARMACY，2017，43：2016)。
现有技术仍然期待有新的方法并且预期具有某种或某些更优异效果来治疗肿瘤，例如期待有更加优良的抗肿瘤活性的药物应用于临床。
发明内容
本发明的目的是提供新的方法并且预期具有某种或某些更优异效果来治疗肿瘤，例如提供具有更加优良的抗肿瘤活性的药物应用于临床。本发明人出人意料地发现，具有本发明结构的化合物呈现优异的抗肿瘤活性。
为此，本发明第一方面提供了以下式(I)化合物：
或其药用盐；其中：
R1和R2相同或不同，各自代表C6-22直链或支链的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个或2个CH2任选地被O替代。
根据本发明第一方面的化合物，其中R1和R2相同或不同，各自代表C8-22直链或支链的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个或2个CH2任选地被O替代。
根据本发明第一方面的化合物，其中R1和R2相同或不同，各自代表C10-22直链或支链的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个或2个CH2任选地被O替代。
根据本发明第一方面的化合物或者本发明其它任一方面提及的，其中所述药用盐是与无机酸或者与有机酸形成的盐。
根据本发明第一方面的化合物或者本发明其它任一方面提及的，其中所述无机酸选自：盐酸、硫酸、磷酸。尤其优选的药用盐为盐酸盐。
根据本发明第一方面的化合物或者本发明其它任一方面提及的，其中所述有机酸选自：乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸、苹果酸、氨基酸(例如丙氨酸、天冬氨酸、赖氨酸)、磺酸(例如甲磺酸、对甲苯磺酸)。
根据本发明第一方面的化合物，其也可以溶剂化物(如水合物)的形式存在，因此，这些溶剂化物(如水合物)也包括在本发明的化合物之内。
根据本发明第一方面的化合物，其为选自下列的化合物1～化合物12：
化合物1：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正癸酸酯，
化合物2：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二月桂酸酯，
化合物3：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二肉豆蔻酸酯，
化合物4：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二棕榈酸酯，
化合物5：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二反油酸酯，
化合物6：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正十六烷氧丙基醚，
化合物7：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正十八烷氧乙基醚，
化合物8：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-月桂酸酯-5’-肉豆蔻酸酯，
化合物9：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-肉豆蔻酸酯-5’-月桂酸酯，
化合物10：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十四烷氧乙基醚-5’-正十六烷氧乙基醚，
化合物11：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十六烷氧丙基醚-5’-正十四烷氧乙基醚，
化合物12：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十六烷氧丙基醚-5’-肉豆蔻酸酯，
或其药用盐。
进一步的，本发明第二方面提供了制备式(I)化合物或其药用盐的方法。
根据本发明第二方面的方法，当式(I)化合物中的R1和R2相同时，该方法如反应路线1所示。
反应路线1：
在反应路线1中，R如本文对R1和/或R2定义的，例如代表C6-22直链或支链的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个或2个CH2任选地被O替代。
具体地说，该制备方法包括如下步骤：
1)使化合物II(国内市售途径获得)溶于非极性溶剂(例如，二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环)，在适量有机碱[例如，三乙胺、N,N-二甲基吡啶、吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)]存在下，与1～6倍当量的Boc2O在室温～50℃温度下搅拌反应3～15小时，得到氨基保护的式(III)化合物；
2)使式(III)化合物溶于质子性溶剂(例如，水、醇或醇-水混合溶剂，例如甲醇)，加入1～2倍当量的无机碱(例如，氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠)，在0℃～室温下搅拌反应3～10小时，得到去羟基保护基的式(IV)化合物；
3)使式(IV)化合物溶于非极性溶剂[例如，二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环]，在适量有机碱(例如，三乙胺、N,N-二甲基吡啶、吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP))存在下，与1～4倍当量的式(V)化合物(国内市售途径获得)于0℃～室温下搅拌反应4～15小时，得到式(VI)化合物；
4)使式(VI)化合物溶于非极性溶剂(例如，二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环)，加入1～2倍当量的酸[例如，三氟乙酸(TFA)、盐酸]，于0℃～室温下搅拌反应0.5～5小时，即得到式(I’)化合物，其为R1和R2相同的式(I)化合物。
根据本发明第二方面的方法，当式(I)化合物中的R1和R2不同时，该方法如反应路线2所示。
反应路线2：
在反应路线2中，R1和R2如本文定义的。
具体地说，该制备方法包括如下步骤：
1)使式(IV)化合物溶于偶极溶剂[例如，二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜]，在适量有机碱(例如，三乙胺、N,N-二甲基吡啶、吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP))存在下，与1～2倍当量的叔丁基二苯基氯硅烷(可缩写为TBDPSCl)于0℃～室温下搅拌反应8～15小时，得到糖环5/-位羟基选择性保护的式(VII)化合物；
2)使式(VII)化合物与式(V)化合物(可缩写为R1COCl)发生酯化反应，得到式(VIII)化合物；
3)使式(VIII)化合物溶于非极性溶剂(例如，二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷、四氢呋喃(THF)、二氧六环)，加入1～2倍当量的四丁基氟化铵(可缩写为TBAF)，于0℃～室温下搅拌反应4～15小时，得到去羟基保护基的式(IX)化合物；
4)使式(IX)化合物与式(V)化合物(R2COCl)发生酯化反应，得到式(X)化合物；
5)使式(X)化合物去Boc保护基，即得到式(I)化合物，其中R1和R2不同。
进一步的，本发明第三方面提供了提高式(J)化合物或其药用盐的抗肿瘤活性的方法，
该方法包括如下步骤：
(1)将式(J)化合物或其药用盐制备成式(I)化合物或其药用盐，该式(I)化合物或其药用盐如本发明第一方面任一项所述；
(2)使式(I)化合物或其药用盐制备成包含磷脂的脂质组合物。
根据本发明第三方面的方法，其中所述式(I)化合物或其药用盐如本发明第一方面任一实施方案所述或者如本发明第二方面任一项所述方法制备得到的。
根据本发明第三方面的方法，其中将式(J)化合物或其药用盐制备成式(I)化合物或其药用盐的方法如本发明第二方面任一项所述。
根据本发明第三方面的方法，其中所述脂质组合物包含：
式(I)化合物或其药用盐：100重量份，
磷脂：50～1000重量份(例如50～800重量份)，
聚乙二醇化磷脂：5～200重量份(例如10～100重量份)，
胆固醇：5～100重量份(例如10～50重量份)，和
赋形剂。
根据本发明第三方面的方法，其中所述脂质组合物是呈液体状态的组合物(例如是脂质混悬液)，其中所述赋形剂是水性溶媒。例如，其选自：水、0.8～1％氯化钠溶液(例如0.9％氯化钠溶液)、2～10％葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖溶液)。例如，该水性溶媒的用量是使得式(I)化合物或其药用盐在该液体组合物中的浓度为0.2～20mg/ml，例如为0.25～15mg/ml，例如0.5～10mg/ml。
根据本发明第三方面的方法，其中所述脂质组合物是呈固体状态的组合物(例如是冷冻干燥组合物)，其中所述赋形剂是冻干赋形剂。例如，该冻干赋形剂选自：甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、蔗糖、葡萄糖等等。例如，式(I)化合物或其药用盐与冻干赋形剂的重量比为100：100～2000，例如重量比为100：200～1500，例如重量比为100：250～1000。
根据本发明第三方面的方法，其中所述磷脂选自：蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(即DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(即DMPG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬酯酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、及其组合。
根据本发明第三方面的方法，其中所述聚乙二醇化磷脂(可简称为PEG化磷脂)是用分子量为1000～10000道尔顿修饰的磷脂，其例如是聚乙二醇化二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，其可表述为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(可缩写为PEG-DSPE或DSPE-PEG)。例如，所述PEG化磷脂选自：二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇1000(可缩写为PEG1000-DSPE，其余亦可类似表述)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3350、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇4000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇6000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇8000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇10000。
根据本发明第三方面的方法，其中所述的脂质组合物是通过脂质体的制备工艺制备得到的。脂质体的制备工艺是本领域周知，例如但不限于：薄膜分散法、挤压制备法、French压力法、逆相蒸发法、化学梯度法(例如，pH梯度法、硫酸铵梯度法)。
根据本发明第三方面的方法，其中所述的脂质组合物是通过包括如下步骤的薄膜分散法(一种经典的脂质体制备方法)制备得到的：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(例如二氯甲烷、氯仿等)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
根据本发明第三方面的方法，其中步骤(23b)中，所述预先用水溶解的赋形剂溶液中赋形剂浓度为3～20％，例如5～15％。
进一步的，本发明第四方面提供了一种脂质组合物，其包含：
式(I)化合物或其药用盐：100重量份，
磷脂：50～1000重量份(例如50～800重量份)，
聚乙二醇化磷脂：5～200重量份(例如10～100重量份)，
胆固醇：5～100重量份(例如10～50重量份)，和
赋形剂。
根据本发明第四方面的脂质组合物，其是呈液体状态的组合物(例如是脂质混悬液)，其中所述赋形剂是水性溶媒。例如，其选自：水、0.8～1％氯化钠溶液(例如0.9％氯化钠溶液)、2～10％葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖溶液)。例如，该水性溶媒的用量是使得式(I)化合物或其药用盐在该液体组合物中的浓度为0.2～20mg/ml，例如为0.25～15mg/ml，例如0.5～10mg/ml。
根据本发明第四方面的脂质组合物，其是呈固体状态的组合物(例如是冷冻干燥组合物)，其中所述赋形剂是冻干赋形剂。例如，该冻干赋形剂选自：甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、蔗糖、葡萄糖等等。例如，式(I)化合物或其药用盐与冻干赋形剂的重量比为100：100～2000，例如重量比为100：200～1500，例如重量比为100：250～1000。
根据本发明第四方面的脂质组合物，其中所述磷脂选自：蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(即DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(即DMPG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬酯酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、及其组合。
根据本发明第四方面的脂质组合物，其中所述聚乙二醇化磷脂(可简称为PEG化磷脂)是用分子量为1000～10000道尔顿修饰的磷脂，其例如是聚乙二醇化二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，其可表述为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(可缩写为PEG-DSPE或DSPE-PEG)。例如，所述PEG化磷脂选自：二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇1000(可缩写为PEG1000-DSPE，其余亦可类似表述)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3350、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇4000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇6000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇8000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇10000。
根据本发明第四方面的脂质组合物，其是通过脂质体的制备工艺制备得到的。脂质体的制备工艺是本领域周知，例如但不限于：薄膜分散法、挤压制备法、French压力法、逆相蒸发法、化学梯度法(例如，pH梯度法、硫酸铵梯度法)。
根据本发明第四方面的脂质组合物，其是通过包括如下步骤的薄膜分散法(一种经典的脂质体制备方法)制备得到的：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(例如二氯甲烷、氯仿等)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发(40～60℃，真空度200～250mbar)除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
根据本发明第四方面的脂质组合物，其中步骤(23b)中，所述预先用水溶解的赋形剂溶液中赋形剂浓度为3～20％，例如5～15％。
进一步的，本发明第五方面提供了一种制备脂质组合物的方法，所述脂质组合物包含：
式(I)化合物或其药用盐：100重量份，
磷脂：50～1000重量份(例如50～800重量份)，
聚乙二醇化磷脂：5～200重量份(例如10～100重量份)，
胆固醇：5～100重量份(例如10～50重量份)，和
赋形剂；
该方法是选自下列的脂质体制备工艺：薄膜分散法、挤压制备法、French压力法、逆相蒸发法、化学梯度法(例如，pH梯度法、硫酸铵梯度法)。
根据本发明第五方面的方法，其中所述脂质组合物是呈液体状态的组合物(例如是脂质混悬液)，其中所述赋形剂是水性溶媒。例如，其选自：水、0.8～1％氯化钠溶液(例如0.9％氯化钠溶液)、2～10％葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖溶液)。例如，该水性溶媒的用量是使得式(I)化合物或其药用盐在该液体组合物中的浓度为0.2～20mg/ml，例如为0.25～15mg/ml，例如0.5～10mg/ml。
根据本发明第五方面的方法，其中所述脂质组合物是呈固体状态的组合物(例如是冷冻干燥组合物)，其中所述赋形剂是冻干赋形剂。例如，该冻干赋形剂选自：甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、蔗糖、葡萄糖等等。例如，式(I)化合物或其药用盐与冻干赋形剂的重量比为100：100～2000，例如重量比为100：200～1500，例如重量比为100：250～1000。
根据本发明第五方面的方法，其包括如下步骤：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(例如二氯甲烷、氯仿等)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
根据本发明第五方面的方法，其中所述磷脂选自：蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(即DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(即DMPG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬酯酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、及其组合。
根据本发明第五方面的方法，其中所述聚乙二醇化磷脂(可简称为PEG化磷脂)是用分子量为1000～10000道尔顿修饰的磷脂，其例如是聚乙二醇化二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，其可表述为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(可缩写为PEG-DSPE或DSPE-PEG)。例如，所述PEG化磷脂选自：二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇1000(可缩写为PEG1000-DSPE，其余亦可类似表述)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3350、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇4000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇6000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇8000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇10000。
根据本发明第五方面的方法，其中步骤(23b)中，所述预先用水溶解的赋形剂溶液中赋形剂浓度为3～20％，例如5～15％。
进一步的，本发明第六方面提供了本发明第一方面任一项所述化合物或者本发明第二方面任一项所述方法制备的化合物或者本发明第四方面所述脂质组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。例如，所述癌症例如但不限于非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌。
根据本发明任一方面的脂质组合物，其为呈液体或固体状态的组合物，其加水稀释或者溶解制成式(I)化合物浓度为0.2mg/ml或更低的药液时，该药液用纳米粒度仪测定，平均粒径小于200nm(例如平均粒径为20～200nm，例如平均粒径为30～200nm，例如平均粒径为40～200nm，例如平均粒径为50～200nm，例如平均粒径为30～180nm，例如平均粒径为30～150nm)，粒径小于10nm的微粒少于5％(例如粒径小于15nm的微粒少于5％)，粒径大于500nm的微粒少于5％(例如粒径大于400nm的微粒少于5％，粒径大于300nm的微粒少于5％)。本项目可称为粒径及粒径分布。
根据本发明任一方面的脂质组合物，其为呈液体或固体状态的组合物，其加水稀释或者溶解制成式(I)化合物浓度为0.2mg/ml或更低的药液时，该药液用纳米粒度仪测定并计算纳米粒的粒径D10、D50、和D90值(通常亦分别理解为10％粒子小于此值的粒径、50％粒子小于此值的粒径或称中值粒径、90％粒子小于此值的粒径)，以下式计算供试品纳米粒的径距Span值：Span＝(Dv90-Dv10)/Dv50；该组合物的Span小于5，特别是小于3，更特别的是小于2.5，更特别的是小于2。Span越小表示微粒的粒度分布越窄，并且越是本领域期待的，本领域公知的是，对于注射用的纳米微粒制剂，Span小于3通常认为是可接受的，Span小于2.5通常认为是满意的，Span小于2通常认为是非常满意的。已经出人意料地发现，本发明方法制备的组合物其纳米粒的平均粒径小于200nm，Span值均小于2.5，并且一些组合物在经历长时间放置后平均粒径和Span值呈现基本不变化的效果。
在本发明的任一方面，所制备的呈液体形式的药物组合物或者进一步制成冷冻干燥粉针剂形式的药物组合物，其可以通过控制制备工艺的方式，将该组合物制成供无菌方式使用的无菌制剂。这种工艺的控制是容易的，例如先控制方式，即将各原辅料经无菌处理，再以全程无菌操作制备成无菌制剂；还可以是后控制的方式，即将制备得到的呈液体形式的组合物经例如但不限于微孔滤膜过滤的方式除菌。因此，根据本发明的任一方面，所制备的呈液体形式的药物组合物或者进一步制成冷冻干燥粉针剂形式的药物组合物是无菌制剂。
本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
在本发明中如未另外说明，涉及的％是重量/重量百分数。
吉西他滨，(+)2'-脱氧-2'2'-二氟胞嘧啶，临床上通常以其盐酸盐的形式使用，常见剂型有盐酸吉西他滨冷冻干燥粉针剂。临床上可用于治疗以下疾病：局部晚期或已转移的非小细胞肺癌、局部晚期或已转移的胰腺癌、吉西他滨与紫杉醇联合，适用于治疗经辅助/新辅助化疗后复发，不能切除的、局部复发或转移性乳腺癌。
吉西他滨的细胞代谢和作用机制：吉西他滨(dFdC)为嘧啶类抗代谢物，在细胞内经核苷激酶的作用被代谢为具有活性的二磷酸(dFdCDP)及三磷酸核苷(dFdCTP)。dFdCDP和dFdCTP通过两种作用机制抑制DNA合成，从而实现吉西他滨的细胞毒作用。首先，dFdCDP抑制核苷酸还原酶的活性，致使合成DNA所必需的三磷酸脱氧核苷(dCTP)的生成受到抑制。其次，dFdCTP与dCTP竞争掺入至DNA链中(自增强作用)。同样，少量的吉西他滨还可以掺入RNA分子中。因此，细胞内dCTP浓度降低更加有利于dFdCTP掺入到DNA链中。DNA聚合酶ε不能去除掺入的吉西他滨及修复已形成的DNA链。吉西他滨掺入DNA链后，延伸的DNA链中就增加了一个核苷酸。这个增加的核苷酸可以完全抑制DNA链的进一步合成(隐蔽链终止)。吉西他滨掺入DNA链后引起细胞凋亡。
吉西他滨对培养细胞的细胞毒活性：吉西他滨对各种培养的人及鼠肿瘤细胞有明显的细胞毒活性。其作用具有细胞周期特异性，即吉西他滨主要作用于DNA合成期(S-期)的细胞，在一定的条件下，可以阻止G1期/S期交接点的细胞进展。在体外，吉西他滨的细胞毒作用取决于浓度和时间。
吉西他滨在动物模型中抗瘤活性的研究：在肿瘤动物模型的研究中发现吉西他滨的抗肿瘤活性与给药的方式有关。每天给药的方法会导致动物死亡率很高，而抗肿瘤活性很低。当用每3-4天给药一次的方法，吉西他滨在非致死剂量时对小鼠的多种肿瘤均有很好的抗肿瘤活性。
吉西他滨的药代动力学特点：在7项研究，共计353例患者中评价了吉西他滨的药代动力学特点。其中女性患者121例和男性患者232例，年龄29-79之间。在这些患者中，约45％为非小细胞肺癌患者，35％为胰腺癌患者。得到以下药代动力学参数的给药剂量范围是500-2,592mg/m2，输液时间变化范围0.4-1.2小时。血浆峰浓度(输液结束后5分钟内得到)为3.2-45.5μg/ml。按照1000mg/m2/30min剂量给药，输液结束30min内母体化合物血浆浓度可持续高于5μg/ml，输液结束后1小时内，其血浆浓度亦高于0.4μg/ml。
分布：中央室的分布容积为女性12.4L/m2和男性17.5L/m2(个体间差异为91.9％)。周边隔室的分布容积为47.4L/m2。周边隔室的容积与性别不相关。血浆蛋白结合可忽略不计。半衰期：半衰期为42-94分钟，与年龄和性别相关。对于推荐的给药方案，吉西他滨在输液开始后的5-11小时内被完全清除。每周给药一次时，吉西他滨不会产生蓄积。
吉西他滨在肝脏、肾脏、血液和其他组织中被胞苷脱氨酶快速代谢。在细胞内，吉西他滨在细胞内代谢产生吉西他滨单磷酸、二磷酸和三磷酸核苷(dFdCMP、dFdCDP和dFdCTP)，其中dFdCDP和dFdCTP具有活性。这些细胞内形成的代谢物，在血浆或尿液中都未曾检出。主要代谢物2'-脱氧-2',2'-二氟脲苷(dFdU)没有活性，在血浆和尿中均可检出。
吉西他滨的全身清除率为29.2L/hr/m2-92.2L/hr/m2，与性别和年龄相关(个体差异为52.2％)。清除率女性比男性低大约25％。虽然清除速度很快，男性和女性的清除率都随年龄增加而下降。吉西他滨推荐给药剂量为1000mg/m2，静脉滴注30分钟，不必因男性和女性降低的清除率而减少吉西他滨的给药剂量。经尿排泄：少于10％以原药形式排泄。肾清除：2-7L/hr/m2。给药后一周内，吉西他滨给药剂量的92％-98％被检出，其中99％主要以dFdU形式经尿排泄，1％经粪便排泄。
本发明出人意料地发现一类独特的吉西他滨化学结构改造物在制备成脂质组合物时呈现显著更高的抗肿瘤活性。
附图说明
图1：脂质组合物的粒度分布图。
图2：脂质组合物的透射电镜图。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。
在以下具体实例部分，如未另外提及，提供的呈液体形式的药物组合物或者呈冷冻干燥组合物形式的配方是每100mg或100重量份式(I)化合物所制得的组合物中各物料的用量来表示的；在实际制备时，以制备包含10g式(I)化合物的药物组合物的量投料。在制备组合物时当需要调节药液pH值时，使用2M盐酸溶液或2M氢氧化钠溶液。以下各实施例在对组合物进行冷冻干燥时，经检测，所得冷冻干燥粉中有机溶剂含量低于检测限。
实施例1、制备2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正癸酸酯
示意性反应路线如下：
将市售的2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二苯甲酸酯(式II化合物，4.7g，0.01mol)溶于50mL二氧六环中，然后依次加入三乙胺(4.0g，0.04mol)，N,N-二甲基吡啶(1.8g，0.01mol)和Boc2O(12.9g，0.04mol)。40℃反应5个小时，TLC监测反应结束。后处理：将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，有机相浓缩(得化合物III)后直接进行下一步反应。将上述化合物III溶于20mL甲醇溶液中，然后加入NaOH固体(28mg，0.7mmol)，室温搅拌4小时，TLC监测反应结束。后处理：直接用硅胶过滤，滤液浓缩并进行柱层析(乙酸乙酯)得1.8g白色固体IV(两步产率为50％)。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.28(d,J＝7.50Hz,1H),7.32(d,J＝7.5Hz,1H),6.23(t,J＝7.80Hz,1H),4.22-4.36(m,1H),3.96(brs,2H),3.80-3.84(brs,1H),1.54(s,9H).
将上述化合物IV(1.8g，4.9mmol)溶于20mL二氯甲烷中，然后依次加入三乙胺(1.5g，14.7mmol)，n-C9H19COCl(2.1g,10.7mmol)。室温搅拌过夜，TLC监测反应结束。后处理：加入水中，二氯甲烷萃取(得化合物VI)并直接进行下一步。
往上述二氯溶液中加入三氟乙酸(0.7g，6.0mmol)，室温搅拌4小时，TLC监测反应结束。后处理：将反应体系用二氯甲烷稀释，并用碳酸氢钠水溶性洗涤，有机相浓缩并进行柱层析(乙酸乙酯)得白色固体2.0g为标题的化合物V’(两步收率：71％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.45(d,J＝6.85Hz,1H),6.45(brs,1H),5.91(d,J＝7.30Hz,1H),5.28(d,J＝11.90Hz,1H),4.42(brs,2H),4.26(d,J＝5.00Hz,1H),2.46(t,J＝7.00Hz,2H),2.40(t,J＝7.35Hz,2H),1.66-1.71(m,4H),1.31-1.34(m,24H),0.92(t,J＝6.50Hz,6H).MS-ESI(m/z):572.3(M+H)+.
实施例2、制备2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二月桂酸酯
制备方法参照实施例1，化合物IV与月桂酰氯反应，经三氟乙酸脱Boc保护基，制得白色固体为标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.55(brs,1H),6.32(brs,1H),6.09(brs,1H),5.29(brs,1H),4.34-4.45(m,3H),2.37-2.40(m,4H),1.60-1.70(m,4H),1.25-1.29(m,32H),0.92(t,J＝6.50Hz,6H).MS-ESI(m/z):628.3(M+H)+.
实施例3、制备2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二肉豆蔻酸酯
制备方法参照实施例1，化合物IV与肉豆蔻酰氯反应，经三氟乙酸脱Boc保护基，制得白色固体为标题化合物。
Mp:142-144℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.44(d,J＝6.85Hz,1H),6.44(d,J＝8.85Hz,1H),5.74(d,J＝7.30Hz,1H),5.22(d,J＝11,90Hz,1H),4.38(brs,2H),4.26(brs,1H),2.41(t,J＝7.35Hz,2H),2.36(t,J＝7.35Hz,2H),1.60-1.70(m,4H),1.25-1.29(m,40H),0.87(t,J＝6.50Hz,6H).MS-ESI(m/z):684.4(M+H)+.
实施例4、制备2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二棕榈酸酯
制备方法参照实施例1，化合物IV与棕榈酰氯反应，经三氟乙酸脱Boc保护基，制得白色固体为标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.42(d,J＝6.90Hz,1H),6.43(brs,1H),5.87(d,J＝7.30Hz,1H),5.32(brs,1H),4.42(brs,2H),4.29(d,J＝5.00Hz,1H),2.46(t,J＝7.35Hz,2H),2.40(t,J＝7.25Hz,2H),1.65-1.70(m,4H),1.25-1.31(m,48H),0.92(t,J＝6.50Hz,6H).MS-ESI(m/z):740.5(M+H)+.
实施例5、2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二反油酸酯
制备方法参照实施例1，化合物IV与反油酸进行缩合反应，经三氟乙酸脱Boc保护基，制得白色固体为标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.42(d,J＝6.90Hz,1H),6.43(brs,1H),5.86(d,J＝7.30Hz,1H),5.32-5.37(m,5H),4.42(brs,2H),4.29(brs,1H),2.46(t,J＝7.35Hz,2H),2.10-2.43(m,12H),1.65-1.71(m,2H),1.25-1.31(m,40H),0.91(t,J＝7.20Hz,6H).MS-ESI(m/z):792.5(M+H)+.
实施例6、制备2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正十六烷氧丙基醚
将十四烷基溴(21.7mmol)和1,3-丙二醇(4.9g，65.1mmol)溶于DMSO(50mL)中，剧烈搅拌下加入KOH(4.8g,86.8mmol)粉末。室温搅拌4小时，TLC监测反应结束。后处理：反应液用100mL水稀释，浓盐酸调至酸性，然后用乙酸乙酯萃取。有机相浓缩并用石油醚进行重结晶得白色固体3g(产率53％)。将上述白色固体溶于二氯甲烷(30mL)中，依次加入三乙胺(5mL)和甲磺酰氯(2.1g，13.8mmol)，室温搅拌2小时。后处理：反应液用水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥并浓缩后直接进行下一步反应。
将化合物IV(2.0g，5.7mmol)和上一步骤所得化合物溶于乙腈(30mL)中并加入甲醇钠(0.6g,11.6mmol)，室温搅拌5小时。后处理，将化合物倒入水中，析出固体粗品。该粗品经三氟乙酸脱Boc，制得2.3g标题化合物(产率53％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.32(d,J＝6.00Hz,1H),6.42(d,J＝8.15Hz,1H),5.71(d,J＝7.30Hz,1H),5.21(brs,1H),4.31(brs,2H),4.15(brs,1H),3.57(t,J＝7.15Hz,8H),3.32(t,J＝6.15Hz,4H),1.62-1.72(m,4H),1.21-1.28(m,56H),0.89(t,J＝6.50Hz,6H).MS-ESI(m/z):828.4(M+H)+.
实施例7、制备2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正十八烷氧乙基醚
制备方法参照实施例6，选用正十六烷基溴和乙二醇为原料即可制得标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.30(brs,1H),6.42(brs,1H),5.73(d,J＝7.30Hz,1H),5.21(brs,1H),4.10-4.24(m,3H),3.51-3.56(m,8H),3.31(t,J＝6.15Hz,4H),1.62-1.71(m,4H),1.25-1.28(m,60H),0.87(t,J＝6.50Hz,6H).MS-ESI(m/z):856.5(M+H)+.
实施例8、2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-月桂酸酯-5’-肉豆蔻酸酯
制备方法照以下反应路线进行：
将化合物IV(1.8g，4.9mmol)溶于DMF(20mL)中，然后依次加入N,N-二甲基吡啶(0.7g，5.9mmol)，叔丁基二苯基氯硅烷(1.4g,5.0mmol)。室温搅拌过夜，TLC监测反应结束。后处理：加入冰水中析出2.1g固体VII(产率69％)，真空干燥(得到式VII化合物)并直接进行下一步。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.27(d,J＝7.50Hz,1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.11-7.25(m,10H),6.21(brs,1H),4.22-4.36(m,3H),3.80-3.84(brs,1H),1.54(s,9H),1.09(s,9H).
参考实施例1的方法，化合物VII(2.1g，3.49mmol)与月桂酰氯(0.8g，3.50mmol)反应制得2.1g白色固体VIII-1(产率77％)。化合物VIII-1(2.1g，2.68mmol)溶于THF(20mL)中，然后加入四丁基氟化铵(3mL，1M THF溶液)。室温搅拌2小时，TLC监测反应结束。后处理：反应液加入水中，用二氯甲烷萃取(得化合物IX，3’-月桂酸酯)，并直接进行下一步。
参考实施例1的方法，上述化合物(IX)与肉豆蔻酰氯反应，经三氟乙酸脱Boc制得标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.54(brs,1H),6.31(brs,1H),6.09(d,J＝8.00Hz,1H),5.29(brs,1H),4.31-4.42(m,3H),2.31-2.40(m,4H),1.60-1.72(m,4H),1.21-1.26(m,36H),0.91-0.95(m,6H).MS-ESI(m/z):656.3(M+H)+.
实施例9、2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-肉豆蔻酸酯-5’-月桂酸酯
参考实施例8的方法，化合物VII与肉豆蔻酰氯反应，然后通过TBAF脱TBDPS保护基，接着与月桂酰氯反应，经三氟乙酸脱Boc制得标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.51(brs,1H),6.30(d,J＝8.15Hz,1H),6.08(d,J＝8.10Hz,1H),5.28(d,J＝11.00Hz,1H),4.31-4.41(m,3H),2.32-2.40(m,4H),1.60-1.72(m,4H),1.21-1.27(m,36H),0.91-0.92(m,6H).MS-ESI(m/z):656.3(M+H)+.
实施例10、2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十四烷氧乙基醚-5’-正十六烷氧乙基醚
参照例1、例6和例8的方法，化合物VII经甲磺酸十四烷氧乙基酯反应，通过TBAF脱TBDPS保护基，然后经甲磺酸十六烷氧乙基酯反应和三氟乙酸脱Boc制得标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.31(brs,1H),6.42(d,J＝8.00Hz,1H),5.73(brs,1H),5.21(brs,1H),4.10-4.23(m,3H),3.51-3.57(m,8H),3.32(t,J＝6.15Hz,2H),3.28(t,J＝6.00Hz,2H),1.65-1.71(m,4H),1.23-1.28(m,48H),0.87-0.89(m,6H).MS-ESI(m/z):772.5(M+H)+.
实施例11、2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十六烷氧丙基醚-5’-正十四烷氧乙基醚
参照例1、例6和例8的方法，化合物VII经甲磺酸十六烷氧丙基酯反应，通过TBAF脱TBDPS保护基，然后经甲磺酸十四烷氧乙基酯反应和三氟乙酸脱Boc制得标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.31(brs,1H),6.41(brs,1H),5.72(d,J＝8.15Hz,1H),5.21(brs,1H),4.10-4.20(m,3H),3.51-3.55(m,8H),3.28-3.32(m,4H),1.64-1.71(m,4H),1.23-1.28(m,50H),0.87-0.89(m,6H).MS-ESI(m/z):786.5(M+H)+.
实施例12、2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十六烷氧丙基醚-5’-肉豆蔻酸酯
参照例1、例6和例8的方法，化合物VII经甲磺酸十六烷氧丙基酯反应，通过TBAF脱TBDPS保护基，然后经肉豆蔻酰氯反应和三氟乙酸脱Boc制得标题化合物。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.31(brs,1H),6.31(d,J＝6.20Hz,1H),5.70(d,J＝7.20Hz,1H),5.21(brs,1H),4.11(brs,2H),4.00-4.03(m,1H),3.97(t,J＝7.20Hz,4H),3.89-3.92(m,2H),3.28-3.32(m,2H),1.64-1.71(m,4H),1.23-1.28(m,48H),0.87-0.90(m,6H).MS-ESI(m/z):756.5(M+H)+.
实施例13、吉西他滨单酯化合物
化合物13：5’-吉西他滨月桂酸酯，参照CN102675390A说明书之[0046]～[0048]所载方法制得。
化合物14：5'-吉西他滨反油酸酯，参照WO98/32762说明书之实施例1所载方法制得。
化合物15：5’-吉西他滨正辛酸酯，参照CN102675390A说明书之[0037]～[0039]所载方法制得。
化合物16：3'-吉西他滨反油酸酯，参照WO98/32762说明书之实施例1所载方法制得。
实施例21、制备脂质组合物
配方：
活性药物：100重量份，
磷脂(DMPC)：250重量份，
聚乙二醇化磷脂(DSPE-PEG2000)：50重量份，
胆固醇：25重量份，和
赋形剂(水性溶媒：5％葡萄糖溶液制成液体组合物，添加量是使活性药物终浓度为2mg/ml；或者冻干赋形剂：甘露醇，制成固体组合物，活性药物与该冻干赋形剂重量比为100：500)。
采用薄膜分散法制备，步骤如下：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(二氯甲烷，添加量为达到完全溶解程度的3倍量)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发(45℃，真空度220mbar)除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，65℃温度下水化2小时，再超声处理30min，过滤除菌(使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液(浓度为8％)，65℃温度下水化2小时，再超声处理30min，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
在本实施例21中，分别使用吉西他滨以及本发明实施例1～13所得16种化合物，作为活性药物，分别制备得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物(17种液体组合物)，以及呈固体状态的冷冻干燥脂质组合物(17种固体组合物)。
实施例22、制备脂质组合物
配方：
活性药物：100重量份，
磷脂(DMPG)：50重量份，
聚乙二醇化磷脂(PEG1000-DSPE)：100重量份，
胆固醇：50重量份，和
赋形剂(水性溶媒：0.9％氯化钠溶液制成液体组合物，添加量是使活性药物终浓度为1mg/ml；或者冻干赋形剂：甘氨酸，制成固体组合物，活性药物与该冻干赋形剂重量比为100：600)。
采用薄膜分散法制备，步骤如下：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(氯仿，添加量为达到完全溶解程度的2倍量)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发(60℃，真空度200mbar)除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，60℃温度下水化1.5小时，再超声处理20min，过滤除菌(使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液(浓度为15％)，70℃温度下水化2.5小时，再超声处理45min，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
在本实施例22中，分别使用吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五种化合物，作为活性药物，分别制备得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物(5种液体组合物)，以及呈固体状态的冷冻干燥脂质组合物(5种固体组合物)。
实施例23、制备脂质组合物
配方：
活性药物：100重量份，
磷脂(蛋黄卵磷脂)：800重量份，
聚乙二醇化磷脂(DSPE-PEG5000)：10重量份，
胆固醇：10重量份，和
赋形剂(水性溶媒：水制成液体组合物，添加量是使活性药物终浓度为0.5mg/ml；或者冻干赋形剂：右旋糖苷，制成固体组合物，活性药物与该冻干赋形剂重量比为100：1000)。
采用薄膜分散法制备，步骤如下：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(二氯甲烷，添加量为达到完全溶解程度的4倍量)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发(40℃，真空度250mbar)除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，70℃温度下水化2.5小时，再超声处理45min，过滤除菌(使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液(浓度为5％)，60℃温度下水化1.5小时)，再超声处理20min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
在本实施例23中，分别使用吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五种化合物，作为活性药物，分别制备得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物(5种液体组合物)，以及呈固体状态的冷冻干燥脂质组合物(5种固体组合物)。
实施例24、制备脂质组合物
配方：
活性药物：100重量份，
磷脂(大豆卵磷脂)：50重量份，
聚乙二醇化磷脂(DSPE-PEG4000)：200重量份，
胆固醇：100重量份，和
赋形剂(水性溶媒：5％葡萄糖溶液制成液体组合物，添加量是使活性药物终浓度为10mg/ml；或者冻干赋形剂：乳糖，制成固体组合物，活性药物与该冻干赋形剂重量比为100：250)。
采用薄膜分散法制备，步骤如下：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(二氯甲烷，添加量为达到完全溶解程度的2倍量)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发(45℃，真空度230mbar)除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，40℃温度下水化2小时，再超声处理35min，过滤除菌(使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液(浓度为10％)，80℃温度下水化5小时，再超声处理35min，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
在本实施例24中，分别使用吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五种化合物，作为活性药物，分别制备得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物(5种液体组合物)，以及呈固体状态的冷冻干燥脂质组合物(5种固体组合物)。
实施例25、制备脂质组合物
配方：
活性药物：100重量份，
磷脂(二棕榈酰磷脂酰胆碱)：1000重量份，
聚乙二醇化磷脂(DSPE-PEG3350)：5重量份，
胆固醇：5重量份，和
赋形剂(水性溶媒：0.9％氯化钠溶液制成液体组合物，添加量是使活性药物终浓度为5mg/ml；或者冻干赋形剂：甘露醇，制成固体组合物，活性药物与该冻干赋形剂重量比为100：750)。
采用薄膜分散法制备，步骤如下：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(二氯甲烷，添加量为达到完全溶解程度的2.5倍量)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发(50℃，真空度210mbar)除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，80℃温度下水化2小时，再超声处理40min，过滤除菌(使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液(浓度为7.5％)，40℃温度下水化1小时，再超声处理25min，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
在本实施例25中，分别使用吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五种化合物，作为活性药物，分别制备得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物(5种液体组合物)，以及呈固体状态的冷冻干燥脂质组合物(5种固体组合物)。
实施例31、脂质组合物的表征
实施例21～实施例25所得全部液体状态的脂质组合物以及全部固体状态的脂质组合物，各自加水稀释或者溶解后稀释，制成式(I)化合物浓度为0.2mg/ml(如果所得液体组合物本身浓度低于此浓度则不稀释)，用使用马尔文Zetasizer Nano ZS纳米粒度电位仪测定该药液中的微粒粒径，计算平均粒径，并统计粒径小于10nm的微粒的百分数、粒径大于300nm的微粒的百分数。
结果：
实施例21～实施例25所得全部液体脂质组合物，粒径小于10nm的微粒均少于5％、粒径大于300nm的微粒均少于5％，例如实施例21针对化合物1所得液体脂质组合物粒径小于10nm的微粒为1.2％、粒径大于300nm的微粒为0.8％；
实施例21～实施例25所得全部固体脂质组合物，粒径小于10nm的微粒均少于5％、粒径大于300nm的微粒均少于5％，例如实施例21针对化合物1所得固体脂质组合物粒径小于10nm的微粒为1.2％、粒径大于300nm的微粒为0.8％；
实施例21～实施例25所得全部液体脂质组合物的平均粒径在85～130nm范围内，例如实施例21针对化合物1所得液体脂质组合物中粒子的平均粒径为97nm，该试样的粒度分布图和透射电镜图分别见图1和图2；
实施例21～实施例25所得全部固体脂质组合物的平均粒径在85～135nm范围内，例如实施例21针对化合物1所得液体脂质组合物中粒子的平均粒径为99nm；实施例21～实施例25所得各种液体组合物与其相应的固体组合物之间的粒径无明显差异。
上述粒度测定结果是在组合物制备后的15日内测定的，这些结果并不能反映组合物粒度性能方面的稳定性，它们相当于0月结果。当将实施例21～实施例25所得全部液体脂质组合物置于室温放置18个月后，测定它们的粒度，结果各样品相比于其0月结果，平均粒径增加32～37％，例如18月后实施例21针对化合物1所得液体脂质组合物中粒子的平均粒径为131nm，增加35.1％。另外，当将实施例21～实施例25所得全部固体脂质组合物置于室温放置18个月后，测定它们的粒度，结果各样品相比于其0月结果，平均粒径增加29～34％，例如18月后实施例21针对化合物1所得固体脂质组合物中粒子的平均粒径增加31.3％。
补充试验(在本申请中可称为实施例26)：分别参照本文实施例21～25的制备方法，不同的仅是在步骤(23a)或(23b)中向容器中添加水性溶媒或者赋形剂溶液时还同时添加氯化镁(其量是活性药物重量的2.5％)，由此得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物或者呈固体状态的脂质组合物，照上述方法测定这些呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物在0月和18月时的平均粒径、小于10nm的微粒百分数、大于300nm的微粒百分数；结果，0月和18月时全部样品粒径小于10nm的微粒均少于5％、粒径大于300nm的微粒均少于5％，0月时全部样品的平均粒径在90～125nm范围内(例如实施例21针对化合物1并添加氯化镁所得液体脂质组合物中粒子的平均粒径为95nm)；18月时全部样品的平均粒径相对于其0月粒径增加-1.7％～2.3％(显示无明显变化，例如实施例21针对化合物1并添加氯化镁所得液体脂质组合物18月粒子的平均粒径为96nm，增加1.05％)。出人意料地发现，本实施例26的结果表明，在脂质组合物中添加少量氯化镁有助于提高组合物中微粒的粒度稳定性。根据上述结果，尽管未添加氯化镁的实施例21～实施例25脂质组合物室温放置18个月后平均粒径增加29～37％，这种增加后平均粒径仍然满足药品一般要求，因此从临床用药角度讲实施例21～实施例25与实施例26的脂质组合物均符合要求，但是人们仍然期望有更好品质的药品应用于临床。因此，根据本发明任一方面的任一实施方案，所述脂质组合物还包含氯化镁；例如其量是式(I)化合物或其药用盐重量的1～5％，例如2.5％；例如该氯化镁是与所述赋形剂一起添加的。另外，使实施例21～实施例25以及实施例26的固体和液体脂质组合物置于2～8℃放置24个月，24月时全部样品的平均粒径相对于其0月粒径增加-2.9％～5.2％，显示无明显变化，例如实施例21针对化合物1并添加氯化镁所得液体脂质组合物24月粒子的平均粒径增加1.26％，这表明，不论加与不加氯化镁，在2～8℃这种常用于脂质体贮藏的条件下长时间放置后粒径不会有明显变化。
实施例32、脂质组合物的抗肿瘤活性
1、试验用细胞
人胰腺癌(AsPC-1)细胞、人胰腺导管癌(SU.86.86)。
2、测试物
吉西他滨、实施例1～12制备的12种吉西他滨酯化物、实施例13制备的6种吉西他滨酯化物、实施例21～25制备的液体(或固体)脂质组合物。
3、实验方法
体外培养AsPC-1、SU.86.86等肿瘤细胞，在37℃、5％CO2条件下于细胞培养箱中培养至对数期。将上述细胞接种于96孔板中，接种密度为5000个/孔，每孔100μL，之后继续在细胞培养箱中培养24h。
采用MTT法测定各种测试物对上述肿瘤细胞的毒性，试验中包括设置用吉西他滨酯化合物和吉西他滨作为阳性对照药。用细胞培养液倍比稀释测试物，得到吉西他滨浓度为1～100μM的细胞培养基。细胞铺板24h后，分别用200μL含药培养基取代对应孔中的原培养基，每个浓度设4个复孔，同时设置空白对照孔和调零孔。继续孵育24、48、72h后，加入20μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，同条件下继续培养4h后弃去培养液，向每孔加入150μL的DMSO溶解甲瓒，平板震荡仪震荡10min，在酶标仪中测定490nm波长处的吸光度值，计算细胞生长抑制率％和IC50(μM)值。部分化合物的IC50(μM)值如下：
针对AsPC-1，吉西他滨的IC50(μM)为1198.0，化合物1的IC50(μM)为1640.4，化合物2的IC50(μM)为1025.5，化合物3～8的IC50(μM)在922.1～1424.2范围内，化合物9～12的IC50(μM)在932.5～1374.8范围内，化合物13的IC50(μM)为958.5，化合物14～16的IC50(μM)在1042.7～1643.3范围内；
针对SU.86.86，吉西他滨的IC50(μM)为124.1，化合物1的IC50(μM)为213.2，化合物2的IC50(μM)为173.5，化合物3～6的IC50(μM)在117.4～262.4范围内，化合物7～12的IC50(μM)在163.3～226.3范围内，化合物13的IC50(μM)为184.7，化合物14～16的IC50(μM)在163.2～217.5范围内。
从上表可见，化合物1～16这些酯对AsPC-1的半数抑制浓度与吉西他滨基本相当，基本上处于同一数量级；化合物1～16这些酯对SU.86.86的半数抑制浓度与吉西他滨基本相当，基本上处于同一数量级；化合物1～12这组酯与化合物13～16这组酯对同一肿瘤细胞的半数抑制浓度基本相当，基本上处于同一数量级。
在某一肿瘤细胞的测试中，某化学物质在实施例21～25中所得液体脂质组合物的IC50(μM)值除以该化学物质IC50(μM)值再乘以100％所得百分数，作为该液体脂质组合物的相对抑制百分数(％)，该相对抑制百分数(％)值越小表示半数抑制浓度越小，表示脂质体相对于其原化合物而言抑制肿瘤细胞的活性越强，例如实施例21制得的化合物1液体脂质组合物对AsPC-1的IC50值除以化合物1对该肿瘤细胞的IC50值再乘以100％所得百分数，即为实施例21所得化合物1液体脂质组合物的相对抑制百分数(％)，对于冷冻干燥所得固体脂质组合物亦同理计算其相对抑制百分数(％)。结果显示，
对AsPC-1细胞，
(i)实施例21产物，吉西他滨液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为87.7％和89.3％；化合物1～12液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在0.13～0.28％范围内并且同一化学物质的固体与液体形式的脂质组合物之间无明显区别，例如化合物1液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为0.173％和0.164％；化合物13～16液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在43.2～56.4％范围内并且同一化学物质的固体与液体形式的脂质组合物之间无明显区别，例如化合物13液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为49.72％和51.24％；
(ii)实施例22～25产物，吉西他滨液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在86.4～90.1％范围内；化合物2、5液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在0.15～0.26％范围内并且同一化学物质的固体与液体形式的脂质组合物之间无明显区别，例如实施例22中的化合物2液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为0.203％和0.196％；化合物13、14液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在46.5～54.7％范围内并且同一化学物质的固体与液体形式的脂质组合物之间无明显区别，例如实施例22中的化合物13液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为48.67％和47.73％。
对SU.86.86细胞，
(a)实施例21产物，吉西他滨液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为93.2％和91.7％；化合物1～12液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在1.53～1.83％范围内并且同一化学物质的固体与液体形式的脂质组合物之间无明显区别，例如化合物1液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为1.78％和1.62％；化合物13～16液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在64.6～71.3％范围内并且同一化学物质的固体与液体形式的脂质组合物之间无明显区别，例如化合物13液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为68.43％和67.95％；
(b)实施例22～25产物，吉西他滨液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在89.6～92.4％范围内；化合物2、5液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在1.61～1.74％范围内并且同一化学物质的固体与液体形式的脂质组合物之间无明显区别，例如实施例22中的化合物2液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为1.72％和1.69％；化合物13、14液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数均在66.3～69.6％范围内并且同一化学物质的固体与液体形式的脂质组合物之间无明显区别，例如实施例22中的化合物13液体和固体脂质组合物的相对抑制百分数分别为67.93％和67.14％。
上述结果表明，采用本发明脂质组合物体系无法显著降低吉西他滨的IC50值即无法显著提高抑制肿瘤细胞的效果，采用本发明脂质组合物体系无法显著降低化合物13～16这类吉西他滨单酯的IC50值即无法显著提高抑制肿瘤细胞的效果，采用本发明脂质组合物体系能够显著降低化合物1～12这类吉西他滨双酯的IC50值即能够显著提高抑制肿瘤细胞的效果。换言之，本发明脂质组合物体系能够显著降低本发明吉西他滨双酯的IC50值即能够显著提高抑制肿瘤细胞的效果，但是令人意外的发现是，此类脂质组合物体系无法有效提高吉西他滨及其单酯物质的抑制肿瘤细胞的效果，表明本发明脂质组合物体系能够显著提高本发明吉西他滨双酯化合物的抗肿瘤活性。本发明脂质组合物体系能够显著提高双酯化合物抑制肿瘤细胞的效果，却无法有效提高吉西他滨本身及其单酯，这是现有技术根本无法预见的。
实施例33：抑制小鼠移植性肿瘤的药效学试验
1、试验材料
药物：吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五种化合物，以及实施例21所得由吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五者制得的液体脂质组合物，共十种受试药物，剂量为相当于10mg吉西他滨/kg体重/次的剂量。清洁级C57BL/6N小鼠。瘤种：小鼠移植性肿瘤Lewis肺癌、S180肉瘤和H22肝癌。
2、试验方法
(1)小鼠Lewis肺癌：
体重18～22g的雄性C57BL/6N小鼠，随机均分为11组，每组10只，分别设为生理盐水对照组、分别为上述五种化合物的五个组、分别为上述五种液体脂质组合物的五个组。
颈部脱臼处死Lewis肺癌皮下接种生长12d的C57BL/6N荷瘤小鼠，无菌取新鲜肿瘤组织，以组织研磨器制成细胞匀浆，用生理盐水调整活细胞含量至2～3×107/mL，接种于C57BL/6N小鼠右侧腋部皮下，每只接种0.1mL。
给药剂量和方法：生理盐水，灌胃，每日0.1mL/10g体重/天，每日1次，共11次；各种试药腹腔注射，间日1次，共4次。
接种第2天开始给药，末次给药后24h，处死动物，称体重及瘤块重量，按下式计算瘤重抑制率：
瘤重抑制率(％)＝(1-试验组瘤重/生理盐水对照组瘤重)×100％。
三批试验合并统计，以SPSS10.0软件进行统计分析，体重和肿瘤重量的实验数据以x±s表示，以单因素方差分析比较各给药组与生理盐水对照组的差异。
(2)小鼠S180肉瘤
无菌取S180肉瘤腹腔接种生长8d的小鼠腹水，以生理盐水稀释瘤细胞含量至3～4×107/mL，接种于实验小鼠右侧腋部皮下，每只接种0.1mL。给药周期11d，分组及给药情况、统计方法与小鼠Lewis肺癌试验相同。
(3)小鼠H22肝癌
取H22肝癌腹腔接种生长9d的小鼠腹水，以生理盐水稀释至瘤细胞含量为5～6×107/mL接种NIH小鼠。给药周期11d，分组及给药情况、统计方法与小鼠Lewis肺癌试验相同。
3、对小鼠移植性肿瘤的抑制结果
吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五种化合物对Lewis肺癌的瘤重抑制率在63～68％范围内(例如吉西他滨为65.3％)，吉西他滨、化合物13、化合物14三者的液体脂质组合物对Lewis肺癌的瘤重抑制率在67～69％范围内(例如吉西他滨脂质组合物为68.7％)，化合物2、化合物5二者的液体脂质组合物对Lewis肺癌的瘤重抑制率在96～99％范围内(例如化合物2脂质组合物为98.3％)；吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五种化合物对S180肉瘤的瘤重抑制率在53～57％范围内(例如吉西他滨为54.7％)，吉西他滨、化合物13、化合物14三者的液体脂质组合物对S180肉瘤的瘤重抑制率在51～58％范围内(例如吉西他滨脂质组合物为53.4％)，化合物2、化合物5二者的液体脂质组合物对S180肉瘤的瘤重抑制率在93～97％范围内(例如化合物2脂质组合物为95.8％)；吉西他滨、化合物2、化合物5、化合物13、化合物14五种化合物对H22肝癌的瘤重抑制率在57～61％范围内(例如吉西他滨为59.2％)，吉西他滨、化合物13、化合物14三者的液体脂质组合物对H22肝癌的瘤重抑制率在60～64％范围内(例如吉西他滨脂质组合物为63.2％)，化合物2、化合物5二者的液体脂质组合物对H22肝癌的瘤重抑制率在97～99％范围内(例如化合物2脂质组合物为98.6％)。
出人意料的发现，化合物2、化合物5二者的液体脂质组合物比之于其它物质针对多种肿瘤具有明显更好的抑瘤作用，这种更优良的抑瘤效果可能是由于本发明特定化学物质和特定组合物组合所呈现的。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (10)

1.一种脂质组合物，其包含：
式(I)化合物或其药用盐：100重量份，
磷脂：50～1000重量份(例如50～800重量份)，
聚乙二醇化磷脂：5～200重量份(例如10～100重量份)，
胆固醇：5～100重量份(例如10～50重量份)，和
赋形剂，
所述式(I)化合物具有如下结构：
其中：
R1和R2相同或不同，各自代表C6-22直链或支链的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个或2个CH2任选地被O替代。
2.根据权利要求1的脂质组合物，其特征在于，
其是呈液体状态的组合物(例如是脂质混悬液)，其中所述赋形剂是水性溶媒；例如，其选自：水、0.8～1％氯化钠溶液(例如0.9％氯化钠溶液)、2～10％葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖溶液)；例如，该水性溶媒的用量是使得式(I)化合物或其药用盐在该液体组合物中的浓度为0.2～20mg/ml，例如为0.25～15mg/ml，例如0.5～10mg/ml；
其是呈固体状态的组合物(例如是冷冻干燥组合物)，其中所述赋形剂是冻干赋形剂；例如，该冻干赋形剂选自：甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、蔗糖、葡萄糖等等；例如，式(I)化合物或其药用盐与冻干赋形剂的重量比为100：100～2000，例如重量比为100：200～1500，例如重量比为100：250～1000。
3.根据权利要求1的脂质组合物，其特征在于，
所述磷脂选自：蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(即DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(即DMPG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬酯酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、及其组合；
所述聚乙二醇化磷脂(可简称为PEG化磷脂)是用分子量为1000～10000道尔顿修饰的磷脂，其例如是聚乙二醇化二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，其可表述为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(可缩写为PEG-DSPE或DSPE-PEG)；例如，所述PEG化磷脂选自：二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇1000(可缩写为PEG1000-DSPE，其余亦可类似表述)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3350、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇4000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇6000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇8000、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇10000；
其是通过脂质体的制备工艺制备得到的；例如但不限于：薄膜分散法、挤压制备法、French压力法、逆相蒸发法、化学梯度法(例如，pH梯度法、硫酸铵梯度法)；
其是通过包括如下步骤的薄膜分散法制备得到的：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(例如二氯甲烷、氯仿等)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发(40～60℃，真空度200～250mbar)除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物；
其中步骤(23b)中，所述预先用水溶解的赋形剂溶液中赋形剂浓度为3～20％，例如5～15％。
4.根据权利要求1的脂质组合物，其特征在于，
其中R1和R2相同或不同，各自代表C8-22直链或支链的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个或2个CH2任选地被O替代；
其中R1和R2相同或不同，各自代表C10-22直链或支链的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个或2个CH2任选地被O替代；
其中所述药用盐是与无机酸或者与有机酸形成的盐；
所述无机酸选自：盐酸、硫酸、磷酸；尤其优选的药用盐为盐酸盐；
所述有机酸选自：乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸、苹果酸、氨基酸(例如丙氨酸、天冬氨酸、赖氨酸)、磺酸(例如甲磺酸、对甲苯磺酸)；
所述式(I)化合物为选自下列的化合物1～化合物12：
化合物1：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正癸酸酯，
化合物2：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二月桂酸酯，
化合物3：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二肉豆蔻酸酯，
化合物4：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二棕榈酸酯，
化合物5：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二反油酸酯，
化合物6：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正十六烷氧丙基醚，
化合物7：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’,5’-二正十八烷氧乙基醚，
化合物8：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-月桂酸酯-5’-肉豆蔻酸酯，
化合物9：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-肉豆蔻酸酯-5’-月桂酸酯，
化合物10：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十四烷氧乙基醚-5’-正十六烷氧乙基醚，
化合物11：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十六烷氧丙基醚-5’-正十四烷氧乙基醚，
化合物12：2’,2’-二氟-2’-脱氧胞嘧啶核苷-3’-正十六烷氧丙基醚-5’-肉豆蔻酸酯，
或其药用盐。
5.根据权利要求1的脂质组合物，所述式(I)化合物是照如下方法制备得到的：
当式(I)化合物中的R1和R2相同时，该方法如反应路线1所示，
反应路线1：
具体包括如下步骤：
1)使化合物II(国内市售途径获得)溶于非极性溶剂(例如，二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环)，在适量有机碱[例如，三乙胺、N,N-二甲基吡啶、吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)]存在下，与1～6倍当量的Boc2O在室温～50℃温度下搅拌反应3～15小时，得到氨基保护的式(III)化合物；
2)使式(III)化合物溶于质子性溶剂(例如，水、醇或醇-水混合溶剂，例如甲醇)，加入1～2倍当量的无机碱(例如，氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠)，在0℃～室温下搅拌反应3～10小时，得到去羟基保护基的式(IV)化合物；
3)使式(IV)化合物溶于非极性溶剂[例如，二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环]，在适量有机碱(例如，三乙胺、N,N-二甲基吡啶、吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP))存在下，与1～4倍当量的式(V)化合物(国内市售途径获得)于0℃～室温下搅拌反应4～15小时，得到式(VI)化合物；
4)使式(VI)化合物溶于非极性溶剂(例如，二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环)，加入1～2倍当量的酸[例如，三氟乙酸(TFA)、盐酸]，于0℃～室温下搅拌反应0.5～5小时，即得到式(I’)化合物，其为R1和R2相同的式(I)化合物，
当式(I)化合物中的R1和R2不同时，该方法如反应路线2所示，
反应路线2：
具体包括如下步骤：
1)使式(IV)化合物溶于偶极溶剂[例如，二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜]，在适量有机碱(例如，三乙胺、N,N-二甲基吡啶、吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP))存在下，与1～2倍当量的叔丁基二苯基氯硅烷(可缩写为TBDPSCl)于0℃～室温下搅拌反应8～15小时，得到糖环5/-位羟基选择性保护的式(VII)化合物；
2)使式(VII)化合物与式(V)化合物(可缩写为R1COCl)发生酯化反应，得到式(VIII)化合物；
3)使式(VIII)化合物溶于非极性溶剂(例如，二氯甲烷(DCM)、三氯甲烷、四氢呋喃(THF)、二氧六环)，加入1～2倍当量的四丁基氟化铵(可缩写为TBAF)，于0℃～室温下搅拌反应4～15小时，得到去羟基保护基的式(IX)化合物；
4)使式(IX)化合物与式(V)化合物(R2COCl)发生酯化反应，得到式(X)化合物；
5)使式(X)化合物去Boc保护基，即得到式(I)化合物，其中R1和R2不同。
6.根据权利要求1的脂质组合物，其特征在于，
其为呈液体或固体状态的组合物，其加水稀释或者溶解制成式(I)化合物浓度为0.2mg/ml或更低的药液时，该药液用纳米粒度仪测定，平均粒径小于200nm(例如平均粒径为20～200nm，例如平均粒径为30～200nm，例如平均粒径为40～200nm，例如平均粒径为50～200nm，例如平均粒径为30～180nm，例如平均粒径为30～150nm)，粒径小于10nm的微粒少于5％(例如粒径小于15nm的微粒少于5％)，粒径大于500nm的微粒少于5％(例如粒径大于400nm的微粒少于5％，粒径大于300nm的微粒少于5％)；
其为呈液体或固体状态的组合物，其加水稀释或者溶解制成式(I)化合物浓度为0.2mg/ml或更低的药液时，该药液用纳米粒度仪测定并计算纳米粒的粒径D10、D50、和D90值，以下式计算供试品纳米粒的径距Span值：Span＝(Dv90-Dv10)/Dv50；该组合物的Span小于5，特别是小于3，更特别的是小于2.5，更特别的是小于2。
7.制备权利要求1～6任一项所述脂质组合物的方法，该方法是选自下列的脂质体制备工艺：薄膜分散法、挤压制备法、French压力法、逆相蒸发法、化学梯度法(例如，pH梯度法、硫酸铵梯度法)。
8.根据权利要求7的方法，其包括如下步骤：
(21)使磷脂、聚乙二醇化磷脂、胆固醇和活性药物溶解于有机溶剂(例如二氯甲烷、氯仿等)中；
(22)在旋转蒸发仪上将上一步骤所得液体蒸发除去溶剂，使残余物在容器内壁形成薄膜；
(23)制备脂质组合物：
(23a)向容器内添加水性溶媒，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，得到呈液体状态的脂质混悬液形式的脂质组合物；或者
(23b)向容器内添加预先用水溶解的赋形剂溶液，40～80℃(例如60～70℃)温度下水化1～5小时(例如1.5～2.5小时)，再超声处理15～60min(例如20～45min)，过滤除菌(例如使用220nm聚醚砜材质微孔滤膜)，分装到玻璃瓶中，置冷冻干燥机内进行冷冻干燥以除去水分，得到呈固体状态的脂质组合物。
9.根据权利要求8的方法，其中步骤(23b)中，所述预先用水溶解的赋形剂溶液中赋形剂浓度为3～20％，例如5～15％。
10.权利要求1～6任一项所述脂质组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途；例如，所述癌症例如但不限于非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌。
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