CN102268099A - 使君子提取物及其提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及使君子提取物及其提取方法。该方法利用生物酶解技术从使君子中提取多糖，再加上乙醇回流提取、水提、抽滤、离心、过DEAE柱分离纯化、真空浓缩和雾化干燥，获得多糖纯度较高的使君子提取物。获得的使君子多糖的纯度在72.7～78.2％，多糖分子量为21800～38900D。药效试验表明，本发明提供的使君子提取物对S180肉瘤均具有抑制作用，对移植性肝癌H22小鼠生命均有延长作用，可以用于制备抑制肿瘤的药物和/或保健品；同时提高了对蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢的治疗效果，可以用于制备治疗蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢的药物和/或保健品。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及使君子提取物及其提取方法。
背景技术
使君子(Quisqualic indica L)为使君子科(Combretaceae)使君子属(Quisqualis)植物，落叶攀援状灌木，生于平地、山坡、路旁等向阳灌丛中，主要分布于东南亚以及我国福建、台湾、四川、广东、广西等地。《本草纲目》记载，该植物的果实、根、叶均可入药，具有杀虫、消积、健脾的作用，临床常用于治蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢等等。
现代研究表明，使君子中主要含有氨基酸、单宁、多糖及其甙类、生物碱、挥发油、蒽醌、甾体、香豆素和萜类化合物。其中，使君子种仁含使君子氨酸约0.5％，以使君子酸钾形式存在；还含有脂肪油23.9％，油中含油酸48.2％，棕榈酸29.2％，硬脂酸9.1％，肉豆蔻酸4.5％及花生酸、甾醇等。临床上常将使君子水煎或炒制后服用，无法有效提取利用使君子中多糖成分，因此，提供一种使君子提取物及从使君子中提取多糖的方法，并将该使君子提取物用于制备治疗肿瘤的药物和/或保健品，具有现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种使君子提取物及其提取方法。该方法利用生物酶解技术从使君子中提取多糖，获得的使君子提取物中多糖的纯度为72.7～78.2％。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种使君子提取物的提取方法，包括：
步骤1：将使君子果实粉碎过20～80目筛后，乙醇回流，收集剩余物得到使君子粗粉；所述乙醇回流为：以kg/L计，在得到的使君子粉中按照质量体积比1∶2～5加入95％乙醇溶液，60～80℃回流提取2～4h；
步骤2：将步骤1所述使君子粗粉按照步骤1所述乙醇回流1～3次，收集沉淀得到使君子细粉；
步骤3：在步骤2所述的使君子细粉中加入重量比为1∶8～15的水，加热至50～60℃浸泡2～4h，用酸调节pH值至3.5～4.0，每kg所述使君子细粉中分别加入8～160万IU的纤维素酶和8～80万IU的果胶酶，在40～45℃酶解6～8h后，得到使君子酶解液；
步骤4：将步骤3所述的使君子酶解液在90～100℃下浸提1～2h，抽滤后得到第一滤液，收集滤渣，以kg/L计，加入质量体积比为1∶3～5的水，在90～100℃浸泡1～2h后抽滤，得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液，得到使君子滤液，将所述使君子滤液离心后收集上清液，用碱调节pH值至5.5～6.8，过DEAE柱分离纯化，收集洗脱液浓缩后，雾化干燥，制得使君子提取物。
纤维素酶是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶活力。内切葡聚糖酶随机切割纤维素多糖链内部的无定型区，产生不同长度的寡糖和新链的末端。外切葡聚糖酶作用于这些还原性和非还原性的纤维素多糖链的末端，释放葡萄糖或纤维二糖。β-葡萄糖苷酶可以将纤维二糖、纤维三糖及其他低分子纤维糊精分解为葡萄糖。
果胶酶，分解果胶的一个多酶复合物，通常包括原果胶酶、果胶甲酯水解酶、果胶酸酶，通过它们的联合作用使果胶质得以完全分解。天然的果胶质在原果胶酶作用下，转化成水可溶性的果胶；果胶被果胶甲酯水解酶催化去掉甲酯基团，生成果胶酸；果胶酸经果胶酸水解酶类和果胶酸裂合酶类降解生成半乳糖醛酸。果胶酶可以由黑曲霉(Aspergillus niger)经发酵精制而得，对分解果胶具有良好的作用。作用pH值为：2.5～6.0，最适作用pH值为：3.5～4.5。鉴于此，本发明酶解反应采用纤维素酶和果胶酶共同对使君子进行酶解，是使君子破壁，有利于提取细胞内多糖。
为了保证酶解在纤维素酶和果胶酶的最适条件下进行，本发明提供的提取方法步骤3中用酸调节pH值，所述酸选自磷酸、柠檬酸、盐酸、硫酸中的一种或两种以上的混合酸。
为了将使君子滤液中固液分离，本发明提供的提取方法步骤4中的离心为在6000～8000r/min的条件下离心10～15min。
DEAE凝胶吸附针对性强，解析性能好，回收率高，因此本发明采用DEAE纤维素层析柱分离纯化使君子抽滤、离心后的上清液。
为了达到过DEAE柱分离纯化的最佳效果，本发明提供的提取方法用碱调节步骤4中离心后的上清液的pH值，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸氢钠、氨水中的一种或两种以上的混合碱。
作为优选，所述步骤4中的过DEAE柱分离纯化为在浓度为10～50mmol/L、pH值为5.5～6.8的磷酸缓冲溶液和0.1mol/L的氯化钠溶液以流速为5mL/min进行洗脱。
作为优选，所述步骤4中浓缩为在真空度为-0.10～-0.08MPa、温度为60～70℃的条件下进行真空浓缩。
作为优选，所述步骤4中雾化干燥为在进料温度为50～80℃，进风温度为160～200℃，出风温度为70～100℃，喷头气压为0.1～0.2MPa，进料速度为20～50mL/min的条件下进行雾化干燥。
作为优选，本发明还提供了由上述提取方法获得的使君子提取物。
作为优选，本发明提供的使君子提取物中使君子多糖的浓度为72.7～78.2％。
此外，本发明还提供了上述提取方法制得的使君子提取物在制备抑制肿瘤，治疗蛔虫腹痛、小儿疳积、乳食停滞、腹胀、泻痢的药物和/或保健品中的应用。
本发明提供了使君子提取物的提取方法，该方法利用生物酶解技术从使君子中提取多糖，再加上乙醇回流提取、水提、抽滤、离心、过DEAE柱分离纯化、真空浓缩和雾化干燥，获得多糖纯度较高的使君子提取物。获得的使君子多糖的纯度在72.7～78.2％，多糖分子量为21800～38900D。药效试验表明，本发明提供的使君子提取物对S180肉瘤均具有抑制作用，对移植性肝癌H22小鼠生命均有延长作用，可以用于制备抑制肿瘤的药物和/或保健品；与阳性药物对照组相比，本发明提供的使君子提取物提高了对蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢的治疗效果，可以应用于制备治疗蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢的药物和/或保健品。
具体实施方式
本发明公开了一种使君子提取物及其提取方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 本发明提供的使君子提取物
将晒干的使君子果实用清水清洗干净后，去壳，取2.0kg用粉碎机进行粉碎，过20目筛网，得到使君子粉，称取1.0kg使君子粉装入圆底烧瓶中，加入的95％乙醇3.0L，放置80℃的水浴中，装上冷却装置后，打开冷却开关，加热回流提取2h，收集剩余物，再加入95％的乙醇3.0L，回流提取得到使君子粗粉，重复乙醇回流1次，收集沉淀物晾干，得到使君子细粉。
取晾干的使君子细粉0.5kg，加水6.00L，加热升温至50℃浸泡提取3h，冷却至室温，用1mol/L的柠檬酸调pH值至3.5，每kg使君子粉中加入8万IU的纤维素酶和8万IU的果胶酶，控制温度为40℃的水浴中进行酶解，酶解时间为6h，在酶解过程中使酶解液的pH值保持3.5。酶解结果后将酶解液加热升温至100℃浸泡提取1h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤，收集第一滤液5.15L，在0.82kg滤渣中加水4.10L，100℃浸泡提取1h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤后收集上清得到第二滤液3.80L，合并第一滤液和第二滤液，用高速冷冻离心机在6000r/min的条件下离心15min，收集上清液得8.9L，用NaOH调pH值至6.5。
取DEAE-纤维素0.5mol/L NaOH浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，换0.5mol/L盐酸浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，湿法装柱后，用10倍体积的10mmol/L磷酸缓冲液(pH值为6.5)进行平衡，将上述的上清液过柱，用10mmol/L磷酸缓冲液(pH值为6.5)和0.1mol/LNaCI洗脱，流速为5mL/min，收集洗脱液，得7.5L洗脱液。洗脱液用旋转蒸发仪在70℃温度抽真空(真空度为-0.10MPa)浓缩，得浓缩液2.1L，浓缩液比重为1.12。
将比重为1.12的浓缩液进行喷雾干燥，进料温度为50℃，进风温度为180℃，出风温度为75℃，喷头气压为0.15MPa，进料速度为20mL/min，获得使君子提取物。
对获得的使君子提取物进行检验，结果如下：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的使君子提取物含有使君子多糖。
多糖含量：77.4％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：28300D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例2 本发明提供的使君子提取物
将晒干的使君子果实用清水清洗干净后，去壳，取2.0kg用粉碎机进行粉碎，过40目筛网，得到使君子粉，称取1.0kg使君子粉装入圆底烧瓶中，加入的95％乙醇2.0L，放置60℃的水浴中，装上冷却装置后，打开冷却开关，加热回流提取3h，收集剩余物，再加入95％的乙醇2.0L，回流提取得到使君子粗粉，重复乙醇回流3次，收集沉淀物晾干，得到使君子细粉。
取晾干的使君子细粉0.5kg，加水4.00L，加热升温至60℃浸泡提取2h，冷却至室温，用1mol/L的盐酸调pH值至3.8，每kg使君子粉中加入40万IU的纤维素酶和30万IU的果胶酶，控制温度为45℃的水浴中进行酶解，酶解时间为8h，在酶解过程中使酶解液的pH值保持3.8。酶解结果后将酶解液加热升温至90℃浸泡提取2h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤，收集第一滤液3.26L，在0.72kg滤渣中加水3.20L，90℃浸泡提取2h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤后收集上清得到第二滤液3.10L，合并第一滤液和第二滤液，用高速冷冻离心机在8000r/min的条件下离心10min，收集上清液得6.30L，用氢氧化钙调pH值至5.5。
取DEAE-纤维素0.5mol/L NaOH浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，换0.5mol/L盐酸浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，湿法装柱后，用10倍体积的50mmol/L磷酸缓冲液(pH值为5.5)进行平衡，将上述的上清液过柱，用50mmol/L磷酸缓冲液(pH值为5.5)和0.1mol/L NaCI洗脱，流速为5mL/min，收集洗脱液，得7.35L洗脱液。洗脱液用旋转蒸发仪在60℃温度抽真空(真空度为-0.08MPa)浓缩，得浓缩液1.65L，浓缩液比重为1.15。
将比重为1.15的浓缩液进行喷雾干燥，进料温度为70℃，进风温度为160℃，出风温度为70℃，喷头气压为0.1MPa，进料速度为40mL/min，获得使君子提取物。
对获得的使君子提取物进行检验，结果如下：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的使君子提取物含有使君子多糖。
多糖含量：78.2％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：25500D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例3 本发明提供的使君子提取物
将晒干的使君子果实用清水清洗干净后，去壳，取2.0kg用粉碎机进行粉碎，过80目筛网，得到使君子粉，称取1.0kg使君子粉装入圆底烧瓶中，加入的95％乙醇5.0L，放置70℃的水浴中，装上冷却装置后，打开冷却开关，加热回流提取4h，收集剩余物，再加入95％的乙醇5.0L，回流提取得到使君子粗粉，重复乙醇回流2次，收集沉淀物晾干，得到使君子细粉。
取晾干的使君子细粉0.5kg，加水7.5L，加热升温至55℃浸泡提取3h，冷却至室温，用1mol/L的磷酸调pH值至4.0，每kg使君子粉中加入160万IU的纤维素酶和80万IU的果胶酶，控制温度为42℃的水浴中进行酶解，酶解时间为7h，在酶解过程中使酶解液的pH值保持3.5。酶解结果后将酶解液加热升温至95℃浸泡提取1.5h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤，收集第一滤液6.85L，在0.68kg滤渣中加水2.10L，95℃浸泡提取1.5h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤后收集上清得到第二滤液2.00L，合并第一滤液和第二滤液，用高速冷冻离心机在7000r/min的条件下离心13min，收集上清液得8.65L，用氢氧化钾调pH值至6.8。
取DEAE-纤维素0.5mol/L NaOH浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，换0.5mol/L盐酸浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，湿法装柱后，用10倍体积的30mmol/L磷酸缓冲液(pH值为6.8)进行平衡，将上述的上清液过柱，用30mmol/L磷酸缓冲液(pH值为6.8)和0.1mol/LNaCI洗脱，流速为5mL/min，收集洗脱液，得7.90L洗脱液。洗脱液用旋转蒸发仪在65℃温度抽真空(真空度为-0.09MPa)浓缩，得浓缩液2.75L，浓缩液比重为1.18。
将比重为1.18的浓缩液进行喷雾干燥，进料温度为80℃，进风温度为200℃，出风温度为100℃，喷头气压为0.2MPa，进料速度为50mL/min，获得使君子提取物。
对获得的使君子提取物进行检验，结果如下：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的使君子提取物含有使君子多糖。
多糖含量：72.7％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：21800D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例4 本发明提供的使君子提取物
将晒干的使君子果实用清水清洗干净后，去壳，取2.0kg用粉碎机进行粉碎，过60目筛网，得到使君子粉，称取1.0kg使君子粉装入圆底烧瓶中，加入的95％乙醇4L，放置65℃的水浴中，装上冷却装置后，打开冷却开关，加热回流提取2.5h，收集剩余物，再加入95％的乙醇4.0L，回流提取得到使君子粗粉，重复乙醇回流3次，收集沉淀物晾干，得到使君子细粉。
取晾干的使君子细粉0.5kg，加水5.0L，加热升温至52℃浸泡提取4h，冷却至室温，用1mol/L的硫酸调pH值至3.6，每kg使君子粉中加入120万IU的纤维素酶和30万IU的果胶酶，控制温度为41℃的水浴中进行酶解，酶解时间为6.5h，在酶解过程中使酶解液的pH值保持3.6。酶解结果后将酶解液加热升温至92℃浸泡提取1.2h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤，收集第一滤液4.10L，在0.76kg滤渣中加水3.3L，92℃浸泡提取1.2h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤后收集上清得到第二滤液3.05L，合并第一滤液和第二滤液，用高速冷冻离心机在6500r/min的条件下离心10min，收集上清液得7.05L，用碳酸氢钠调pH值至5.8。
取DEAE-纤维素0.5mol/L NaOH浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，换0.5mol/L盐酸浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，湿法装柱后，用10倍体积的20mmol/L磷酸缓冲液(pH值为5.8)进行平衡，将上述的上清液过柱，用20mmol/L磷酸缓冲液(pH值为5.8)和0.1mol/LNaCI洗脱，流速为5mL/min，收集洗脱液，得6.60L洗脱液。洗脱液用旋转蒸发仪在62℃温度抽真空(真空度为-0.10MPa)浓缩，得浓缩液2.60L，浓缩液比重为1.08。
将比重为1.08的浓缩液进行喷雾干燥，进料温度为60℃，进风温度为190℃，出风温度为80℃，喷头气压为0.1MPa，进料速度为30mL/min，获得使君子提取物。
对获得的使君子提取物进行检验，结果如下：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的使君子提取物含有使君子多糖。
多糖含量：75.3％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：38900D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例5 本发明提供的使君子提取物
将晒干的使君子果实用清水清洗干净后，去壳，取2.0kg用粉碎机进行粉碎，过80目筛网，得到使君子粉，称取1.0kg使君子粉装入圆底烧瓶中，加入的95％乙醇3.5L，放置75℃的水浴中，装上冷却装置后，打开冷却开关，加热回流提取3.5h，收集剩余物，再加入95％的乙醇3.5L，回流提取得到使君子粗粉，重复乙醇回流2次，收集沉淀物晾干，得到使君子细粉。
取晾干的使君子细粉0.5kg，加水7.0L，加热升温至57℃浸泡提取3.5h，冷却至室温，用1mol/L的柠檬酸调pH值至3.9，每kg使君子粉中加入85万IU的纤维素酶和60万IU的果胶酶，控制温度为44℃的水浴中进行酶解，酶解时间为7.5h，在酶解过程中使酶解液的pH值保持3.9。酶解结果后将酶解液加热升温至98℃浸泡提取1.7h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤，收集第一滤液6.25L，在0.74kg滤渣中加水3.5L(1∶3～5)，98℃浸泡提取1.7h，冷却至室温，用循环真空泵抽滤后收集上清得到第二滤液3.20L，合并第一滤液和第二滤液，用高速冷冻离心机在7500r/min的条件下离心15min，收集上清液得9.15L，用氨水调pH值至6.2。
取DEAE-纤维素0.5mol/L NaOH浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，换0.5mol/L盐酸浸泡0.5h，用蒸馏水洗脱至中性，湿法装柱后，用10倍体积的40mmol/L磷酸缓冲液(pH值为6.2)进行平衡，将上述的上清液过柱，用40mmol/L磷酸缓冲液(pH值为6.2)和0.1mol/LNaCI洗脱，流速为5mL/min，收集洗脱液，得8.50L洗脱液。洗脱液用旋转蒸发仪在68℃温度抽真空(真空度为-0.08MPa)浓缩，得浓缩液1.85L，浓缩液比重为1.25。
将比重为1.25的浓缩液进行喷雾干燥，进料温度为65℃，进风温度为170℃，出风温度为90℃，喷头气压为0.2MPa，进料速度为35mL/min，获得使君子提取物。
对获得的使君子提取物进行检验，结果如下：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的使君子提取物含有使君子多糖。
多糖含量：73.6％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：32500D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例6 本发明提供的使君子提取物对小鼠肉瘤S180的抑制作用
取昆明种小鼠，清洁级，体重为22±2g，雌雄各半80只，于小鼠右腋皮下接种肉瘤S180细胞悬液(5.0×107·L-1)0.20ml，接种次日随机分为4组，每组20只，分为模型对照组，本发明实施例1提供的使君子提取物低剂量(80mg/kg/d)、中剂量(160mg/kg/d)、高剂量(320mg/kg/d)三个剂量组。于接种次日起模型对照组给予生理盐水灌胃，三个剂量组给予以实施例1提供的使君子提取物灌胃，每天一次，连续给药14天，停药次日将小鼠眼球放血后脱颈处死，取肿瘤称重。按下式计算抑瘤率：抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。
使君子提取物低、中、高剂量对小鼠S180肉瘤均有抑制作用。低剂量组用药后的肿瘤生长抑制率为24.79％，中剂量组用药后的肿瘤生长抑制率为41.45％，高剂量组用药后的肿瘤生长抑制率为46.58％，其中剂量和高剂量组对小鼠S180肉瘤有极显著的抗肿瘤作用(P＜0.01)，结果见下表1。
表1 使君子提取物对小鼠肉瘤S180的抑制作用(
n＝15)
与模型对照组比较#P＜0.01
实施例7 本发明提供的使君子提取物对移植性肝癌H22小鼠生存期的影响
取昆明种小鼠，清洁级，体重为22±2g，雌雄各半80只，于小鼠右腋皮下接种肝癌H22细胞悬液(5.0×107·L-1)0.20ml，接种次日随机分为4组，每组20只，分为模型对照组，本发明实施例1提供的使君子提取物低剂量(80mg/kg/d)、中剂量(160mg/kg/d)、高剂量(320mg/kg/d)三个剂量组。于接种次日起模型对照组给予生理盐水灌胃，三个剂量组给予以实施例1提供的使君子提取物灌胃，每天一次，连续给药14天后停药，观察并记录其自然死亡时间的天数。按下式计算生命延长率：生命延长率(％)＝(给药组平均生存天数-空白对照组)/空白对照组×100％。
与模型对照组比较，使君子提取物低、中、高剂量组对移植性肝癌H22小鼠生命均有延长作用。使君子提取物低、中、高剂量组对移植性肝癌H22小鼠生存时间分别为17.84％、43.66％、53.99％。结果见下表2。
表2 使君子提取物对肝癌H22小鼠生存期的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg/d) | 鼠数(只) | 生存天数(天) | 生命延长率(％) |
| 模型对照 | -- | 20 | 21.3±3.4 | -- |
| 低剂量 | 80 | 20 | 25.1±4.5* | 17.84 |
| 中剂量 | 160 | 20 | 30.6±3.8# | 43.66 |
| 高剂量 | 320 | 20 | 32.8±5.4# | 53.99 |
与模型对照组比较，*P＜0.05，#P＜0.01
实施例8 本发明提供的使君子提取物的药效试验
按照实施例6至7的试验方法，对本发明实施例2至5提供的使君子提取物进行药效评价，与实施例6、实施例7的结果具有相近性，本发明实施例2至5提供的使君子提取物对S180肉瘤均具有抑制作用，对移植性肝癌H22小鼠生命均有延长作用。
实施例9 本发明提供的使君子提取物药效试验
将本发明实施例1至5提供的使君子提取物作为试验组，和阳性药物对照组分别对蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢各300名患者进行治疗，结果见表3。
表3 本发明提供的使君子提取物药效试验
由表3结果可知，本发明实施例1至5提供的使君子提取物，与阳性药物对照组相比，蛔虫腹痛的总有效率由88.3％提高至96.0％，治愈率由72.7％提高至85.7％，差异具有显著性(P＜0.05)；小儿疳积的总有效率由94.3％提高至97.3％，治愈率由85.3％提高至91.7％，差异具有显著性(P＜0.05)；乳食停滞的总有效率由88.0％提高至95.7％，治愈率由78.0％提高至88.0％，差异具有显著性(P＜0.05)；腹胀的总有效率由95.0％提高至99.0％，治愈率由88.0％提高至93.7％，差异具有显著性(P＜0.05)；泻痢的总有效率由94.3％提高至98.7％，治愈率由85.3％提高至90.3％，差异具有显著性(P＜0.05)。
综合上述结果，本发明实施例1至5提供的使君子提取物，与阳性药物对照组相比，显著提高了药效。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种使君子提取物的提取方法，其特征在于，包括：
步骤1：将使君子果实粉碎过20～80目筛后，乙醇回流，收集剩余物得到使君子粗粉；所述乙醇回流为：以kg/L计，在得到的使君子粉中按照质量体积比1∶2～5加入95％乙醇溶液，60～80℃回流提取2～4h；
步骤2：将步骤1所述使君子粗粉按照步骤1所述乙醇回流1～3次，收集沉淀得到使君子细粉；
步骤3：在步骤2所述的使君子细粉中加入重量比为1∶8～15的水，加热至50～60℃浸泡2～4h，用酸调节pH值至3.5～4.0，每kg所述使君子细粉中分别加入8～160万IU的纤维素酶和8～80万IU的果胶酶，在40～45℃酶解6～8h后，得到使君子酶解液；
步骤4：将步骤3所述的使君子酶解液在90～100℃下浸提1～2h，抽滤后得到第一滤液，收集滤渣，以kg/L计，加入质量体积比为1∶3～5的水，在90～100℃浸泡1～2h后抽滤，得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液，得到使君子滤液，将所述使君子滤液离心后收集上清液，用碱调节pH值至5.5～6.8，过DEAE柱分离纯化，收集洗脱液浓缩后，雾化干燥，制得使君子提取物。
2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤3中的酸选自磷酸、柠檬酸、盐酸、硫酸中的一种或两种以上的混合酸。
3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤4中的碱选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸氢钠、氨水中的一种或两种以上的混合碱。
4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤4中的离心为在6000～8000r/min的条件下10～15min。
5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤4中的过DEAE柱分离纯化为在浓度为10～50mmol/L、pH值为5.5～6.8的磷酸缓冲溶液和0.1mol/L的氯化钠溶液以流速为5mL/min进行洗脱。
6.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤4中浓缩为在真空度为-0.10～-0.08MPa、温度为60～70℃的条件下进行真空浓缩。
7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤4中雾化干燥为在进料温度为50～80℃，进风温度为160～200℃，出风温度为70～100℃，喷头气压为0.1～0.2MPa，进料速度为20～50mL/min的条件下进行雾化干燥。
8.如权利要求1至7任一项所述的提取方法获得的使君子提取物。
9.如权利要求8所述的使君子提取物中使君子多糖的纯度为72.7～78.2％。
10.如权利要求8或9所述的使君子提取物在制备抑制肿瘤，治疗蛔虫腹痛、小儿疳积、乳食停滞、腹胀、泻痢的药物和/或保健品中的应用。
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