CN101538334B - 一种药用回心草多糖提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于一种中药活性成分的提取方法，更具体地说它涉及一种从回心草中提取及纯化回心草多糖的方法。该方法是将回心草粉碎，于超声波提取器中用热水把粗多糖从从药材中提取出来，提取液经过离心、过滤、浓缩、除去蛋白，再用乙醇从水提物中沉淀析出，得到水溶性的回心草粗多糖，再将粗多糖进一步分离及纯化，真空干燥得纯化回心草多糖精品。本发明能从回心草中最大限度的提取回心草多糖，安全无毒，可靠易行，收率高。为发挥回心草多糖的药效作用，制备各种适应症的药物或保健食品提供了可能。
Description
技术领域
本发明属于一种中药活性成分的提取方法，更具体地说它涉及一种从回心草中提取及纯化回心草多糖的方法。
背景技术
目前已有近百种多糖化合物被提取出来，经药理研究与临床应用，证明多糖具有抗肿瘤、降血脂、抗血栓、增强免疫、延缓衰老等功能的作用，因此多糖的研究开发越来越多的被人们重视。多糖是天然高分子化合物，存在于动植物和微生物中，多糖一般从天然产物中提取，天然多糖是一类重要生物活性物质，具有多方面生物活性和保健功能，可作为药物和保健品的有效成份。目前，人参多糖、枸杞多糖、香菇多糖、刺五加多糖、灵芝多糖用于临床，取得满意的效果。
回心草，学名大叶藓(Rhodobryum roseum(Hedw.)Limp.)是真藓科植物大叶藓及南大叶藓的干燥或新鲜全草，是云南多民族共用草药。民间常单用或同大枣、胡椒、三七等配伍用于治疗心脏病，神经衰弱等。并且其单用治疗冠心病的有效率高达87.88％，其药用价值非常明显。然而遗憾的是目前国内外对回心草的研究较少，且主要是从生药学和整体临床药理学角度加以研究，对其它方面的研究报道较少，至今未见回心草多糖提取方面相关报道。基于以上原因，本发明对回心草多糖的提取方法进行了详细研究。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种药用回心草多糖提取方法，采用安全无毒的有机溶剂为提取剂，方法安全无毒，收率高，对环境无污染，有利于更进一步研究回心草多糖在配制药品、保健品的作用效果。
解决本发明的技术问题所采用的方案是：将回心草粉碎，于超声波提取器用水浸提，提取液经过过滤、离心、浓缩、除去蛋白，再用乙醇从水提物中沉淀析出，得到回心草粗多糖，再用乙醇精提，得到精提产品。
所述的回心草多糖粗提的具体工艺步骤如下：
(1)将回心草粉碎，过60目筛，置于超声波提取器中，加入回心草重量20～30倍的水，室温浸泡1小时，调pH值为pH＝8～9，升高温度至75℃～95℃，恒温浸提2小时～4小时，用滤布过滤得提取液；残渣重复恒温浸提3次，后二次时间缩短至1小时～2小时，加水量为第一次的一半；合并提取液；
(2)在离心机中以2000r/min.～4000r/min.离心分离15分钟～25分钟，取清液；
(3)将提取液于旋转蒸发器中减压浓缩至固形物质量含量为6～8％，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇，使乙醇体积百分浓度为50％～85％，沉淀产生，去除上清液，沉淀物为粗多糖。
本发明回心草多糖精提的具体工艺步骤如下：
(1)将粗多糖沉淀物用蒸馏水溶解后，加入食用乙醇至乙醇体积百分浓度为25％～35％，使沉淀产生，离心去沉淀，取上清液；
(2)在上清液中加入食用乙醇至乙醇体积百分浓度为60-85％，使沉淀产生，离心取沉淀；
(3)取上述沉淀物用体积百分浓度95％乙醇洗涤2～4次，减压干燥得到回心草多糖提取成品；
(4)将干燥后的多糖粉碎，得粉未状多糖精品，装入密闭容器防潮保存，备用。
在粗提过程中，所述超声波浸提时间为2小时、固液重量/体积比为1∶20，浸提温度为90℃、沉淀粗多糖时乙醇体积百分浓度为80％。调节pH值时采用NaOH稀碱溶液。此外，所述的粗多糖沉淀物用体积百分浓度95％的乙醇反复洗涤次数为2～4次。
本发明的有益效果是：回心草是一种药效好、价值高的民族中药材。降低回心草多糖制造成本是本发明的核心。本法可规模化生产，大大降低回心草多糖的制造成本，有别一般实验室的制备方法；其二，采用本法生产的回心草多糖纯度高，其多糖含量高达97％以上(硫酸-蒽酮法测定)。其三，回心草多糖的生物活性高且广泛，本发明为生物活性多糖家族增加了新的一员。其经济效益和社会效益度十分显著。其四，利用本发明生产的回心草多糖质量稳定，重复性好。
具体实施方式
实施例1
将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中加入20倍的水，调pH8～9，升高温度至90℃，分别浸提不同的时间，合并提取液，过滤，离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇使浓度达到80％，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表1：由此可见，浸提时间2小时就可满足要求了。
表1不同浸提时间的多糖得率
| 时间/h | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 多糖得率％ | 7.75 | 8.36 | 8.38 | 8.42 | 8.43 |
实施例2
将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中，分别加入不同倍数的水，调pH8～9，升高温度至90℃，浸提2小时，合并提取液，过滤，离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇使浓度达到80％，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表2：由此可见，固液比为1∶20～30都行，考虑到后续工艺步骤要浓缩，增加成本，选择1∶20较经济。
表2不同固液比提取回心草多糖的得率
| 时间/h | 1∶10 | 1∶15 | 1∶20 | 1∶25 | 1∶30 |
| 多糖得率％ | 7.95 | 8.10 | 8.36 | 8.36 | 8.37 |
实施例3
将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中，加入20倍的水，调pH8～9，用不同的温度浸提2小时，合并提取液。离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇使浓度达到80％，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表3：由此可见，浸提温度为90℃时，产率最高。
表3不同温度下回心草多糖的得率
| 温度/℃ | 75 | 80 | 85 | 90 | 95 |
| 多糖得率％ | 6.20 | 7.16 | 8.25 | 8.36 | 8.36 |
实施例4
考察萃取次数对提取率的影响：将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中，加入20倍的水，调pH8～9，升高温度至90℃，分别萃取不同的次数，合并几次提取液。离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇使浓度达到80％，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表4：由此可见，萃取次数3次，绝大多数多糖已萃取出来。
表4不同萃取次数回心草多糖的得率
| 萃取次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 多糖得率％ | 7.10 | 8.05 | 8.36 | 8.37 | 8.37 |
实施例5
考察沉析用乙醇浓度对提取率的影响：将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中，加入20倍的水，调pH8～9，升高温度至90℃，合并三次提取液。离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇沉淀，使溶液中乙醇为不同浓度，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表5：由此可见，当乙醇浓度加到80％以上时，才能更多地把多糖沉淀出来。
表5不同乙醇浓度下回心草多糖的得率
| 乙醇浓度％ | 60 | 70 | 75 | 80 | 90 |
| 多糖得率％ | 5.82 | 7.21 | 8.04 | 8.36 | 8.35 |
Claims (3)
1.一种药用回心草多糖提取方法，其特征是工艺步骤如下：
⑴将回心草粉碎，过60目筛，置于超声波提取器中，加入回心草重量20～30倍的水，室温浸泡1小时，调pH值为pH=8～9，升高温度至75℃～95℃，恒温浸提2小时～4小时，用滤布过滤得提取液；残渣重复恒温浸提3次，后二次时间缩短至1小时～2小时，加水量为第一次的一半；合并提取液；
⑵在离心机中以2000r/min.～4000r/min.离心分离15分钟～25分钟，取清液；
⑶将提取液于旋转蒸发器中减压浓缩至固形物质量含量为6～8％，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇，使乙醇体积百分浓度为50%～85%，沉淀产生，去除上清液，沉淀物为粗多糖；
⑷再用乙醇精提，得到精提的回心草多糖产品。
2.按权利要求1所述的药用回心草多糖提取方法，其特征是精提的具体工艺步骤如下：
⑴将粗多糖沉淀物用蒸馏水溶解后，加入食用乙醇至乙醇体积百分浓度为25%～35%，使沉淀产生，离心去沉淀，取上清液；
⑵在上清液中加入食用乙醇至乙醇体积百分浓度为60～85%，使沉淀产生，离心取沉淀；
⑶取上述沉淀物用体积百分浓度95%乙醇洗涤2～4次，减压干燥得到回心草多糖提取成品；
⑷将干燥后的多糖粉碎，得粉未状多糖精品，装入密闭容器防潮保存，备用。
3.根据权利1所述的药用回心草多糖提取方法，其特征是：所述超声波浸提时间为2小时、固液重量/体积比为1∶20，浸提温度为90℃、沉淀粗多糖时乙醇体积百分浓度为80%，调节pH值时采用NaOH稀碱溶液。
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