CN101659708B - 一种药用回心草多糖提取及纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从回心草中提取及纯化回心草多糖的方法。该方法是先将回心草粉碎，于超声波提取器中用热水把粗多糖从从药材中提取出来，提取液经过离心、过滤、浓缩、除去蛋白，再用乙醇从水提物中沉淀析出，得到水溶性的回心草粗多糖，再将粗多糖进一步分离及纯化，真空干燥得纯化回心草多糖精品。本发明能从回心草中最大限度的提取回心草多糖，安全无毒，可靠易行，收率高。为发挥回心草多糖的药效作用，制备各种适应症的药物或保健食品提供了可能。
Description
技术领域
本发明属于一种中药活性成分的提取方法，更具体地说它涉及一种从回心草中提取及纯化回心草多糖的方法。
背景技术
目前已有近百种多糖化合物被提取出来，经药理研究与临床应用，证明多糖具有抗肿瘤、降血脂、抗血栓、增强免疫、延缓衰老等功能的作用，因此多糖的研究开发越来越多的被人们重视。多糖是天然高分子化合物，存在于动植物和微生物中，多糖一般从天然产物中提取，天然多糖是一类重要生物活性物质，具有多方面生物活性和保健功能，可作为药物和保健品的有效成份。目前，人参多糖、枸杞多糖、香菇多糖、刺五加多糖、灵芝多糖用于临床，取得满意的效果。
回心草，学名大叶藓(Rhodobryum roseum(Hedw.)Limp.)是真藓科植物大叶藓及南大叶藓的干燥或新鲜全草，是云南独特的多民族共用草药。民间常单用或同大枣、胡椒、三七等配伍用于治疗心脏病，神经衰弱等。并且其单用治疗冠心病的有效率高达87.88％，其药用价值非常明显。然而遗憾的是目前国内外对回心草的研究较少，且主要是从生药学和整体临床药理学角度加以研究，对其它方面的研究报道较少，至今未见回心草多糖提取方面相关报道。基于以上原因，本发明对回心草多糖的提取方法进行了详细研究。
发明内容
本发明采用的目的是提供一种从回心草中提取及纯化回心草多糖的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
(1)将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中。加入20-30倍的水室温浸泡1小时，调pH8-9，升高温度至75-95℃，恒温浸提2-4小时，用滤布过滤得提取液；残渣重复恒温浸提3次。后二次时间可缩短至1-2小时，加水量为第一次的一半；合并三次提取液。
(2)于离心机中2000-4000r/min离心15-25分钟，取清液。
(3)将提取液于旋转蒸发器减压浓缩至一定体积，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇，至乙醇浓度为60-85％，使沉淀产生，去除上清液，沉淀物为粗多糖。
2、回心草中多糖精制方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
(1)将沉淀物用蒸馏水溶解后，在沉淀中加入食用乙醇至乙醇浓度为25-35％，使沉淀产生，离心去沉淀，取上清液。
(2)在上清液中加入食用乙醇至乙醇浓度为60-85％，使沉淀产生，离心取沉淀。
(3)取上述沉淀物用95％乙醇洗涤2-4次，减压干燥得得成品。
(4)将干燥后的多糖粉碎，得粉未状多糖精品，装入密闭容器防潮保存，备用。
在上述技术方案中，所述浸泡时间为2小时、固液比为(1∶20)，浸提温度为90℃、沉淀乙醇浓度为80％。调节pH用NaOH稀溶液。
在上述技术方案中，所述的沉淀物用乙醇反复洗涤次数为2-4次。
本发明是通过反复实验的基础上，以回心草多糖产率为指标，对提取过程中水浸提时间、固液比、温度，萃取次数，沉析用乙醇浓度等因素分别进行考察，确定了回心草多糖的最佳提取条件，为回心草多糖的开发提供依据。
本发明采用安全无毒的有机溶剂为提取剂，在全国人民都关注食品、药品安全的今天具有重要意义，方法安全无毒，收率高，对环境无污染。有利于更进一步研究回心草多糖在配制药品、保健品的作用效果。
具体实施方式下面以实例进一步说明本发明的实质内容，但本发明的内容并不限于此。
实施例1：
(1)考察浸提时间对提取率的影响：将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中加入20倍的水，调pH8-9，升高温度至90℃，分别浸提不同的时间，合并三次提取液。离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩至一定体积，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇使浓度达到80％，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表1：由此可见，浸提时间2小时就可满足要求了。
表1浸提时间对多糖得率的影响
实施例2
考察固液比对提取率的影响：将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中，分别加入不同倍数的水，调pH8-9，升高温度至90℃，浸提2小时，合并三次提取液。离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩至一定体积，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇使浓度达到80％，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表2：由此可见，固液比为1∶20-30都行，考虑到后续工艺步骤要浓缩，增加成本，选择1∶20较经济。
表2固液比对多糖得率的影响
实施例3
考察浸提温度对提取率的影响：将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中，加入20倍的水，调pH8-9，用不同的温度浸提2小时，合并三次提取液。离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩至一定体积，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇使浓度达到80％，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表3：由此可见，浸提温度为90℃时，产率最高。
表3浸提温度对多糖得率的影响
实施例4
考察萃取次数对提取率的影响：将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中，加入20倍的水，调pH8-9，升高温度至90℃，分别萃取不同的次数，合并几次提取液。离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩至一定体积，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇使浓度达到80％，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表4：由此可见，萃取次数3次，绝大多数多糖已萃取出来。
表4萃取次数对多糖得率的影响
实施例5
考察沉析用乙醇浓度对提取率的影响：将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中，加入20倍的水，调pH8-9，升高温度至90℃，合并三次提取液。离心15分钟后取清液；将提取液减压浓缩至一定体积，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇沉淀，使溶液中乙醇为不同浓度，产生的沉淀经过精制、真空干燥后，粉碎得回心草多糖精品。提取率如表5：由此可见，当乙醇浓度加到80％以上时，才能更多地把多糖沉淀出来。
表5乙醇浓度对多糖得率的影响
Claims (3)
1.一种从回心草中提取多糖的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
(1)将回心草粉碎，过60目，置于超声波提取器中；加入20-30倍的水室温浸泡1小时，调pH8-9，升高温度至75-95℃，恒温浸提2-4小时，用滤布过滤得提取液；残渣重复恒温浸提3次，后二次时间可缩短至1-2小时，加水量为第一次的一半；合并三次提取液；
(2)于离心机中2000-4000r/min离心15-25分钟，取清液；
(3)将步骤(2)中获得的清液于旋转蒸发器减压浓缩至一定体积，用savage法除去蛋白，然后加入食用乙醇，至乙醇浓度为50-85％，使沉淀产生，去除上清液，即得沉淀物粗多糖；
所述浸提时间为2小时、回心草与水的比例为1∶20，浸提温度为90℃、沉淀乙醇浓度为80％，调节pH时用NaOH稀溶液。
2.根据权利要求1所述的从回心草中提取多糖的方法，其特征在于所述的沉淀物用所述的乙醇反复洗涤次数为2-4次。
3.一种回心草中多糖精的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
(1)将通过权利要求1的方法制备得到的回心草粗多糖沉淀物用蒸馏水溶解后，加入食用乙醇至乙醇浓度为25-35％，使其沉淀产生，离心去沉淀，取上清液；
(2)在上清液中加入食用乙醇至乙醇浓度为60-85％，使沉淀产生，离心取沉淀；
(3)取上述沉淀物用95％乙醇洗涤2-4次，得减压干燥得成品；
(4)将干燥后的回心草多糖粉碎，得粉末状回心草多糖精，装入密闭容器防潮保存，备用。
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