CN104250308A - 一种活性多糖的提取方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种活性多糖的提取方法，其包括如下步骤：(1)准备红豆杉原料；(2)回流脱脂、抽虑，将红豆杉原料用6号溶剂油回流脱脂，抽虑，对滤渣进行干燥处理，得到干燥的滤渣；(3)酶解，将所述干燥的滤渣在浸泡剂中搅拌浸泡，然后加入占滤渣重量0.5％～1％的纤维素酶，得到混合液A，调节混合液A的pH至5.0～5.5，第一次酶解；然后加入占滤渣重量0.3％～1.0％的中性蛋白酶，得到混合液B，调节混合液B的pH至6.8～7.0，第二次酶解，灭酶，得到浆液；(4)回流提取；(5)制备粗多糖。本活性多糖的提取方法可加速多糖的释放速度、减少工艺步骤、缩短提取时间，并提高提取率。
Description
技术领域
本发明涉及一种活性多糖的提取方法，本发明还涉及一种活性多糖的应用，属于药用植物开发领域。
背景技术
多糖是由十个以上单糖由糖苷键连接而成的聚合物，广泛存在于生物界中，其分子量从数万到数百万，有的高达上千万。多糖是构成生命活动的四大物质之一，并与维持生命所需的多种生理功能密切相关。其最突出的功能主要有增强机体免疫能力、抗肿瘤作用、抗凝血作用，此外还具有抗病毒，降血糖、降血脂、促进核酸和蛋白质合成等生理功能。
红豆杉是一种珍贵的药用植物，是红豆杉科红豆杉属植物的总称。红豆杉的药用价值早在《本草纲目》中就有记载，主要用于治疗霍乱、伤寒及用于排毒。现代中医亦将其用于治疗糖尿病、肾病及妇科疾病等。1993年，美国将其从红豆杉中分离提取的紫杉醇类药物投入市场，用于治疗多种恶性肿瘤，红豆杉便成为研究的热门药用植物之一。目前已从红豆杉植物中分离出400多种化合物，主要成分为紫杉烷类和非紫杉烷类两种。紫杉烷类为紫杉烷二萜类化合物，非紫杉烷类化合物主要为三萜、甾体、高萜、黄酮、苯丙素类和酚类等。随着人们对红豆杉的深入研究，红豆杉其他成分的药用功能逐步得到开发，研究报道红豆杉多糖有抗肿瘤、免疫调节和预防控制心肌缺血再灌注损伤等功能。近年来，红豆杉的人工种植面积不断扩大，全面开发利用红豆杉的生物活性成分，提高红豆杉的综合利用价值，对红豆杉资源的合理利用和可持续发展具有重大意义。
多糖的提取方法很多，常用的主要有溶剂法、酸法、碱法、酶解法、超滤及二氧化碳超临界萃取等方法，主要步骤就是破坏细胞壁、提取多糖，但是这些提取方法提取速度及提取率都有待提高。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是针对技术现状提供一种提取率高、提取速度快的活性多糖的提取方法。
本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种活性多糖的应用。
本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种活性多糖的提取方法，包括如下步骤：
(1)准备红豆杉原料；
(2)回流脱脂、抽虑，将红豆杉原料用6号溶剂油回流脱脂，抽虑，对滤渣进行干燥处理，得到干燥的滤渣；
(3)酶解，将所述干燥的滤渣在浸泡剂中搅拌浸泡，然后加入占滤渣重量0.5％～1％的纤维素酶，得到混合液A，调节混合液A的pH至5.0～5.5，例如5.2、5.3、5.4，第一次酶解；然后加入占滤渣重量0.3％～1.0％(例如0.5％、0.7％、0.8％)的中性蛋白酶，得到混合液B，调节混合液B的pH至6.8～7.0，第二次酶解，灭酶，得到浆液；
(4)回流提取，对所述浆液进行回流提取处理，得到提取液，第一次离心分离，得到的上清液浓缩，获得浓缩液，所述浓缩液醇沉，第二次离心分离，获得沉淀物；
(5)由沉淀物获得粗多糖。
其中，步骤(1)的操作过程为，红豆杉枝和/或叶烘干、粉碎，过80～100目(例如85目、90目、95目、98目)筛，筛下物即为红豆杉原料。其中，红豆杉优选为人工栽培南方红豆杉。
其中，步骤(2)中，所述回流脱脂的操作过程为，将红豆杉原料置于回流提取罐中，加入红豆杉原料重量3～5倍的6号溶剂油，回流脱脂5～7h(例如5.5h、6h、6.5h)。
其中，步骤(2)中，抽虑后回收6号溶剂油，所得的粗油脂精制得到红豆杉精油；
优选的，步骤(2)中，对所述滤渣进行干燥处理的操作过程为，将所述滤渣置于干燥室内风干，得到干燥的滤渣。
其中，步骤(3)中，所述搅拌浸泡的操作过程为，将干燥后的滤渣置于加热搅拌罐中，加入滤渣重量10～20倍(例如13倍、15倍、18倍)的浸泡剂，于45℃～55℃(例如48℃、50℃、52℃)下搅拌浸泡10～30min(例如15min、20min、25min)；
优选浸泡剂为水。
其中，步骤(3)中，所述第一次酶解的时间为1.5～2.5h，第一次酶解的温度为50～60℃；所述第二次酶解的时间为50～70min，例如55min、60min、65min，第二次酶解后升温至沸，灭酶5～20min，例如8min、10min、15min，得到浆液。
其中，步骤(4)中，所述回流提取处理的操作过程为，将所述浆液转至回流提取罐中，于85～95℃下回流提取2～4h；
优选的，步骤(4)中，所述浓缩液的浓度为20％～40％，例如25％、30％、35％；
优选的，步骤(4)中，所述醇沉所用醇为95％的乙醇，其中95％是指纯乙醇所占的体积份数，所述乙醇的重量为浓缩液重量的3～5倍；
优选的，步骤(4)中，醇沉时间为8～12h、例如9h、10h、11h。
其中，步骤(5)的操作过程为，所述的沉淀物冷冻干燥，获得粗多糖。
或者，步骤(5)的操作过程为，所述的沉淀物用稀释剂稀释，得到稀释液，所述稀释液喷雾干燥，获得粗多糖；
优选的，所述稀释液的浓度为12％～20％；
优选稀释剂为水。
本发明解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为：依照上述制备方法制备出的红豆杉提取物在制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、降低血液中胆固醇含量、预防冠心病药物中的应用。
优选的，所述药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本提取方法采用生物酶降解与回流提取相结合的方法提取活性多糖，其利用生物酶在温和的条件下分解植物组织，去除蛋白等成分，加速了多糖的释放速度，减少了工艺步骤，并缩短提取时间、提高了提取率。另外，本提取方法可降低能耗，并不会破坏多糖的生理活性。
附图说明
图1为实施例1制备活性多糖的工艺流程图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
一种活性多糖的提取方法，包括如下步骤：
(1)准备红豆杉原料，将红豆杉枝剪枝切碎、干燥、粉碎，过100目筛，筛下物即为红豆杉原料，备用。
(2)回流脱脂、抽虑，称取筛下物10kg，置于回流提取罐中，加入红豆杉原料重量3倍的6号溶剂油，回流脱脂6h；抽虑，回收6号溶剂油，所得的副产物——粗油脂精制可得到红豆杉精油；而将滤渣置于干燥室内风干，得到干燥的滤渣。
(3)酶解，将干燥的滤渣置于加热搅拌罐内，加入滤渣重量10倍的浸泡剂——水，于50℃下低速搅拌浸泡20min；然后向加热搅拌罐中加入占滤渣重量0.8％的纤维素酶，得到混合液A，调节混合液A的pH至5.5，在50℃下低速搅拌第一次酶解2小时；再加入占滤渣重量0.6％的中性蛋白酶，得到混合液B，调节混合液B的pH至7.0，第二次酶解1小时，升温至90℃，然后灭酶10min，得到浆液。
(4)回流提取，将浆液转入回流提取罐中，于90℃下回流提取2小时，得到提取液，第一次离心分离，得到的上清液置于减压浓缩罐中，减压浓缩获得浓度为30％的浓缩液，滤渣另作它用；向浓缩液中加入占浓缩液重量的4倍的95％的乙醇，低温沉淀10小时，该阶段即为醇沉过程，第二次离心分离，的到的上清液泵入回收罐回收乙醇，获得的沉淀物备用；
(5)沉淀物冷冻干燥，得到含量为88.72％的粗多糖0.92kg。
当然在步骤(5)中，也可以先将沉淀物用水稀释成浓度为12％～20％(例如12％)的稀释液，稀释液喷雾干燥，也能获得粗多糖。
本实施例具体的流程图见图1。
用本实施例制备的活性多糖可以用来制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、降低血液中胆固醇含量、预防冠心病的药物，如药品、保健药品或保健食品，药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
实施例2
一种活性多糖的提取方法，包括如下步骤：
(1)准备红豆杉原料，将红豆杉枝剪枝切碎、干燥、粉碎，过100目筛，筛下物即为红豆杉原料，备用。
(2)回流脱脂、抽虑，称取筛下物10kg，置于回流提取罐中，加入红豆杉原料重量3倍的6号溶剂油，回流脱脂6h；抽虑，回收6号溶剂油，所得的副产物——粗油脂精制可得到红豆杉精油；而将滤渣置于干燥室内风干，得到干燥的滤渣。
(3)酶解，将干燥的滤渣置于加热搅拌罐内，加入滤渣重量20倍的浸泡剂——水，于50℃下低速搅拌浸泡20min；然后向加热搅拌罐中加入占滤渣重量1.0％的纤维素酶，得到混合液A，调节混合液A的pH至5.5，在50℃下低速搅拌第一次酶解2小时；再加入占滤渣重量0.8％的中性蛋白酶，得到混合液B，调节混合液B的pH至7.0，第二次酶解1小时，升温至90℃，然后灭酶10min，得到浆液。
(4)回流提取，将浆液转入回流提取罐中，于90℃下回流提取2小时，得到提取液，第一次离心分离，得到的上清液置于减压浓缩罐中，减压浓缩获得浓度为30％的浓缩液，滤渣另作它用；向浓缩液中加入占浓缩液重量的5倍的95％的乙醇，低温沉淀10小时，该阶段即为醇沉过程，第二次离心分离，的到的上清液泵入回收罐回收乙醇，获得的沉淀物备用；
(5)沉淀物冷冻干燥，得到含量为89.16％的粗多糖1.05kg。
当然在步骤(5)中，也可以先将沉淀物用水稀释成浓度为12％～20％(例如18％)的稀释液，稀释液喷雾干燥，也能获得粗多糖。
用本实施例制备的活性多糖可以用来制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、降低血液中胆固醇含量、预防冠心病的药物，如药品、保健药品或保健食品，药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
实施例3
一种活性多糖的提取方法，包括如下步骤：
(1)准备红豆杉原料，将红豆杉枝剪枝切碎、干燥、粉碎，过100目筛，筛下物即为红豆杉原料，备用。
(2)回流脱脂、抽虑，称取筛下物10kg，置于回流提取罐中，加入红豆杉原料重量3倍的6号溶剂油，回流脱脂6h；抽虑，回收6号溶剂油，所得的副产物——粗油脂精制可得到红豆杉精油；而将滤渣置于干燥室内风干，得到干燥的滤渣。
(3)酶解，将干燥的滤渣置于加热搅拌罐内，加入滤渣重量12倍的浸泡剂——水，于50℃下低速搅拌浸泡20min；然后向加热搅拌罐中加入占滤渣重量0.6％的纤维素酶，得到混合液A，调节混合液A的pH至5.5，在50℃下低速搅拌第一次酶解2小时；再加入占滤渣重量0.4％的中性蛋白酶，得到混合液B，调节混合液B的pH至7.0，第二次酶解1小时，升温至90℃，然后灭酶10min，得到浆液。
(4)回流提取，将浆液转入回流提取罐中，于90℃下回流提取2小时，得到提取液，第一次离心分离，得到的上清液置于减压浓缩罐中，减压浓缩获得浓度为30％的浓缩液，滤渣另作它用；向浓缩液中加入占浓缩液重量的3倍的95％的乙醇，低温沉淀10小时，该阶段即为醇沉过程，第二次离心分离，的到的上清液泵入回收罐回收乙醇，获得的沉淀物备用；
(5)沉淀物冷冻干燥，得到含量为88.64％的粗多糖0.88kg。
用本实施例制备的活性多糖可以用来制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、降低血液中胆固醇含量、预防冠心病的药物，如药品、保健药品或保健食品，药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
采用苯酚-硫酸法测定实施例1～3制备的粗多糖中活性多糖的含量，检测结果如下表所示：
| 实施例 | 水分(％) | 溶解度(％) | 含量(％) | 提取率(得率)(％) |
| 1 | 2.32 | 100 | 88.72 | 9.20 |
| 2 | 2.20 | 100 | 89.16 | 10.50 |
| 3 | 2.38 | 100 | 88.64 | 8.80 |
以上内容仅为本发明的较佳实施例，对于本领域的普通技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (10)
1.一种活性多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)准备红豆杉原料；
(2)回流脱脂、抽虑，将红豆杉原料用6号溶剂油回流脱脂，抽虑，对滤渣进行干燥处理，得到干燥的滤渣；
(3)酶解，将所述干燥的滤渣在浸泡剂中搅拌浸泡，然后加入占滤渣重量0.5％～1％的纤维素酶，得到混合液A，调节混合液A的pH至5.0～5.5，第一次酶解；然后加入占滤渣重量0.3％～1.0％的中性蛋白酶，得到混合液B，调节混合液B的pH至6.8～7.0，第二次酶解，灭酶，得到浆液；
(4)回流提取，对所述浆液进行回流提取处理，得到提取液，第一次离心分离，得到的上清液浓缩，获得浓缩液，所述浓缩液醇沉，第二次离心分离，获得沉淀物；
(5)由沉淀物获得粗多糖。
2.根据权利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤(1)的操作过程为，红豆杉枝和/或叶烘干、粉碎，过80～100目筛，筛下物即为红豆杉原料。
3.根据权利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤(2)中，所述回流脱脂的操作过程为，将红豆杉原料置于回流提取罐中，加入红豆杉原料重量3～5倍的6号溶剂油，回流脱脂5～7h。
4.根据权利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤(2)中，抽虑后回收6号溶剂油，所得的粗油脂精制得到红豆杉精油；
优选的，步骤(2)中，对所述滤渣进行干燥处理的操作过程为，将所述滤渣置于干燥室内风干，得到干燥的滤渣。
5.根据权利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤(3)中，所述搅拌浸泡的操作过程为，将干燥后的滤渣置于加热搅拌罐中，加入滤渣重量10～20倍的浸泡剂，于45℃～55℃下搅拌浸泡10～30min；
优选浸泡剂为水。
6.根据权利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤(3)中，
所述第一次酶解的时间为1.5～2.5h，第一次酶解的温度为50℃～60℃；所述第二次酶解的时间为50～70min，第二次酶解后升温至沸，灭酶5～20min，得到浆液。
7.根据权利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤(4)中，所述回流提取处理的操作过程为，将所述浆液转至回流提取罐中，于85～95℃下回流提取2～4h；
优选的，步骤(4)中，所述浓缩液的浓度为20％～40％；
优选的，步骤(4)中，所述醇沉所用醇为95％的乙醇，所述乙醇的重量为浓缩液重量的3～5倍；
优选的，步骤(4)中，醇沉时间为8～12h。
8.根据权利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤(5)的操作过程为，所述的沉淀物冷冻干燥，获得粗多糖。
9.根据权利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤(5)的操作过程为，所述的沉淀物用稀释剂稀释，得到稀释液，所述稀释液喷雾干燥，获得粗多糖；
优选的，所述稀释液的浓度为12％～20％；
优选稀释剂为水。
10.根据权利要求1至9任一项权利要求所述的制备方法制备出的红豆杉提取物在制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、降低血液中胆固醇含量、预防冠心病药物中的应用；
优选的，所述药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20141231 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |