CN102228462B - 兽用土青注射液制备方法及临床应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种兽用土青注射液制备方法及临床应用，注射液原料主要包括土霉素、青蒿素、甲氧苄氨嘧啶、氟尼辛葡甲胺、氧化镁或氯化镁、抗氧剂、pH调节剂、复合有机溶媒和水。本发明作为一种兽用复方制剂，主要用于治疗敏感的革兰氏阳性菌和阴性菌，附红体、立克次体、支原体引起的感染性疾病和继发感染。兽用复方土青注射液制备方法简单，生产过程温和，螯合温度低，稳定性好，使用方便，适合工业化生产。

Description

兽用土青注射液制备方法及临床应用

技术领域

本发明涉及一种兽用土青注射液制备方法及临床应用，特别是一种由土霉素、青蒿素、甲氧苄氨嘧啶、氟尼辛葡甲胺和氯化镁(或氧化镁)组成的复方制剂的制备方法。本发明的注射液对猪气喘病、副猪嗜血杆菌病、肠炎、腹泻、牛巴氏杆菌病、附红体、立克次体、支原体引起的感染性疾病有显著疗效。

背景技术

土霉素为四环素类抗生素。本品为广谱抑菌剂，许多立克次体属、支原体属、衣原体属、螺旋体、阿米巴原虫和某些疟原虫对本品敏感，其他如放线菌属、炭疽杆菌、单核细胞增多性李斯特菌、梭状芽孢杆菌、奴卡菌属、弧菌、布鲁菌属、弯曲杆菌、耶尔森菌等也对本品敏感。多年来土霉素及其相关制剂广泛应用，土霉素碱因口服吸收少，且含较多量差向化合物，已不再口服使用，现普遍使用土霉素注射液。土霉素碱微溶于水，可溶于甲醇、乙醇、丙二醇等，在空气中较稳定，但其制剂在酸性或碱性条件下，遇热或长时间存放均易变色或沉淀、甚至变成黑色，造成效价降低。在兽医临床中，土霉素对猪的副伤寒、附红细胞体、炭疽病、喘气病、痢疾、猪肺疫均疗效显著；在家禽方面，用于雏禽痢疾、衣原体病、还可以用缓解应激反应、提高产蛋量、促进幼禽增重等；在水产方面，应用于治疗鱼类弧病菌、脱磷病、烂鳃病、鳗鱼受德化氏病、鳟鱼疮病、鳗赤鳍病等。

青篙素是从中药青篙中提取的有过氧基团的倍半萜内酯药物。其对鼠疟原虫红内期超微结构的影响，主要是疟原虫膜系结构的改变，该药首先作用于食物泡膜、表膜、线粒体，内质网，此外对核内染色质也有一定的影响。提示青篙素的作用方式主要是干扰表膜-线粒体的功能。可能是青篙素作用于食物泡膜，从而阻断了营养摄取的最早阶段，使疟原虫较快出现氨基酸饥饿，迅速形成自噬泡，并不断排出虫体外，使疟原虫损失大量胞浆而死亡。在兽医临床中，主用于畜禽等动物立克次体、原虫、细菌、病毒等引起的多种瘟热疫病。

甲氧苄氨嘧啶属抑菌剂，为亲脂性弱碱，其对大肠埃希菌、克雷伯菌属、奇异变形杆菌、沙门菌属、志贺菌属均具有抗菌活性。本品作用机制为干扰细菌的叶酸代谢。主要为选择性抑制细菌的二氢叶酸还原酶的活性，使二氢叶酸不能还原为四氢叶酸，而合成叶酸是核酸生物合成的主要组成部分，因此本品阻止了细菌核酸和蛋白质的合成，且本品与细菌的二氢叶酸还原酶的结合较之对哺乳类动物酶的结合紧密5万～6万倍。本品与土霉素合用可使细菌的叶酸合成代谢遭到双重阻断，有协同作用，使土霉素抗菌活性增强，并可使抑菌作用转为杀菌作用，减少耐药菌株产生。

氟尼辛葡甲胺为苯基乙酸衍生物，具有镇痛、抗炎、解热镇痛作用，其镇痛作用比阿司匹林和吲哚美辛强，约为阿司匹林的26～50倍，系外周型镇痛药。特点为药效强，不良反应轻，剂量小，个体差异小。兽医临床上常用于缓解马的内脏绞痛、肌肉与骨骼紊乱引起的疼痛及抗炎；牛的各种疾病感染引起的急性炎症的控制，如蹄叶炎、关节炎等，另外也可用于母猪乳房炎、子宫炎及无乳综合征的辅助治疗。

当代畜禽业，从大量的临床病例可以看出，革兰氏阳性菌和阴性菌，附红体、立克次体、支原体引起的感染性疾病，诸如：附红细胞体等血液；原虫病、气喘病、传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病；各种肠炎、拉稀等肠道疾病；链球菌病、仔猪副伤寒等，市场上缺少标本兼治的治疗药物，迫切需求一种药效可靠、疗效好、使用方便的的特效药物。

CN101062042A(200710052243.X)公开了一种兽用复方长效土霉素注射液及其制备方法，其注射液处方中含有土霉素、甲氧苄氨嘧啶或二甲氧苄氨嘧啶、氯化镁或氧化镁、乙醇胺、抗氧剂、复合有机溶媒和水。该注射液的主要成分是土霉素，甲氧苄氨嘧啶，其产品药效上已达到或超过进口的类似产品-土霉素注射液，但没有青蒿素和氟尼辛葡甲胺等特效成分。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种兽用土青注射液制备方法及临床应用。

本发明的技术特点是将由土霉素、青蒿素、甲氧苄氨嘧啶、氟尼辛葡甲胺和氯化镁(或氧化镁)组成复方制剂，其产品特点为(1)工艺领先，对气喘病、传染性胸膜肺炎有特效。(2)高效、低毒且对局部组织刺激小。(3)注射本品5分钟在血液出现，2小时达到血液高峰且有效浓度维持2-3天。主要用于治疗敏感的革兰氏阳性菌和阴性菌，附红体、立克次体、支原体引起的感染性疾病和继发症。特别应用于：(1)气喘病、传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病；(2)各种肠炎、拉稀等肠道疾病；(3)附红细胞体等血液原虫病；(4)链球菌病、仔猪副伤寒等。

在进口兽药质量标准中，土霉素注射液的性状要求为黄色至棕黄色澄明液体。但市场上很多土霉素注射液性状为棕红色或棕褐色，说明土霉素注射液在生产或存储过程中均存在氧化或降解现象。土霉素微溶于水，且在强碱性条件下极易被破坏而失去生物活性，但药典中规定土霉素注射液的pH要求为8.0-9.0。青蒿素在水中几乎不溶，其水溶液浓度离治疗效果的有效浓度相差巨大；氟尼辛葡甲胺是一种新型的、非甾体类动物专用的解热镇痛药物，溶于水和乙醇；本发明的主要技术任务在于：(1)寻求一种适宜的溶剂，保证青蒿素的完全溶解，以达到有效治疗剂量。(2)寻求合适的溶剂，力求土霉素的完全溶解，在达到有效治疗浓度的同时保证土霉素在碱性溶液中的稳定性。(3)兼顾每种药物的性质，寻求合适的稳定剂，保证复方土青注射液在规定pH范围内的稳定性。

一种兽用复方土青注射液，原料组分如下，均为重量份：

土霉素10-30g，青蒿素2-8g，甲氧苄氨嘧啶2-10g，氟尼辛葡甲胺2-10g，氯化镁或氧化镁2-10g，抗氧剂0.1-1g，pH调节剂5-10g，复合有机溶媒40-60g，注射用水10-40g。

上述兽用复方土青注射液的制备方法，步骤如下：

(1)取处方量的α-吡咯烷酮、N，N-二甲基甲酰胺于容器中，搅拌均匀，加入土霉素搅拌均匀得A液。

(2)氯化镁或氧化镁、抗氧剂溶于水中，搅拌溶解均匀，得B液。

(3)甲氧苄氨嘧啶用85℃丙二醇溶解均匀后，降温至30℃以下，得C液。

(4)氟尼辛葡甲胺用水溶解完全，得D液。

(5)青蒿素用乙醇溶解完全，得E液。

(6)将B液缓慢加入A液中，充分混合均匀，然后逐渐加入pH调节剂，并不断搅拌，将药液转入50℃的水浴使之保温，溶解澄明后加入溶液C、D和E。

(7)保温搅拌30分钟，调节pH值在8.0-9.0之间，注射用水至定量。

(8)药液用0.22-0.45μm的有机滤膜进行过滤，除菌，充氮气，无菌分装即得。

进一步，兽用复方土青注射液的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中的α-吡咯烷酮、N，N-二甲基甲酰胺与步骤(3)中的丙二醇，步骤(5)中的乙醇，四者之间重量比为(4-5)∶(1-2)∶(1-2)∶(1-2)。

进一步，兽用复方土青注射液的制备方法，其特征在于所述步骤(6)中pH调节剂的最佳选择为乙醇胺。

进一步，兽用复方土青注射液的制备方法，其特征在于所述步骤(2)、(4)中所用的注射用水的最佳比例为3∶2。

进一步，兽用复方土青注射液的制备方法，其特征在于所述步骤(7)中pH值的优化范围为8.4-8.7。

进一步，兽用复方土青注射液的制备方法，其特征在于所述步骤(8)中除菌方法为0.22-0.45μm的有机滤膜进行过滤。

进一步，兽用复方土青注射液的制备方法，其特征在于所述步骤(8)中充氮气分装的益处在于防止主药降解，增加土霉素注射液的稳定性。

与其他土霉素注射液相比较，本发明的优点在于，选择氯化镁为金属离子络合剂，使不溶于水的土霉素与镁离子形成络合物，优选α-吡咯烷酮与N，N-二甲基甲酰胺为复方溶媒，用以增加土霉素络合物在水溶液中的稳定性；青蒿素几乎不溶于水，优选乙醇为溶剂，使难溶性的青蒿素达到了有效治疗浓度，充分发挥药效；氟尼辛葡甲胺为解热、镇痛、抗炎药物，特点为药效强，不良反应轻，剂量小，个体差异小。该药的加入，对于家畜发热、疼痛性疾病等效果显著，妥善解决了家畜发热性疾病的问题；兼顾每种原料的性质，本注射液选择优化pH值：8.4-8.7，同时选用优化抗氧剂，增强复方土青注射液的稳定性。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。

实施例1、复方土青注射液制备方法

一种兽用复方土青注射液，含有如下组分，均为重量份：

土霉素10g，青蒿素4g，甲氧苄氨嘧啶4g，氟尼辛葡甲胺4g，氯化镁4g，硫代硫酸钠0.5g，乙醇胺6g，α-吡咯烷酮30g，N，N-二甲基甲酰胺10g，丙二醇10g，乙醇10g，注射用水8g。

该兽用复方土青注射液采用如下方法进行制备：

(1)取处方量的α-吡咯烷酮30g、N，N-二甲基甲酰胺10g于容器中，搅拌均匀，加入土霉素10g搅拌均匀得A液。

(2)氯化镁4g、硫代硫酸钠0.5g溶于水中，搅拌溶解均匀，得B液。

(3)甲氧苄氨嘧啶4g，用丙二醇10g加热85℃溶解均匀后，降温至30℃以下，得C液。

(4)氟尼辛葡甲胺4g用水溶解完全，得D液。

(5)青蒿素4g用乙醇10g溶解完全，得E液。

(6)将B液缓慢加入A液中，充分混合均匀，然后逐渐加入乙醇胺，并不断搅拌，将药液转入50℃的水浴使之保温，溶解澄明后加入溶液C、D和E。

(7)保温搅拌30分钟，调节pH值为8.6，注射用水至定量。

(8)药液用0.22-0.45μm的有机滤膜进行过滤，除菌，充氮气，无菌分装即得。

实施例2、复方土青注射液制备方法

一种兽用复方土青注射液，含有如下组分，均为重量份：

土霉素15g，青蒿素6g，甲氧苄氨嘧啶5g，氟尼辛葡甲胺4g，氧化镁6g，硫脲0.7g，乙醇胺5g，α-吡咯烷酮25g，N，N-二甲基甲酰胺5g，丙二醇10g，乙醇10g，注射用水9g。

该兽用复方土青注射液采用如下方法进行制备：

(1)取处方量的α-吡咯烷酮15g、N，N-二甲基甲酰胺5g于容器中，搅拌均匀，加入土霉素15g搅拌均匀得A液。

(2)氧化镁6g、硫脲0.7g溶于水中，搅拌溶解均匀，得B液。

(3)甲氧苄氨嘧啶5g，用丙二醇10g加热85℃溶解均匀后，降温至30℃以下，得C液。

(4)氟尼辛葡甲胺4g用水溶解完全，得D液。

(5)青蒿素6g用乙醇10g溶解完全，得E液。

(6)将B液缓慢加入A液中，充分混合均匀，然后逐渐加入乙醇胺5g，并不断搅拌，将药液转入50℃的水浴使之保温，溶解澄明后加入溶液C、D和E。

(7)保温搅拌30分钟，调节pH值为8.5，注射用水至定量。

(8)药液用0.22-0.45μm的有机滤膜进行过滤，除菌，充氮气，无菌分装即得。

实施例3、复方土青注射液制备方法

一种兽用复方土青注射液，含有如下组分，均为重量份：

土霉素30g，青蒿素3g，甲氧苄氨嘧啶3g，氟尼辛葡甲胺2g，氧化镁4g，甲醛合次亚硫酸氢钠0.3g，二乙醇胺5g，α-吡咯烷酮15g，N，N-二甲基甲酰胺10g，丙二醇15g，乙醇7g，注射用水6g。

该兽用复方土青注射液采用如下方法进行制备：

(1)取处方量的α-吡咯烷酮15g、N，N-二甲基甲酰胺10g于容器中，搅拌均匀，加入土霉素30g搅拌均匀得A液。

(2)氧化镁4g、甲醛合次亚硫酸氢钠0.3g溶于水中，搅拌溶解均匀，得B液。

(3)甲氧苄氨嘧啶3g，用丙二醇15g加热85℃溶解均匀后，降温至30℃以下，得C液。

(4)氟尼辛葡甲胺2g用水溶解完全，得D液。

(5)青蒿素3g用乙醇7g溶解完全，得E液。

(6)将B液缓慢加入A液中，充分混合均匀，然后逐渐加入三乙醇胺，并不断搅拌，将药液转入50℃的水浴使之保温，溶解澄明后加入溶液C、D和E。

(7)保温搅拌30分钟，调节pH值为8.7，注射用水至定量。

(8)药液用0.22-0.45μm的有机滤膜进行过滤，除菌，充氮气，无菌分装即得。

实施例4、复方土青注射液制备方法

一种兽用复方土青注射液，含有如下组分，均为重量份：

土霉素15g，青蒿素2g，甲氧苄氨嘧啶5g，氟尼辛葡甲胺4g，氯化镁10g，亚硫酸氢钠0.1g，乙醇胺8g，α-吡咯烷酮25g，N，N-二甲基甲酰胺5g，丙二醇10g，乙醇7g，注射用水9g

该兽用复方土青注射液采用如下方法进行制备：

(1)取处方量的α-吡咯烷酮25g、N，N-二甲基甲酰胺5g于容器中，搅拌均匀，加入土霉素15g搅拌均匀得A液。

(2)氯化镁10g、亚硫酸氢钠0.1g溶于水中，搅拌溶解均匀，得B液。

(3)甲氧苄氨嘧啶5g，用丙二醇10g加热85℃溶解均匀后，降温至30℃以下，得C液。

(4)氟尼辛葡甲胺4g用水溶解完全，得D液。

(5)青蒿素2g用乙醇7g溶解完全，得E液。

(6)将B液缓慢加入A液中，充分混合均匀，然后逐渐加入乙醇胺8g，并不断搅拌，将药液转入50℃的水浴使之保温，溶解澄明后加入溶液C、D和E。

(7)保温搅拌30分钟，调节pH值为8.5，注射用水至定量。

(8)药液用0.22-0.45μm的有机滤膜进行过滤，除菌，充氮气，无菌分装即得。

按本方案生产的兽用复方土青注射液，按市售产品进行包装，分别按药典标准要求进行常温试验、加速试验，从一年的观察结果来看，其性状(黄色)、pH值(8.4-8.7)、处方中各组分含量(90.0-110.0％)均在规定范围之内，说明该注射液非常稳定。

该实施例的兽用复方土青注射液的临床试验数据如下：

表1兽用复方土青注射液临床治疗效果(治疗剂量：1kg体重0.1ml)

表2与土霉素注射液临床效果比对试验(治疗剂量：1kg体重0.1ml)

德州武城刘某喂养育肥猪76头，60日龄突然发病，猪支出现消瘦、被毛粗乱、食欲减退等，出现咳嗽或急促咳嗽、清晨进食前后及剧烈运动时最明显，严重的可发生痉挛性咳嗽，腹式呼吸或犬坐姿势，体温一般正常。解剖后发现，肺心叶粟粒大至绿豆大，形成融合性支气管肺炎，两侧病变大致对称，病变部肿大，淡红色或灰红色半透明状，界限明显，象鲜嫩的肌肉样肉变，疑为猪气喘病。用本发明注射液进行治疗，注射剂量为每kg体重0.1ml，注射24小时后，猪群呼吸困难明显减轻，食欲明显改善，连续治疗三天后，猪群基本康复，治愈率达97.64％。

安全性试验结果：注射本注射液后猪群无明显死亡。观察30天，给药后的猪群长势良好，无任何疾病发生。

通过以上试验数据表明，本发明的注射液在疾病治疗中对猪气喘病、副猪嗜血杆菌病、肠炎、腹泻、牛巴氏杆菌病、牛肺炎病、附红体、立克次体、支原体引起的感染性疾病有显著疗效。

通过与对照组的治疗结果表明，本发明的注射液对猪气喘、副猪嗜血杆菌病、猪肠炎、腹泻、牛巴氏杆菌病、牛肺炎等系统疾病的平均治愈率为94.89％，土霉素注射液治疗组的平均治愈率为67.83％，空白对照组的平均治愈率为20.48％，本发明组与土霉素注射液治疗组、空白对照组相比较，疗效及其显著，安全可靠，无明显毒副作用。

Claims (4)

1.一种兽用复方土青注射液，其特征在于，原料组成如下，均为重量比：

土霉素10-30g，青蒿素2-8g，甲氧苄氨嘧啶2-10g，氟尼辛葡甲胺2-10g，氯化镁或氧化镁2-10g，抗氧剂0.1-1g，pH调节剂5-10g，复合有机溶媒40-60g，注射用水10-40g；所述的复合有机溶媒为α-吡咯烷酮、丙二醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺和乙醇。

2.根据权利要求1所述的兽用复方土青注射液，其特征在于，所述的抗氧剂为亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、硫脲、甲醛合次亚硫酸氢钠和无水亚硫酸钠中一种或多种。

3.根据权利要求1所述的兽用复方土青注射液，其特征在于，所述的pH调节剂为乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺或乙二胺中一种或多种。

4.根据权利要求1所述的兽用复方土青注射液，其特征在于制备方法是按以下步骤进行：

(1)取处方量的α-吡咯烷酮、N，N-二甲基甲酰胺于容器中，搅拌均匀，加入土霉素搅拌均匀得A液；

(2)氯化镁或氧化镁、抗氧剂溶于水中，搅拌溶解均匀，得B液；

(3)丙二醇加热至85℃，加入甲氧苄氨嘧啶溶解均匀后，降温30℃以下，得C液；

(4)氟尼辛葡甲胺用水溶解完全，得D液；

(5)青蒿素用乙醇溶解完全，得E液；

(6)将B液缓慢加入A液中，充分混合均匀，然后逐渐加入pH调节剂，并不断搅拌，将药液转入50℃的水浴使之保温，溶解澄明后加入溶液C、D和E；

(7)将合并液保温搅拌30分钟，调节pH值在8.0-9.0之间，注射用水至定量；

(8)药液用0.22-0.45μm的有机滤膜进行过滤，充氮气，无菌分装即得。