CN102217686A - 一种降糖茶及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种降糖茶及其制备方法。该降糖茶由番石榴叶提取物和辅料组成，所述番石榴叶提取物的重量比为60.0％～99.9％，所述辅料的重量比为0.1％～40.0％，所述番石榴叶提取物为番石榴叶60％～80％的乙醇提取物，辅料为饮用茶和/或可食用花类。本发明降糖茶具有有效降糖和无毒副作用的优点，其制备方法配方简单、药效高、口感好及成本低。

Description

一种降糖茶及其制备方法

技术领域

本发明涉及具有降糖作用的茶饮品及其加工技术领域，尤其涉及一种以番石榴叶提取物为主成分的降糖茶及其制备方法。

背景技术

糖尿病是一类高发病率的慢性疾病，发病率有逐年增加的趋势，已成为继心脑血管疾病、癌症之后的严重威胁人类健康的第三大疾病，严重影响人们的生活甚至危及生命。据统计，全世界约有糖尿病患者1.94亿，中国糖尿病患者已超过4000万，预计到2025年全球糖尿病患者人数将达到3.33亿。西医对糖尿病的病因及慢性并发症发病机制尚未完全阐明，至今糖尿病尚不能根治，慢性并发病的防治尚无理想措施。

II型糖尿病是以胰岛素耐受、高血糖、高血脂为主要特征的一种代谢性疾病，其病人往往经历以下过程：肥胖→核过氧化酶增殖体激活受体(PPAR)调节→胰岛素耐受→高血胰岛素→胰岛细胞受压与受损→渐进性的胰岛素释放降低→高血糖的发生。其中PPAR失活引起的胰岛素耐受是整个过程的关键环节。PPAR是配体激活转录因子，属于核受体基因家族，可调节许多基因的表达，影响血糖浓度、脂质代谢、血管紧张度和致炎等。PPAR有3种亚型：PPARα、PPAR6、PPARγ，其中PPARγ的激活可以提高胰岛素敏感性，减少炎症的发生，降低游离脂肪酸的脂质浓度以及降低血压。

此外，目前的研究发现糖尿病与自由基对胰脏B细胞损伤有关。正常情况下，胰脏B细胞是生产和分泌胰岛素的基本单位，其本身含有清除自由基系统，所以自由基不会引起胰脏B细胞损害。但是，在化学或免疫因素作用下，B细胞会受到损害，其抗自由基能力降低，引起自由基大量集聚，破坏B细胞结构，影响其分泌胰岛素，最终引起糖尿病。实验发现，I型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病)和II型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)患者血清中，自由基含量都明显增加，抗氧系统却明显降低。糖尿病合并血管病变者，血管自由基含量增加更明显，清除自由基能力也明显降低，所以，自由基损伤是糖尿病及其并发症的重要因素。自由基不仅破坏B细胞结构，影响胰岛素分泌，而且自由基对不饱和脂肪酸过氧化产物可以引起小动脉纤维性病变、动脉硬化和心血管疾病，抑制前列腺环素生物合成，使抗凝血因子失活，血流处于高凝状态，易于诱发血栓形成，使微循环障碍，出现大血管和微循环病变。所以，清除自由基是预防和治疗糖尿病及其并发症的重要途径。

糖尿病的最大特点是病程长且复杂、难根治，给社会和个人带来了沉重的经济负担。糖尿病患者长期服用胰岛素类、磺酰脲类、双胍类等多种药物，会对药物产生依赖性，导致药量越吃越大，品种越来越多，而且久服西药会带来损肝、伤肾、刺激胃肠道等副作用，让患者苦不堪言。同时，这些药物的价格相对较高，令患者难以接受。

在糖尿病治疗的三大原则中饮食治疗是基础措施。近年来，国内外把寻找治疗糖尿病药物的目标重点转向具有降糖活性的天然产物。

番石榴叶为桃金娘科(Myrtaceau)番石榴属(Psidium L)番石榴(Psidium guajava L)的干燥叶，异名鸡矢茶，味甘涩，性平，具有生津止渴、除烦、收敛止泻、消炎止血的功效。番石榴是热带常绿小乔木或灌木，又名芭乐、喇叭果，主要化学成分有黄酮类化合物、鞣质、挥发油、槲皮素、植物固醇、叶绿素和多糖等。

广西医学院糖尿病科研组对番石榴叶制剂治疗糖尿病的机理作了系统研究，证明番石榴叶的有效成分为黄酮苷，有促进胰岛素与靶细胞膜上专一受体的结合作用，能调整糖、脂代谢。经临床治疗各型糖尿病人175例，总有效率81.7％～84.6％，并有降血压及降血脂作用。

现有的降糖茶多采用多种中药混合，药物之间的作用复杂，长期服用后的毒副作用未知，效果难以确定，并且仅通过少量临床试验或动物试验数据结果推测其作用，没有从糖尿病的作用机制上验证和确定降糖茶的疗效。此外，多数降糖茶的制备方法仅经简单的物理粉碎处理，粗粉装袋，从而番石榴原叶中的粗纤维、杂蛋白和无机物等副成分会影响有效成分在人体的吸收，导致药效低，并且可能对人体造成负担，降低胃肠适应性且口感较差。

发明内容

为了更加科学、有效地利用番石榴叶，克服天然药草产品的见效慢、作用弱、副成分多、口感差等缺点，本发明采用现代提取精制方法，有效地解决了上述问题，开发功用更强、成分更纯粹、口感更佳的健康茶饮。

本发明一方面提供了一种降糖茶，由番石榴叶提取物和辅料组成，番石榴叶提取物的重量百分比为60.0％～99.9％，辅料的重量百分比为0.1％～40.0％，其中，番石榴叶提取物为番石榴叶60％～80％的乙醇提取物，辅料为饮用茶和/或可食用花类。

优选的，番石榴叶提取物的含量为70.0％～80.0％，辅料含量为20.0％～30.0％。

番石榴叶提取物是以番石榴的干燥叶为原料经现代精制工艺提取制备得到。具体的，是将番石榴叶用浓度为60％～80％的乙醇水溶液提取得到。用乙醇提取番石榴叶原料成分，将番石榴叶浸出液加热蒸馏，其中乙醇馏出后又被冷却，重复流回浸出容器中浸提番石榴叶原料，这样周而复始，直至番石榴叶有效成分回流提取完全。优选番石榴叶60％乙醇回流提取物。番石榴叶提取物在提取后经浓缩和干燥等处理工艺制备成粉末状。将番石榴叶药材在室温条件下用一定浓度的乙醇浸提后过滤浓缩得到的提取物粉末也可以替代本发明的番石榴叶提取物。本发明番石榴叶提取物也可以用番石榴叶药材的水提取物来替代，但由于黄酮苷在水中的溶解度较低，因此番石榴叶水提物的活性较醇提物差。

饮用茶选自乌龙茶、绿茶和黑茶中的一种或几种。

乌龙茶，亦称青茶、半发酵茶，包括铁观音、大红袍和冻顶乌龙茶等。其药理作用突出表现在分解脂肪、减肥健美等方面。乌龙茶中含有大量的茶多酚、单宁酸，可以提高脂肪分解酶的作用，降低血液中的胆固醇含量，有降低血压、抗氧化、防衰老及防癌等作用，并能提高口感回甘。乌龙茶优选铁观音。

绿茶包括西湖龙井、庐山云雾茶和信阳毛尖等，较多的保留了鲜叶内的天然物质。其中茶多酚保留鲜叶的85％以上。绿茶中保留的天然物质成分对防衰老、防癌、抗癌、杀菌、消炎等均有特殊效果。

黑茶包括普洱茶、茯茶和黑砖茶等，具有良好的降解脂肪、抗血凝、促纤维蛋白原溶解作用，并能显著抑制血小板聚集，还能使血管壁松弛，增加血管有效直径，从而抑制主动脉及冠状动脉内壁粥样硬化斑块的形成，达到降压、软化血管、防治心血管疾病的目的。黑茶优选普洱茶。

可食用花类选自桂花、茉莉花、白兰花和金银花中的一种或几种。其中桂花味道香甜、清香提神、化痰止咳、健脾开胃。可食用花类优选桂花。

辅料中还可加入天然甜味剂，天然甜味剂优选甜叶菊、甘蔗和甘草中的一种或几种，优选甜叶菊。

本发明提供的降糖茶须经冲泡后饮用。该降糖茶可以是将番石榴叶提取物和辅料按一定比例混合后装袋制备而成的茶包，茶包经冲泡后可被取出；还可以是将番石榴叶提取物和辅料按一定比例混合后经压制而成的茶块。茶包和茶块的规格是每包中混合物的量为2～5g。

本发明另一方面提供了一种降糖茶的制备方法，包括以下步骤：称取番石榴叶干燥药材，用6～10倍量60％～80％乙醇-水溶液回流提取2～3次，每次1～4小时，将提取液在40℃～45℃真空旋转浓缩，得到浓缩液，将浓缩液冷冻干燥，得番石榴叶提取物粉末；将重量比为60.0％～99.9％的番石榴叶提取物和0.1％～40.0％的辅料混合；灭菌、包装；所述辅料为饮用茶和/或可食用花类。

优选的，番石榴叶提取物和辅料的组成含量为，番石榴叶提取物70.0％～80.0％，辅料20.0％～30.0％。提取溶剂优选60％乙醇溶液。

具体的，浓缩和干燥步骤是将所述番石榴叶提取物溶液旋转蒸发为浓缩液，将浓缩液冷冻干燥得番石榴叶提取物冻干粉末。其中，旋转蒸发是指在真空负压条件下旋转并恒温加热番石榴叶提取物溶液，使提取物溶液形成薄膜，增大蒸发面积从而加快蒸发速率，得到番石榴叶提取物浓缩液。冷冻干燥是指将番石榴叶提取物浓缩液冷冻到冰点以下，使水转变为冰，然后在较高真空下将冰转变为蒸气而除去，得到番石榴叶提取物冻干粉末。该冻干粉末能够保留完好的活性成分，常温下能够长久储存，重量轻，并且加水后能够快速、完全的复原。

饮用茶选自乌龙茶、绿茶和黑茶中的一种或几种。可食用花类选自桂花、茉莉花、白兰花和金银花中的一种或几种。辅料中还可以加入天然甜味剂，天然甜味剂优选甜叶菊、甘蔗和甘草中的一种或几种。关于辅料中饮用茶、可食用花类和天然甜味剂的具体描述均如前所述。

混合过程是将番石榴叶提取物粉末与加入的辅料粉末在低速搅拌机内混合均匀。

灭菌方式为照射灭菌、微波灭菌或热压灭菌。

包装是将本发明所述番石榴叶提取物和辅料按比例混合均匀后的混合物装入茶包袋，该茶包袋上可连接一根拉绳，利于该茶包在冲泡过后被取出。此外，还可以是将本发明所述番石榴叶提取物和辅料按比例混合均匀后压制成茶块之后包装。每包或每块茶块的规格是2～5g。

本发明降糖茶在服用时建议每次1袋(每袋3g)，每日3次，餐后冲泡饮用。

本发明比较了不同加工方法得到的番石榴叶提取物的活性差异，从而从多种加工工艺中选出最佳方法，以达到提高疗效的目的。

本发明提供的降糖茶采用现代提取精制方法，对番石榴叶干燥药材进行提取纯化，去除了原叶中的粗纤维、杂蛋白、无机物等副成分，能有效提高药效，并去除副成分对人体造成的负担，改善口感及胃肠适应性。

本发明以番石榴叶提取物为主要成分，以其他有益天然食源材料为辅料，合理配伍，能有效提高降脂降血压作用，并能提高口感回甘。

此外，本发明采用了多种体外生物活性体系，进一步明确了主成分番石榴叶提取物的高活性及无毒性。本发明降糖茶具有有效降糖和无毒副作用的优点，并且使用方便、经济，适于糖尿病患者。

附图说明

图1所示为番石榴叶提取物及大孔树脂各馏分的自由基清除活性；

图2所示为番石榴叶提取物对PPAR-γ的激动活性；

图3所示为番石榴叶提取物及大孔树脂各馏分的HepG2细胞毒活性。

具体实施方式

以下实施例将有助于本领域的普通技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1

番石榴叶提取物粉末：60.0％，普洱茶粉末：40.0％。

取干燥番石榴叶9.5kg，用8倍量的60％乙醇加热回流提取2次，每次2小时。将番石榴叶浸出液加热至沸腾进行蒸馏，乙醇馏出后又被冷却，重复流回浸出容器中浸提番石榴叶原料。在真空负压条件下旋转并恒温45℃加热番石榴叶乙醇提取物溶液，得到浓缩液。将浓缩液冷冻干燥，得到冻干粉末2.6kg。取普洱茶研磨成粉末状。将番石榴叶60％乙醇提取物冻干粉末和普洱茶粉末按上述比例混合均匀，按每包规格3g称量，分装入茶包袋。

实施例2

番石榴叶提取物粉末：90.0％，铁观音茶粉末：10.0％。

取干燥番石榴叶9.5kg，用10倍量70％乙醇加热回流提取3次，每次2小时。将番石榴叶浸出液加热至沸腾进行蒸馏，其中乙醇馏出后又被冷却重复流回浸出容器中浸提番石榴叶原料。在真空负压条件下旋转并恒温40℃加热番石榴叶乙醇提取物溶液，得到浓缩液。冷冻干燥后得到冻干粉末2.8kg。取铁观音茶研磨成粉末状。将番石榴叶70％乙醇提取物冻干粉末和铁观音茶粉末按上述组分混合均匀，按每包规格3g称量，分装入茶包袋。

实施例3

番石榴叶提取物粉末：75％，乌龙茶粉末：25％，桂花粉末0.1％。

取干燥番石榴叶9.5kg，用6倍量75％乙醇加热回流提取2次，每次4小时。将番石榴叶浸出液加热至沸腾进行蒸馏，乙醇冷却回流浸提番石榴叶原料。在真空负压条件下旋转并恒温40℃加热番石榴叶乙醇提取物溶液，得到浓缩液。冷冻干燥后得到冻干粉末2.6kg。取乌龙茶和桂花研磨成粉末状。将番石榴叶75％乙醇提取物冻干粉末、乌龙茶粉末和桂花粉末按上述组分混合均匀，按每包规格3g称量，分装入茶包袋。

实施例4

番石榴叶提取物粉末80.0％，龙井茶粉末20％，茉莉花粉末0.3％，甜叶菊0.1％。

番石榴叶提取物粉末制备方法同实施例1描述，得到番石榴叶提取物冻干粉末2.2kg。取龙井茶、茉莉花和甜叶菊研磨成粉末状，将上述组分混合均匀，称量3g，分别压制成茶块，并包装。饮用前，去除茶块外层包装。冲泡茶块，即可饮用。

实施例5

番石榴叶提取物75％，铁观音茶25％，茉莉花0.5％，甘草0.1％。

番石榴叶提取物粉末制备方法同实施例3描述，得到番石榴叶提取物冻干粉末2.4kg。将铁观音茶、茉莉花和甘草分别研磨成粉末状，将上述粉末按比例混合均匀，称量3g，分装入茶包袋。

番石榴叶提取物的活性试验

下述活性实验中，番石榴叶提取物的制备与实施例1的提取方法相同，是取番石榴叶干燥药材用8倍量60％乙醇加热回流提取2次，每次2小时，得提取物溶液。将此溶液旋转蒸发得浓缩液，并进一步冷冻干燥为番石榴叶提取物粉末，命名为PG。

从PG中取出700g，用水分散后，使用D-101大孔吸附树脂柱色谱，依次用水、30％、50％、95％乙醇-水洗脱，各洗脱液减压浓缩，得4个馏分，命名为PG0％、PG30％、PG50％、及PG95％。

一、番石榴叶提取物的抗氧化活性-DPPH自由基清除法

1、DPPH自由基溶液和供试品溶液的配制

DPPH自由基用无水乙醇配成1mg/5mL的溶液(临用鲜配)，置于室温避光保存。番石榴叶提取物、大孔树脂各馏分和阳性药均用DMSO配成50mg/mL的原液，测试前用无水乙醇稀释成所需浓度。

2、活性的测定

将不同浓度的供试品溶液40μL，无水乙醇80μL，0.4M HOAc/NaOAc(PH5.5)缓冲溶液40μL和DPPH自由基溶液40μL加入96孔板各孔中，选常用抗氧化剂白藜芦醇作为阳性对照，用时以不加DPPH自由基的供试品溶液各浓度作为对照以消除供试品本身颜色对测试结果的干扰，并设DPPH自由基阴性对照(以40μL无水乙醇代替供试品)，每组平行设3个复孔。将96孔板室温、避光放置30分钟后放入酶标仪中，振荡5秒，测试其在517nm处的吸光度A值，按如下公式计算供试品的自由基清除率。

自由基清除率＝[A_DPPH.control-(A_sample-A_{sample control})]/A_DPPH.control×100％。其中，A_DPPH.control为DPPH自由基阴性对照组A值的平均值；A_sampl为样品组A值的平均值；s_{ample control}为样品乙醇对照组A值的平均值。

3、活性测试结果及结论

图1所示为番石榴叶提取物及大孔树脂各馏分的自由基清除活性，白藜芦醇作为阳性对照物，实验数据具体如表1所示：

表1

样品	自由基清除率(％)100μg/mL	自由基清除率(％)25μg/mL
			白藜芦醇	52.9

PG	73.4	74.4
			PG0	71.7	60.8
PG30	70.9	68.8
			PG50	70.2	71.2
PG95	67.2	34.2

以上数据表明，番石榴叶提取物及大孔树脂各馏分在高浓度(100μg/mL)时的抗氧化活性无明显差异，且均高于阳性对照白藜芦醇的抗氧化活性，在低浓度(25μg/mL)时的抗氧化活性由高到低依次为番石榴叶总提物(PG)、大孔树脂50％馏分(PG50％)、大孔树脂30％馏分(PG30％)、大孔树脂0％馏分(PG0％)、大孔树脂95％馏分(PG95％)。结果表明番石榴叶总提物具有最强活性。

二、番石榴叶提取物的降血糖活性-PPAR-γ激动活性法

1、实验方法

利用分子生物学方法构建获得PPAR-γ表达质粒，另外构建获得PPRE报告载体，包括PPRE-GFP与PPRE-Luc报告载体两种。其后将PPRE-GFP报告载体与PPAR-γ的质粒共转染到人乳腺癌细胞MCF-7细胞中，加入待测试样品进行培养后，通过比较细胞的绿色荧光或荧光素酶发光强度来考察样品对PPAR-γ的激动活性。其后使用这个体系对番石榴叶60％乙醇提取物进行活性确认。

2、活性测定结果及结论

实验结果如图2所示，其中，上排为GFP荧光，下排为存活细胞密度。PPRE表示PPRE-GFP报告质粒；PPARγ表示PPARγ的表达质粒；PGM表示番石榴叶60％乙醇-水提取物。图2中，A是只表达细胞内源性PPAR激动效果的荧光图；B是加入一定量外源性PPARγ后，表达内源性PPAR和外源性PPARγ激动效果的荧光图；C是加入一定量番石榴叶60％乙醇-水提取物后，表达内源性PPAR和番石榴叶60％乙醇-水提取物激动效果的荧光图；D是加入相同量PPARγ和番石榴叶60％乙醇-水提取物后，表达内源性PPAR、外源性PPARγ和番石榴叶60％乙醇-水提取物激动效果的荧光图。荧光越多，体系被激活的程度越高，证明降血糖效果越好。

由图2可见，单加外源性PPARγ对体系有一定的激动效果，单加番石榴叶60％乙醇-水提取物有比单加外源性PPARγ对体系更好的激动效果，同时加入外源性PPARγ和番石榴叶60％乙醇-水提取物对体系有非常好的激动效果，推测两者可能有协同作用，而且这种激动效果不是线性增强，而可能是呈指数增强。

上述测试结果说明番石榴叶提取物有明显的PPAR激动作用。

三、番石榴叶提取物的细胞毒活性-荧光测定培养细胞毒试验(FMCA)法

1、实验方法

将前述番石榴叶提取物、大孔树脂各馏分和阳性药均用DMSO配成50mg/mL的原液，测试前用无水乙醇稀释成所需浓度。将人肝癌细胞HepG2播种6000/孔在黑色96孔板，5％CO₂，37℃，24小时培养后，加入待测样品，24小时培养，之后用PBS清洗细胞，加入10μg/mL荧光素重醋酸盐(FDA)，一小时后测定Ex：485nm，Em：538nm的荧光，根据细胞水解FDA产生荧光素的量判断死、活细胞数量，进而得到各样品细胞毒性结果。

2、细胞毒活性测试结果及结论

图3所示为番石榴叶提取物、大孔树脂各馏分及阳性药对HepG2细胞毒活性。具体测试结果见表2：

表2

样品	活性(％)100μg/mL	活性(％)25μg/mL
			PG	14.6	99.0
PG0	12.8	14.5
			PG30	14.1	20.7
PG50	14.9	90.2
			PG95	13.1	59.4

从以上数据可见，番石榴叶提取物及大孔树脂各馏分在高浓度时(100μg/mL)的细胞毒活性无明显差异，在低浓度时(25μg/mL)番石榴叶提取物(PG)不显示任何细胞毒性。结果表明番石榴叶提取物可以作为安全、无毒性茶饮。

上述具体实施例中对本发明的优选实施方式进行了描述，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种降糖茶，其特征在于，由番石榴叶提取物和辅料组成，所述番石榴叶提取物的重量比为60.0％～99.9％，所述辅料的重量比为0.1％～40.0％，所述番石榴叶提取物为番石榴叶60％～80％的乙醇-水提取物，所述辅料为饮用茶和/或可食用花类。

2.如权利要求1所述的降糖茶，其特征在于，所述番石榴叶提取物为番石榴叶药材经60％乙醇-水溶液提取后得到的提取物。

3.如权利要求1所述的降糖茶，其特征在于，所述饮用茶选自乌龙茶、绿茶和黑茶中的一种或几种。

4.如权利要求1所述的降糖茶，其特征在于，所述可食用花类选自桂花、茉莉花、白兰花和金银花中的一种或几种。

5.如权利要求1所述的降糖茶，其特征在于，所述辅料还包括天然甜味剂。

6.如权利要求5所述的降糖茶，其特征在于，所述天然甜味剂选自甜叶菊、甘蔗和甘草中的一种或几种。

7.一种降糖茶的制备方法，包括以下步骤：称取番石榴叶干燥药材，用6～10倍量60％～80％乙醇-水溶液回流提取2～3次，每次1～4小时，将提取液在40℃～45℃真空旋转浓缩，得到浓缩液，将浓缩液冷冻干燥，得番石榴叶提取物粉末；将重量比为60.0％～99.9％的番石榴叶提取物和0.1％～40.0％的辅料混合；灭菌、包装；所述辅料为饮用茶和/或可食用花类。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述提取溶剂为60％的乙醇-水溶液。

9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述辅料还包括天然甜味剂。

10.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述番石榴叶提取物和辅料的组成含量为番石榴叶提取物70.0％～80.0％，辅料20.0％～30.0％。

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