CN102210747A - 降血糖药物制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有降血糖作用的药物制剂,是由中药提取物和药学上可接受的辅料组成,所述中药提取物为番石榴叶50%~80%乙醇-水提取物,所述辅料为糊精、淀粉、微晶纤维;所述药物制剂包括番石榴叶提取物10~25份,糊精2~5份,淀粉4~15份和微晶纤维4~10份。本发明提供的药物制剂具有较好的降血糖作用。
Description
技术领域
本发明涉及含有中药提取物的药物制剂及其应用领域,尤其涉及由番石榴叶提取物制备的降血糖药物制剂及其制备方法。
背景技术
糖尿病是一类高发病率的慢性疾病,发病率有逐年增加的趋势,已成为继心脑血管疾病、癌症之后的严重威胁人类健康的第三大疾病,严重影响人们的生活甚至危及生命。据统计,全世界约有糖尿病患者1.94亿,中国糖尿病患者已超过4000万,预计到2025年全球糖尿病患者人数将达到3.33亿。西医对糖尿病的病因及慢性并发症发病机制尚未完全阐明,至今糖尿病尚不能根治,慢性并发症的防治尚无理想措施。
II型糖尿病是以胰岛素耐受、高血糖、高血脂为主要特征的一种代谢性疾病,其病人往往经历以下过程:肥胖导致核过氧化酶增殖体激活受体(PPAR)调节失活,引起胰岛素耐受,形成高血胰岛素,进一步使胰岛细胞受压与受损,形成渐进性的胰岛素释放降低,最终导致高血糖的发生。其中PPAR失活引起的胰岛素耐受是整个过程的关键环节。PPAR是配体激活转录因子,属于核受体基因家族,可调节许多基因的表达,影响血糖浓度、脂质代谢、血管紧张度和致炎等。PPAR有3种亚型:PPARα、PPARδ、PPARγ,其中PPARγ的激活可以提高胰岛素敏感性,减少炎症的发生,降低游离脂肪酸的脂质浓度以及降低血压。
此外,目前的研究发现糖尿病与自由基对胰脏B细胞损伤有关。正常情况下,胰脏B细胞是生产和分泌胰岛素的基本单位,其本身含有清除自由基系统,所以自由基不会引起胰脏B细胞损害。但是,在化学或免疫因素作用下,B细胞会受到损害,其抗自由基能力降低,引起自由基大量集聚,破坏B细胞结构,影响其分泌胰岛素,最终引起糖尿病。实验发现,I型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病)和II型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)患者血清中,自由基含量都明显增加,抗氧系统却明显降低。糖尿病合并血管病变者,血管自由基含量增加更明显,清除自由基能力也明显降低,所以,自由基损伤是糖尿病及其并发症的重要因素。自由基不仅破坏B细胞结构,影响胰岛素分泌,而且自由基对不饱和脂肪酸过氧化产物可以引起小动脉纤维性病变、动脉硬化和心血管疾病,抑制前列腺环素生物合成,使抗凝血因子失活,血流处于高凝状态,易于诱发血栓形成,使微循环障碍,出现大血管和微循环病变。所以,清除自由基是预防和治疗糖尿病及其并发症的重要途径。
糖尿病的最大特点是病程长且复杂、难根治,给社会和个人带来了沉重的经济负担。糖尿病患者长期服用胰岛素类、磺酰脲类、双胍类等多种药物,会对药物产生依赖性,导致药量越吃越大,品种越来越多,而且久服西药会带来损肝、伤肾、刺激胃肠道等副作用,让患者苦不堪言。同时,这些药物的价格相对较高,令患者难以接受。近年来,国内外把寻找治疗糖尿病药物的目标重点转向具有降糖活性的天然产物。
番石榴叶为桃金娘科(Myrtaceau)番石榴属(Psidium L)番石榴(Psidium guajava L)的干燥叶,异名鸡矢茶,味甘涩,性平,具有生津止渴、除烦、收敛止泻、消炎止血的功效。
发明内容
本发明的目的是提供具有降血糖作用的药物制剂及其制备方法。
本发明首先提供了一种具有降血糖作用的药物制剂,该制剂是由中药提取物和药学上可接受的辅料组成,主药为番石榴叶50%~80%乙醇-水提取物,辅料为糊精、淀粉、微晶纤维,该药物制剂中各成分的重量份数如下:番石榴叶提取物10~25份,糊精2~5份,淀粉4~15份,微晶纤维4~10份。
优选的,各成分的重量份数为番石榴叶提取物12~20份,糊精2~4份,淀粉4~12份,微晶纤维4~8份。
进一步的,上述药物制剂还包括多糖类物质2~10份,优选4~8份,所述多糖类物质为枸杞多糖、茶叶多糖、海带多糖、魔芋多糖、南瓜多糖中的一种或几种,优选南瓜多糖和/或枸杞多糖。
具体的,本发明药物制剂中各成分的重量份数为番石榴叶提取物10~25份,多糖类物质2~10份,糊精2~5份,淀粉4~15份,微晶纤维4~10份。优选的,番石榴叶提取物12~20份,多糖类物质4~8份,糊精2~4份,淀粉4~12份,微晶纤维4~8份。
本发明还进一步提供了上述降血糖药物制剂的制备方法,是将番石榴叶干燥药材用6~10倍量50%~80%乙醇-水溶液回流提取2~3次,每次1~4小时,将提取液在40℃~45℃真空旋转浓缩得到浓缩液,将浓缩液冷冻干燥,得番石榴叶提取物粉末;取番石榴叶提取物10~25份,糊精2~5份,淀粉4~15份,微晶纤维4~10份,混合均匀,润湿后制软材,过20目筛制颗粒,在55℃~65℃温度下干燥,再过20目筛整粒,压片。
优选的,各成分的重量份数为番石榴叶提取物12~20份,糊精2~4份,淀粉4~12份,微晶纤维4~8份。
可以替代的,番石榴叶提取物也可以是将番石榴叶药材在室温条件下用乙醇浸提后过滤浓缩提取液得到的提取物粉末。
进一步的,上述药物制剂在制备过程中加入多糖类物质2~10份,优选4~8份,所述多糖类物质为枸杞多糖、茶叶多糖、海带多糖、魔芋多糖、南瓜多糖中的一种或几种,优选南瓜多糖和/或枸杞多糖。将多糖类物质与番石榴叶提取物和辅料共同混合均匀。
具体的,本发明药物制剂中各成分的重量份数为番石榴叶提取物10~25份,多糖类物质2~10份,糊精2~5份,淀粉4~15份,微晶纤维4~10份。优选的,番石榴叶提取物12~20份,多糖类物质4~8份,糊精2~4份,淀粉4~12份,微晶纤维4~8份。
进一步的,润湿过程用50%~95%乙醇-水溶液进行润湿,优选90%乙醇-水溶液。
进一步的,整粒前向混合物中加入混合物总重量0.2~0.8%的硬脂酸镁,混合均匀后再进行压片。
本发明对上述番石榴叶50%~80%乙醇-水提取物中的主要化学成分进行了含量测定,上述提取物中主要为黄酮类成分和酚酸类成分,黄酮类成分在提取物中占60%~90%。其中,黄酮类成分包括槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷,酚酸类成分包括没食子酸。
本发明采用了多种体外生物活性体系,进一步明确了番石榴叶提取物的高活性及无毒性。本发明提供的含有番石榴叶提取物的药物制剂具有较好的降血糖作用。
附图说明
图1所示为番石榴叶提取物及其大孔树脂各馏分的自由基清除活性;
图2所示为番石榴叶提取物对PPAR-γ的激动活性;
图3所示为番石榴叶提取物及其大孔树脂各馏分的细胞毒活性;
图4所示为番石榴叶提取物的液相图谱。
具体实施方式
下面的实施例可更详细地说明本发明,但不以任何形式限制本发明。
实施例1:番石榴叶提取物的制备
取干燥番石榴叶9.5kg,用8倍量的60%乙醇-水溶液加热回流提取2次,每次2小时。将番石榴叶浸出液加热至沸腾进行蒸馏,温度为80℃,其中乙醇馏出后又被冷却至5-6℃,重复流回浸出容器中浸提番石榴叶原料。在真空负压条件下旋转并恒温45℃加热番石榴叶乙醇提取物溶液,得到浓缩液。将番石榴叶乙醇提取物浓缩液冷冻干燥,得到番石榴叶乙醇提取物冻干粉末2.6kg。
实施例2:番石榴叶提取物的制备
取干燥番石榴叶9.5kg,用10倍量的50%乙醇-水溶液加热回流提取3次,每次1小时。在真空负压条件下旋转并恒温40℃加热番石榴叶乙醇提取物溶液,得到浓缩液。冷冻干燥后得到冻干粉末2.8kg。
实施例3:番石榴叶提取物的制备
取干燥番石榴叶9.5kg,用6倍量的80%乙醇加热回流提取2次,每次3小时。在真空负压条件下旋转并恒温42℃加热番石榴叶乙醇提取物溶液,得到浓缩液。冷冻干燥后得到冻干粉末2.6kg。
实施例4:片剂制备
番石榴叶提取物∶糊精∶淀粉∶微晶纤维=5∶1∶3∶2
番石榴叶提取物为实施例1中制备得到。按配方比例称量各组分,混合均匀,用50%乙醇/水润湿,制软材,过20目筛制颗粒,65℃干燥,过20目筛整粒,加0.6%硬脂酸镁,混合均匀,压片。
实施例5:片剂制备
番石榴叶提取物∶糊精∶淀粉∶微晶纤维=20∶3∶12∶8
番石榴叶提取物为实施例1制备得到。按配方比例称量各组分,混合均匀,用90%乙醇/水润湿,制软材,过20目筛制颗粒,60℃干燥,过20目筛整粒,加0.5%硬脂酸镁,混合均匀,压片。
实施例6:片剂制备
番石榴叶提取物∶糊精∶淀粉∶微晶纤维=10∶3∶4∶4
番石榴叶提取物为实施例2制备得到。按配方比例称量各组分,混合均匀,用95%乙醇/水润湿,制软材,过20目筛制颗粒,55℃干燥,过20目筛整粒,加0.5%硬脂酸镁,混合均匀,压片。
实施例7:片剂制备
番石榴叶提取物∶南瓜多糖∶枸杞多糖∶糊精∶淀粉∶微晶纤维=12∶4∶4∶3∶10∶8
番石榴叶提取物为实施例1中制备得到。按配方比例称量各组分,混合均匀,用80%乙醇/水润湿,制软材,过20目筛制颗粒,60℃干燥,过20目筛整粒,加0.5%硬脂酸镁,混合均匀,压片。
实施例8:片剂制备
番石榴叶提取物∶枸杞多糖∶糊精∶淀粉∶微晶纤维=10∶2∶2∶5∶4
番石榴叶提取物为实施例3制备得到。按配方比例称量各组分,混合均匀,用90%乙醇/水润湿,制软材,过20目筛制颗粒,60℃干燥,过20目筛整粒,加0.5%硬脂酸镁,混合均匀,压片。
实施例9:片剂制备
番石榴叶提取物∶茶叶多糖∶枸杞多糖∶糊精∶淀粉∶微晶纤维=15∶3∶3∶4∶8∶6
番石榴叶提取物为实施例2制备得到。按配方比例称量各组分,混合均匀,用95%乙醇/水润湿,制软材,过20目筛制颗粒,60℃干燥,过20目筛整粒,加0.5%硬脂酸镁,混合均匀,压片。
实施例10:片剂制备
番石榴叶提取物∶南瓜多糖∶魔芋多糖∶糊精∶淀粉∶微晶纤维=22∶5∶5∶3∶14∶8
番石榴叶提取物为实施例1中制备得到。按配方比例称量各组分,混合均匀,用80%乙醇/水润湿,制软材,过20目筛制颗粒,60℃干燥,过20目筛整粒,加0.5%硬脂酸镁,混合均匀,压片。
取本发明实施例4至实施例10中制备得到的片剂,按照2010版药典进行崩解时限检测,崩解时间在18min~27min之间,结果均符合2010版药典中规定的中药浸膏崩解时限60min的要求。
以下活性实验中,番石榴叶提取物的制备方法与实施例1中的制备方法相同,得到的番石榴叶提取物粉末命名为PG。
从PG中取出700g,用水分散后,使用D-101大孔吸附树脂柱色谱,依次用水、30%、50%、95%乙醇-水洗脱,各洗脱液减压浓缩,得4个馏分,命名为PG0%、PG30%、PG50%、及PG95%。
1、抗氧化活性实验-DPPH自由基清除法
(1)、DPPH自由基溶液和供试品溶液的配制
DPPH自由基用无水乙醇配成1mg/5mL的溶液(临用鲜配),置于室温避光保存。番石榴叶提取物、大孔树脂各馏分和阳性药均用DMSO配成50mg/mL的原液,测试前用无水乙醇稀释成所需浓度。
(2)、活性的测定方法
将不同浓度的供试品溶液40μL,无水乙醇80μL,0.4M HOAc/NaOAc(PH5.5)缓冲溶液40μL和DPPH自由基溶液40μL加入96孔板各孔中,选常用抗氧化剂白藜芦醇作为阳性对照,用时以不加DPPH自由基的供试品溶液各浓度作为对照以消除供试品本身颜色对测试结果的干扰,并设DPPH自由基阴性对照(以40μL无水乙醇代替供试品),每组平行设3个复孔。将96孔板室温、避光放置30分钟后放入酶标仪中,振荡5秒,测试其在517nm处的吸光度A值,按如下公式计算供试品的自由基清除率。
自由基清除率=[ADPPH.control-(Asample-Asample control)]/ADPPH.control×100%。其中,ADPPH.control为DPPH自由基阴性对照组A值的平均值;Asampl为样品组A值的平均值;Asample control为样品乙醇对照组A值的平均值。
(3)、活性测试结果及结论
图1所示为番石榴叶提取物及大孔树脂各馏分的自由基清除活性,白藜芦醇作为阳性对照物,实验数据具体如表1所示:
表1
样品 | 自由基清除率(%)100μg/mL | 自由基清除率(%)25μg/mL |
白藜芦醇 | 52.9 | |
PG | 73.4 | 74.4 |
PG0 | 71.7 | 60.8 |
PG30 | 70.9 | 68.8 |
PG50 | 70.2 | 71.2 |
PG95 | 67.2 | 34.2 |
以上数据表明,番石榴叶提取物及大孔树脂各馏分在高浓度(100μg/mL)时的抗氧化活性无明显差异,且均高于阳性对照白藜芦醇的抗氧化活性,在低浓度(25μg/mL)时的抗氧化活性由高到低依次为番石榴叶总提物(PG)、大孔树脂50%馏分(PG50%)、大孔树脂30%馏分(PG30%)、大孔树脂0%馏分(PG0%)、大孔树脂95%馏分(PG95%)。结果表明番石榴叶总提物具有最强活性。
2、降血糖活性实验-PPAR-γ激动活性法
(1)、实验方法
利用分子生物学方法构建获得PPAR-γ表达质粒,另外构建获得PPRE报告载体,包括PPRE-GFP与PPRE-Luc报告载体两种。其后将PPRE-GFP报告载体与PPAR-γ的质粒共转染到人乳腺癌细胞MCF-7细胞中,加入待测试样品进行培养后,通过比较细胞的绿色荧光或荧光素酶发光强度来考察样品对PPAR-γ的激动活性。其后使用这个体系对番石榴叶60%乙醇提取物进行活性确认。
(2)、活性测定结果及结论
实验结果如图2所示,其中,上排为带GFP荧光的存活细胞,下排为所有存活细胞。PPRE表示PPRE-GFP报告质粒;PPARγ表示PPARγ的表达质粒;PGM表示番石榴叶60%乙醇-水提取物。图2中,A为转染PPRE质粒的细胞组,是只表达细胞内源性PPAR激动效果的荧光图;B为共转染PPRE与PPAR-γ质粒的细胞组,是加入一定量外源性PPARγ后,表达内源性PPAR和外源性PPARγ激动效果的荧光图;C为转染PPRE质粒,然后用番石榴叶提取物(PGM)处理的细胞组,是加入一定量番石榴叶60%乙醇-水提取物后,表达内源性PPAR和番石榴叶60%乙醇-水提取物激动效果的荧光图;D为共转染PPRE与PPAR-γ质粒,然后用番石榴叶提取物(PGM)处理的细胞组,是加入相同量PPARγ和番石榴叶60%乙醇-水提取物后,表达内源性PPAR、外源性PPARγ和番石榴叶60%乙醇-水提取物激动效果的荧光图。荧光越多,体系被激活的程度越高,证明降血糖效果越好。
由图2可见,上排GFP细胞的绿色荧光强度大小顺序为D>B,C>A,也就是说,单加外源性PPARγ对体系有一定的激动效果,单加番石榴叶60%乙醇-水提取物有比单加外源性PPARγ对体系更好的激动效果,同时加入外源性PPARγ和番石榴叶60%乙醇-水提取物对体系有非常好的激动效果,推测两者可能有协同作用,而且这种激动效果不是线性增强,而可能是呈指数增强。所以,结果表明番石榴叶提取物具有明显PPAR-γ激动作用。
3、细胞毒活性实验-荧光测定培养细胞毒试验(FMCA)法
(1)、实验方法
将前述番石榴叶提取物、大孔树脂各馏分和阳性药均用DMSO配成50mg/mL的原液,测试前用无水乙醇稀释成所需浓度。将人肝癌细胞HepG2播种6000/孔在黑色96孔板,5%CO2,37℃,24小时培养后,加入待测样品,24小时培养,之后用PBS清洗细胞,加入10μg/mL荧光素重醋酸盐(FDA),一小时后测定Ex:485nm,Em:538nm的荧光,根据细胞水解FDA产生荧光素的量判断死、活细胞数量,进而得到各样品细胞毒性结果。
(2)、细胞毒活性测试结果及结论
图3所示为番石榴叶提取物、大孔树脂各馏分及阳性药对HepG2细胞毒活c性。具体测试结果见表2:
表2
样品 | 活性(%)100μg/mL | 活性(%)25μg/mL |
PG | 14.6 | 99.0 |
PG0 | 12.8 | 14.5 |
PG30 | 14.1 | 20.7 |
PG50 | 14.9 | 90.2 |
PG95 | 13.1 | 59.4 |
从以上数据可见,番石榴叶提取物及大孔树脂各馏分在高浓度时(100μg/mL)的细胞毒活性无明显差异,在低浓度时(25μg/mL)番石榴叶提取物(PG)不显示任何细胞毒性。结果表明番石榴叶提取物可以作为安全、无毒性茶饮。
4、番石榴叶提取物中活性成分的指认
(1)、色谱条件:
仪器型号:Agilent 1100series
色谱柱型号:Phenomendex C18(4.6×250mm)
柱温:30℃
流速:0.8ml/min
样品浓度:50mg/mL
进样量:5μL
检测波长:365nm
流动相:A:5‰醋酸/水,B:甲醇,C:乙腈
0~41min,洗脱方式为B∶C∶A=20∶10∶70;41~43min,洗脱方式为B∶C∶A=25∶15∶60;43~80min,洗脱方式为B∶C∶A=25∶15∶60
(2)、样品溶液及对照品溶液的制备:
样品溶液的制备:精密称取番石榴叶提取物粉末500.7mg,甲醇定容至100mL,超声30min,取上清液过ODS小预柱两遍,过0.45mm滤膜,即得。
对照品溶液的制备:精密称取槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷10.0mg,槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷9.8mg,槲皮素9.7mg,加甲醇50mL制成含槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷200mg/mL,槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷196mg/mL,槲皮素194mg/mL的溶液,作为母液备用。
(3)、主要成分色谱峰指认见表3。
表3
保留时间(min) | 化合物名称 | 峰面积百分比(%) |
3.483 | 没食子酸 | 3.16 |
21.727 | 槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖 | 20.60 |
23.145 | 槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖 | 7.13 |
29.085 | 槲皮素-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷 | 15.42 |
33.895 | 槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷 | 23.26 |
57.345 | 槲皮素 | 8.72 |
番石榴叶60%乙醇-水提取物的液相图谱见图4。以上结果说明,番石榴叶提取物中主要成分为没食子酸、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖、槲皮素-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷、槲皮素,其峰面积百分比之和占色谱峰面积的78.29%。
Claims (10)
1.一种具有降血糖作用的药物制剂,由中药提取物和药学上可接受的辅料组成,其特征在于,所述中药提取物为番石榴叶50%~80%乙醇-水提取物,所述辅料为糊精、淀粉、微晶纤维;所述药物制剂包括番石榴叶提取物10~25份,糊精2~5份,淀粉4~15份和微晶纤维4~10份。
2.如权利要求1所述的药物制剂,其特征在于,所述药物制剂进一步包括多糖类物质2~10份。
3.如权利要求2所述的药物制剂,其特征在于,所述多糖类物质为南瓜多糖和/或枸杞多糖。
4.如权利要求1、2或3所述的药物制剂,其特征在于,所述药物制剂包括番石榴叶提取物12~20份,多糖类物质4~8份,糊精2~4份,淀粉4~12份和微晶纤维4~8份。
5.如权利要求1所述的药物制剂,其特征在于,所述番石榴叶50%~80%乙醇-水提取物包括没食子酸、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷和槲皮素。
6.权利要求1具有降血糖作用的药物制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将番石榴叶干燥药材用6~10倍量50%~80%乙醇-水溶液回流提取2~3次,每次1~4小时,将提取液在40℃~45℃真空旋转浓缩得到浓缩液,将浓缩液冷冻干燥,得番石榴叶提取物粉末;
(2)取番石榴叶提取物10~25份、糊精2~5份、淀粉4~15份、微晶纤维4~10份,混合均匀,润湿后制软材,过20目筛制颗粒,在55℃~65℃温度下干燥,再过20目筛整粒,压片;
7.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中进一步向混合物中加入多糖类物质2~10份,混合均匀。
8.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述多糖类物质为南瓜多糖和/或枸杞多糖。
9.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)润湿过程用50%~95%乙醇-水溶液进行润湿。
10.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)整粒前向混合物中加入混合物总重量0.2~0.8%的硬脂酸镁,混合均匀后进行压片。
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