CN113069484B - 一种抗衰老药物的微胶囊制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种抗衰老药物及其微胶囊制剂的制备方法，属于生物医药或保健品技术领域。为了解决桦褐孔菌在抗衰老保健品制备中应用较少，以及现有的桦褐孔菌提取方法存在的费时费力，耗能高，提取率低等问题，本发明将桦褐孔菌、灵芝和黄芪进行配伍，利用超细破壁粉碎机粉碎，得到超微细粉，再利用微波萃取技术得到提取物，然后制备成微囊，得到一种新型的抗衰老药物。本发明所述新型抗衰老药物的制备方法具有节能环保，药物有效成分提取率高，剂型稳定，口感好等优点。

Description

一种抗衰老药物的微胶囊制剂的制备方法

技术领域

本发明属于生物医药或保健品技术领域，具体涉及一种抗衰老药物的微胶囊制剂制备方法。

背景技术

随着人类抗衰老医学的发展，科学家们已经揭示出这样一个全新的观念：人类的衰老并非不可抗拒，人体的衰老本身是一种疾病。进而科学家也找到了预防和治疗人类衰老的药物。临床实践也表明，通过治疗，人体的衰老过程不仅可以延缓而且可以逆转！细胞对人来讲就意味着生命，细胞的生老病死也是人体渐衰的一个过程。细胞的生长靠得是分裂，一旦细胞的分裂速度减缓就预示着新生细胞的减少，那就是人人都害怕的衰老的开始，所以防止衰老的根本最终归结到细胞。

现代药理研究证明桦褐孔菌具有很好的抗衰老、抗氧化、抗癌、治疗痛风、防治糖尿病、降血糖、增强免疫力、防治艾滋病、调节血脂等多种药理活性。桦褐孔菌可清除体内的自由基，保护细胞，延长传代细胞的分裂代数，增进细胞寿命，促进代谢，因而能有效地延缓衰老，长期服用可延年益寿，而且桦褐孔菌含有丰富的多种维生素、氨基酸、微量元素、多糖、无机元素等，有利于维持多系统器官组织的营养补充及新陈代谢；富含的多酚化合物具有良好的抗氧化活性，能与维生素C、E和胡萝卜素等其他抗氧化物在体内一起发挥抗氧化功效，清除有害人体健康的坏分子—自由基。改善皮肤的健康，促进了黑色素(一种保护皮肤免受紫外线伤害的色素)的形成，其抗菌消炎的作用能治疗皮肤病如痤疮、皮疹、湿疹等。但是现有技术中对桦褐孔菌应用的研究较少，对桦褐孔菌的现代提取技术及制剂成型工艺的研究就更少了。将桦褐孔菌碎成小块后煮水为较普遍的服用方式，该方法费时费力，且有效成分提取率极低，耗能高。

《神农本草经》将灵芝列为上品，认为“主耳聋，利关节，保神，益精气，坚筋骨，好颜色。久服，轻身、不老、延年”。《本草纲目》载灵芝“久食益色，至老不改，令人不饥，大小便少，明目益精”。现代药理研究认为，灵芝主要成分是灵芝多糖，它可以有效调节人体内环境，提高人体免疫功能，促进新陈代谢，净化血液，改善微循环，全面改善身体功能，从而达到增强体质，延缓衰老的功效。灵芝有“仙草”、“瑞草”之称，被誉为食药两用，延年益寿之珍品。黄芪不仅能扩张冠状动脉，改善心肌供血，提高免疫功能，而且能够延缓细胞衰老的进程。

当前，我国即将步入老龄化社会，深入研究抗衰老复方药物，必将有利于我国“健康的老龄化”目标的实现。

发明内容

为了解决桦褐孔菌在抗衰老保健品制备中应用较少，以及现有的桦褐孔菌提取方法存在的费时费力，耗能高，提取率低等问题，本发明提供了一种抗衰老药物，所述抗衰老药物由以下重量份的原料备而成：桦褐孔菌10重量份～15重量份、灵芝6重量份～12重量份和黄芪9重量份～30重量份。

进一步地限定，所述抗衰老药物由以下重量份的原料备而成：桦褐孔菌 12重量份、灵芝10重量份和黄芪18重量份。

本发明还提供了上述抗衰老药物的微胶囊制剂制备方法的具体步骤如下：

步骤一、按照重量份称取桦褐孔菌、灵芝和黄芪，放入超细微破壁粉碎机中粉碎，得到超微粉；

步骤二、按照1g：2.5mL的料液比，将步骤一获得的超微粉与体积分数为80％的乙醇溶液混合，放入微波萃取机中，将温度设为65℃，萃取15min；

步骤三、萃取结束后待萃取物冷却至室温，再于3000r/min的转速下，离心20min，取上清液并浓缩回收乙醇至溶液密度为1.1g/cm³，即得提取液；

步骤四、将步骤三获得的提取物联用阿拉伯胶，明胶及甲醛溶液，利用雾干燥机，制成微胶囊。

进一步地限定，步骤三所述旋转蒸发的温度为60℃，压力为0.08mpa。

进一步地限定，步骤四所述微胶囊的具体制备方法如下：

S1、将步骤三获得的提取物与5％的阿拉伯胶溶液混合，于组织捣碎机中进行乳化；再加入5％明胶溶液，于55℃下搅拌均匀；然后边搅拌边加入 10％的醋酸溶液，调节pH值至3.8-4.0；

S2、将30℃的蒸馏水400ml加入S1获得的溶液中，自然冷却，待温度降至30℃时，加入冰块，继续搅拌至10℃，再加入体积分数为37％的甲醛溶液2mL，搅拌10min，然后用20％氢氧化钠溶液调节pH值至8-9，继续搅拌20min；

S3、待微囊析出并全部沉降后，倾去上清液，用蒸馏水洗至无醛味，再置于喷雾干燥机中，于150℃的条件下，快速喷干，即得到微胶囊。

进一步地限定，S1所述5％的阿拉伯胶溶液的制备方法为：取阿拉伯胶 5g，加入蒸馏水50ml，慢慢加热至80℃时，搅拌溶解，加蒸馏水至100ml 备用。

进一步地限定，S1所述5％明胶溶液的制备方法为：称取明胶5g，加入蒸馏水浸泡溶胀后，加热溶解，再加蒸馏水至100ml，搅匀，50℃保温储藏备用。

进一步地限定，获得的微胶囊平均粒径约为120μm，包封率达到90％以上。

有益效果

1、本发明将桦褐孔菌、灵芝和黄芪进行配伍，各药相辅相成，相互作用可有效地起到延缓衰老、抗氧化、美容养颜的作用。

2、本发明采用微波萃取的提取工艺，高频电磁波穿透萃取介质，到达被萃取物料的内部，使药物在提取溶剂中强烈的急性振动，导致药物细胞分子间的氢键松弛，细胞膜结构破裂，有效成分即从胞内流出，并在较低的温度下溶解于萃取介质并加速溶剂分子对基体的渗透，再通过进一步过滤分离，即可获得被萃取组分。由于微波可对萃取物质中的不同组分进行选择性加热，因而可使目标组分与基体直接分离开来，从而较常规的加热提取可很大程度的节约时间和能耗并提高了萃取效率和产品纯度，易于控制、安全环保。

3、将提取物联用淀粉、乳糖、微晶纤维素、阿拉伯胶及糊精等辅料，分别制备芯材溶液和壁材溶液，混合两种溶液后利用喷雾干燥法制备成微囊剂型，使药物外层有高分子膜包裹，可起到减少与外界的接触，掩盖不良气味的作用。除此之外，微囊一般不易被消化液溶解，药物释放时体液渗入微囊中，溶解微囊中的药物，顺着囊膜内外的浓度差向外扩散，直至内外达到平衡，可有效的起到延长药物疗效的作用。

喷雾干燥较冷冻干燥及低温烘干来说，既大大节约了试时间，且产品的产率成型率也极高，产品完整度良好。微囊剂型在有效成分含量、稳定性、存储时间、口感及服用剂量等方面均较传统的熬制溶液良好，说明微囊具有精度高、稳定性好、口感良好、服用剂量少、存储方便等优点。

4、本发明所述药物的微囊制剂中含紫萁酮、黄芪甲苷及总多糖含量较高，其中，紫萁酮含量为0.0215mg/g，黄芪甲苷含量为0.7158mg/g，总多糖含量为30.6518mg/g。说明本药物有效成分含量很高，可起到明显的延缓衰老、抗氧化及美容养颜的功效。

具体实施方式

实施例1、抗衰老药物的微胶囊制剂的制备方法

步骤一、分别称取桦褐孔菌6g，灵芝5g，黄芪9g，放入WFJ-32型超细微破壁粉碎机中粉碎，得到超微粉末待用；

步骤二、将步骤一获得的超微粉末，置于微波制样杯内，加入体积分数为80％的乙醇50ml，放入微波萃取机中，设置温度为65℃，时间为15min；

步骤三、萃取结束后冷却至室温，将萃取物置于高速离心机中 (3000r/min)，高速离心20min，取上清液旋转蒸发(温度60℃，压力0.08mpa)，回收乙醇至溶液密度为1.1g/cm³，待用；

步骤四、

称取明胶5g，加入适量蒸馏水后浸泡溶胀后，加热溶解，再加蒸馏水至 100ml，搅匀，50℃保温储藏备用；取阿拉伯胶5g，加入蒸馏水50ml，慢慢加热至80℃时，搅拌溶解，加蒸馏水至100ml备用；

S1、将步骤5得到的提取液和5％的阿拉伯胶溶液混合，于组织捣碎机中进行乳化；将上述溶液与所得5％明胶溶液混合，于55℃下搅拌均匀，将 10％的醋酸溶液边搅拌边加入到混合液中，调节pH值为3.8-4.0；

S2、将30℃的蒸馏水400ml加入上述溶液中，自然冷却，待温度降温 30℃左右时，加入冰块，继续搅拌至10℃以下，加入37％甲醛溶液2ml，搅拌10min，再用20％的氢氧化钠溶液调节pH值为8-9左右，继续搅拌约20min；

S3、静置待微囊析出并全部沉降后，倾去上清液，用蒸馏水洗至无醛味，将其置于yC-015喷雾干燥机中(使用前将喷雾干燥机罐体全部清洗干净，保持干燥)，设置温度为150℃，待达到温度时，启动蠕动泵，将溶液快速喷干得到微胶囊，在显微镜下观察平均粒径约为120μm，包封率达到90％以上，符合要求。

按照下述方法，对紫萁酮、黄芪甲苷及总多糖进行测定。

①其中紫萁酮的测定方法为：1.供试品溶液的制备：称取0.2g供试品置于100ml锥形瓶中，加入甲醇50ml，精密称定重量，超声提取30min，在称重，加甲醇补足重量，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，4℃冰箱保存，待用。2.标准品溶液的制备：精密称取紫萁酮对照品0.5002mg，加入1ml 的色谱甲醇制成浓度为500μg/ml的贮备液，过0.45μm微孔滤膜，4℃冰箱保存，待用。制备标准曲线，得到线性方程。3.液相色谱条件：高效液相色谱仪(Thermo-Sciencetific Ultimate3000)，色谱柱RP-C18色谱柱(150 mm×4.6mm，5μm，Agilent，USA)；流动相：A为甲醇，B为0.5％醋酸水，梯度洗脱条件：0～2min(20％A→20％A)，2min～20min(20％A→45％A)， 20min～40min(45％A→100％A)，40min～50min(100％A→20％A)；柱温：25℃；检测波长：320nm；流速：0.5ml/min；进样量：10μl。将供试品溶液按照上述液相色谱条件进样，计算含量。

②黄芪甲苷测定方法：1.供试品溶液的制备：称取0.2g供试品置于100ml 锥形瓶中，加入甲醇50ml，超声提取60min，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。 3.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈- 水(32：68)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。4.测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

③总多糖测定方法：1.供试品溶液的制备：称取0.2g供试品，置于50ml 锥形瓶中，加入甲醇20ml，精密称定重量，超声提取30min，在称重，加甲醇补足重量，滤过，取续滤液，待用。精密吸取供试品溶液2ml，置10ml具塞干燥刻度试管中，各加水2ml，精密加入5％苯酚溶液1ml，再精密加入硫酸5ml，摇匀后置于沸水中水浴10min，再放置在冰水中冷却7min，以蒸馏水为空白对照，在490nm处测定吸光度。2.标准品溶液的制备：精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品5.01mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.1002mg·ml－1的无水葡萄糖对照品溶液。精密吸取无水葡萄糖对照品溶液0.7ml、0.9ml、1.1ml、 1.3ml、1.5ml、1.7ml、1.9ml，置10ml具塞干燥刻度试管中，各加水2ml，精密加入5％苯酚溶液1ml，再精密加入硫酸5ml，摇匀后置于沸水中水浴10 min，再放置在冰水中冷却7min，以蒸馏水为空白对照，在490nm处测定吸光度。得到标准曲线后，将供试品所得吸光度带入求出浓度即得。

测定成品中紫萁酮、黄芪甲苷及总多糖的含量，其结果分别为紫萁酮含量为0.0215mg/g，黄芪甲苷含量为0.7158mg/g，总多糖含量为30.6518mg/g。

上述具体制备方法中微波萃取的优化如下：

①醇浓度单因素考察：设置5个处理组，每组称取桦褐孔菌6g，灵芝5g，黄芪9g，置于微波制样杯内，分别加入配制好的体积分数为20％、40％、60％、 80％、95％的乙醇50ml，放入微波萃取机中，设置时间为10min，温度为65℃，加热时间结束后冷却至室温，置于高速离心机中(3000r/min)高速离心20min，取上清液按下述方法对紫萁酮、黄芪甲苷及总多糖进行含量测定，结果发现醇浓度为80％时有效含量最大，故将提取醇浓度定为80％，此浓度也有利于后续的乙醇回收。

②萃取时间单因素考察：设置4个处理组，每组称取桦褐孔菌6g，灵芝 5g，黄芪9g，分别置于微波制样杯内，加入80％乙醇50ml，放入微波萃取机中，温度设置为65℃，分别萃取1min、5min、10min、15min、20min，加热时间结束后冷却至室温，置于高速离心机中(3000r/min)高速离心20min，取上清液按下述方法对紫萁酮、黄芪甲苷及总多糖进行含量测定，结果发现当萃取时间为1-10min时，各指标的含量显著提高，10min-15min时，各指标含量提高较少，RSD值小于3％,考虑到不同批次及误差影响，故将萃取时间定为15min。

本发明采用微波萃取技术，高频电磁波穿透萃取介质，到达被萃取物料的内部，微波能迅速转化为热能而使细胞内部的温度快速上升。当细胞内部的压力超过细胞的承受能力时，细胞就会破裂，有效成分即从胞内流出，并在较低的温度下溶解于萃取介质，再通过进一步过滤分离，即可获得被萃取组分。由于微波可对萃取物质中的不同组分进行选择性加热，因而可使目标组分与基体直接分离开来，从而可很大程度的节约时间并提高了萃取效率和产品纯度，将微波萃取技术和加热回流及超声提取方法进行比较，比较过程中除提取方法不同，其他条件均相同，结果见表1。

表1.微波萃取、加热回流及超声提取方法的效果比较

结果发现微波萃取15min的提取物含量较加热回流及超声提取120min的含量还高，紫萁酮含量：微波萃取15min较加热回流及超声提取120min所得含量分别增加了7.84％和15.67％；黄芪甲苷含量：分别增加了3.76％和0.98％；总多糖含量：分别增加了5.18％及6.75％。实验结果证明了微波萃取技术在节约大量时间的同时，也能有效的提高有效物质的产率。

将喷雾干燥与抽滤低温烘干及冷冻干燥进行比较，结果见表2。

由上表可知，喷雾干燥较冷冻干燥及低温烘干来说，既大大节约了试时间，且产品的产率成型率也极高，产品完整度良好。

本发明得到一种有效延缓衰老的微囊新剂型，微囊可减少药物与外界的接触，使液体药物固体化，服用和携带更加方便，有效的防止了药物的挥发损失，增加药物的稳定性。将桦褐孔菌碎成小块后煮水为较普遍的服用方式，按实施例1中的配方称取一份药材，加水熬制两次，每次60min，将所得溶液与实施例1获得的微囊产品进行有效成分含量、稳定性、存储时间、服用口感方面的比较，结果见表3。

表3.传统熬制方法获得的提取液与本发明获得的微囊产品的比较

根据上表可知，同一剂量下，微囊剂型在有效成分含量、稳定性、存储时间、口感及服用剂量等方面均较传统的熬制溶液良好，说明微囊具有精度高、稳定性好、口感良好、服用剂量少、存储方便等优点。

除此之外，微囊在体内缓慢释放，有效延长药物作用时间，减少服药次数。本发明对微囊的释放时间进行考察，采用微波萃取技术提取1处方量药材，将提取液直接喷雾干燥得到提取物粉末，将其与制备的微囊成品分别放置药物溶出仪中，设置温度为37℃±1℃，同时分别于10min、20min、30min、 40min、50min、60min取样过滤测定总多糖含量，结果见表4。

表4.微囊成品在药物溶出仪中经不同时间的总多糖含量

注：单位为mg/g

由上表结果可知，提取物粉末在30min内基本溶出完全，40min后RSD 值变化较小，而微囊在60min后才基本全部溶出，可有效减少药物在体内转运过程的损耗，延长药物作用时间。

综上，本产品采用微波萃取技术，可有效的节约能源时间，提高产率，且剂型微囊剂，药物外层有高分子膜包裹，可减少与外界的接触，起到保护药物、掩盖不良气味的作用，除此之外，微囊一般不易被消化液溶解，药物释放时体液渗入微囊中，溶解微囊中的药物，顺着囊膜内外的浓度差向外扩散，直至内外达到平衡，可有效的起到延长药物疗效的作用；通过高效液相色谱仪及紫外分光光度计等精密仪器，对复方制剂中紫萁酮、黄芪甲苷及总多糖含量进行测定，结果显示复方中含紫萁酮、黄芪甲苷及总多糖含量较高，紫萁酮含量为0.0215mg/g，黄芪甲苷含量为0.7158mg/g，总多糖含量为 30.6518mg/g。说明本药物有效成分含量很高，可起到明显的延缓衰老、抗氧化及美容养颜的功效。

Claims (6)

1.一种抗衰老药物的微胶囊制剂的制备方法，其特征在于，所述抗衰老药物由以下重量份的原料制备而成：桦褐孔菌10重量份~15重量份、灵芝6重量份~12重量份和黄芪9重量份~30重量份；所述抗衰老药物的微胶囊制剂的制备方法包括如下步骤：

步骤一、按照重量份称取桦褐孔菌、灵芝和黄芪，放入超细微破壁粉碎机中粉碎，得到超微粉；

步骤二、按照1g：2.5mL的料液比，将步骤一获得的超微粉与体积分数为80%的乙醇溶液混合，放入微波萃取机中，将温度设为65℃，萃取15min；

步骤三、萃取结束后待萃取物冷却至室温，再于3000r/min的转速下，离心20min，取上清液旋转蒸发，回收乙醇至溶液密度为1.1g/cm³，即得提取液；

步骤四、将步骤三获得的提取液联用阿拉伯胶，明胶及甲醛溶液，利用喷雾干燥机，制成微胶囊；

步骤四所述微胶囊的具体制备方法如下：

S1、将步骤三获得的提取液与5%的阿拉伯胶溶液混合，于组织捣碎机中进行乳化；再加入5%明胶溶液，于55℃下搅拌均匀；然后边搅拌边加入10%的醋酸溶液，调节pH值至3.8-4.0；

S2、将30℃的蒸馏水400ml加入S1获得的溶液中，自然冷却，待温度降至30℃时，加入冰块，继续搅拌至10℃，再加入体积分数为37%的甲醛溶液2mL，搅拌10min，然后用20%氢氧化钠溶液调节pH值至8-9，继续搅拌20min；

S3、待微囊析出并全部沉降后，倾去上清液，用蒸馏水洗至无醛味，再置于喷雾干燥机中，于150℃的条件下，快速喷干，即得到微胶囊。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述抗衰老药物由以下重量份的原料备而成：桦褐孔菌12重量份、灵芝10重量份和黄芪18重量份。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤三所述旋转蒸发的温度为60℃，压力为0.08mpa。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，S1所述5%的阿拉伯胶溶液的制备方法为：取阿拉伯胶5g，加入蒸馏水50ml，慢慢加热至80℃时，搅拌溶解，加蒸馏水至100ml备用。

5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，S1所述5%明胶溶液的制备方法为：称取明胶5g，加入蒸馏水浸泡溶胀后，加热溶解，再加蒸馏水至100ml，搅匀，50℃保温储藏备用。

6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，获得的微胶囊平均粒径约为120μm，包封率达到90%以上。