CN102210872A

CN102210872A - 一种聚乙二醇修饰肽药物制剂及其制备方法

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Publication number: CN102210872A
Application number: CN 201110142527
Authority: CN
Inventors: 陶安进; 张文治; 袁建成; 马亚平
Original assignee: Hybio Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Hybio Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-05-30
Filing date: 2011-05-30
Publication date: 2011-10-12

Abstract

本发明提供一种稳定的聚乙二醇修饰肽药物制剂及其制备方法。药物制剂包含聚乙二醇修饰肽和缓冲剂,制剂的pH为4.0-7.0，所述的缓冲剂为醋酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液中的一种或其任意两种或两种以上的组合。其包括下述步骤：称取处方量缓冲剂，用注射用水溶解并移入配液罐；用上述溶液将处方量的聚乙二醇修饰肽溶解，并稀释至处方浓度；用滤膜过滤除菌，得聚乙二醇修饰肽注射液。本发明的制剂长期稳定性明显提高。

Description

一种聚乙二醇修饰肽药物制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种多肽药物制剂和其制备方法，尤其涉及聚乙二醇修饰肽的制剂及其制备方法。

背景技术

具有药理作用的蛋白质或多肽可以通过聚乙二醇（PEG）化提高血清半衰期。通过聚乙二醇（PEG）化可以降低药理蛋白质的使用频率。然而，通常蛋白质聚乙二醇（PEG）化会降低蛋白质的药理活性。

近年来的研究表明，促红细胞生成素（EPO）刺激红细胞的生成，可用于治疗因肾病导致的慢性贫血。许多EPO类似肽已经被发现。然而， EPO类似肽通常在体内有效浓度会很快降低。通过对EPO类似肽进行化学修饰，使之通过聚乙二醇（PEG）化可以延长药物在体内有效浓度的时间，并增强抗原性。

本发明所涉及的聚乙二醇修饰肽即是一种EPO类似肽，进行聚乙二醇化，从而延长该药物在体内有效浓度的时间，起到治疗慢性肾脏衰竭病患的贫血症状。

本发明所涉及的聚乙二醇修饰肽，它的多肽单体具有的分子式为(AcG)GLYACHMGPIT(1-nal)VCQPLRM(MeG)K,它通过一个叔胺键形成双体化合物并与聚乙二醇相结合。它可以用式（I）表示：

Figure 2011101425274100002DEST_PATH_IMAGE001

（I）

其中

AcG=N-乙酰甘氨酸

G=甘氨酸

L=赖氨酸

Y=酪氨酸

A=丙氨酸

C=半胱氨酸

H=组氨酸

M=蛋氨酸

P=脯氨酸

I=异亮氨酸

T=苏氨酸

1-nal=1-萘基丙氨酸

V=缬氨酸

Q=谷氨酰胺

L=亮氨酸

R=精氨酸

MeG=N-甲基甘氨酸，又叫肌氨酸

PEG=聚乙二醇

本发明所提供的聚乙二醇修饰肽药物制剂液，稳定性良好，临床使用方便，在国内外尚无任何报道。

发明内容

本发明提供一种稳定的聚乙二醇修饰肽药物制剂，以解决聚乙二醇修饰肽在制备、储藏和使用过程中的水解、放置和贮藏稳定性不好的问题。

影响药物制剂稳定性的因素很多，申请人对聚乙二醇修饰肽浓度、pH值、缓冲剂、防腐剂等因素进行考察，发现pH值对药物制剂的稳定性影响最大。

本发明聚乙二醇修饰肽药物制剂的处方如下:

一种聚乙二醇修饰肽的药物制剂，包含聚乙二醇修饰肽和缓冲剂，所述制剂的pH为4.0至7.0。意外的发现pH值为5.0至6.0，聚乙二醇修饰肽的稳定性最好。更优选为5.5。

当聚乙二醇修饰肽的药物制剂的pH值为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0时，考察药物制剂在60℃时的稳定性，结果发现当pH值由3.0增加至6.0是有关物质变化不明显，而当pH值由6.0增加至7.0时有关物质逐渐增加，但依然可以满足药物制剂的稳定性和安全性的要求。当pH值由7.0增加至9.0时有关物质急剧增加，表明聚乙二醇修饰肽在pH3.0至7.0的范围内稳定性较好，考虑到pH值小于4.0在临床注射时会造成疼痛，病人顺应性差，故将pH值范围为4.0到7.0。优选为5.0-6.0，更优选为5.5。

本发明中所用的缓冲剂包括醋酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或其任意两种或两种以上的组合，优选醋酸盐缓冲液。采用此发明中的处方制备聚乙二醇修饰肽药物制剂可以极大地提高聚乙二醇修饰肽的稳定性，更利于长期贮存和临床应用，具体数据可见表1和表2。

本发明的聚乙二醇修饰肽药物制剂中聚乙二醇修饰肽的浓度优选的浓度为0.001%至0.1% w/v,（单位：mg/ml），更优选的浓度为0.06% w/v。动物试验结果表明，当给药剂量为0.025、 0.05、 0.1 、0.2、 2、 20 mg/kg时均可产生药理作用。采用注射剂给药时，注射液的体积需要适宜，一般控制在5ml左右。因此选择聚乙二醇修饰肽的浓度范围为0.001%至0.1% w/v，有利于临床使用时给药剂量的调整，如果浓度过低或过高均不利于临床给药。

本发明的选用的防腐剂为本领域常用的防腐剂，优选防腐剂选自间甲酚、苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞中的任一种或其任意两种或两种以上的组合，更优选为三氯叔丁醇和间甲酚中的任一种或其组合。本发明所述的防腐剂的用量为0.001%至1.0%w/v（单位：mg/ml），优选0.01%至1.0% w/v。当防腐剂的浓度低于0.001% w/v时则防腐效果不明显，而当浓度大于1.0% w/v时则会由于防腐剂本身会产生药理作用而影响聚乙二醇修饰肽的临床应用。

本发明中所选用的等渗调节剂的含量为0.7%至10%w/v（单位：mg/ml），所用的等渗调节剂为甘露醇、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、蔗糖、麦芽糖中的一种或其任意两种或两种以上的组合，优选氯化钠。

聚乙二醇修饰肽药物制剂，可以是注射剂，包括粉针剂和注射液，优选注射液。

以上聚乙二醇修饰肽的药物制剂可以采用普通的药物制剂技术制备获得。

本发明同时还提一种聚乙二醇修饰肽注射液的制备方法，包括下述步骤：

（1）称取处方量缓冲剂，用注射用水溶解并移入配液罐；

（2）用上述溶液将处方量的聚乙二醇修饰肽溶解，并稀释至处方浓度；

（3）用滤膜过滤除菌，得聚乙二醇修饰肽注射液。

在步骤（3）进行过滤之前，可以通过加入等渗调节剂实现与人（或动物）体液等渗；或者根据需要加入防腐剂。

所述处方量是指按照本发明聚乙二醇修饰肽药物制剂的处方的主要成分与辅料的配比，根据需要配置的规模而确定的各成分的质量。比如缓冲剂的处方量是指为了实现的pH值为4.0至7.0的质量，根据配制规模，确定缓冲剂应该称取的用量。处方浓度是指聚乙二醇修饰肽溶解后，将聚乙二醇修饰肽稀释至质量浓度为0.001%至0.1%w/v。

本发明所述的聚乙二醇修饰肽注射液的制备方法，优选包括下述步骤：

（1）称取处方量的防腐剂、等渗调节剂、缓冲剂，依次用注射用水溶解并移入配液罐；

（3）用滤膜过滤除菌，得聚乙二醇修饰肽注射液。其中滤膜优选0.22μm滤膜。

所述的步骤（1）称取处方量的辅料，辅料为防腐剂、等渗调节剂、缓冲剂，依次用注射用水溶解并移入配液罐。所述的处方量是指为了实现的防腐剂质量浓度为0.001%至1.0%，等渗调节剂的含量为0.7%至10%w/v，pH值为4.0至7.0.的辅料质量，根据生产规模，确定各辅料的用量。

所述的步骤（2）处方浓度是指聚乙二醇修饰肽溶解后，将聚乙二醇修饰肽稀释至质量浓度为0.001%至0.1%w/v。

本发明确定了影响聚乙二醇修饰肽药物制剂稳定性的关键因素，即合理的配方、pH 值范围，可以得到稳定的聚乙二醇修饰肽药物制剂；同时采用本发明提供的制备方法，可以得到稳定的聚乙二醇修饰肽注射液，有利于聚乙二醇修饰肽注射液质量的控制，从而制定科学的生产规程，使聚乙二醇修饰肽注射液大批量工业化生产成为可能。

具体实施方法

实施例一：处方1

聚乙二醇修饰肽 6g

甘露醇 40g

三氯叔丁醇 5.0g

冰醋酸 0.07g

三水合醋酸钠 1.20g

注射用水加至 1000ml

称取处方量的甘露醇、三氯叔丁醇、冰醋酸、三水合醋酸钠，加入800ml 注射用水，溶解后再加入处方量的聚乙二醇修饰肽，然后用注射用水加至1000ml，使用0.22μm的滤膜除菌过滤，即得。

实施例二：处方2

聚乙二醇修饰肽 6g

氯化钠 7.2g

间甲酚 2.2g

冰醋酸 0.07g

三水合醋酸钠 1.20g

注射用水加至 1000ml

称取处方量的氯化钠、间甲酚、冰醋酸、三水合醋酸钠，加入800ml 注射用水，溶解后再加入处方量的聚乙二醇修饰肽，然后用注射用水加至1000ml，使用0.22μm的滤膜除菌过滤，即得。

实施例三：处方3

聚乙二醇修饰肽 6g

甘露醇 42g

三氯叔丁醇 5.0g

磷酸氢二钠 0.81g

一水合枸橼酸 0.91g

注射用水加至 1000ml

称取处方量的甘露醇、三氯叔丁醇、磷酸氢二钠、一水合枸橼酸，加入800ml 注射用水，溶解后再加入处方量的聚乙二醇修饰肽，然后用注射用水加至1000ml，使用0.22μm的滤膜除菌过滤，即得。

实施例四：处方4

聚乙二醇修饰肽 6mg

氯化钠 7.2g

三氯叔丁醇 5.0g

一水合枸橼酸 0.63g

二水合枸橼酸钠 2.07g

注射用水加至 1000ml

称取处方量的氯化钠、三氯叔丁醇、一水合枸橼酸、二水合枸橼酸钠，加入800ml 注射用水，溶解后再加入处方量的聚乙二醇修饰肽，然后用注射用水加至1000ml，使用0.22μm的滤膜除菌过滤，即得。

实施例五：

聚乙二醇修饰肽注射液的稳定性考察

以实施例二的处方2为处方制备一批制剂（表示为“实施例2”)，同时按相同处方制备一批不含冰醋酸和三水合醋酸钠的制剂（表示为“实施例（2）”），每批分成两份：一份放置于温度25℃±2℃、相对湿度60%±10%条件下进行加速试验，分别于0、1、2、3、6月取样检测；另一份放置于温度6℃±2℃恒温环境长期试验，分别于0、3、6、9、12月取样检测。

表1 聚乙二醇修饰肽注射液25℃稳定性试验考察结果

Figure 2011101425274100002DEST_PATH_IMAGE003

表2聚乙二醇修饰肽注射液6℃稳定性试验考察结果

Figure 2011101425274100002DEST_PATH_IMAGE005

以实施例1或实施例3所制备的注射液重复上述实验，可以得到相似的实验结果。

从上述实验结果可见，本发明中的含有缓冲剂的聚乙二醇修饰肽注射液稳定性比不含缓冲剂的制剂稳定性有明显提高，表明缓冲剂可以很好的提高聚乙二醇修饰肽注射液的稳定性。

经过稳定性实验研究，采用本发明中的缓冲剂制备的聚乙二醇修饰肽注射液，其稳定性与不含缓冲剂的处方相比有明显提高。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种聚乙二醇修饰肽的药物制剂，包含聚乙二醇修饰肽和缓冲剂,制剂的pH为4.0--7.0，所述的缓冲剂为醋酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液中的一种或其任意两种或两种以上的组合；所述的聚乙二醇修饰肽是如式（I）的化合物：

Figure 2011101425274100001DEST_PATH_IMAGE002

（I）。

2.根据权利要求1所述的聚乙二醇修饰肽的药物制剂，其特征在于：制剂的pH为5.0--6.0。

3.根据权利要求1所述的聚乙二醇修饰肽的药物制剂，其特征在于：所述的聚乙二醇修饰肽的质量浓度为0.001%至0.1%。

4.根据权利要求2所述的聚乙二醇修饰肽的药物制剂，其特征在于：所述的聚乙二醇修饰肽的质量浓度为0.001%至0.1%。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的聚乙二醇修饰肽的药物制剂，其特征在于：含有等渗调节剂，等渗调节剂质量浓度为0.7%至10%w/v, 等渗调节剂为甘露醇、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、蔗糖、麦芽糖中的一种或其任意两种或两种以上的组合。

6.根据权利要求1-4任意一项所述的聚乙二醇修饰肽的药物制剂，其特征在于：含有防腐剂，防腐剂是间甲酚、苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞中的任一种或其任意两种或两种以上的组合，质量浓度为为0.001%至1.0%w/v。

7.根据权利要求5所述的聚乙二醇修饰肽的药物制剂，其特征在于：含有防腐剂，防腐剂是间甲酚、苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞中的任一种或其任意两种或两种以上的组合，质量浓度为为0.001%至1.0%w/v。

8.根据权利要求1-7任意一项所述的聚乙二醇修饰肽的药物制剂的制备方法，其特征在于：药物制剂为注射液，其包括下述步骤：

称取处方量缓冲剂，用注射用水溶解并移入配液罐；

用上述溶液将处方量的聚乙二醇修饰肽溶解，并稀释至处方浓度；

用滤膜过滤除菌，得聚乙二醇修饰肽注射液。

9.根据权利要求8所述的的聚乙二醇修饰肽的药物制剂的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：

（3）用滤膜过滤除菌，得聚乙二醇修饰肽注射液。

10.根据权利要求8或9所述的的聚乙二醇修饰肽的药物制剂的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：等渗调节剂的质量浓度为0.7%至10%。