CN102197029A

CN102197029A - 作为cdk抑制剂的亚砜亚胺取代的苯胺基嘧啶衍生物、其制备以及作为药物的用途

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Publication number: CN102197029A
Application number: CN2009801419787A
Authority: CN
Inventors: U·吕金; R·尧泰拉特; G·西迈斯特; J·舒尔策; P·利瑙
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Intellectual Property GmbH
Priority date: 2008-10-21
Filing date: 2009-10-09
Publication date: 2011-09-21
Anticipated expiration: 2029-10-09
Also published as: CU24052B1; AR074053A1; DK2350026T3; EP2350026B1; HRP20140830T1; AU2009306733C1; TW201020237A; CR20110210A; PA8846201A1; HN2011001019A; ZA201103727B; UA103500C2; UY32190A; SA109300632B1; JP5564054B2; WO2010046035A1; CA2739739A1; PT2350026E; IL211713A; IL211713A0

Abstract

本发明涉及式(I)的亚砜亚胺取代的苯胺基嘧啶衍生物、其制备方法以及其用作治疗多种疾病的药物的用途。

Description

作为CDK抑制剂的亚砜亚胺取代的苯胺基嘧啶衍生物、其制备以及作为药物的用途

本发明涉及所选的亚砜亚胺(sulfoximine)取代的苯胺基嘧啶衍生物、其制备方法以及其用作治疗多种疾病的药物的用途。

细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)是一类在调节细胞周期中起重要作用的酶，并且由此代表用于开发小的抑制分子的特别令人关注的目标。CDK的选择性抑制剂可用于治疗癌症或者由细胞增殖紊乱引起的其它疾病。

已描述了作为活性物质的嘧啶化合物及其类似物，例如2-苯胺基-嘧啶化合物作为杀真菌剂(DE 4029650)或取代嘧啶衍生物用于治疗神经疾病或神经变性疾病(WO 99/19305)。已描述了作为CDK抑制剂的多种嘧啶衍生物，例如2-氨基-4-取代的嘧啶类(WO 01/14375)、嘌呤类(WO 99/02162)、5-氰基-嘧啶类(WO 02/04429)、苯胺基嘧啶类(WO 00/12486)和2-羟基-3-N，N-二甲基氨基丙氧基-嘧啶类(WO 00/39101)。

具体而言，WO 02/096888和WO 03/076437中公开了对CDK具有抑制作用的嘧啶衍生物。包含苯基磺酰氨基(phenylsulfonamide group)的化合物是已知的人碳酸酐酶(carboanhydrase)(特别是碳酸酐酶-2)的抑制剂，并特别用作利尿剂，用于治疗青光眼。磺酰胺的氮原子和氧原子通过氢桥结合至碳酸酐酶-2的活性中心中的二价锌离子和氨基酸Thr 199上，并因此阻断其酶的作用(A.Casini，F.Abbate，A.Scozzafava，C.T.Supuran，Bioorganic.Med.Chem.Lett.2003，1，2759)。包含苯基磺酰胺基的CDK抑制剂的临床用途可能受到对碳酸酐酶的可能的抑制作用以及由此产生的副作用范围的限制。

亚砜亚胺活性物质的实例是作为杀真菌剂的亚砜亚胺基(sulfonimidoyl)修饰的三唑化合物(H.Kawanishi，H.Morimoto，T.Nakano，T.Watanabe，K.Oda，K.Tsujihara，Heterocycles 1998，49，181)或者作为除草剂和杀虫剂的芳烷基亚砜亚胺(Shell International Research，Ger.P.2 129 678)。

WO 2005/037800公开了作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的开放的亚砜亚胺取代的苯胺基嘧啶衍生物。所给出的实例是未取代的或者在嘧啶的5位被卤素，特别是被溴取代的结构。具体公开的结构均不具有5-三氟甲基取代基。

从这一现有技术开始，本发明所面临的问题是提供不仅是强效的CDK抑制剂而且还可以有效抑制肿瘤生长的化合物。事实上，强效的CDK抑制对于有效的肿瘤抑制是必需而非充分的要求。该结构还需要其它性质，例如渗入肿瘤细胞的性质。

现在发现通式(I)的化合物及其盐、非对映体和对映体，

其中

X代表-O-或-NH-，并且

R¹代表甲基、乙基、丙基或异丙基，并且

R²和R³各自独立地代表氢、甲基或乙基，并且

R⁴代表C₁-C₆烷基或C₃-C₇环烷基环，

其不仅强效抑制CDK，还特别有效地抑制肿瘤生长。

其中X代表-O-的化合物共同组成式(Ia)的组。

其中X代表-NH-的化合物共同组成式(Ib)的组。

本申请基于以下定义：

C ₁ -C ₆ 烷基

在每种情况中应理解C₁-C₆烷基为直链或支链的烷基残基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基残基。

C ₃ -C ₇ 环烷基

应理解C₃-C₇环烷基环为环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基环。

在通式(I)中，X可以代表-O-或-NH-。

优选地，X代表-O-。

在通式(I)中，R¹可以代表甲基、乙基、丙基或异丙基。

优选地，R¹代表甲基。

在通式(I)中，R²和R³可以各自独立地代表氢、甲基或乙基。

优选地，R²和R³各自独立地代表氢或甲基。

特别优选地，R²代表甲基，并且R³代表氢或甲基。

在通式(I)中，R⁴可以代表C₁-C₆烷基残基或C₃-C₇环烷基环。

优选地，R⁴代表甲基或乙基或者代表环丙基环。

通式(I)的化合物的优选亚组包括通式(I)的化合物及其盐、非对映体和对映体，

其中

X代表-O-或-NH-，并且

R¹代表甲基，并且

R²代表甲基，并且

R³代表氢或甲基，并且

R⁴代表甲基或乙基或者代表环丙基环。

本发明的化合物适用于治疗以下疾病：

●癌症，例如实体瘤、瘤转移以及血液肿瘤，特别是头颈部肿瘤；肺部和支气管肿瘤；胃肠肿瘤，例如胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肝细胞癌；内分泌活性肿瘤(endokin active tumor)；乳腺癌和妇科肿瘤；泌尿生殖系统肿瘤，例如肾癌、膀胱癌、前列腺癌；皮肤肿瘤；肉瘤；白血病和淋巴瘤；

●病毒病，以及

●心血管疾病，例如狭窄、动脉硬化和再狭窄、支架诱导的再狭窄(stent-induced restenoses)。

使用用于盖仑制剂(galenical)的普通赋形剂将一种或多种活性物质转化为所需的剂型，通过本身已知的方法将本发明的化合物配制为药物制剂。

可以使用载体、填充剂、崩解剂、粘合剂、保湿剂、助流剂、吸收剂和吸附剂、稀释剂、溶剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、矫味剂(corrective)、着色剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、用于改变渗透压的盐或缓冲剂作为例如赋形剂。

应当参考Remington′s Pharmaceutical Science，第15版，Mack PublishingCompany，East Pennsylvania(1980)。

所述药物制剂可以是：

固体形式的，例如片剂、糖衣片剂、丸剂、栓剂、胶囊剂、经皮系统，或

半固体形式的，例如软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、栓剂、乳剂，或

液体形式的，例如溶液剂、酊剂、混悬剂或乳剂。

本发明意义上的赋形剂可以是例如盐、糖类(单糖、二糖、三糖、寡糖和/或多糖)、蛋白质、氨基酸、肽、脂肪、蜡、油、碳氢化合物及其衍生物，其中所述赋形剂可以是天然来源的或者是可通过合成或部分合成得到的。

可以特别考虑片剂、糖衣片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、锭剂、混悬剂、乳剂或溶液剂用于口服或经口施用。

可以特别考虑混悬剂、乳剂以及尤其是溶液剂用于肠胃外施用。

本发明化合物的制备

通常亚砜亚胺具有结构和构型上的高稳定性(C.Bolm，J.P.Hildebrand，J.Org.Chem.2000，65，169)。

该官能团的这些性质通常允许甚至极端的反应条件，并使得在亚砜亚胺的亚胺氮和α-碳上的简单衍生化成为可能。对映异构纯的亚砜亚胺还可以在非对映立体选择性合成中用作辅料((a)S.G.Pyne，Sulfur Reports 1992，12，57；(b)C.R.Johnson，Aldrichimica Acta 1985，18，3)。

已描述了对映异构纯的亚砜亚胺的制备，例如通过使用对映异构纯的樟脑-10-磺酸进行外消旋体的拆分((a)C.R.Johnson，C.W.Schroeck，J.Am.Chem.Soc.1973，95，7418；(b)C.S.Shiner，A.H.Berks，J.Org.Chem.1988，53，5542)。制备旋光活性的亚砜亚胺的另一方法是将旋光活性的亚砜立体选择性亚胺化((a)C.Bolm，P.Müller，K.Harms，Acta Chem.Scand.1996，50，305；(b)Y.Tamura，J.Minamikawa，K.Sumoto，S.Fujii，M.Ikeda，J.Org.Chem.1973，38，1239；(c)H.Okamura，C.Bolm，Org.Lett.2004，6，1305)。

亚砜亚胺的综述文献参见例如a)M.Regglin，C.Zur，Synthesis 2000，1；(b)C.R.Johnson，Aldrichimica Acta 1985，18，3)。

以下实施例阐释了本发明化合物的制备，而并未将所要求保护的化合物的范围限制于这些实施例中。

式(Ia)的化合物(4-O衍生物)的制备

可以通过这样的方法制备本发明的化合物，所述方法的特征在于以下步骤：

a)将式(IVd)的化合物氧化得到式(IVc)的亚砜

b₁)将式(IVc)的亚砜直接亚胺化得到式(IVa)的被保护的亚砜亚胺

或者

b₂)将式(IVc)的亚砜亚胺化得到式(IVb)的未被保护的亚砜亚胺，随后引入保护基得到式(IVa)的化合物

c)将式(IVa)的化合物还原得到式(IV)的化合物

d)通过与式(VI)的单保护的二醇反应将2，4-二氯-5-碘-嘧啶(VII)的4位官能团并形成式(Va)的中间体

e)制备5-CF₃中间体(V)

f)将式(IV)和(V)的化合物偶联得到式(III)的中间体

g)脱除保护基(PG)并形成(II)

h)脱除亚砜亚胺上的保护基并形成(Ia)

其中取代基R¹、R²、R³和R⁴具有通式(I)中所述的含义。

步骤a)

将式(IVd)的化合物氧化得到式(IVc)的亚砜。有多种方法(包括立体选择性方法)可以将硫醚转化为亚砜(参见例如：(a)M.H.Ali等人，Synthesis1997，764；b)M.C.Carreno，Chem.Rev.1995，95，1717；c)I.Patel等人，Org.Proc.Res.Dev.2002，6，225；c)N.Khiar等人，Chem.Rev.2003，103，3651)。所述的使用高碘酸/氯化铁(III)特别适于制备式(IVc)的化合物。

步骤b ₁ )

式(IVc)的亚砜与三氟乙酰胺以及二乙酸碘苯、氧化镁和催化量的乙酸铑(II)二聚体的反应使得制备式(IVa)的被保护的亚砜亚胺成为可能。该反应是立体特异性的，并且在发生时保留立构中心的构型(参见：(a)H.Okamura，C.Bolm，Org.Lett.2004，6，1305)。

步骤b ₂ )

首先使式(IVc)的亚砜发生反应得到式(IVb)的未被保护的亚砜亚胺。适合的方法是例如：

a)所述亚砜与叠氮化钠/浓硫酸的反应(参见例如：(a)C.R.Johnson，P.E.Rogers，J.Org.Chem.1973，38，1793)，

b)所述亚砜与叠氮化钠/发烟硫酸的反应(参见例如：(a)N.V.Kondratenko，O.A.Radchenko，L.M.Yagupol′ski，J.Org.Chem.USSR 1984，20，2051)，

c)所述亚砜与O-2，4，6-三甲基苯磺酰羟胺(o-mesitylenesulfonylhydroxylamine，MSH)的反应(参见例如：(a)C.R.Johnson，R.A.Kirchhoff，H.G.Corkins，J.Org.Chem.1974，39，2458)。

例如可以如所述的通过在碱性条件下与三氟乙酸酐反应来进行随后的保护基的引入并形成式(IVa)的化合物。

步骤c)

对于接下来的将芳族硝基还原得到式(IV)的化合物，原则上很多反应条件是适用的(参见例如：R.C.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH，New York，1989，411)。例如，所述的氯化钛(III)的使用或者使用钯碳的氢化特别适合。

步骤d)

2，4-二氯-5-碘-嘧啶(VII)与式(VI)的醇的反应使得制备式(Va)的中间体成为可能(参见例如：U.Lücking等人，WO2007/071455).

步骤e)

原则上有多种方法可用于在含氮的杂芳族化合物中用三氟甲基置换卤素(参见例如：a)G.E.Carr，R.D.Chambers，T.F.Holmes，J.Chem.Soc.PerkinTrans.1，1988，921；b)F.Cottet，M.Schlosser，Eur.J.Org.Chem.2002，327；c)F.G.Njoroge等人，J.Med.Chem 1997，40，4290)。

所述的在N-甲基-2-吡咯烷酮和THF中使用碘化亚铜、氟化钾和(三氟甲基)-三甲基硅烷特别适合所述嘧啶(Va)的5位的引入并形成中间体(V)。

步骤f)

可以使式(V)的2-氯嘧啶与式(IV)的苯胺反应得到式(III)的中间体(参见例如：a)J.Bryant等人，WO 2004/048343)。

步骤g)

从中间体(III)中脱除保护基(PG)得到中间体(II)(参见例如：P.J.Kocienski，Protecting Groups，Georg Thieme Verlag Stuttgart，New York，1994)。

所述的氢化特别适合于所述的苄基的脱除。如果需要，可以早在步骤f的条件下就发生THP基团的脱除。

步骤h)

脱除亚砜亚胺(II)上的三氟乙酰基得到式(Ia)的化合物。所述的在室温下使用甲醇中的碳酸钾的技术特别适合于此(参见例如：(a)H.Okamura，C.Bolm，Org.Lett.2004，6，1305)。

一般信息

所有氧化敏感性或水解敏感性化合物的反应均是在氩气下使用干燥溶剂进行的。

除了所述亚砜亚胺衍生物之外，使用程序Autonom 2000 Name命名物质，所述Autonom 2000 Name在MDL ISIS Draw中执行。Autonom 2000 Name不接受任何亚砜亚胺，因此按照IUPAC规则(IUPAC，Nomenclature ofOrganic Chemistry，1979版，C-6.3.亚砜类和砜类，第C-633条，633.1磺酰亚胺和亚砜亚胺)命名亚砜亚胺。

缩写

实施例1

(RS)-S-环丙基-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)亚砜亚胺

1a)中间体的制备

化合物1.1

1-环丙基硫烷基-4-硝基苯

将1.78g(44.6mmol)的氢化钠(60％)分批加入到3.00g(40.5mmol)的环丙烷硫醇(根据E.Block等人，J.Am.Chem.Soc.1992，114，3492制备)的100ml THF/100ml乙醚溶液中，并在室温下搅拌30分钟。然后分批加入6.00g(38.7mmol)的1-氟-4-硝基苯。将该混合物在40℃下搅拌2小时。将其冷却，然后将混合物放入水中，并用苯萃取(3次)。通过蒸发浓缩合并的有机相，并将残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯95∶5)。得到4.6g(23.6mmol；收率：61％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.12(m，2H)，7.54(m，2H)，2.35(m，1H)，1.16(m，2H)，0.61(m，2H)。

化合物1.2

(RS)-1-环丙烷亚磺酰基-4-硝基苯

将179mg(1.11mmol)的氯化铁(III)加入到7.2g(36.88mmol)的1-环丙基硫烷基-4-硝基苯在140ml乙腈中的混合物中，并将其在室温下搅拌15分钟。然后在25℃下分批加入9.25g(40.57mmol)的高碘酸。将该混合物搅拌30分钟，然后在搅拌的同时将其加入到冷却的饱和硫代硫酸钠溶液中。然后将其用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯1∶1)。得到(28.07mmol；收率：76％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.41(m，2H)，7.98(m，2H)，2.60(m，1H)，1.01(m，3H)，0.86(m，1H)。

化合物1.3

(RS)-S-环丙基-S-(4-硝基苯基)-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

在氩气下，将1.58g(3.58mmol)的乙酸铑(II)二聚体加入到15.1g(71.53mmol)的(RS)-1-环丙烷亚磺酰基-4-硝基苯、17.8g(157.37mmol)的三氟乙酰胺、38.0g(118.02mmol)的二乙酸碘苯和12.7g(314.73mmol)的氧化镁在801ml DCM中的悬浮液中，并在室温下搅拌过夜。使用硅藻土抽滤该混合物，并通过蒸发浓缩。将残留的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯2∶1)。得到18.0g(55.97mmol；收率：78％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.49(m，2H)，8.25(m，2H)，3.56(m，1H)，1.51(m，1H)，1.41(m，1H)，1.18(m，2H)。

化合物1.4

(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

将1.4g的钯碳(10％/50％湿度)加入到6.9g(21.44mmol)的(RS)-S-环丙基-S-(4-硝基苯基)-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺在214ml乙醇和39ml THF中的溶液中，并在25℃下在常压下氢化1小时。再加入1.4g的钯碳，并在常压下再氢化4.5小时。过滤该混合物，再次向滤液中加入1.4g的钯碳，并最后氢化45分钟。过滤该混合物，并通过蒸发浓缩。得到5.8g(19.91mmol；收率：93％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝7.53(m，2H)，6.71(m，2H)，6.40(br，2H)，3.21(m，1H)，1.28(m，2H)，1.08(m，2H)。

化合物1.5

(2R，3R)-3-苄氧基-丁-2-醇

在室温下将5.00g(44.6mmol)的叔丁醇钾(potassium tert-butylate)加入到4.00g(44.4mmol)的(2R，3R)-丁烷-2，3-二醇的300ml THF溶液中，并将该混合物回流15分钟。将该混合物冷却至约50℃，并加入5.3ml(44.6mmol)的溴化苄。将其回流3小时，并在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯和氯化钠溶液稀释该混合物，然后用1N的氯化氢溶液(1次)和氯化钠溶液(2次)洗涤。干燥有机相(Na₂SO₄)，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯1∶1)。得到3.41g(18.9mmol；收率43％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝7.35(m，4H)，7.28(m，1H)，4.52(m，3H)，3.67(m，1H)，3.37(m，1H)，1.05(d，3H)，1.01(d，3H)。

化合物1.6

4-((1R，2R)-2-苄氧基-1-甲基-丙氧基)-2-氯-5-碘-嘧啶

在0℃下在搅拌下将2.07g的氢化钠(55％)分批加入到56ml乙醚中的8.55g(47.4mmol)的(2R，3R)-3-苄氧基-丁-2-醇中。10分钟后移除冰浴，并在室温下再搅拌3分钟。在0℃下将形成的悬浮液加入到6.52g(23.7mmol)的2，4-二氯-5-碘-嘧啶的溶液中。在40℃下将该混合物搅拌4小时，然后加入稀氯化钠溶液。然后用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥合并的有机相(Na₂SO₄)，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯4∶1)。得到4.12g(9.8mmol；收率：41％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.78(s，1H)，7.29(m，5H)，5.27(m，1H)，4.64(d，1H)，4.53(d，1H)，3.73(m，1H)，1.30(d，3H)，1.19(d，3H)。

化合物1.7

4-((1R，2R)-2-苄氧基-1-甲基-丙氧基)-2-氯-5-三氟甲基-嘧啶

在室温下在搅拌下将3.82g(20.0mmol)的碘化亚铜、0.97g(16.7mmol)的氟化钾和2.47ml(16.7mmol)的(三氟甲基)-三甲基甲硅烷加入到4.66g(11.1mmol)的4-((1R，2R)-2-苄氧基-1-甲基-丙氧基)-2-氯-5-碘-嘧啶在15.8ml NMP和15.8ml THF中的溶液中。将该混合物在80℃下搅拌5.5小时。冷却，然后将该混合物加入到稀氯化钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯4∶1)。得到2.17g(6.0mmol；收率：54％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.81(s，1H)，7.21(m，5H)，5.40(m，1H)，4.57(d，1H)，4.42(d，1H)，3.70(m，1H)，1.28(d，3H)，1.13(d，3H)。

化合物1.8

(RS)-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-(苄氧基)-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

在80℃下将0.96ml 4N的氯化氢的1，4-二氧六环溶液加入到18.8ml乙腈中的1.39g(3.85mmol)的4-((1R，2R)-2-苄氧基-1-甲基-丙氧基)-2-氯-5-三氟甲基-嘧啶和1.35g(4.62mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺中。冷却，然后用乙酸乙酯稀释该混合物，并用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯4∶1)。得到1.32g(2.14mmol，收率：56％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.71(s，1H)，8.84(s，1H)，8.08(m，2H)，7.93(m，2H)，7.26(m，5H)，5.52(m，1H)，4.62(d，1H)，4.51(d，1H)，3.78(m，1H)，3.35(m，1H)，1.37(m，5H)，1.16(m，5H)。

化合物1.9

(RS)-S-环丙基-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

将1.64g的钯碳(10％)加入到1.31g(2.12mmol)的(RS)-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-(苄氧基)-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺的66ml乙醇溶液中，并在室温下常压氢化。过滤该混合物，并通过蒸发浓缩。得到0.88g(1.67mmol；收率：79％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.65(s，1H)，8.58(s，1H)，8.04(m，2H)，7.89(m，2H)，5.28(m，1H)，4.86(d，1H)，3.82(m，1H)，3.35(m，1H)，1.45(m，5H)，1.15(m，5H)。

1b)终产物的制备

将1130mg(8.20mmol)的碳酸钾加入到35ml甲醇中的863mg(1.64mmol)的(RS)-S-环丙基-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺中，并在室温下搅拌1.5小时。将其用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(3次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到709mg(1.64mmol)的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.50(s，1H)，8.59(s，1H)，7.94(m，2H)，7.84(m，2H)，5.32(m，1H)，4.91(d，1H)，4.07(s，1H)，3.86(m，1H)，2.63(m，1H)，1.30(d，3H)，1.11(m，4H)，0.91(m，3H)。

MS：431(ES+)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak IA 5μ250×30mm

洗脱剂：己烷/乙醇8∶2

流速：40.0mL/min

检测器：UV 254nm

温度：室温

保留时间：10.8-13.4min；立体异构体1(＝实施例1-SI-1)

13.6-18.5min；立体异构体2(＝实施例1-SI-2)

实施例2

(RS)-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-甲基亚砜亚胺

2a)中间体的制备

化合物2.1

(RS)-S-(4-硝基苯基)-S-甲基亚砜亚胺

将0.70g(10.76mmol)的叠氮化钠加入到20ml DCM中的1.56g(8.42mmol)1-(甲基亚磺酰基)-4-硝基苯中。在0℃下向该混合物缓慢加入2.3ml的浓硫酸，然后加热至45℃。16小时后，将该混合物冷却至室温，加入水，然后用DCM萃取。用15％的氢氧化钠溶液将水相调节至pH11，并用DCM萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到1.08g(5.39mmol；收率：63％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.43(m，2H)，8.17(m，2H)，4.62(s，1H)，3.18(s，3H)。

化合物2.2

(RS)-S-甲基-S-(4-硝基苯基)-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

在冰冷却下，将1.00ml(7.08mmol)的三氟乙酸酐滴加到1000mg(4.99mmol)的(RS)-S-(4-硝基苯基)-S-甲基亚砜亚胺、55mg(0.45mmol)的DMAP和0.76ml(5.49mmol)的三乙胺的32ml DCM溶液中。在冰浴下将该混合物再搅拌2小时。用DCM稀释，并用半浓缩氯化钠溶液洗涤。干燥(Na₂SO₄)有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将所得的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯60∶40)。最后用二异丙醚搅拌所得的产物。抽滤出该固体并干燥。得到1444mg(4.87mmol：收率：98％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.50(m，2H)，8.24(m，2H)，3.87(s，3H)。

化合物2.3

(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

将292mg的钯碳(10％/50％湿度)加入到1.34g(4.52mmol)的(RS)-S-甲基-S-(4-硝基苯基)-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺在45ml乙醇和8ml THF中的溶液中，并在24℃下常压氢化45分钟。过滤该混合物，并通过蒸发浓缩。用二异丙醚搅拌所得的残余物。抽滤出该固体并干燥。得到1.07g(4.03mmol；收率：89％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝7.54(m，2H)，6.67(m，2H)，6.35(s，2H)，3.55(s，3H)。

化合物2.4

(RS)-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-(苄氧基)-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

将0.97ml 4N的氯化氢的1，4-二氧六环溶液加入到19.0ml乙腈中的1.40g(3.88mmol)的4-((1R，2R)-2-苄氧基-1-甲基-丙氧基)-2-氯-5-三氟甲基-嘧啶和1.20g(4.51mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺中，然后在80℃下搅拌6小时。冷却，然后用乙酸乙酯稀释该混合物，并用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯1∶1)。得到1.76g(2.98mmol，收率：77％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.66(s，1H)，8.60(s，1H)，8.02(m，2H)，7.93(m，2H)，7.21(m，5H)，5.46(m，1H)，4.57(d，1H)，4.46(d，1H)，3.72(m，1H)，3.68(s，3H)，1.31(d，3H)，1.16(d，3H)。

化合物2.5

(RS)-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

将0.18g的钯碳(10％)加入到1.75g(2.96mmol)的(RS)-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-(苄氧基)-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺的35ml乙醇溶液中，并在室温下常压氢化。过滤该混合物，并通过蒸发浓缩。得到1.40g的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.65(s，1H)，8.58(s，1H)，8.04(m，2H)，7.93(m，2H)，5.28(m，1H)，4.86(d，1H)，3.83(m，1H)，3.70(s，3H)，1.26(d，3H)，1.07(d，3H)。

2b)终产物的制备

将1.92g(13.89mmol)的碳酸钾加入到60ml甲醇中的1.39g(2.78mmol)的(RS)-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺中，并在室温下搅拌1.5小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将残余物色谱纯化(DCM/EtOH 9∶1)。得到862mg(2.13mmol；收率：77％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.47(s，1H)，8.55(s，1H)，7.90(m，2H)，7.83(m，2H)，5.27(m，1H)，4.86(d，1H)，4.04(s，1H)，3.82(m，1H)，3.00(s，3H)，1.26(d，3H)，1.07(d，3H)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak IC 5μ250×20mm

洗脱剂：己烷/乙醇8∶2

缓冲液：己烷/0.1％DEA

流速：25.0mL/min

检测器：UV 280nm

温度：室温

保留时间：9.5-12.1min；立体异构体1(＝实施例2-SI-1)

13.1-16.0min；立体异构体2(＝实施例2-SI-2)

实施例3

(RS)-S-(4-{[4-{[(R)-2-羟基-1，2-二甲基丙基]氧基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-甲基亚砜亚胺

3a)中间体的制备

化合物3.1.

(R)-2-甲基-丁烷-2，3-二醇

将10.0g(96.1mmol)的(R)-(+)-乳酸甲酯的20ml THF溶液缓慢滴加到160ml(480.0mmol)用冰冷却的3N的甲基氯化镁的THF溶液中。首先将该混合物缓慢加热至室温，然后回流30分钟。冷却，然后将该混合物加入到饱和氯化铵溶液中，并用乙酸乙酯萃取(3次)。用Whatman过滤器过滤合并的有机相，并通过蒸发浓缩。得到4.5g(43.1mmol)的粗产物，并无需进一步纯化而使用。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝4.21(d，1H)，3.93(s，1H)，3.29(m，1H)，0.97(m，9H)。

化合物3.2.

(R)-3-(2-氯-5-碘-嘧啶-4-基氧基)-2-甲基-丁-2-醇

在0℃下在搅拌下将1.84g(42.3mmol)的氢化钠(55％)分批加入到4.40g(42.3mmol)的(R)-2-甲基-丁烷-2，3-二醇的83ml乙醚溶液中，并搅拌10分钟。在室温下再搅拌3分钟，然后将该混合物加入到用冰冷却的9.68g(35.2mmol)的2，4-二氯-5-碘-嘧啶的97ml乙腈溶液中。将该混合物在40℃下搅拌4小时，并冷却，然后加入冰和饱和NaCl溶液。然后用乙酸乙酯萃取(3次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯4∶1)。得到4.96g(14.5mmol；收率：41％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.73(s，1H)，4.96(q，1H)，4.62(s，1H)，1.21(d，3H)，1.13(s，6H)。

ES：343(CI+)。

化合物3.3.

2-氯-4-[(R)-1，2-二甲基-2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-丙氧基]-5-碘-嘧啶

将2.64ml(29.0mmol)的二氢吡喃和0.36g(1.5mmol)的吡啶对甲苯磺酸盐加入到4.96g(14.5mmol)的(R)-3-(2-氯-5-碘-嘧啶-4-基氧基)-2-甲基-丁-2-醇的30ml DCM溶液中，并在室温下搅拌22小时。用DCM稀释该混合物，并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。干燥(Na₂SO₄)有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯4∶1)。得到5.50g(12.9mmol；收率：89％)的非对映体混合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.75(s，1H)，8.74(s，1H)，5.15(m，2H)，4.91(m，2H)，3.70(m，2H)，3.30(m，2H)，1.31(m，30H)。

化合物3.4.

2-氯-4-[(R)-1，2-二甲基-2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-丙氧基]-5-三氟甲基-嘧啶

在室温下将1.61g(8.44mmol)的碘化亚铜、0.41g(7.03mmol)的氟化钾和1.04ml(7.03mmol)的(三氟甲基)-三甲基甲硅烷加入到1.00g(2.34mmol)的2-氯-4-[(R)-1，2-二甲基-2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-丙氧基]-5-碘-嘧啶在3.3ml NMP和3.3ml THF中的溶液中。将该混合物在90℃下搅拌2小时。冷却，然后将该混合物加入到稀氯化钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取(3次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯4∶1)。得到0.53g(1.43mmol；收率：61％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.84(s，1H)，5.32(m，1H)，4.85(m，1H)，3.68(m，1H)，3.30(m，1H)，1.31(m，15H)。

3b)终产物的制备

在70℃下将5ml乙醇中的200mg(0.54mmol)的2-氯-4-[(R)-1，2-二甲基-2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-丙氧基]-5-三氟甲基-嘧啶和87mg(0.33mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺搅拌6小时。在旋转蒸发仪中将该混合物蒸发至干燥，并将残余物溶于11.6ml的甲醇中。向该溶液中加入373mg(2.70mmol)的碳酸钾，并将其在室温下搅拌1.5小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。通过HPLC纯化残余物。得到31mg(0.07mmol；收率：14％)的产物。

柱：XBridge C185μ100×30mm

洗脱剂A：水/0.1％HCOOH

洗脱剂B：乙腈

梯度：

流速：50.0mL/min

检测：DAD扫描范围210-400nm；

MS ESI+，ESI-，扫描范围160-1000m/z

温度：室温

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.48(s，1H)，8.56(s，1H)，7.90(m，2H)，7.83(m，2H)，5.13(q，1H)，4.67(s，1H)，4.06(s，1H)，3.01(s，3H)，1.28(d，3H)，1.12(m，6H)。

通式(Ib)的化合物(4-N衍生物)的制备

a)将式(IVd)的化合物氧化得到式(IVc)的亚砜

或者

c)将式(IVa)的化合物还原得到式(IV)的化合物

d)通过与式(VIa)的胺反应将2，4-二氯-5-三氟甲基-嘧啶(VIIb)的4位官能化并形成式(Vb)的中间体

e)将式(Vb)和(IV)的化合物偶联得到式(IIb)的中间体

f)脱除亚砜亚胺上的保护基并形成(Ib)

其中取代基R¹、R²、R³和R⁴具有通式(I)中所给出的含义。

步骤a)-c)

这些步骤与制备通式(Ia)的化合物的步骤a)-d)相同。

步骤d)

2，4-二氯-5-三氟甲基-嘧啶(VIIb)与式(VIa)的胺的反应得到产物(Vb)和(Vc)的混合物。可以通过例如色谱法分离期望的产物(Vb)(参见例如：(a)J.Bryant等人，WO 2004/048343)。

步骤e)

可以使式(Vb)的2-氯-嘧啶与式(IV)的苯胺反应得到式(IIb)的中间体(参加例如：(a)J.Bryant等人，WO 2004/048343)。

步骤f)

脱除亚砜亚胺(IIb)上的三氟乙酰基得到式(Ib)的化合物。所述的在室温下使用甲醇中的碳酸钾的技术特别适合于此。

实施例4

(RS)-S-环丙基-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)亚砜亚胺

4a)中间体的制备

化合物4.1

(2R，3R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-丁-2-醇

在0℃下将72.2ml(520.71mmol)的三乙胺滴加到1035ml乙腈中的56.5g(260.35mmol)的2，4-二氯-5-三氟甲基-嘧啶和32.7g(260.35mmol)的(2R，3R)-3-氨基-丁-2-醇盐酸盐中。将该混合物缓慢加热过夜至室温。将该混合物加入到半浓缩的氯化钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将残留的残余物色谱纯化(己烷/乙酸乙酯0-100％)。得到18.6g(68.97mmol；收率：27％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.38(s，1H)，6.71(d，1H)，5.00(d，1H)，4.08(m，1H)，3.71(m，1H)，1.12(d，3H)，1.01(d，3H)。

(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺的制备如在化合物1.4中所述。

4b)终产物的制备

将0.21ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液加入到3.75ml乙腈中的250mg(0.86mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺和231mg(0.86mmol)的(2R，3R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-丁-2-醇中，然后在60C下搅拌3.5小时。将该混合物蒸发至干燥。加入18.4ml的甲醇和590mg(4.28mmol)的碳酸钾，并在室温下搅拌1小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将残留的残余物色谱纯化(DCM/MeOH 4∶1)。得到242mg(0.56mmol；收率：65％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.04(s，1H)，8.25(s，1H)，7.91(m，2H)，7.74(m，2H)，6.05(d，1H)，5.07(d，1H)，4.14(m，1H)，3.97(s，1H)，3.77(m，1H)，2.56(m，1H)，1.19(d，3H)，1.05(m，4H)，0.86(m，3H)。

MS：430(ESI+)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak IA 5μ250×20mm

洗脱剂：己烷/2-丙醇50∶50

缓冲液：己烷/0.1％DEA

流速：15.0mL/min

检测器：UV 254nm

温度：室温

保留时间：5.9-6.6min；立体异构体1(＝实施例4-SI-1)

7.1-8.8min；立体异构体2(＝实施例4-SI-2)

实施例5

(RS)-S-环丙基-S-(4-{[4-{[(R)-2-羟基-1，2-二甲基丙基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)亚砜亚胺

5a)中间体的制备

化合物5.1

(R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-2-甲基-丁-2-醇

将3.6g(35.03mmol)的(R)-3-氨基-2-甲基-丁-2-醇滴加到139ml乙腈中的7.6g(35.03mmol)的2，4-二氯-5-三氟甲基-嘧啶中。现在在0℃下滴加9.7ml(70.1mmol)的三乙胺，并将该混合物缓慢加热过夜至室温。将其在室温下再搅拌2天。将该混合物加入到半浓缩的氯化钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。通过制备HPLC纯化残留的残余物。得到3.0g(10.65mmol；收率：30％)的产物。

柱：XBridge C185μ150×20mm

洗脱剂A：水/0.2％NH₃

洗脱剂B：乙腈

梯度：70％A+30％B(2′)30-＞60％B(10′)60-＞99％B(0.1′)

流速：50.0mL/min

检测器：DAD(200-400nm)TAC；MS-ESI+(160-1000m/z)TIC

温度：室温

保留时间：5.6-6.4min

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.42(s，1H)，6.52(d，1H)，5.01(s，1H)，4.10(m，1H)，1.11(m，9H)。

5b)终产物的制备

将0.34ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液加入到6.0ml乙腈中的400mg(1.37mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺和388mg(1.37mmol)的(R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-2-甲基-丁-2-醇中，并在60℃下搅拌3.5小时。将该混合物蒸发至干燥。加入29.4ml的甲醇和950mg(6.84mmol)的碳酸钾，并在室温下搅拌1小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到600mg(1.35mmol；收率：65％)的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.08(s，1H)，8.30(s，1H)，7.94(m，2H)，7.80(m，2H)，6.07(d，1H)，4.95(s，1H)，4.16(m，1H)，4.02(s，1H)，2.62(m，1H)，1.20(m，6H)，1.10(m，4H)，0.89(m，3H)。

MS：444(ESI+)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak AD-H 5μ250×20mm

洗脱剂：己烷/2-丙醇60∶40

缓冲液：己烷/0.1％DEA

流速：20.0mL/min

检测器：UV 280nm

温度：室温

保留时间：5.1-6.3min；立体异构体1(＝实施例5-SI-1)

8.0-10.8min；立体异构体2(＝实施例5-SI-2)

实施例6

(RS)-S-乙基-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)亚砜亚胺

6a)中间体的制备

化合物6.1

1-乙基硫烷基-4-硝基苯

在用水冷却的同时将16.56g(106.72mmol)的4-硝基硫代苯酚加入到4.27g(106.76mmol)的氢氧化钠的320ml乙醇溶液中，并在室温下搅拌15分钟。然后在用水冷却的同时加入8.63ml(106.79mmol)的碘乙烷，并将该混合物在室温下搅拌过夜。将该混合物加入到饱和氯化钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。然后将其溶解于DCM中，再次过滤，并蒸发至干燥。得到16.86g(92.02mmol)的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.14(m，2H)，7.49(m，2H)，3.14(q，2H)，1.31(tr，3H)。

化合物6.2

(RS)-1-乙基亚磺酰基-4-硝基苯

将428mg(2.64mmol)的氯化铁(III)加入16.86g(92.02mmol)的1-乙基硫烷基-4-硝基苯在75ml乙腈中的混合物中，并在室温下搅拌10分钟。然后分批加入22.44g(98.44mmol)的高碘酸，使得温度不超过30℃。将该混合物搅拌50分钟，然后在搅拌下将其加入到170ml的DCM、500ml的冰水和100g的五水合硫代硫酸钠的混合物中。用DCM萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。将得到的残余物从乙酸乙酯/己烷中重结晶。得到12.49g(62.69mmol；收率：68％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.35(m，2H)，7.88(m，2H)，3.12(m，1H)，2.84(m，1H)，0.99(tr，3H)。

化合物6.3

(RS)-S-乙基-S-(4-硝基苯基)亚砜亚胺

在冰浴中小心地将30.5ml的发烟硫酸(20％SO₃)加入到6.00g(30.12mmol)的(RS)-1-乙基亚磺酰基-4-硝基苯中。然后在氩气下在搅拌下小心地分批加入2.35g(36.14mmol)的叠氮化钠，然后将该混合物加热至45℃。6小时后，将该混合物冷却至室温，并小心地倒入冰中。使用碳酸氢钠碱化该混合物，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到5.74g(26.79mmol；收率：89％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.37(m，2H)，8.09(m，2H)，4.56(s，1H)，3.18(q，2H)，1.04(tr，3H)。

化合物6.4

(RS)-S-乙基-S-(4-硝基苯基)-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

在用冰冷却下，将4.53ml(32.04mmol)的三氟乙酸酐滴加到5.72g(26.70mmol)的(RS)-S-乙基-S-(4-硝基苯基)亚砜亚胺和4.07ml(29.37mmol)的三乙胺的175ml DCM溶液中。将该混合物在冰浴中再搅拌3小时，其中温度上升至约10℃。用DCM稀释，并用半浓缩的氯化钠溶液洗涤。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到8.17g(26.33mmol)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝8.52(m，2H)，8.22(m，2H)，3.99(m，2H)，1.16(tr，3H)。

化合物6.5

(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-乙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺

在冰冷却下，将88.5ml的氯化钛(III)在约10％盐酸中的15％溶液缓慢加入到4.05g(13.05mmol)的(RS)-S-乙基-S-(4-硝基苯基)-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺的191ml THF溶液中。将该混合物在室温下搅拌3.5小时，用乙酸乙酯稀释，然后用半浓缩的氯化钠溶液洗涤(3次)。干燥(Na₂SO₄)有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到3.17g(11.31mmol)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝7.48(m，2H)，6.68(m，2H)，3.64(m，2H)，1.06(tr，3H)。

(2R，3R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-丁-2-醇的制备如在化合物4.1中所述。

6b)终产物的制备

将0.36ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液加入到7.0ml乙腈中的400mg(1.43mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-乙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺和385mg(1.43mmol)的(2R，3R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-丁-2-醇中，并在60℃下搅拌4.5小时。将该混合物蒸发至干燥。加入19.0ml的甲醇和608mg(4.4mmol)的碳酸钾，并在室温下搅拌1小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到590mg(1.41mmol)的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.10(s，1H)，8.30(s，1H)，7.96(m，2H)，7.78(m，2H)，6.10(d，1H)，5.11(d，1H)，4.19(m，1H)，4.00(s，1H)，3.82(m，1H)，3.07(q，2H)，1.24(d，3H)，1.06(m，6H)。

MS：418(ESI+)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak AD-H 5μ250×20mm

洗脱剂：己烷/2-丙醇60∶40

缓冲液：己烷/0.1％DEA

流速：20.0mL/min

检测器：UV 280nm

温度：室温

保留时间：6.2-6.8min；立体异构体1(＝实施例6-SI-1)

7.2-8.9min；立体异构体2(＝实施例6-SI-2)

实施例7

(RS)-S-乙基-S-(4-{[4-{[(R)-2-羟基-1，2-二甲基丙基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)亚砜亚胺

7a)中间体的制备

(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-乙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺的制备如在化合物6.5中所述。

(R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-2-甲基-丁-2-醇的制备如在化合物5.1中所述。

7b)终产物的制备

将0.36ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液加入到7.0ml乙腈中的400mg(1.43mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-乙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺和405mg(1.43mmol)的(R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-2-甲基-丁-2-醇中，并在60℃下搅拌4.5小时。将该混合物蒸发至干燥。加入25.0ml的甲醇和788mg(5.70mmol)的碳酸钾，并在室温下搅拌1小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到620mg(1.43mmol)的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.06(s，1H)，8.28(s，1H)，7.92(m，2H)，7.74(m，2H)，6.03(d，1H)，4.90(s，1H)，4.12(m，1H)，3.96(s，1H)，3.03(q，2H)，1.16(m，6H)，1.08(m，3H)，1.02(tr，3H)。

MS：432(ESI+)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak AD-H 5μ250×20mm

洗脱剂：A：己烷；B：2-丙醇

缓冲液：己烷/0.1％DEA

梯度：20-＞40％B(20′)+40％B(5′)

流速：10.0mL/min

检测器：UV 280nm

温度：室温

保留时间：17.5-19.8min；立体异构体1(＝实施例7-SI-1)

20.1-22.0min；立体异构体2(＝实施例7-SI-2)

实施例8

(RS)-S-(4-{[4-{[(1R，2R)-2-羟基-1-甲基丙基]氨基}-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-S-甲基亚砜亚胺

8a)中间体的制备

(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺的制备如在化合物2.3中所述。

8b)终产物的制备

将0.38ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液加入到7.3ml乙腈中的399mg(1.50mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺和404mg(1.50mmol)的(2R，3R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-丁-2-醇中，并在60℃下搅拌9小时。将该混合物蒸发至干燥。加入32.2ml的甲醇和1040mg(7.50mmol)的碳酸钾，并在室温下搅拌1.5小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(3次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到565mg(1.40mmol)的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：10.09(s，1H)，8.30(s，1H)，7.96(m，2H)，7.83(m，2H)，6.10(d，1H)，5.11(d，1H)，4.18(m，1H)，4.03(s，1H)，3.82(m，1H)，3.03(s，3H)，1.25(d，3H)，1.10(d，3H)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak IC 5μ250×20mm

洗脱剂：己烷/乙醇50∶50

缓冲液：己烷/0.1％DEA

流速：20.0mL/min

检测器：UV 254nm

温度：室温

保留时间：5.1-5.8min；立体异构体1(＝实施例8-SI-1)

6.1-6.7min；立体异构体2(＝实施例8-SI-2)

实施例9

9a)中间体的制备

9b)终产物的制备

将0.38ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液加入到7.3ml乙腈中的399mg(1.50mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-甲基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺和425mg(1.50mmol)的(R)-3-(2-氯-5-三氟甲基-嘧啶-4-基氨基)-2-甲基-丁-2-醇中，并在60℃下搅拌4小时。将该混合物蒸发至干燥。加入32.2ml的甲醇和1040mg(7.50mmol)的碳酸钾，并在室温下搅拌1.5小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(2次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到600mg(1.44mmol)的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.05(s，1H)，8.26(s，1H)，7.91(m，2H)，7.79(m，2H)，6.03(d，1H)，4.91(s，1H)，4.11(m，1H)，3.99(s，1H)，2.99(s，3H)，1.16(m，6H)，1.10(m，3H)。

MS：418(ESI+)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak IC 5μ250×20mm

洗脱剂：己烷/乙醇80∶20

流速：30.0mL/min

检测器：UV 254am

温度：室温

保留时间：6.0-6.7min；立体异构体1(＝实施例9-SI-1)

7.1-8.9min；立体异构体2(＝实施例9-SI-2)

比较物质的制备

比较特别以嘧啶5位的5-CF₃取代基为特征的本发明化合物与它们的5-Br类似物的体外和体内功效，所述5-Br类似物在WO 2005/037800中明确公开或者被其一般性公开所覆盖。

V11＝实施例11中的5-Br比较物质

实施例11中的比较物质是(RS)-S-[4-({5-溴-4-[(R)-(2-羟基-1，2-二甲基丙基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)苯基]-S-环丙基-亚砜亚胺的非对映体混合物中更具活性的立体异构体，其在申请WO 2005/037800(第35页)的实施例1.6中公开。

对于体内比较，在实施例11中使用非对映体(R)-S-[4-({5-溴-4-[(R)-(2-羟基-1，2-二甲基丙基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)苯基]-S-环丙基-亚砜亚胺，其比(S)-S-[4-({5-溴-4-[(R)-(2-羟基-1，2-二甲基丙基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)苯基]-S-环丙基-亚砜亚胺具有更高的体外功效。

为此目的，通过以下方法制备V11：

V11a)中间体的制备

将0.07ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液加入到16.50ml丁醇和1.65ml甲醇中的988mg(3.35mmol)的(R)-3-(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-2-甲基-丁-2-醇和750mg(2.79mmol)的(R)-S-(4-氨基苯基)-N-(乙氧羰基)-S-环丙基亚砜亚胺(根据U.Lücking等人，WO 2007/071455，p.112，实施例4制备)中，并在60℃下搅拌3天。冷却，然后将该混合物蒸发至干燥，并色谱纯化(DCM/EtOH 9∶1)。得到319mg(0.61mmol，收率：22％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝9.96(s，1H)，8.13(s，1H)，7.92(m，2H)，7.73(m，2H)，6.28(d，1H)，4.05(m，1H)，3.84(m，2H)，2.96(m，1H)，1.05(m，16H)。

V11b)终产物的制备

将2.0ml新制备的1.5M的乙醇钠(sodium ethanolate)溶液加入到4.3ml乙醇中的319mg(0.61mmol)的所述中间体中，并在60℃下搅拌18小时。冷却，然后将该混合物加入饱和氯化钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取(3次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。最后重结晶(DCM/乙酸乙酯)之后得到215mg(0.47mmol；收率：78％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝9.68(s，1H)，8.08(s，1H)，7.86(m，2H)，7.70(m，2H)，6.07(d，1H)，4.82(s，1H)，4.05(m，1H)，3.93(s，1H)，2.55(m，1H)，1.15(m，6H)，1.10(m，3H)，1.03(m，1H)，0.83(m，3H)。

柱：Chiralpak AD-H 5μ150×4.6mm

洗脱剂：己烷/乙醇80.20

流速：1.0mL/min

检测：PDA 280nm

温度：25℃

保留时间：11.64min

V12＝实施例12中的5-Br比较物质

根据WO 2005/037800中的实施例1.52制备实施例12中的比较物质。

实施例1.52具有比实施例1.53更高的体外功效。

V13＝实施例13中的5-Br比较物质

根据WO 2005/037800中的实施例3.13制备实施例13中的比较物质。

实施例3.13具有比实施例3.12更高的体外功效。

V14＝实施例14中的5-Br比较物质

V14a)中间体的制备

将1.5ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液加入到13.1ml乙腈中的845mg(3.00mmol)的(2R，3R)-3-(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基氧基)-丁-2-醇(根据WO 2005/037800，第93页制备)和877mg(3.00mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺中，并在80℃下搅拌5小时。再向该混合物中加入422mg(1.50mmol)的(2R，3R)-3-(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基氧基)-丁-2-醇，并在80℃下继续搅拌。3小时后，再次加入0.75ml 4N的氯化氢的二氧六环溶液，并在80℃下继续搅拌。33小时后，再次加入175mg(0.60mmol)的(RS)-S-(4-氨基苯基)-S-环丙基-N-(三氟乙酰基)亚砜亚胺，并最后在80℃下搅拌18小时。

冷却，然后通过蒸发浓缩该混合物，并将残留的残余物色谱纯化(DCM/EtOH 9∶1)。得到740mg(1.38mmol，收率：46％)的产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.31(s，1H)，8.44(s，1H)，8.01(m，2H)，7.84(m，2H)，5.19(m，1H)，4.88(d，1H)，3.81(m，1H)，3.31(m，1H)，1.40(m，1H)，1.29(m，4H)，1.08(m，5H)。

V14b)终产物的制备

将950mg(6.84mmol)碳酸钾加入到29ml甲醇中的735mg(1.37mmol)的所述中间体中，并在室温下搅拌1.5小时。用饱和氯化钠溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取(3次)。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，并通过蒸发浓缩。得到607mg(1.37mmol)的粗产物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ＝10.08(s，1H)，8.40(s，1H)，7.86(m，2H)，7.75(m，2H)，5.19(m，1H)，4.87(d，1H)，3.97(s，1H)，3.82(m，1H)，2.56(m，1H)，1.25(d，3H)，1.09(d，3H)，1.05(m，1H)，0.86(m，3H)。

通过制备HPLC将非对映体混合物分离为纯的立体异构体：

柱：Chiralpak IC 5μ250×20mm

洗脱剂：己烷/乙醇7∶3

流速：20.0mL/min

检测器：UV 280nm

温度：室温

保留时间：9.6-11.2min；立体异构体1

11.3-14.9min；立体异构体2

立体异构体2表现出比立体异构体1更高的体外功效，因此在实施例14中使用立体异构体2作为比较物质。

实施例10

10.1检测1：CDK1/CycB激酶检测

从ProQinase GmbH，Freiburg购得由杆状病毒感染的昆虫细胞(Sf9)纯制的重组CDK1和CycB-GST融合蛋白。用作激酶底物的组蛋白IIIS商购自Sigma公司。

在各种浓度的测试物质(0μM，以及0.01-100μM的范围)的存在下，在22℃下将CDK1/CycB(200ng/测量点)在检测缓冲液[50mM的Tris/HCl pH8.0、10mM的MgCl₂、0.1mM的原钒酸钠、1.0mM的二硫苏糖醇、0.5μM的三磷酸腺苷(ATP)、10μg/测量点的组蛋白IIIS、0.2μCi/测量点的³³P-γATP、0.05％NP40、1.25％二甲亚砜]中温育10min。通过加入EDTA溶液(250mM，pH 8.0，15μl/测量点)使反应停止。

对于每个反应混合物，取15μl施加到P30滤纸条(来自Wallac)上，并通过将滤纸条在0.5％磷酸中洗涤三次(每次10分钟)来除去未掺入的³³P-ATP。将滤纸条在70℃下干燥1小时，然后用闪烁剂条(scintillator strip)(MeltiLex^TM A，来自Wallac)将其覆盖，并在90℃下烘烤1小时。在γ-射线测量仪(Wallac)中通过闪烁测量测定所掺入的³³P的量(底物磷酸化)。将测量的数据标准化至0％抑制(无抑制剂的酶反应)和100％抑制(除了酶之外的全部检测组分)。使用该公司的自带软件通过四参数拟合(4-parameter fit)来测定IC₅₀值。

10.2检测2：CDK2/CycE激酶检测

从ProQinase GmbH，Freiburg购得由杆状病毒感染的昆虫细胞(Sf9)纯制的重组CDK2和CycE-GST融合蛋白。用作激酶底物的组蛋白IIIS商购自Sigma公司。

在各种浓度的测试物质(0μM，以及0.01-100μM的范围)的存在下，在22℃下将CDK2/CycE(50ng/测量点)在检测缓冲液[50mM的Tris/HCl pH8.0、10mM的MgCl₂、0.1mM的原钒酸钠、1.0mM的二硫苏糖醇、0.5μM的三磷酸腺苷(ATP)、10μg/测量点的组蛋白IIIS、0.2μCi/测量点的³³P-γATP、0.05％NP40、1.25％二甲亚砜]中温育10min。通过加入EDTA溶液(250mM，pH 8.0，15μl/测量点)使反应停止。

对于每个反应混合物，取15μl施加到P30滤纸条(来自Wallac)上，并通过将滤纸条在0.5％磷酸中洗涤三次(每次10分钟)来除去未掺入的³³P-ATP。将滤纸条在70℃下干燥1小时，然后用闪烁剂条(MeltiLex^TM A，来自Wallac)将其覆盖，并在90℃下烘烤1小时。在γ-射线测量仪(Wallac)中通过闪烁测量测定所掺入的³³P的量(底物磷酸化)。将测量的数据标准化至0％抑制(无抑制剂的酶反应)和100％抑制(除了酶之外的全部检测组分)。使用该公司的自带软件通过四参数拟合来测定IC₅₀值。

10.3检测3：VEGF受体-2激酶检测

由杆状病毒感染的昆虫细胞(Sf9)纯制作为GST融合蛋白的重组VEGF受体酪氨酸激酶-2。用作激酶底物的聚-(Glu4Tyr)(poly-(Glu4Tyr))商购自Sigma公司。

在各种浓度的测试物质(0μM，以及0.001-30μM的范围)的存在下，在22℃下将VEGF受体酪氨酸激酶(90ng/测量点)在30μl检测缓冲液[40mM的Tris/HCl pH 5.5、10mM的MgCl₂、1mM的MnCl₂、3μM的原钒酸钠、1.0mM的二硫苏糖醇、8μM的三磷酸腺苷(ATP)、0.96μg/测量点的聚-(Glu4Tyr)、0.2μCi/测量点的³³P-γATP、1.4％二甲亚砜]中温育10min。通过加入EDTA溶液(250mM，pH 8.0，15μl/测量点)使反应停止。

10.4检测4：增殖检测

在200μl的生长介质(DMEM/HAMS F12、2mM的L-谷氨酰胺、10％的胎牛血清)中，将培养的人HeLa-MaTu宫颈癌细胞(获自EPO-GmbH，Berlin)以3000个细胞/测量点的密度铺在96孔多滴定板(multititer plate)上。24小时后，将一个板(0点板(zero-point plate))的细胞用结晶紫染色(如下所述)，而将其它板的介质替换为新的培养基(200μl)，在所述新的培养基中添加有各种浓度的测试物质(0μM，以及0.01-30μM的范围；溶剂二甲亚砜的最终浓度为0.5％)。在测试物质的存在下将细胞培养4天。通过用结晶紫染色细胞来测定细胞增殖：通过在室温下经15分钟加入20μl/测量点的11％的戊二醛溶液来固定细胞。将固定的细胞用水洗涤3次，然后在室温下干燥该板。通过加入100μl/测量点的0.1％结晶紫溶液(通过加入乙酸将pH调节至3)来将细胞染色。将染色细胞用水洗涤3次，然后在室温下干燥该板。通过加入100μl/测量点的10％乙酸溶液来溶解染料。在595nm的波长下通过光度测定来测定消光。将0点板的消光值(＝0％)和未处理(0μM)细胞的消光值(＝100％)的测量值标准化，由此计算细胞生长的百分数变化。将测量的数据标准化至0％抑制(无抑制剂的细胞增殖)和100％抑制(0点板)。使用该公司的自带软件通过四参数拟合来测定IC₅₀值。

10.5酶检测和增殖检测的结果

表1

酶检测和增殖检测的结果未表明本发明的化合物相对于现有技术的化合物具有任何系统性优势。

体内比较

实施例11中研究了与V11比较，实施例5-SI-2的体内功效。

实施例12中研究了与WO 2005/037800中的实施例1.52(＝比较物质V12)比较，实施例6-SI-2的体内功效。

实施例13中研究了与WO 2005/037800中的实施例3.13(＝比较物质V13)比较，实施例2-SI-2的体内功效。

实施例14中研究了与V14比较，实施例1-SI-2的体内功效。

实施例11

将在细胞培养中生长的HeLa-MaTu(EPO-GmbH，Berlin)人宫颈癌细胞皮下植入雌性NMRI裸鼠的肋腹(flank)中。一旦肿瘤生长至约20mm²的大小就开始治疗。一旦其中一组的肿瘤大小达到约150mm²就终止研究。

使用以下测试组：

第1组：对照，用增溶剂(40％PEG400/60％水)治疗

第2组：根据实施例5制备的立体异构体2(＝实施例5-SI-2)(5mg/kg，口服，在第4、5、11、12天每天两次)

设计此项研究用于测定人宫颈癌异种移植物模型对用实施例5-SI-2治疗的始初反应。在作为NMRI裸鼠的异种移植物的HeLa-MaTu宫颈肿瘤模型中测试该化合物的生长抑制作用。将实施例5-SI-2完全溶解于增溶剂40％聚乙二醇(PEG)400/60％水中至最终浓度0.5mg/ml。在肿瘤接种后的第4天开始对建立的肿瘤进行治疗。在第1组(对照)中的动物的肿瘤大小超过约150mm²后的第17天结束此项研究。

研究结果(图1)显示，在所选的5mg/kg的口服剂量下，在循环治疗方案(连续两天每天两次治疗，随后5天无治疗)中，实施例5-SI-2高度抑制肿瘤生长(第3组，在此项研究的终点，肿瘤重量下降至对照组的7％，p＜0.05)。

5-Br比较物质(＝V11)

将在细胞培养中生长的HeLa-MaTu(EPO-GmbH，Berlin)人宫颈癌细胞皮下植入雌性NMRI裸鼠的肋腹中。一旦肿瘤生长至约20mm²的大小就开始治疗。一旦其中一组的肿瘤大小达到约150mm²就终止研究。

使用以下测试组：

第1组：对照，用增溶剂(30％HPβCD/70％水)治疗

第2组：根据如上公开的V11的制备而制备的WO 2005/037800的化合物(8mg/kg，口服，在第4、5、11、12天每天两次)

设计此项研究用于测定人宫颈癌异种移植物模型对用5-Br比较物质V11治疗的始初反应。在作为NMRI裸鼠的异种移植物的HeLa-MaTu宫颈肿瘤模型中测试该化合物的生长抑制作用。将V11完全溶解于增溶剂30％β-羟丙基-环糊精(HPβCD)/70％水中至最终浓度0.8mg/ml。在肿瘤接种后的第4天开始对建立的肿瘤进行治疗。在第1组(对照)中的动物的肿瘤大小超过约150mm²后的第17天结束此项研究。

研究结果(图2)显示，在所选的8mg/kg的口服剂量下，在连续两天每天两次治疗且随后5天无治疗的治疗方案中，V11在HeLa-MaTu异种移植物模型中抑制肿瘤生长(第2组，在此项研究的终点，肿瘤重量下降至对照组的39％，p＜0.05)。

结论

在由连续两天每天两次口服施用5mg/kg的剂量和随后的5天无治疗组成的循环治疗方案中，实施例5的立体异构体2(实施例5-SI-2(5-CF₃))在HeLa-MaTu异种移植物模型中对肿瘤生长实现完全的抑制(治疗/对照比T/C＝0.07)。在相应的高度耐受的8mg/kg剂量的循环治疗方案中，5-Br比较物质(＝V11)在HeLa-MaTu异种移植物模型中仅实现对肿瘤生长的延迟(治疗/对照比T/C＝0.39)。令人吃惊的是，与V11(5-Br)相比，实施例5-SI-2(5-CF₃)表现出更高的效力(与V11的剂量8mg/kg相比，实施例5-SI-2的剂量为5mg/kg)以及好得多的抗肿瘤功效(与V11以T/C＝0.39减缓肿瘤生长相比，实施例5-SI-2以T/C＝0.07完全抑制肿瘤生长)。

实施例12

将在细胞培养中生长的HeLa-MaTu(EPO-GmbH，Berlin)人宫颈癌细胞皮下植入雌性NMRI裸鼠的肋腹中。一旦肿瘤生长至约20mm²的大小就开始治疗。一旦其中一组的肿瘤大小达到约150mm就终止研究。

使用以下测试组：

第1组：对照，用增溶剂(40％PEG400/60％水)治疗

第2组：根据实施例6制备的立体异构体2(＝实施例6-SI-2)(3mg/kg，口服，在第4、5、11、12、17、18天每天两次)

第3组：根据实施例6制备的立体异构体2(＝实施例6-SI-2)(4mg/kg，口服，在第4、5、11、12、17、18天每天两次)

第4组：根据实施例6制备的立体异构体2(＝实施例6-SI-2)(5mg/kg，口服，在第4、5、11、12、17、18天每天两次)

设计此项研究用于测定人宫颈癌异种移植物模型对用实施例6-SI-2治疗的始初反应。在作为NMRI裸鼠的异种移植物的HeLa-MaTu宫颈肿瘤模型中测试该化合物的生长抑制作用。将实施例6-SI-2完全溶解于增溶剂40％聚乙二醇400(PEG400)/60％水中至最终浓度0.3mg/ml(第2组)、0.4mg/ml(第3组)或0.5mg/ml(第4组)。在肿瘤接种后的第4天开始对建立的肿瘤进行治疗。在第1组(对照)中的动物的肿瘤大小超过约150mm²后的第20天结束此项研究。

研究结果(图3)显示，在由连续两天每天两次口服施用和随后的5天无治疗组成的治疗方案中，实施例6-SI-2在HeLa-MaTu异种移植物模型中对肿瘤生长提供剂量依赖性抑制。在最高剂量组(第4组)中，肿瘤生长几乎被完全抑制，并且在此项研究的终点，肿瘤重量的下降达到对照组的8％(T/C＝0.08，p＜0.05)。

5-Br比较物质(＝V12)

使用以下测试组：

第1组：对照，用增溶剂(40％PEG400/60％水)治疗

第2组：WO 2005/037800的实施例1.52的化合物(＝V12)(7mg/kg，口服，在第4、5、11、12、17、18、23、24天每天两次)

第3组：WO 2005/037800的实施例1.52的化合物(＝V12)(8.5mg/kg，口服，在第4、5、11、12、17、18、23、24天每天两次)

第4组：WO 2005/037800的实施例1.52的化合物(＝V12)(10mg/kg，口服，在第4、5、11、12、17、18、23、24天每天两次)

设计此项研究用于测定人宫颈癌异种移植物模型对用5-Br比较物质V12治疗的始初反应。在作为NMRI裸鼠的异种移植物的HeLa-MaTu宫颈肿瘤模型中测试该化合物的生长抑制作用。将V12完全溶解于增溶剂40％聚乙二醇400(PEG 400)/60％水中至最终浓度0.7mg/ml(第2组)、0.85mg/ml(第3组)或1.0mg/ml(第4组)。在肿瘤接种后的第4天开始对建立的肿瘤进行治疗。在第1组(对照)中的动物的肿瘤大小超过约150mm²后的第28天结束此项研究。

研究结果(图4)显示，在由连续两天每天两次口服施用和随后的5天无治疗组成的治疗方案中，V12在HeLa-MaTu异种移植物模型中产生对肿瘤生长的剂量依赖性弱抑制。在最高剂量组(第4组)中，与对照组相比，约一半的肿瘤生长得到抑制(T/C＝0.51)。

结论：

在由连续两天每天两次口服施用5mg/kg的剂量和随后的5天无治疗组成的循环治疗方案中，实施例6的立体异构体2(实施例6-SI-2(5-CF₃))在HeLa-MaTu异种移植物模型中对肿瘤生长实现几乎完全的抑制(治疗/对照比T/C＝0.08)。在相应的高度耐受的10mg/kg剂量的循环治疗方案中，WO 2005/037800的实施例1.52的化合物(＝V12(5-Br))在HeLa-MaTu异种移植物模型中仅实现对肿瘤生长的延迟(治疗/对照比T/C＝0.51)。令人吃惊的是，与V12(5-Br)相比，实施例6-SI-2(5-CF₃)表现出更高的效力(与V12的剂量10mg/kg相比，实施例6-SI-2的剂量为5mg/kg)以及好得多的抗肿瘤功效(与V12以T/C＝0.51减缓肿瘤生长相比，实施例6-SI-2以T/C＝0.08完全抑制肿瘤生长)。

实施例13

将在细胞培养中生长的HeLa-MaTu(EPO-GmbH，Berlin)人宫颈癌细胞皮下植入雌性NMRI裸鼠的肋腹中。一旦肿瘤生长至约20mm²的大小就开始治疗。一旦其中一组的肿瘤大小达到约160mm²就终止研究。

使用以下测试组：

第1组：对照，用增溶剂(40％PEG 400/60％水)治疗

第2组：根据实施例2制备的立体异构体2(＝实施例2-SI-2)(1.5mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

第3组：根据实施例2制备的立体异构体2(＝实施例2-SI-2)(2.0mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

第4组：根据实施例2制备的立体异构体2(＝实施例2-SI-2)(2.5mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

设计此项研究用于测定人宫颈癌异种移植物模型对用实施例2-SI-2治疗的始初反应。在作为NMRI裸鼠的异种移植物的HeLa-MaTu宫颈肿瘤模型中测试该化合物的生长抑制作用。将实施例2-SI-2完全溶解于增溶剂40％聚乙二醇400(PEG 400)(PEG 400)/60％水中至最终浓度0.15mg/ml(第2组)、0.2mg/ml(第3组)或0.25mg/ml(第4组)。在肿瘤接种后的第5天开始对建立的肿瘤进行治疗。在第1组(对照)中的动物的肿瘤大小超过约160mm²后的第20天结束此项研究。

研究结果(图5)显示，在由连续两天每天两次口服施用和随后的5天无治疗组成的治疗方案中，实施例2-SI-2在HeLa-MaTu异种移植物模型中产生对肿瘤生长的剂量依赖性抑制。在最高剂量组(2.5mg/kg，第4组)中，肿瘤生长几乎被完全抑制，并且在此项研究的终点，肿瘤重量的下降达到对照组的18％(T/C＝0.18，p＜0.05)。

5-Br比较物质(＝V13)

使用以下测试组：

第1组：对照，用增溶剂(40％PEG 400/60％水)治疗

第2组：WO 2005/037800的实施例3.13的化合物(＝V13)(6mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

第3组：WO 2005/037800的实施例3.13的化合物(＝V13)(8mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

第4组：WO 2005/037800的实施例3.13的化合物(＝V13)(10mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

设计此项研究用于测定人宫颈癌异种移植物模型对用5-Br比较物质V13治疗的始初反应。在作为NMRI裸鼠的异种移植物的HeLa-MaTu宫颈肿瘤模型中测试该化合物的生长抑制作用。将V13完全溶解于增溶剂40％聚乙二醇400(PEG 400)/60％水中至最终浓度0.6mg/ml(第2组)、0.8mg/ml(第3组)或1.0mg/ml(第4组)。在肿瘤接种后的第5天开始对建立的肿瘤进行治疗。在第1组(对照)中的动物的肿瘤大小超过约160mm²后的第20天结束此项研究。

研究结果(图6)显示，在由连续两天每天两次口服施用和随后的5天无治疗组成的治疗方案中，V13在HeLa-MaTu异种移植物模型中产生对肿瘤生长的剂量依赖性抑制。在最高剂量组(10mg/kg，第4组)中，肿瘤生长得到显著抑制，并且在此项研究的终点，肿瘤重量下降达到对照组的23％(T/C＝0.23，p＜0.05)。

结论：

在由连续两天每天两次口服施用2.5mg/kg的剂量和随后的5天无治疗组成的循环治疗方案中，实施例2的立体异构体2(实施例2-SI-2(5-CF₃))在HeLa-MaTu异种移植物模型中对肿瘤生长实现几乎完全的抑制(治疗/对照比T/C＝0.18)。在相应的高度耐受的10mg/kg剂量的循环治疗方案中，WO 2005/037800的实施例3.13的化合物(＝V13(5-Br))在HeLa-MaTu异种移植物模型中对肿瘤生长实现略低的延迟(治疗/对照比T/C＝0.23)。令人吃惊的是，与V13(5-Br)相比，实施例2-SI-2(5-CF₃)表现出高得多的效力(与V13的剂量10mg/kg相比，实施例2-SI-2的剂量为2.5mg/kg)以及更好些的抗肿瘤功效(与V13以T/C＝0.23抑制肿瘤生长相比，实施例2-SI-2以T/C＝0.18抑制肿瘤生长)。

实施例14

使用以下测试组：

第1组：对照，用增溶剂(40％PEG 400/60％水)治疗

第2组：根据实施例1制备的立体异构体2(＝实施例1-SI-2)(1.5mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

第3组：根据实施例1制备的立体异构体2(＝实施例1-SI-2)(2.0mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

第4组：根据实施例1制备的立体异构体2(＝实施例1-SI-2)(2.5mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

设计此项研究用于测定人宫颈癌异种移植物模型对用实施例1-SI-2治疗的始初反应。在作为NMRI裸鼠的异种移植物的HeLa-MaTu宫颈肿瘤模型中测试该化合物的生长抑制作用。将实施例1-SI-2完全溶解于增溶剂40％聚乙二醇400(PEG 400)/60％水中至最终浓度0.15mg/ml(第2组)、0.2mg/ml(第3组)或0.25mg/ml(第4组)。在肿瘤接种后的第5天开始对建立的肿瘤进行治疗。在第1组(对照)中的动物的肿瘤大小超过约160mm²后的第20天结束此项研究。

研究结果(图7)显示，在由连续两天每天两次口服施用和随后的5天无治疗组成的治疗方案中，实施例1-SI-2在HeLa-MaTu异种移植物模型中产生对肿瘤生长的剂量依赖性抑制。在最高剂量组(2.5mg/kg，第4组)中，肿瘤生长几乎被完全抑制，并且在此项研究的终点，肿瘤重量的下降达到对照组的19％(T/C＝0.19，p＜0.05)。

5-Br比较物质(＝V14)

使用以下测试组：

第1组：对照，用增溶剂(40％PEG 400/60％水)治疗

第2组：根据以上公开的V14的制备而制备的WO 2005/037800的化合物(6mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

第3组：根据以上公开的V14的制备而制备的WO 2005/037800的化合物(8mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

第4组：根据以上公开的V14的制备而制备的WO 2005/037800的化合物(10mg/kg，口服，在第5、6、12、13、19、20天每天两次)

设计此项研究用于测定人宫颈癌异种移植物模型对用5-Br比较物质V14治疗的始初反应。在作为NMRI裸鼠的异种移植物的HeLa-MaTu宫颈肿瘤模型中测试该化合物的生长抑制作用。将V14完全溶解于增溶剂40％聚乙二醇400(PEG 400)/60％水中至最终浓度0.6mg/ml(第2组)、0.8mg/ml(第3组)或1.0mg/ml(第4组)。在肿瘤接种后的第5天开始对建立的肿瘤进行治疗。在第1组(对照)中的动物的肿瘤大小超过约160mm²后的第20天结束此项研究。

研究结果(图8)显示，在由连续两天每天两次口服施用和随后的5天无治疗组成的治疗方案中，V14在HeLa-MaTu异种移植物模型中产生对肿瘤生长的剂量依赖性抑制。在最高剂量组(10mg/kg，第4组)中，肿瘤生长得到弱抑制，并且在此项研究的终点，肿瘤重量的下降达到对照组的44％(T/C＝0.44，未达到统计学显著性)。

结论：

在由连续两天每天两次口服施用2.5mg/kg的剂量和随后的5天无治疗组成的循环治疗方案中，实施例1的立体异构体2(实施例1-SI-2(5-CF₃))在HeLa-MaTu异种移植物模型中对肿瘤生长实现几乎完全的抑制(治疗/对照比T/C＝0.19)。在相应的高度耐受的10mg/kg剂量的循环治疗方案中，WO 2005/037800的5-Br化合物(＝V14(5-Br))在HeLa-MaTu异种移植物模型中实现对肿瘤生长的弱抑制(治疗/对照比T/C＝0.44)。令人吃惊的是，与V14(5-Br)相比，实施例1-SI-2(5-CF₃)表现出高得多的效力(与V14的剂量10mg/kg相比，实施例1-SI-2的剂量为2.5mg/kg)以及好得多的抗肿瘤功效(与V14以T/C＝0.44抑制肿瘤生长相比，实施例1-SI-2以T/C＝0.19抑制肿瘤生长)。

附图说明

图1显示在用实施例5-SI-2治疗期间，在人HeLa-MaTu宫颈肿瘤异种移植物模型中对肿瘤生长的抑制。在第0天在NMRI裸鼠中皮下植入HeLa-MaTu细胞。在肿瘤大小达到约20mm²的第4天后开始治疗。按照以下剂量和施用方案进行治疗：

第1组：(对照组)-增溶剂(40％PEG 400/60％水)

第2组：实施例5-SI-2，循环治疗方案，

在4、5、11、12天每天2次，口服，剂量5mg/kg。

A)作为时间函数的HeLa-MaTu异种移植肿瘤的生长。

B)HeLa-MaTu肿瘤在第17天的重量，以及治疗组的平均肿瘤重量与对照组的平均肿瘤重量的比值(T/C)。

图2显示在用V11治疗期间，在人HeLa-MaTu宫颈肿瘤异种移植物模型中对肿瘤生长的抑制。在第0天在NMRI裸鼠中皮下植入HeLa-MaTu细胞。在肿瘤大小达到约20mm²后的第4天开始治疗。按照以下剂量和施用方案进行治疗：

第1组：(对照组)-增溶剂(30％HPβCD/70％水，在第4-17天每天口服一次)；

第2组：V11，循环治疗方案，

在4、5、11、12天每天2次，口服，剂量8mg/kg。

A)作为时间函数的HeLa-MaTu异种移植肿瘤的生长。

B)HeLa-MaTu肿瘤在第17天的重量，以及各个治疗组的平均肿瘤重量与对照组的平均肿瘤重量的比值(T/C)。

图3显示在用实施例6-SI-2治疗期间，在人HeLa-MaTu宫颈肿瘤异种移植物模型中对肿瘤生长的抑制。在第0天在NMRI裸鼠中皮下植入HeLa-MaTu细胞。在肿瘤大小达到约20mm²后的第4天开始治疗。按照以下剂量并以由在第4、5、11、12、17和18天每天两次口服施用组成的循环治疗方案进行治疗：

第1组：(对照组)-增溶剂(40％PEG400/60％水)；

第2组：实施例6-SI-2，剂量3mg/kg；

第3组：实施例6-SI-2，剂量4mg/kg；

第4组：实施例6-SI-2，剂量5mg/kg。

A)作为时间函数的HeLa-MaTu异种移植肿瘤的生长。

B)HeLa-MaTu肿瘤在第20天的重量，以及各个治疗组的平均肿瘤重量与对照组的平均肿瘤重量的比值(T/C)。

图4显示在用V12治疗期间，在人HeLa-MaTu宫颈肿瘤异种移植物模型中对肿瘤生长的抑制。在第0天在NMRI裸鼠中皮下植入HeLa-MaTu细胞。在肿瘤大小达到约20mm²后的第4天开始治疗。按照以下剂量并以由在第4、5、11、12、17、18、23和24天每天两次口服施用组成的循环治疗方案进行治疗：

第1组：(对照组)-增溶剂(40％PEG 400/60％水)；

第2组：V12，剂量7mg/kg；

第3组：V12，剂量8.5mg/kg；

第4组：V12，剂量10mg/kg。

A)作为时间函数的HeLa-MaTu异种移植肿瘤的生长。

B)HeLa-MaTu肿瘤在第28天的重量，以及各个治疗组的平均肿瘤重量与对照组的平均肿瘤重量的比值(T/C)。

图5显示在用实施例2-SI-2治疗期间，在人HeLa-MaTu宫颈肿瘤异种移植物模型中对肿瘤生长的抑制。在第0天在NMRI裸鼠中皮下植入HeLa-MaTu细胞。在肿瘤大小达到约20mm²后的第5天开始治疗。按照以下剂量并以由在第5、6、12、13、19和20天每天两次口服施用组成的循环治疗方案进行治疗：

第1组：(对照组)-增溶剂(40％PEG 400/60％水)；

第2组：实施例2-SI-2，剂量1.5mg/kg；

第3组：实施例2-SI-2，剂量2mg/kg；

第4组：实施例2-SI-2，剂量2.5mg/kg。

A)作为时间函数的HeLa-MaTu异种移植肿瘤的生长。

图6显示在用V13治疗期间，在人HeLa-MaTu宫颈肿瘤异种移植物模型中对肿瘤生长的抑制。在第0天在NMRI裸鼠中皮下植入HeLa-MaTu细胞。在肿瘤大小达到约20mm²后的第5天开始治疗。按照以下的剂量并以由在第5、6、12、13、19和20天每天两次口服施用组成的循环治疗方案进行治疗：

第1组：(对照组)-增溶剂(40％PEG 400/60％水)；

第2组：V13，剂量6mg/kg；

第3组：V13，剂量8mg/kg；

第4组：V13，剂量10mg/kg。

A)作为时间函数的HeLa-MaTu异种移植肿瘤的生长。

图7显示在用实施例1-SI-2治疗期间，在人HeLa-MaTu宫颈肿瘤异种移植物模型中对肿瘤生长的抑制。在第0天在NMRI裸鼠中皮下植入HeLa-MaTu细胞。在肿瘤大小达到约20mm²后的第5天开始治疗。按照以下剂量并以由在第5、6、12、13、19和20天每天两次口服施用组成的循环治疗方案进行治疗：

第1组：(对照组)-增溶剂(40％PEG 400/60％水)；

第2组：实施例1-SI-2，剂量1.5mg/kg；

第3组：实施例1-SI-2，剂量2mg/kg；

第4组：实施例1-SI-2，剂量2.5mg/kg。

A)作为时间函数的HeLa-MaTu异种移植肿瘤的生长。

图8显示在用V14治疗期间，在人HeLa-MaTu宫颈肿瘤异种移植物模型中对肿瘤生长的抑制。在第0天在NMRI裸鼠中皮下植入HeLa-MaTu细胞。在肿瘤大小达到约20mm²后的第5天开始治疗。按照以下剂量并以由在第5、6、12、13、19和20天每天两次口服施用组成的循环治疗方案进行治疗：

第1组：(对照组)-增溶剂(40％PEG400/60％水)；

第2组：V14，剂量6mg/kg；

第3组：V14，剂量8mg/kg；

第4组：V14，剂量10mg/kg。

A)作为时间函数的HeLa-MaTu异种移植肿瘤的生长。