CN102188636A - 具有改善贫血功能的竹笋提取物及其制备方法以及竹笋提取物复合制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有改善贫血功能竹笋提取物及其复合制剂以及其制备方法，复合制剂由竹笋提取物、补铁剂及其它助剂配制而成，其中：所述竹笋提取物是固形物、提取液或干粉，由新鲜竹笋或笋干水提醇提得到；所述补铁剂为铁卟啉或血红素铁。采用以上设计，本发明复合制剂中竹笋提取物含有丰富的葡萄糖、蛋白质以及多种元素，能够刺激造血，扩充血容量，其复合铁制剂对失血性贫血的恢复有更好促进作用。采用本发明的方法制备竹笋提取物，工艺简单实用，并可以很好地保留竹笋原料中的各种有益成分，适于工业化生产。

Description

具有改善贫血功能的竹笋提取物及其制备方法以及竹笋提取物复合制剂

本发明为分案申请。原申请日为2008年1月14日，申请号200810056154.7，发明名称为“一种竹笋提取物复合制剂及其中竹笋提取物的制备方法”。

技术领域：

本发明涉及医药领域，具体涉及一种具有改善贫血功能的竹笋提取物复合制剂及其制备方法。

背景技术：

竹笋是禾本科多年生植物竹子的嫩茎，具有生长旺盛的特点，是绿色无污染植物。可供食用的竹笋品种主要有毛竹笋、淡竹笋、慈竹笋等；竹笋肉质鲜嫩，松脆，味道鲜美，是我国的传统佳肴，到目前为止已有2500多年的食用史。竹笋营养丰富，文献报导竹笋含有铁、钙、磷等多种矿物质营养元素和维生素，以及各种蛋白质。蛋白质水解后可得到18种氨基酸，而且脂肪含量低(刘明池.竹笋的营养价值与食用方法[J].蔬菜，2002，2：40-40)。竹笋的主要功用在食用方面，也有研究者将其作为原料从中提取竹笋氨基酸肽类用作食品添加剂(专利申请200510025443.7)或提取竹笋甾类醇功能性组分(专利申请200410099219.8)。

本申请人早期研究中公开了竹笋提取物竹胎粉中含有EPO、IL-1β、IL-2等造血因子类似物，微量元素以及多种氨基酸(陈琳，师伟，吕洋，等.竹胎粉辅助卟啉铁改善营养性贫血的疗效观察[J].营养学报2006，28(3)：233-235)，首次提出了竹胎粉辅助卟啉铁复合制剂改善营养性贫血的效果，提供了竹笋提取物的一种新的用途。

血液由血浆和血细胞组成，血浆中含有机体新陈代谢所需要的蛋白质、电解质等各种重要的营养物质。失血性贫血常造成血细胞减少以及血浆中营养物质的丢失，所以采用竹笋提取物复合制剂治疗失血性贫血是一个好的思路。

本申请人在研究阶段已提出了专利申请200610066207.4，说明了含有竹胎粉的改善贫血的保健品及其制备方法。然而在向产业化推进过程中，发现原有制备工艺上存在一些缺陷，如制备竹胎水时采用多次膜过滤以及反复冻融，工艺繁琐，不仅提高了生产成本，工业化生产时难以实施。因此，需要提出更具有产业利用价值的竹胎提取物保健品和制备工艺。

发明内容：

本发明的主要目的在于提供一种可产业实施的改善营养性贫血的竹笋提取物及其复合制剂。

本发明具有改善贫血功能竹笋提取物复合制剂，由竹笋提取物、补铁剂及其它助剂配制而成，其中：所述竹笋提取物是固形物、提取液或干粉，所述补铁剂为铁卟啉或血红素铁，所述竹笋提取物与补铁剂的重量比为400～800∶1。

所述竹笋提取物复合制剂，其中竹笋提取物中游离总氨基酸含量不低于质量百分比3.75％。

所述竹笋提取物复合制剂，所述竹笋提取物分别按以下方法获得：

固形物：将粉碎之后的鲜竹笋加入多功能提取罐中，加入竹笋6倍重量的纯化水回流提取，共提取两次，合并提取液，减压浓缩至4g竹笋/ml，将浓溶液转移至醇沉罐中，加入等体积的95％乙醇，静置，取上清液，减压浓缩，真空干燥，得到竹笋提取物固形物；

提取液：笋干粉碎至过200目筛，加入20倍的水热回流提取，提取多，收集馏出液得到竹笋提取液；

粉料：是将所述提取液在150℃喷雾干燥得到。

所述竹笋提取物复合制剂，为口服液，所述其它助剂包括食品级的调味剂、助悬剂、抑菌剂等辅助功能的组分；具体选自阿斯巴甜、AK糖、柠檬酸羧、甲基纤维素钠、黄原胶、红牛香精、尼泊金乙酯中的一种或多种。

所述竹笋提取物复合制剂为口服液，按以下组分混合并用去离子水定容：

所述竹笋提取物复合制剂为片剂，按以下组分混合形成片芯：

所述竹笋提取物复合制剂为胶囊，按以下组分混合形成：

本发明的另一目的在于提供上述竹笋提取物复合制剂中活性成分竹笋提取物的制备方法。

其中，固形物：将粉碎之后的鲜竹笋加入多功能提取罐中，加入竹笋6倍重量的纯化水回流提取，共提取两次，合并提取液，减压浓缩至4g竹笋/ml，将浓溶液转移至醇沉罐中，加入等体积的95％乙醇，静置，取上清液，减压浓缩，真空干燥，得到竹笋提取物固形物；

提取液：笋干粉碎至过200目筛，加入20倍的水热回流提取，提取多，收集馏出液得到竹笋提取液；

粉料：是将所述提取液在150℃喷雾干燥得到。

以上所述方法获得的竹笋提取物也是本发明的技术内容，所述竹笋提取物中游离总氨基酸含量不低于质量百分比3.75％。

该竹笋提取物在制备抗贫血药物或保健品中的应用也是本发明的技术内容。

采用以上设计，本发明复合制剂中竹笋提取物含有丰富的葡萄糖、蛋白质以及多种元素，能够刺激造血，扩充血容量，其复合铁制剂对失血性贫血的恢复有更好促进作用。采用本发明的方法制备竹笋提取物，工艺简单实用，并可以很好地保留竹笋原料中的各种有益成分，适于工业化生产。

附图说明：

图1为本发明中竹笋提取物的氨基酸分析图谱。

图2为本发明竹笋提取物复合制剂对失血性贫血小鼠血红蛋白的影响。

具体实施方式：

本发明竹笋提取物复合制剂，是由竹笋提取物、补铁剂、其它助剂以及基料配制而成。其中：

本发明竹笋提取物的获取从便于产业化的思路来考虑，因此，可以是便于保管与储运的固形物，可以是固形物、提取液或干粉，可由新鲜竹笋或由笋干用水提并进一步加工取得，以下再详述制备过程。

补铁剂为铁卟啉或血红素铁，其中铁卟啉又称叶绿素铁钠盐，为天然植物提取物，是已有的具有补血功效的补铁剂；血红素铁属天然有机铁，是人体内重要的组成物质，为已有的安全无毒的补铁剂。

其它助剂包括食品级的调味剂、助悬剂、抑菌剂等辅助功能的组分；如阿斯巴甜、AK糖、柠檬酸羧、甲基纤维素钠、黄原胶、红牛香精、尼泊金乙酯。

基料包括水或淀粉等适应不同剂型的基质材料。

以下通过具体实例说明本发明竹笋提取物复合制剂及其制备过程。

制备例1、竹笋提取物固形物的制备

将粉碎之后的1000g鲜竹笋加入多功能提取罐中，加入竹笋6倍重量的纯化水回流提取，共提取2次，合并2次提取液，减压浓缩，至4g竹笋/ml，将浓溶液转移至醇沉罐中，加入等体积的95％乙醇，静置，取上清液，减压浓缩，真空干燥，得到竹笋提取物固形物100g，提取收率为10％。

竹笋提取物的质检标准：游离氨基酸含量不低于3.75％(质量百分比)。

参照GBT8314《茶游离氨基酸总量测定》标准检测竹笋提取物中的氨基酸含量，结果：含量4.12％。

制备例2、竹笋提取液的制备

取黄竹笋干100g，粉碎至过筛(200目)，加入2000ml的去离子水，热回流提取，提取3次，合并全部提取液；继续回流蒸馏40min，收集馏出液得到竹笋提取物11ml。

竹笋提取液的质检标准同制备例1。用与制备例1相同的方法检测，本例提取液中的氨基酸含量为3.9％，达到质检要求。

制备例3、竹笋提取物粉料的制备

采用与制备例2相同的方法获得1L符合质检要求的竹笋提取液，提取液在150℃喷雾干燥，得到黄色粉状提取物196g；竹笋提取物粉料总收率为19.6％。

竹笋提取物粉料的质检标准同制备例1。用与制备例1相同的方法检测，本例提取物粉料中的氨基酸含量为3.89％，达到质检要求。

以下以多个剂型制备例来说明以上竹笋提取物的使用。剂型制备例为正交实验的优化结果。正交实验中：氯化血红素铁的用量按药品剂量标准设定，以大鼠缺铁性贫血模型对大鼠缺铁性贫血的疗效(方法参见功能验证之三)来优化竹笋提取物和氯化血红素铁的配比，结果竹笋提取物和氯化血红素铁比例在400～800∶1的情况下效果较好，低于400时疗效不够，超过800时，不仅提高了口服液的制备成本和生产难度，且口服液的稳定性会差些。

另外，剂型制备例中，各种辅料是按照制剂学知识进行调配并优化，例如制备例4中的调味剂的种类和用量以人体感观(口感)评价确定；助悬剂的种类和用量以稳定性指标来确定；抑菌剂的种类和用量依据卫生学来确定。正交实验的过程略过。

制备例4、含有竹笋提取物口服液的制备

按照上述正交实验，获得优化结果的一个配方如下：

以1000ml产品计，口服液其一配方如下，其中竹笋提取物为制备例1的产物，使用时将固形物粉碎即可。

配制过程：

1.原料、辅料检验按照各自质量标准进行检验。检验合格之后的原辅料方可投入生产；

2.称取竹笋提取物、AK糖，加入约4倍量的水，加热、搅拌使溶解；滤过，备用；

3.称取羧甲基纤维素钠、黄原胶，加适量乙醇润湿，加水配制为0.5％的溶液，加热，搅拌，静置，备用；

4.称取血红素铁，加入预先配制好的100倍体积的0.5％的NaOH溶液，加热，搅拌使充分溶解；

5.称取尼泊金乙酯，配制为5％的乙醇溶液，备用；

6.在加热并搅拌之下，将助悬剂溶液加入竹笋提取物溶液当中，充分搅拌，使混合均匀；

7.在加热并搅拌之下，将竹笋提取物溶液加入血红素铁溶液中，充分搅拌，使混合均匀；

8.加入尼泊金乙酯溶液、香精；

9.用柠檬酸调节pH至7.5；

10.用水调节液体至全量；

11.灌装，每支25ml；

12.流通蒸汽灭菌30min；

13.包装。

本例制备得到的1000ml液体可按400支分装得到最终产品口服液。

按照上述原料比例和配制过程，将竹笋提取物使用量加大，最大可以提升至80g，均可以得到疗效明显以及稳定的口服液产品，在此不再一一罗列。

制备例5、含有竹笋提取物片剂的制备

以制备200克片芯计，采用以下配方：

制法：按照上述制剂配方，称取制备例3得到的竹笋提取物粉体，加入铁卟啉、微晶纤维素、乳糖以及羟丙基纤维素，以95％乙醇制粒，60℃干燥，整粒；加入其余辅料混合均匀后压片，制成1000片；包薄膜衣，包装，即得。

制备例6、含有竹笋提取物口服液的制备

制备10000ml口服液制剂处方：

制法：按照制剂处方取得各组分原料，其中竹笋提取液为用制备例2方法得到的提取液，将各原料混合均匀，煮沸，放置，滤过，分装成1000支，每支10ml，灭菌，即得。

制备例7、含有竹笋提取物胶囊剂的制备

以制备400克芯料计，制剂处方如下：

制法：按照上述制剂处方称取各组分原料，其中竹笋提取物为制备例3得到的粉体；所有原料过80目筛，混匀，直接装胶囊，制成1000粒，包装，即得。

制备例8、含有竹笋提取物药用制剂的制备

将70ml制备例2的竹笋提取物和1ml的铁卟啉水溶液(浓度为0.15g/ml)、10ml蜂蜜混合，加水至100ml混合均匀，得到含有竹笋提取物药用制剂。

制备例9：含有竹笋提取物饮料的制备

以制备10L饮料计，容器中加入2g的竹笋提取物(制备例1的产物，粉碎)、0.1g的铁卟啉，10ml的蜂蜜，混合后用水稀释定容至10L，混匀直接装罐(500ml)得到功能性饮料。

以上制备例中，如无特殊说明，氯化血红素铁、铁卟啉(海宁风鸣叶绿素有限公司产品，铁含量为3.72％)以及其余助剂均为商购。

本发明分别对上述制备例的产物进行以下检测或功能验证：

一、竹笋提取物功效成分检测

以制备例1和制备例2的产物为检测样品，采用医用生化分析仪测定葡萄糖，总蛋白，宏量元素钠、氯、镁、钾、钙、磷的浓度；用ICTMS检测微量元素铁、锌、铜、锰、钴、钒、镍、钼、铬、钛、锗的浓度；采用酸水解和碱水解法，用HP1100色谱仪分析氨基酸组成和含量。结果参见表1至表3以及图1。

表1葡萄糖和总蛋白检测

表2宏量元素检测

表3微量元素检测

图1显示，本发明制备得到的竹笋提取物，其中游离总氨基酸质量百分比高于3.75％。本实验说明：本发明制备得到的竹笋提取物含有葡萄糖、蛋白质，参与电解质形成的钠、钙、钾、氯、磷、镁等宏量元素，刺激或参与造血的铁、锌、铜、锰、钛等微量元素，以及在体内参与多种酶的表达、合成和分泌并影响各消化腺、有助于胃肠功能改善的酶活性，还可以促进非铁卟啉等营养物质和多种氨基酸等营养成分的吸收。本发明制备竹笋提取物的工艺简单实用，并可以很好地保留竹笋原料中的各种有益成分。

二、竹笋提取物对造血干细胞的调控作用验证

将CD34+细胞加入含有50μg/L rhSCF、10μg/L rhIL-3、10μg/L 1rhIL-6、2U/mlEPO和20μg/L rhFL的IMDM培养基中，接种于24孔板(2.0×105/孔)，细胞密度为1.0×104/ml，每孔1ml培养体系。试验组中加入5ug/ml的竹笋提取物(制备例1的产物，粉碎水溶)。对照组未加竹笋提取物。每组三孔。24孔板置于37℃、5％CO2孵箱中培养12天。12天后取细胞计数，结果参见表4：

表4：细胞计数

	总有核细胞增殖倍数	CD34+细胞数增殖倍数
			对照组	72.1±3.5	9.1±0.9
试验组	58.2±8.6	6.8±1.1

该实验结果显示，竹笋提取物能够促进有核细胞的增殖，与对照组相比竹笋提取物能够显著扩增CD34+细胞的数量。

三、竹笋提取物药用制剂对失血性贫血小鼠疗效实验

1、失血性贫血小鼠模型建立：对文献(失血性血虚症模型[M]//苗明三.实验动物和动物实验技术.(第1版)北京：中国中医药出版社，(1997年出版)290-291)介绍的失血型血虚模型加以改进，通过对小鼠少量多次放血，达到贫血状态，以模拟临床失血性贫血。Balb/C小鼠按体重随机分3组，每组8只，均给予正常饮食，以毛细管刺入小鼠内眦静脉丛，按25ml/kg体重失血，连续放血2d，失血量占小鼠血容量的40％-45％，血红蛋白、红细胞数、红细胞压积均低于正常值下限，分别为12.2g/dl、7.7×106/μl、41.5％，建立失血性贫血动物模型。

2、实验方法：实验小鼠失血后立刻灌胃给药，按25ml/kg体重，1次/d，连续给药5d，分别给予阳性对照制剂(0.15％铁卟啉、10％蜂蜜)、药物制剂(本发明制备例8的产物即70％竹笋提取物、0.15％铁卟啉、10％蜂蜜)及阴性对照去离子水，分别于给药0h、18h、42h、67h、90h从小鼠尾静脉取血，以4％EDTA-K2抗凝，血细胞计数仪测定血红蛋白、红细胞、红细胞压积。给药0h为失血前对照。

3、实验结果：参见表5、表6和图2所示。

表5.竹笋提取物复合制剂对失血性贫血小鼠红细胞的影响(n＝8)

*与阴性对照组相比t＝-2.86 P＜0.05；**阳性对照组与阴性对照组相比t＝3.52，药物组与阴性对照组相比t＝-8.34，P＜0.01；

^△阳性对照组与药物组相比t＝-3.03，P＜0.05；☆☆阳性对照组与阴性对照组相比，t＝-3.89，药物组与阴性对照组相比t＝-3.89，P＜0.01

表6竹笋提取物复合制剂对失血性贫血小鼠红细胞压积的影响(n＝8)

*与阴性对照组相比t＝-3.12 P＜0.05；**阳性对照组与阴性对照组相比t＝4.75，药物组与阴性对照组相比t＝-4.20，P＜0.01；

^△阳性对照组与药物组相比t＝-2.91，P＜0.05；^☆☆阳性对照组与阴性对照组相比t＝4.94，药物组与阴性对照组相比t＝-5.76，P＜0.01

本实验通过组间比较显示：给予竹笋提取物复合制剂(药物组)的小鼠在失血后42h血红蛋白、红细胞数、红细胞压积高于阴性对照组；失血67h，阳性对照组和药物组的小鼠，其血红蛋白、红细胞数、红细胞压积均高于阴性对照组(p＜0.01)，且两组间差异有统计学意义；失血90h，两组与阴性对照组相比差异有非常显著意义。表明药物组和阳性对照组对失血性贫血的恢复均有一定的作用，且药物组疗效好于阳性对照组。由此表明竹笋提取物中多种营养成分的协同作用，能够刺激造血，扩充血容量。

该实验中由于小鼠失血量达40％左右，可能造成造血原料铁的丢失，因此本发明补充了铁剂；因此本发明复合制剂能够更好地促进失血性贫血小鼠的恢复。

参见图2所示，其中制剂1为阳性对照制剂，制剂2为药物制剂，对照为阴性对照；图2显示竹笋提取液组具有最好的促进失血性贫血小鼠血红蛋白恢复的作用。

四、竹笋提取物液口服制剂治疗缺铁性贫血实验

1、临床资料

一般资料：选经诊断为缺铁性贫血的成人患者60例，年龄在18～65岁。采取双盲随机分组，组间和自身两种对照设计。将60例缺铁性贫血患者，按性别、年龄、红细胞数(RBC)、血红蛋白(HB)、红细胞压积(HCT)、红细胞游离原卟啉等均衡地分为2组，每组30例，然后随机分为观察组和对照组。用药前尿常规检查(尿糖、尿胆红素、尿酮体、尿潜血、尿蛋白、尿胆原、尿白细胞)受试者均在正常范围。用药前两组患者性别、年龄、红细胞数(RBC)、血红蛋白(HB)、红细胞压积(HCT)、红细胞游离原卟啉均无明显差异，具有可比性。

纳入标准：经检查血红蛋白＜120g/L的缺铁性贫血患者，且病人自愿参加并保证配合者，均可纳入试验。

排除标准：年龄在18岁以下或65岁以上者，妊娠或哺乳期妇女，其他器质性疾病或精神病患者。未按规定服用受试物的受试者，资料不全影响功效或安全性评价者。

2、方法

按完全随机双盲法分为实验组和对照组。给实验组连续食用竹笋提取物液口服液(制备例4的产品)，并给对照组食用外观口感与之相同的安慰剂，每天2次，每次1瓶(25ml)，观察期为40d。试食期间对受试对象的生活和饮食不加干预，但避免应用其它含铁制剂。

3、试验结果

实验组与对照组试验前后Hb(血红蛋白)、FEP(红细胞内游离原卟啉)和SF(血清铁蛋白)的结果比较件表7。

表7

**试验前后自身配对t检验，P＜0.01；##试验后实验组与对照组t检验，P＜0.01；*试验前后自身配对t检验，P＜0.05。

4、结论

实验结果表明，实验组60名患有营养性贫血的受试者，在连续食用竹笋提取物液口服液40d后，各项有关血液指标有明显改善。血红蛋白的含量平均升高、红细胞内游离原卟啉明显下降和实验后血清铁蛋白的含量有所升高。实验组改善营养性贫血的总有效率达78％。结果表明，竹笋提取物液口服液对营养性贫血具有明显的改善作用。

该实验还得出本发明竹笋提取物复合制剂的口服剂量可为50ml/天·人。如用作保健辅助治疗，剂量酌减。

Claims (10)

1.一种具有改善贫血功能的竹笋提取物，为固形物、提取液或粉料，其中：

所述固形物按以下方式获得：将粉碎之后的鲜竹笋加入多功能提取罐中，加入竹笋6倍重量的纯化水回流提取，共提取两次，合并提取液，减压浓缩至4g竹笋/ml，将浓溶液转移至醇沉罐中，加入等体积的95％乙醇，静置，取上清液，减压浓缩，真空干燥，得到竹笋提取物固形物；

所述提取液按以下方式获得：笋干粉碎至过200目筛，加入20倍的水热回流提取，提取多次，收集馏出液得到竹笋提取液；

所述粉料为上述提取液在150℃喷雾干燥得到。

2.根据权利要求1所述竹笋提取物，其特征在于，所述竹笋提取物中游离总氨基酸含量不低于质量百分比3.75％。

3.权利要求1或2所述竹笋提取物的制备方法，采用下述方式之一：

固形物的制备：将粉碎之后的鲜竹笋加入多功能提取罐中，加入竹笋6倍重量的纯化水回流提取，共提取两次，合并提取液，减压浓缩至4g竹笋/ml，将浓溶液转移至醇沉罐中，加入等体积的95％乙醇，静置，取上清液，减压浓缩，真空干燥，得到竹笋提取物固形物；

提取液的制备：笋干粉碎至过200目筛，加入20倍的水热回流提取，提取多，收集馏出液得到竹笋提取液；

粉料的制备：是将所述提取液在150℃喷雾干燥得到。

4.权利要求1或2所述具有改善贫血功能竹笋提取物在制备抗贫血药物或保健品中的应用。

5.一种具有改善贫血功能竹笋提取物复合制剂，由权利要求1或2所述竹笋提取物、补铁剂及其它助剂配制而成，所述竹笋提取物与补铁剂的重量比为400～800∶1。

6.根据权利要求5所述竹笋提取物复合制剂，其特征在于，所述补铁剂为铁卟啉或血红素铁。

7.根据权利要求5或6所述竹笋提取物复合制剂，其特征在于，为口服液，所述其它助剂包括食品级的调味剂、助悬剂、抑菌剂等辅助功能的组分；具体选自阿斯巴甜、AK糖、柠檬酸羧、甲基纤维素钠、黄原胶、红牛香精、尼泊金乙酯中的一种或多种。

8.根据权利要求7所述竹笋提取物复合制剂，其特征在于，按以下组分混合并用去离子水定容：

9.根据权利要求5或6所述竹笋提取物复合制剂，其特征在于，为片剂，按以下组分混合形成片芯：

10.根据权利要求5或6所述竹笋提取物复合制剂，其特征在于，为胶囊，按以下组分混合形成：

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