CN102175672B

CN102175672B - 油脂中磷脂的测定方法

Info

Publication number: CN102175672B
Application number: CN 201110001315
Authority: CN
Inventors: 李蓉; 赵万里; 马晓迅; 陈斌
Original assignee: Northwest University
Current assignee: Northwest University
Priority date: 2011-01-06
Filing date: 2011-01-06
Publication date: 2013-04-03
Anticipated expiration: 2031-01-06
Also published as: CN102175672A

Abstract

本发明公开了一种油脂中磷脂的测定方法，包括油脂的炭化、灰化、溶解及磷的钼蓝比色法测定等步骤，其中油脂的炭化采取加入浓硫酸，以及碱金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐。本发明用浓硫酸预炭化，然后加碱反应，可在15分钟内完成不同量的各类油脂的炭化，防止直接电炉加热炭化过程中产生的飞溅、燃烧，缩短炭化时间；用碱金属的氢氧化物或碳酸盐或碳酸氢盐代替ZnO，生成热分解温度更高的可溶性磷酸盐，缩短灰化时间，灰化产物可直接溶解过滤，使后续操作更为简易安全。

Description

油脂中磷脂的测定方法

技术领域

本发明涉及一种油脂中磷脂的测定方法。

背景技术

油脂精炼过程中，毛油中的磷脂会引起油品起泡、回色和氧化稳定性，影响油脂风味，而富含磷脂的毛油油脚又是生产磷脂保健品的主要原料。生物柴油生产过程中高磷脂原料油会导致脂肪酶严重失活。脂质体中的磷脂含量则是衡量其稳定性的重要指标。所以油脂产品生产中，磷含量是一项很重要的检测指标。

目前，磷脂的检测方法有比色法，浊度法，重量法，TLC，HPLC，IR，NMR等。浊度法和重量法囿于较低的检测精度而应用有限；TLC法受人为操作影响较大，重复性不好，而使用面积扫描仪其仪器又比较昂贵；HPLC、IR、NMR的检测成本均较高，而且需要扎实的专业知识，非一般的检测人员所能做到。

GB5537-2008采用钼蓝比色法检测磷脂，具体方法如下：油脂样品加氧化锌炭化、灰化，试样中的有机磷转化为难溶的磷酸锌，加盐酸溶解而得磷酸根，通过酸碱调节控制体系呈酸性，再加入钼酸盐生成磷钼酸盐，磷钼酸盐被还原而产生钼蓝，其颜色深浅与油脂中磷脂含量成正相关，由此可进行比色定量。该法具有准确、灵敏度高等优点，但存在如下缺点：（1）电炉加热炭化耗时长（精制油需6-8小时，脱胶油需4-5小时），且炭化过程不易控制；（2）所加ZnO转成难溶的磷酸锌，后续操作繁琐，且灰化温度受限制。因此寻找一种准确、快速测定油相体系中的磷脂含量的方法有重要的现实意义。陈勇（中国油脂，2009,34(5):69-70）在对GB5537-2008进行改进时用风扇使样品不着火，这样可以使炭化时间缩短2-3小时，但此法依然费时，且没有解决灰化生成的磷酸锌难溶于水需加酸煮沸溶解的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种既快速、安全、准确，又简易、重现性好的油脂中磷脂的检测方法。

本发明依据的原理是利用浓硫酸能够将有机物炭化的性质，迅速完成油脂炭化，但单纯使用浓硫酸有时不能将油脂炭化完全，还需电炉加热完成炭化；利用碱金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐可与灰分中的磷酸根生成可溶性磷酸盐，不但可以提高炭化质量，而且可以减少后续操作步骤；酸性条件下磷酸盐与钼酸钠可通过还原剂在沸水温度下生成蓝色络合物，蓝色程度与磷酸根含量成正比，然后就可由标准曲线计算磷含量。

本发明实现过程如下：

一种油脂中磷脂的测定方法，包括油脂的炭化、灰化、溶解及磷的钼蓝比色法测定等步骤，其中油脂炭化先加入浓硫酸，浓硫酸加入量至少是油脂质量的10%；再加入过量的碱金属的氢氧化物或碳酸盐或碳酸氢盐以确保与浓硫酸反应完全。

所述油脂为植物油或动物油，如大豆油、桐油、菜籽油、棕榈油、橄榄油、猪油、牛油等。

所述的浓硫酸为硫酸质量百分含量为95%～98%的浓硫酸。

所述的碱金属的氢氧化物为LiOH、NaOH、KOH，最好为KOH。使用氢氧化钾灰化后得到的灰分蓬松，更易溶解于水。

碱金属磷酸盐的热分解温度高，可显著提高灰化温度，缩短灰化时间；碱金属磷酸盐可直接用水溶解，勿需用酸溶解及后续的反复pH调节。

本发明灰化温度550℃～1000℃，最佳灰化温度650℃～800℃，一般灰化时间约1.5小时，通常灰化温度越高，灰化时间越短。灰化所得灰分直接用水溶解。

具体的说，油脂中磷脂的测定方法包括如下步骤：

（

）磷酸盐标准储备液的制备：称取干燥24h的磷酸二氢钾0.4387 g，用水溶解并稀释定容到1000mL；

（

）硫酸联氨溶液的制备：将0.15 g硫酸联氨溶解在1L水中，得到0.015%的硫酸联氨溶液；

（

）钼酸钠稀硫酸溶液的制备：量取140mL浓硫酸注入300mL水中，冷却到室温，加入12.5 g钼酸钠，溶解后用水定容至500mL，充分摇匀，静置24h备用；

（4）盐酸溶液的制备：将37%的浓盐酸溶解于等体积的水中；

（5）标准曲线的绘制：向6支比色管中分别加入磷酸盐标准溶液0、1、2、4、6、 8mL，加水补齐至10mL；再加入硫酸联氨溶液8mL，钼酸钠溶液2mL；比色管加塞，摇匀，去塞后沸水浴10min，冷却至室温后，加水稀释至50ml，摇匀后静置10min；650nm测定吸光度，绘制标准曲线；

（6）试液的制备：取3～10g油脂于坩埚中，加入0.5～5mL 95%～98%的浓硫酸，再加入1.5～9.0g固体氢氧化钾；电炉上加热炭化5～15min，炭化完成时油脂呈固态；放入700℃马弗炉中灰化1.5h；取出冷却至室温，用30～60mL热水溶解灰分，滤液转移至100 mL容量瓶中，滴加1:1的盐酸，调节pH值至3左右，定容至100mL；

（7）比色：移取10 mL上述试液至50 mL比色管中，加入硫酸联氨溶液8mL，钼酸钠溶液2mL；加塞，摇匀，去塞后沸水浴10min；冷却至室温后，加水稀释至50ml，摇匀后静置10min；650nm测定吸光度；将样品吸光度代入标准曲线，求出被测油脂中的磷含量；

（8）试样中磷脂含量按下式计算:

式中:

X—磷脂含量，单位为mg/g

P—标准曲线查得的被测液的含磷量，单位为mg

m—试样质量，单位为g

V₁—样品灰化后稀释的体积，单位为mL

V₂—比色时所取的被测液的体积，单位为mL

26. 31—每毫克磷相当于磷脂的毫克数。

当被测液的吸光值过大时，适当减少吸取的被测液体积，以保证被测液的吸光值在标准曲线的线性范围内；26.31是磷与磷脂的换算系数，根据油类的不同可以有不同的值，一般在24-32之间。

本发明的优点与积极效果：（1）用浓硫酸预炭化，然后加碱反应，可在15分钟内完成不同量的各类油脂的炭化，防止直接电炉加热炭化过程中产生的飞溅、燃烧，缩短炭化时间。（2）用碱金属的氢氧化物或碳酸盐或碳酸氢盐代替ZnO，生成热分解温度更高的可溶性磷酸盐，缩短灰化时间，灰化产物可直接溶解过滤，使后续操作更为简易安全。

具体实施方式

实施例1 精密度试验

取5个坩埚，各加入3.0g的花椒籽油，再加入1.0mL浓硫酸和3.0g固体氢氧化钾，放在600W电炉上加热15min炭化，至油样呈固体状，然后放入程序升温马弗炉中700℃灰化1.5h，冷却至室温，用50mL热水溶解过滤，冷却后用1:1盐酸调节pH值至3左右，定容至100mL；

移取上述试液10 mL至50 mL比色管中，加人硫酸联氨溶液8 mL，钼酸钠溶液2 mL，加塞，摇匀，去塞，将比色管沸水浴10 min，取出，冷却至室温，用水稀释至刻度，充分摇匀，静置10 min，用分光光度计在650 nm下，测其吸光度。将所得样品吸光度代入标准曲线方程，求出花椒籽油中磷脂的含量。其具体实验数据见表1，RSD%为1.03，可见，本发明方法具有良好的重现性，满足测量要求。

表1 花椒籽油磷脂含量精密度实验结果

实施例2 回收率试验

分别配制低、中、高三种浓度的磷标准溶液，加入到福临门一级精制大豆油中，混匀后测其中的磷含量，操作条件与实施例1方法相同。具体实验数据见表2、3、4；

表2 高浓度（含P量约0.8 mg）的回收率实验结果

表3 中浓度（含P量约0.4 mg）的回收率实验结果

表4 低浓度（含P量约0.1 mg）的回收率实验结果

从表2、3、4可见，回收率在97.57～101.88%之间，本发明的准确度满足检测要求。

对比实验与GB5537-2008的对比试验

按GB GB5537-2008方法重复上述测定，具体实验数据见表5至8。

表5 GB高浓度的回收率实验结果

表6 GB中浓度的回收率实验结果

表7 GB低浓度的回收率实验结果

表8 本方法和GB法的回收率对比实验

经比较，本发明测得的回收率与GB5537-2008相当，但其精密度在低中高三个水平均优于后者。

实施例3 桐油原油中的磷脂含量检测

（

（）硫酸联氨溶液的制备：将0.15 g硫酸联氨溶解在1L水中，得到0.015%的硫酸联氨溶液；

（）钼酸钠稀硫酸溶液的制备：量取140mL浓硫酸注入300mL水中，冷却到室温，加入12.5 g钼酸钠，溶解后用水定容至500mL，充分摇匀，静置24h备用；

（4）盐酸溶液的制备：将37%的浓盐酸溶解于等体积的水中；

（6）试液的制备：取3.0g的桐油，加入1.0mL98%的浓硫酸，再加入3.0g固体氢氧化钾，600W电炉上加热炭化10min，炭化完成时油脂呈固态；放入700℃的程序升温马弗炉中灰化1.5h；灰化结束冷却至室温，用50mL热水溶解，然后滴加1:1的盐酸调节滤液pH值至3左右，最后定容至100mL；

（7）比色：移取上述试液10 mL至50 mL比色管中，加人硫酸联氨溶液8 mL，钼酸钠溶液2 mL；加塞，振匀，去塞，将比色管沸水浴10 min；取出，冷却至室温，用水稀释至刻度，充分摇匀，静置10 min；用分光光度计在650 nm下，测其吸光度；将所得样品吸光度代入标准曲线方程，求出桐油中磷的含量。

（8）试样中磷脂含量按下式计算:

式中:

X—磷脂含量，单位为mg/g

P—标准曲线查得的被测液的含磷量，单位为mg

m—试样质量，单位为g

V₁—样品灰化后稀释的体积，单位为mL

V₂—比色时所取的被测液的体积，单位为mL

26. 31—每毫克磷相当于磷脂的毫克数。

测定结果为桐油原油中磷脂含量为618.6mg/kg。

实施例4 蛋黄中磷脂含量检测

与实施例3类似，测得蛋黄中磷脂含量为5.1%。

实施例5 猪油中磷脂含量检测

与实施例3类似，测得猪油中磷脂含量0.1%。

本发明方法节省大量检测时间，测定数据更稳定，数值更准确。由此进一步证明了本发明方法的优越性。

Claims

1.油脂中磷脂的测定方法，包括油脂的炭化、灰化、溶解及磷的钼蓝比色法测定步骤，其特征在于：油脂的炭化采取加入浓硫酸，以及碱金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，其中浓硫酸加入量至少是油脂质量的10%，所述浓硫酸为95%～98%的浓硫酸。

2.根据权利要求1所述的油脂中磷脂的测定方法，其特征在于：加入过量的碱金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐以确保与浓硫酸反应完全。

3.根据权利要求2所述的油脂中磷脂的测定方法，其特征在于：油脂的炭化加入的碱金属氢氧化物为LiOH、NaOH或KOH。

4.根据权利要求3所述的油脂中磷脂的测定方法，其特征在于：油脂的炭化加入的碱金属氢氧化物为氢氧化钾。

5.根据权利要求1至4任意之一所述的油脂中磷脂的测定方法，其特征在于：灰化温度为550℃～1000℃。

6.根据权利要求5所述的油脂中磷脂的测定方法，其特征在于：灰化温度为650℃～800℃。

7.根据权利要求6所述的油脂中磷脂的测定方法，其特征在于：灰化所得灰分直接用水溶解。

8.根据权利要求1所述的油脂中磷脂的测定方法，其特征在于包括如下步骤：

（

（4）盐酸溶液的制备：将37%的浓盐酸溶解于等体积的水中；

（6）试液的制备：取3～10g油脂于坩埚中，加入0.5～5mL 95%～98%的浓硫酸，再加入1.5～9.0g固体氢氧化钾；电炉上加热炭化5～15min，炭化完成时油脂呈固态；放入700℃马弗炉中灰化1～2h；取出冷却至室温，用30～60mL热水溶解灰分，滤液转移至100 mL容量瓶中，滴加1:1的盐酸，调节pH值至3左右，定容至100mL；

（8）试样中磷脂含量按下式计算:

式中:

X—磷脂含量，单位为mg/g

P—标准曲线查得的被测液的含磷量，单位为mg

m—试样质量，单位为g

V₁—样品灰化后稀释的体积，单位为mL

V₂—比色时所取的被测液的体积，单位为mL

26.31—每毫克磷相当于磷脂的毫克数。