CN102169109A

CN102169109A - 雌激素替代模板分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法

Info

Publication number: CN102169109A
Application number: CN2011100413320A
Authority: CN
Inventors: 周学敏; 吴晓丽; 李芸; 王舒; 文婷婷; 王若禹; 李飞; 张军
Original assignee: Nanjing Medical University
Current assignee: Nanjing University; Nanjing Medical University
Priority date: 2011-02-21
Filing date: 2011-02-21
Publication date: 2011-08-31
Anticipated expiration: 2031-02-21
Also published as: CN102169109B

Abstract

本发明提供一种替代模板分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法。步骤如下：a.石英纤维的表面处理、硅烷化；b.模板分子和功能单体在致孔剂中预聚，加入交联剂及引发剂，放入硅烷化后的石英纤维，超声除去氧气，氮气条件下55℃～60℃条件下聚合6～12h；c.石英纤维老化至少1h；甲醇乙酸溶液洗脱模板分子。本发明制备的固相微萃取头对雌激素类内分泌干扰物具有特异的识别能力，避免了模板泄漏问题，应用于实际样品测定时可提高方法的准确度；反复使用后，涂层无断裂、脱落现象。本发明替代模板分子印迹固相微萃取萃取头与色谱联用，可用于环境样品、食品、生物样品等复杂基质中雌激素类内分泌干扰物的分离与富集。

Description

雌激素替代模板分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种雌激素替代模板分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，制备出的萃取头具有专属选择性高和实用性好的特点。

背景技术

继臭氧层破坏、地球气候变暖两大环境问题之后，环境雌激素(EnvironmentalEstrogens，EEs)污染已成为人类的第三大环境问题，被喻为威胁人类存亡的定时炸弹。EEs是一类具有雌激素样作用的化合物，其分布广泛，种类繁多，并且随着工业化的进程，EEs的污染有进一步扩大的趋势，不仅成为人类健康的潜在威胁因素，也威胁到生物种族的存亡。90年代开始，环境雌激素对人类生殖、发育的影响及与激素依赖性肿瘤和自身免疫性疾病等的关系引起社会和医学界的重视。其中内源性雌激素(雌二醇、雌三醇、雌酮)作为雌激素生物活性最强的一类内分泌干扰物而成为了人们关注的重中之重。

目前，对实际样品中内源性雌激素的检测仍存在着许多困难与挑战。首先，雌激素一般存在于复杂基质中，例如河水、生活污水、淤泥等，如果未经有效的净化处理，这些基质会对目标物的分析产生巨大的干扰。其次，雌激素在环境水体、尿液、血液中的含量非常低，通常浓度低于ng/L级。这无疑降低了雌激素的检出浓度，加大了检测难度。目前检测雌激素的方法主要有免疫测定法、LC、LC/MS和GC/MS等。免疫测定法广泛应用于生物基质中雌激素的检测，因为该方法满足临床分析的高灵敏度和高通量的要求。但是由于雌激素具有相似的结构，免疫检测法无法区分且容易产生交叉反应。GC/MS的选择性和灵敏度均佳，能够区分单个雌激素，但是雌激素及其代谢物是一类分子量小、挥发性差、极性弱的类固醇雌激素，本身不易挥发，用于GC/MS分析检测前，需要对其进行复杂的水解或衍生化，这就大大增加了实验的复杂度。另外，雌激素本身的可供离子化的官能团不多，质谱对其响应信号较弱，所以目前最先进的LC/MS也无法实现高灵敏度直接检测。因此建立快速有效的样品前处理方法成为成功检测雌激素的关键。

固相微萃取(solid-phase micro-extraction，SPME)是从20世纪90年代逐渐发展起来的新颖的样品前处理技术，SPME集采样、萃取、浓缩、进样于一体，具有简便、快速、便携、高效、无需有机溶剂的优点，并且容易与气相色谱、高效液相色谱和毛细管电泳等分析仪器连用，提高了分析速度及灵敏度，可以有效地用于环境、药物、食品及生物分析等领域，尤其是在有机物的痕量分析方面显示了良好的发展前景。SPME的装置，外型如一只微量进样器，由手柄(holder)和萃取头或纤维头(fiber)两部分构成，萃取头是一根涂有不同吸附剂的熔融石英纤维，接在不锈钢丝上，外套细不锈钢管(保护石英纤维不被折断)，纤维头在钢管内可伸缩或进出，细不锈钢管可穿透橡胶或塑料垫片进行取样或进样。手柄用于安装或固定萃取头。在SPME过程中，除了采样条件及分析物本身的性质之外，萃取头的涂层材料是最关键的。目前大部分的商品化固相微萃取头的涂层热稳定性不够理想、使用寿命短、涂层一般不具有专属选择性、可供选择的涂层种类较少、价格昂贵等缺点，这些缺点成为SPME技术广泛应用的瓶颈。

Koster等人首先将分子印迹聚合物(molecular imprinted polymer，MIP)用作为SPME萃取头的涂层材料，成功的克服了SPME技术广泛应用的瓶颈。由于MIP对模板分子(目标分子)空间结构的“记忆”效应和作用位点的“识别”作用，能够高选择性分离富集复杂体系中的一类结构类似物，并具有制备方法简单、稳定性好、可反复使用等优点。尽管如此，该方法也面临着一些技术上的挑战。首先，模板泄漏(template bleeding)问题便是其中之一。由于在传统的MIP合成中使用大量目标分子作为模板分子，MIP的网络交联度很高，模板分子完全去除比较困难，即使经过有机溶剂的反复洗脱，仍然会存在模板残留的问题。这样的MIP作为SPME涂层，应用于微痕量物质的分析检测时，模板分子会缓慢地释放到样品中，从而引起样品污染，并降低分析的精确度和准确度。其次，现有涂层厚度通常在20-100μm左右，尽管萃取头的涂层越厚，对待测物吸附量越大，可以降低最低检测限，但涂层越厚，所需的萃取和解吸平衡时间也越长，使分析速度减慢。因此，亟需发展一种具有较高的萃取量，同时吸附和解吸效率也较高的萃取头。

发明内容

为了克服上述问题，本发明提供一种雌激素替代模板分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，制备得到的萃取头解决了上述模板分子不易洗脱完全导致渗漏，影响测定准确度的问题。同时，萃取头的涂层厚度较薄，具有对目标分子易结合、易洗脱的优点，能高效的从复杂样品中分离富集结构类似的目标分析物，提高分析方法的精密度和准确性。

本发明的目的是通过下方式实现的：

一种替代模板分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，该方法包括以下步骤：

a)将石英纤维依次经过丙酮、碱、酸浸泡后，再通过去离子水洗涤至中性后活化，再置于硅烷偶联剂中进行硅烷化反应，经甲醇清洗，氮气吹干；

b)将替代模板分子和功能单体三氟甲基丙烯酸置于致孔剂中预聚6～12h后，再加入功能单体4-乙烯基吡啶预聚6～12h；最后加入交联剂及引发剂，超声，放入硅烷化后的石英纤维，氮气保护，55℃～60℃条件下聚合6～12h；

c)取出石英纤维老化至少1h，用体积比9∶1混合的甲醇乙酸溶液洗脱模板分子，得到替代模板分子印迹固相微萃取萃取头。

所述碱为浓度为0.5～2mol/L的NaOH溶液，优选浓度为1mol/L；酸为浓度0.1～1.0mol/L的HCL溶液，浓度优选为0.1mol/L；浸泡时间各为1～2h；另外，石英纤维于丙酮中浸泡时间1～2h；所述的活化方式为真空50～70℃下干燥1～2h，所述的硅烷偶联剂为质量百分比浓度为10-30％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液或者质量百分比浓度为10-30％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液，硅烷化时间优选为1～2h。老化条件优选为真空50～70℃下干燥1～4h。本发明所使用的石英纤维的直径为100～200μm、长度为3～4cm。

本发明所用的替代模板分子是17-乙基雌二醇，其结构式为：

17-乙基雌二醇(17-ED)

本发明使用的功能单体为复合功能单体，具体为摩尔比为1∶1的三氟甲基丙烯酸和4-乙烯基吡啶；交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)中的一种；引发剂为偶氮二异丁腈，致孔剂为甲苯或者甲醇。替代模板分子、复合功能单体、交联剂三者的摩尔比为1∶4～16∶4～32，优选摩尔比为1∶4～16∶4～16，进一步优选摩尔比为1∶4～8∶4～8，最优选摩尔比为1∶4∶4。引发剂的摩尔量为替代模板分子摩尔量的10％～20％，优选为15％。替代模板分子在致孔剂中的浓度为12～13mol/L。

本发明预聚时分为两次，这样处理的好处是：三氟甲基丙烯酸是酸性的，4-乙烯基吡啶是碱性，分两次预聚三氟甲基丙烯酸先和模板分子以氢键结合，可以避免两个功能单体的缔合。

与现有技术比较本发明的有益效果：

(1)本发明通过化学键的作用将分子印迹聚合物涂渍到石英纤维的表面，使得涂层热稳定性好，反复使用后无断裂、脱落、腐蚀现象。分别使用10次、20次、25次、30次后，吸附量Q的RSD均在5％范围内。

(2)本发明在制备替代模板分子印迹固相微萃取萃取头过程中使用目标分子的结构类似物作为替代模板，可避免模板泄漏干扰。替代模板分子印迹固相微萃取法既保留了MIP对目标分子的识别选择性，同时凭借替代模板与目标分子的色谱行为差异可进行区别，从而可有效避免模板的泄漏对目标分子造成的干扰。萃取头对结构类似的雌激素均具有特定的选择性。

(3)本发明中采用摩尔比1∶1为三氟甲基丙烯酸和4-乙烯基吡啶为复合功能单体，形成的MIP萃取头对雌激素具有较好的识别性能以及较大的吸附量，如图2所示。这是由于三氟甲基丙烯酸结构中的三个高电负性F原子对邻近原子的电荷分布以及对模板分子的羟基质子可能产生更强的电子诱导作用，容易形成氢键，在一定的浓度范围内，可以捕获和保留数量更多的目标分子。同时由于四种雌激素结构中C-3的酚羟基具有一定的酸性，与碱性的4-乙烯基吡啶除了能形成氢键外，还可以发生酸碱离子作用，使得模板分子与功能单体能更好的作用，产生较好的识别位点。

(4)本发明对影响MIP涂层吸附性能的模板分子、功能单体、交联剂、引发剂、溶剂等的用量及试验条件进行了优化，制备出的涂层致密、均匀，涂层的厚度在5μm左右(如图1所示)。与商品化涂层相比，涂层厚度薄，有效利用率显著提高，同时兼具选择性好、吸附量高、吸附快和解吸所需时间短等特点。

(5)本发明制备的萃取头与色谱联用，可用于环境样品、食品、生物样品等复杂基质中雌激素类内分泌干扰物的快速分离与富集，最终达到样品的高选择性、高灵敏度准确测定。

为了验证本发明雌激素分子印迹固相微萃取涂层的吸附性能，发明人进行了如下试验：

静态吸附试验：在10mL的小玻璃瓶中分别加入6mL不同浓度的雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、炔雌醇(EE)、雌酮(E1)的甲苯/甲醇溶液，放入磁子，将萃取头固定在瓶塞上，放入瓶中，密封，室温搅拌(500转/分钟)，达吸附平衡后，取出萃取头，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)超声解吸，解吸液利用HPLC-UV测定浓度，分别计算印迹萃取头和非印迹萃取头在不同浓度下的吸附容量Q，结果见图2。

选择性吸附试验：在10mL的小玻璃瓶中分别加入6mL20ng/mL雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、炔雌醇(EE)、雌酮(E1)、双酚A(BPA)、苯酚(PhOH)的甲苯/甲醇溶液，放入磁子，将萃取头固定在瓶塞上，放入瓶中，密封，室温搅拌(500转/分钟)，达吸附平衡后，取出萃取头，甲醇∶乙酸(9∶1，v∶v)超声解吸，解吸液利用HPLC-UV测定浓度，分别计算印迹萃取头(按照本发明实施例1方法制备得到)和非印迹萃取头在20ng/ml浓度下对不同物质的吸附容量Q(ng)，结果见表1。非分子印迹固相微萃取(SPME-NIP)萃取头的制备步骤同本发明分子印迹固相微萃取(SPME-MIP)萃取头，仅不加模板分子17-乙基雌二醇。

表1：SPME-MIP-萃取头和SPME-NIP-萃取头对六种结构类似物的选择性吸附结果

吸附动力学试验：在10mL的小玻璃瓶中分别加入6mL20ng/mL炔雌醇的甲苯/甲醇溶液，放入磁子，将萃取头固定在瓶塞上，放入瓶中，密封，室温搅拌(500转/分钟)不同时间，根据吸附前后吸附液的浓度变化，分别计算萃取头在不同时间对炔雌醇的吸附量Q，结果见图3。

解吸动力学试验：在10mL的小玻璃瓶中分别加入6mL20ng/mL炔雌醇的甲苯/甲醇溶液，放入磁子，将萃取头固定在瓶塞上，放入瓶中，密封，室温搅拌(500转/分钟)至吸附平衡，取出萃取头，甲醇∶乙酸(9∶1，v∶v)超声解吸不同的时间，解吸液利用HPLC-UV测定浓度，得出达解吸平衡所需的时间，结果见图4。

本发明静态吸附及选择性吸附所涉及的六种物质结构式：

附图说明

图1：石英纤维和本发明替代模板分子印迹固相微萃取萃取头的扫描电子显微镜图(a：石英纤维(×300倍)；b：替代模板分子印迹固相微萃取萃取头表面(×300倍)；c：替代模板分子印迹固相微萃取萃取头涂层横截面(×10000倍)；d：替代模板分子印迹固相微萃取萃取头涂层表面(×3000倍))

图2：本发明制得萃取头对四种雌激素的静态吸附曲线

图3：吸附动力学曲线

图4：解吸动力学曲线

具体实施方式

实施例1：

石英纤维(直径为200μm，长度为3cm，南京飞帝斯光纤机械电子工程制作中心)先在丙酮中浸泡1h以去除保护层，然后在1mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.1mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为10％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化1.5h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。

0.5mmol 17-乙基雌二醇和156mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲苯中混匀后，预聚6h，再加入119μL 4-乙烯基吡啶(三氟甲基丙烯酸与4-乙烯基吡啶的用量摩尔比为1∶1)，混匀后再次预聚6h，加入398.6μL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈(替代模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1∶4∶4，引发剂的摩尔量为替代模板分子的15％。)，常规20-40Hz超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维(浸入溶液中长度约1cm)，通氮气除氧，塞紧密封，氮气环境下55℃聚合6h。取出石英纤维，真空70℃老化1h，甲醇乙酸溶液(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

实施例2：

石英纤维(直径为100μm，长度为4cm)先在丙酮中浸泡1h，然后在1mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.1mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为20％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。

0.5mmol 17-乙基雌二醇和156mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲醇中混匀后，预聚6h，再加入119μL 4-乙烯基吡啶，混匀后再次预聚6h，加入398.6μL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈(使得替代模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1∶4∶4，引发剂的摩尔量为替代模板分子的15％。)，超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维，氮气环境下60℃聚合12h。真空70℃干燥老化4h，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

实施例3：

石英纤维(直径为200μm，长度为4cm)先在丙酮中浸泡1h，然后在1mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.1mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为30％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化1.5h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。

0.5mmol 17-乙基雌二醇和312mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲苯中混匀后，预聚6h，再加入238μL 4-乙烯基吡啶，混匀后再次预聚6h，加入1.6mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈(替代模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1∶8∶8，引发剂的摩尔量为替代模板分子的15％)，超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维，氮气环境下55℃聚合10h。真空70℃干燥老化2h，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

实施例4：

石英纤维(直径为200μm，长度为3cm)先在丙酮中浸泡1h，然后在0.5mol/L氢氧化钠中浸泡2h、0.5mol/L盐酸中浸泡2h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于真空50℃干燥活化1h，干燥后放于质量百分比浓度为10％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化1.5h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。

0.5mmol 17-乙基雌二醇和624mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲苯中混匀后，预聚6h，再加入476μL 4-乙烯基吡啶，混匀后再次预聚6h，加入3.2mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈(替代模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1∶16∶32，引发剂的摩尔量为替代模板分子的15％。)，超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维，氮气环境下55℃聚合6h。真空70℃干燥老化3h，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

实施例5：

石英纤维(直径为100μm，长度为4cm)先在丙酮中浸泡2h，然后在2mol/L氢氧化钠中浸泡1h、1.0mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于真空60℃干燥活化1h，干燥后放于质量百分比浓度为30％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。

0.5mmol 17-乙基雌二醇和624mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲醇中混匀后，预聚6h，再加入476μL 4-乙烯基吡啶，混匀后再次预聚6h，加入1.6mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈(替代模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1∶16∶16，引发剂的摩尔量为替代模板分子的15％。)，超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维，氮气环境下60℃聚合12h。真空70℃干燥老化4h，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

实施例6：

石英纤维的选取及硅烷化步骤同实施例1，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用；

0.5mmol 17-乙基雌二醇和156mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲苯中混匀后，预聚6h，再加入119μL 4-乙烯基吡啶，混匀后再次预聚6h，加入2.8mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈，超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维，氮气环境下55℃聚合6-12h。真空70℃干燥老化4h，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

实施例7：

0.5mmol 17-乙基雌二醇和195mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲苯中混匀后，预聚6h，再加入149μL 4-乙烯基吡啶，混匀后再次预聚6h，加入2.4mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及20mg偶氮二异丁腈，超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维，氮气环境下55℃聚合6-12h。真空70℃干燥老化3h，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

实施例8：

0.5mmol 17-乙基雌二醇和234mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲苯中混匀后，预聚6h，再加入179μL 4-乙烯基吡啶，混匀后再次预聚6h，加入2.4mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及40mg偶氮二异丁腈，超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维，氮气环境下55℃聚合6-12h。真空70℃干燥老化2h，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

实施例9：

0.5mmol 17-乙基雌二醇和273mg三氟甲基丙烯酸在40mL甲苯中混匀后，预聚6h，再加入208μL 4-乙烯基吡啶，混匀后再次预聚6h，加入4mL三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈，超声5min。取5mL上述混合溶液于玻璃瓶中，放入硅烷化石英纤维，氮气环境下55℃聚合6-12h。真空50℃干燥老化1h，甲醇乙酸(9∶1，v∶v)洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。

Claims

1.一种替代模板分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，该方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1中所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于：所述的碱为0.5～2mol/L的NaOH溶液；酸为0.1～1.0mol/L的HCL溶液；浸泡时间各为1～2h。

3.根据权利要求1中所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于：所述的活化方式为真空50～70℃下干燥1～2h。

4.根据权利要求1中所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于：所述的硅烷偶联剂为质量百分比浓度为10～30％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液或者质量百分比浓度为10～30％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液。

5.根据权利要求1中所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于所述的硅烷化时间为1～2h。

6.根据权利要求1中所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于：所述的替代模板分子是17-乙基雌二醇；三氟甲基丙烯酸和4-乙烯基吡啶的用量摩尔比为1∶1。

7.根据权利要求1所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于：交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯中的一种；引发剂为偶氮二异丁腈；致孔剂为甲苯或者甲醇，替代模板分子在致孔剂中的浓度为12～13mol/L。

8.根据权利要求1所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于所述的石英纤维直径为100～200μm，长度为3～4cm。

9.根据权利要求1中所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于：替代模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1∶4～16∶4～32，引发剂的摩尔量为替代模板分子摩尔量的10％～20％。

10.根据权利要求1所述的分子印迹固相微萃取萃取头的制备方法，其特征在于老化条件为真空50～70℃下干燥1～4h。