CN102159182B - 含有源于人参，包括野山参及高丽参的形成层的植物干细胞系作为活性成分的抗衰老或抗氧化组合物 - Google Patents
含有源于人参，包括野山参及高丽参的形成层的植物干细胞系作为活性成分的抗衰老或抗氧化组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种抗老化或抗氧化组合物，其含有一种来源于包括野山参及高丽参的人参形成层的植物干细胞系，或其提取物、溶解产物和培养物作为活性成分。该组合物与现存的抗老化剂和抗氧化剂相比，具有最小的副作用，对此对皮肤是安全的。并且，本发明的组合物显示抗氧化效果，抑制皮肤老化的主要原因的由暴露于UV辐射引起的活性氧。并且，本发明的组合物可以有效地减少或抑制与衰老有关的因素。因此，本发明的组合物对预防和抑制老化是有用的。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种抗衰老或抗氧化组合物，含有任何一种或多种源于人参，包括野山参及高丽参形成层的植物细胞系、其提取物、溶解产物和培养物作为活性成分。
【背景技术】
目前世界上大约存在300,000多种植物，人们已知含有有用成分的植物会表现出各种生理活性。这些有用成分是在正常代谢过程中其次产生的并且积聚在细胞内特定位置的次级代谢产物。这些有用成分引来越来越多的关注，因为从生化和生态学的观点来说它们有助于植物抵御微生物或外来动物并在生理活性方面有利。由植物产生的次生代谢产物，包括生物碱类，黄酮类，类胡萝卜素，苷类，萜类化合物等。
许多这样的次级代谢产物表现出保湿、舒缓肌肤及调整肤色、屏蔽紫外线、美白、去除角质、抗衰老、抗氧化、抗皱、抗菌、消炎和抗癌等功效。因此，各种含有植物来源有用成分的化妆产品被开发出来。举例来说，含有植物来源有用成分的化妆产品包括：一种含有从桑叶分离出来的桑皮黄素的美白化妆品组合物(韩国专利登记号25582)，一种含有草豆蔻提取物的化妆品组合物(韩国专利登记号295875)，一种含人参提取物的防止皮肤老化成分的化妆品组合物(韩国专利登记号361433)，以及含有大型藻类的减少皱纹的化妆品组合物(韩国专利登记号2001-25580)。此外，含有各种植物提取物的化妆产品已经被开发出来，包括栗树皮、苍耳子、葫芦、苏木(Caesapiniasappan L.)、虎杖、锦葵、薄荷、赤杨(Alnus juponica)、香草、桦木、茯苓(Pora cocos)、石榴、柳皮、绿豆、玫瑰等。这些植物来源的有用成分是从植物中直接提取的次级代谢产物，因为它们的生物合成途径是复杂的。
同时，皮肤是人体的主要防御屏障，它的作用是保护人体内的各个器官不受温度和湿度变化的影响，以及外部环境的刺激，例如紫外线和污染物，并且在维持体内平衡起到了重要作用。不过，紫外线、过度的来自外部环境的物理和化学刺激、压力、营养缺乏等使皮肤的正常功能退化，增加皮肤老化现象，例如坚密度损失，角质化和形成皱纹等。为了防止这些现象，保持肌肤更加健康和具弹性，人们一直在努力使用各种含有动物、植物和微生物来源的生理活性物质的化妆品来保持皮肤的内在功能，激活皮肤细胞，从而有效抑制皮肤老化。然而，现有技术中的化妆品原材料存在各种问题，它们通常没有足够的效果或会引起皮肤的副作用。
因此，本发明人做出了很多努力来开发来源于天然材料的组合物，它与现有的抗老化剂和抗氧化剂相比具有最小的副作用以及优秀的抗老化和抗氧化效果。因而，本发明人发现，来自人参形成层的同源细胞系、其溶解产物、提取物或培养物具有优秀的抑制老化和氧化的作用，从而完成了本发明。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种来自天然材料的组合物，与现有的抗老化剂和抗氧化剂相比它具有最小的副作用并表现出的抗老化和抗氧化效果。
为了实现上述目标，本发明提供了一种含有来源于人参的形成层任意一种或多种细胞系、其溶解产物、提取物或培养物的抗衰老或抗氧化组合物，并具有以下特征：
(a)处于固有未分化的状态；
(b)是同源细胞系；并且
(c)形态学上的特点是有很多液泡。
本发明还提供了一种含有任意一种或多种所述的细胞系、其提取物、溶解产物和培养物的抗衰老化妆品组合物。
本发明还提供了一种含有任意一种或多种所述的细胞系、其提取物、溶解产物和培养物的抗衰老或抗氧化功能食品。
本发明的其他特征和实施例将在下面的详细说明书和所附权利要求中更全面地展示。
【附图简要说明】
图1是显示本发明的细胞系获取过程的一组照片，从野山参的形成层得到的细胞系。
图2是显示用各种浓度的本发明的来自野山参形成层的同源细胞系的提取物或细胞系的培养物，处理正常人体皮肤成纤维细胞(NHF)的结果图表，并研究细胞系的提取物或培养物是否对成纤维细胞具有细胞毒性。图2中，湿：湿的人参细胞，干：干的人参细胞，培养基：人参细胞的培养基，E1：诱导-1阶段，E2：诱导-2阶段，G：生长阶段。
图3是显示用各种浓度的来自野山参形成层的同源细胞系的提取物或细胞系的培养物，处理正常人体皮肤成纤维细胞(NHF)的结果图表，在0.5％的胎牛血清最小培养基中培养成纤维细胞，并研究来源于野生人参形成层的同质细胞系提取物或培养物对成纤维细胞增殖的影响。图3中，湿：湿的人参细胞，干：干的人参细胞，培养基：人参细胞的培养基，E1：诱导-1阶段，E2：诱导-2阶段，G：生长阶段。
图4是显示用各种浓度的来自野山参形成层的同源细胞系的提取物或细胞系的培养物，处理正常人体皮肤成纤维细胞(NHF)的结果图表，用UVB辐射处理成纤维细胞，并研究来源于野生人参形成层的同质细胞系提取物或培养物是否抑制了由UVB辐射引起的MMP-1表现增加。图4中，湿：湿的人参细胞，干：干的人参细胞，培养基：人参细胞的培养基，E1：诱导-1阶段，E2：诱导-2阶段，G：生长阶段，RA：维生素A酸。
图5是显示用各种浓度的来自野山参形成层的同源细胞系的提取物或细胞系的培养物，处理正常人体皮肤成纤维细胞(NHF)的结果图表，用UVB辐射处理成纤维细胞，并研究来源于野生人参形成层的同质细胞系提取物或培养物是否抑制了由UVB辐射引起的活性氧增加。图5中，湿：湿的人参细胞，干：干的人参细胞，培养基：人参细胞的培养基，E1：诱导-1阶段，E2：诱导-2阶段，G：生长阶段，RA：维生素A酸。
图6是显示来源于野生人参形成层的同质细胞系的提取物或培养物对由UV辐射引起的MMP-1生成的抑制效果的图表。
图7是显示本发明的来源于野生人参形成层的同质细胞系的提取物或培养物对由UV辐射引起的活性氧的去除效果的图表。
【本发明的最佳实施方式】
除非另有定义，这里所用的所有的技术和科学术语与本领域普通技术人员理解的具有相同的含义。一般来说，此处使用的术语是众所周知的并且是本领域传统使用的。
在本发明的详细说明中使用的主要术语定义如下。
本文中所使用的术语“形成层”是指能增厚茎和根部来使植物体积增长的组织。据报道，当形成层，其中一个发生最活跃的细胞分裂的分生组织，作为植物组织培养的外植体，能够快速和大规模地生产细胞(韩国专利登记号10-0533120)。
本文中所使用的术语“溶解产物”指的是通过化学方法，例如洗涤剂，或者物理方法破坏细胞得到的细胞溶解产物。术语细胞系的“提取物”是指通过将细胞溶解在一种溶剂中并对其进行分离所得到的物质，提取物可以通过蒸馏或蒸发进行浓缩。并且，术语细胞系的“培养基”是指培养细胞之后将细胞移除所得到的细胞培养基。此外，本文所使用的术语细胞系的“培养物”是指含有培养基和/或培养的细胞系的材料，培养的细胞系是包括在培养环境下分化的细胞系或具有改进的生产和/或分泌有用物质能力的细胞系。
本文中所使用的术语“固有未分化”是指细胞在特殊细胞形态的消失过程中，细胞不处于未分化状态，而是维持在最初的预分化状态。
一方面，本发明提供了一种含有任意一种或多种来自人参的形成层的细胞系、其溶解产物、提取物或培养物作为活性成分的抗衰老或抗氧化组合物。在本发明中，人参包括野生人参或人参(Lian M.L.等，.，J.Plant Biology，45：201，2002；Han J.Y.et al.，J.Plant Biology，49：26，2006；Teng W.L.et al.，Tissue and Organ Culture，68：233，2002)。在本发明中，野生人参或人参包括野外种植人参或组织培养的人参(不定根和来源于不定根的细胞系)。
本发明的源自人参形成层的细胞系具有以下特点：(a)处于固有的未分化状态；(b)是同源细胞系；并且(c)形态学上的特点是有很多液泡。本发明的源自人参形成层的细胞系还具有以下附加的特征：(a)在悬浮培养基中是单细胞形态；(b)与其他来自非人参形成层组织的细胞系相比，在生物反应器中对切应力具有低敏感性，以及(c)与其他来自非人参形成层组织的细胞系相比，具有较高的生长速度，并且培养稳定。
本发明的细胞系是使用包括以下步骤的分离方法获得：
(a)取得含有人参形成层的贮藏根组织；
(b)向取得的含有形成层的贮藏根组织施加渗透压，然后在含有IAA(吲哚-3乙酸)或IBA(吲哚-3丁酸)的培养基中培养含形成层的贮藏根组织，从而诱导形成层衍生的细胞系；及
(c)收集诱导的来源于形成层的细胞系。
在本发明方法的步骤(b)中，渗透压的应用特别是为了诱导在形成层中细胞系。优选地，是在含IAA-或IBA-的培养基中进行组织培养之前进行，使除了形成层的一般组织(即外皮、韧皮部、木质部和木髓)失去分裂能力，使它们在使用形成层分裂特定荷尔蒙如IAA或IBA处理时坏死。在此，优选地，渗透剂使用量为0.5-2M，渗透压在冷态或在室温下施加16-24小时，然后除去。然而，本发明的范围不限于此，因为浓度、渗透剂的处理时间和温度会随植物种类和组织状态改变。在步骤(b)中，IAA或IBA优选含有量为0.1-5mg/l。
优选地，步骤(c)是在含有一种或更多的2，4-D(2，4-二氯苯氧基乙酸)、毒莠定和IBA的培养基中进行来源于形成层的细胞系的增殖，然后收集来源于形成层的细胞系。在此，2，4-D，毒莠定和IBA中的任何一种的优选含量为1-5mg/L，更优选2mg/升。
在本发明中，细胞系的培养基优选在额外地含有3-5wt％粗糖或糖、和/或一种或多种茉莉酮酸甲酯、壳聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、ABA、水杨酸和醋酸钠作为诱导子的培养基中获得。在此，培养基优选包含3-5wt％的粗糖或糖；和至少一个物质选自茉莉酮酸甲酯、真菌提取物、细菌提取物、酵母提取物、壳聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水杨酸、花生四烯酸、STS、mevalonalonate N-benzolyglycine、ABA、SNP、IPP、BHT、CCC、乙烯利、马尿酸、硝酸铈铵、硝酸银、硫酸氧钒、对氨基苯甲酸、油菜素内酯、海藻酸钠和乙酸钠。
此外，在本发明，可以利用用诱导子处理细胞系而获得的培养物对细胞系施加物理和化学应力，该诱导子包括紫外线辐射、热、乙烯、抗真菌剂、抗生素、重金属盐和高浓度盐。
本发明所使用的培养基是用于植物组织培养的传统培养基，其中的例子包括但不限于N6培养基、SH培养基、MS培养基、AA培养基、LS培养基、B5培养基、WPM培养基、LP培养基、怀特培养基(white medium)、GD培养基、DKW培养基、DCR培养基等。
在本发明中，提取物优选由使用一种溶剂得到，溶剂选自由以下物质构成的组，蒸馏水、乙醇、丙酮、DMSO(二甲亚砜)及其混合溶剂。在此，醇的例子包括具有1至5个碳原子的醇，例如甲醇和乙醇。
在本发明中，提取物可以通过用蒸馏水、甲醇、丙酮顺序分馏细胞系得到。
在本发明的一个实施例中，合成胶原蛋白(皮肤真皮的主要成分)的成纤维细胞用所述细胞系提取物或培养物进行处理，结果发现，细胞系提取物和培养基对成纤维细胞的增殖具有极好的效果，表明本发明的细胞系提取物或培养物具有增加皮肤弹性的效果。在本发明的另一个实施例中，发现本发明的细胞系提取物或培养物具有抑制降解皮肤胶原蛋白而形成皮肤皱纹的MMP-1的表现，这表明它们具有阻止和减少皱纹的效果。在本发明的还另一个实施例中，发现本发明的细胞系提取物或培养物具有抑制紫外辐射诱导的活性氧的效果，表明它们具有抗氧化作用。因为本领域技术人员公知具有抗氧化活性的组合物具有抗老化效果，本发明的组合物具有抗氧化效果是显而易见的。
在本发明的还另一个实施例中，为了保证客观性，由外部检测机构进行本发明的细胞系提取物和培养物的抗衰老及抗氧化试验。结果，我们发现与公知具有优秀抗老化效果的RA和野山参提取物相比，本发明的细胞系提取物和培养物具有极其优秀的抗衰老及抗氧化效果。此外，还可以看出，与野外栽培的野生人参相比，本发明的细胞系提取物和培养物具有更多的抗氧化效果。
因此，如上所述我们发现该细胞系提取物具有抗衰老作用及抗氧化活性。至此，虽然本发明没有特定的实施例显示含有细胞系的组合物显示出抗衰老的作用及抗氧化活性，但对于本领域技术人员来说含有本发明的细胞系或其溶解产物的组合物也具有抗衰老和抗氧化活性是显而易见的。
含有任何一种或多种本发明的细胞系、其提取物、溶解产物和培养物的抗衰老或抗氧化组合物可以以含有任意一种或多种所述细胞系、其提取物、溶解产物和培养物的一种或混合物与至少一种可药用的载体、赋形剂或稀释剂的药用组合物的形式提供。该细胞系、其提取物、溶解产物或培养物可以根据疾病及其严重程度、病人的年龄、体重、健康状况、性别、给药途径和治疗周期选用药学有效量用于药学组合物中。
本文中所使用的术语“可药用的组合物”是指生理上可以接受的组合物，当应用于人体不会引起过敏反应或如胃肠道紊乱或眩晕的类似反应。所述载体、赋形剂或稀释剂的例子可包括乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨醇，甘露醇，木糖醇，赤藓糖醇，麦芽糖醇，淀粉，阿拉伯橡胶，海藻酸钠，明胶，磷酸钙，硅酸钙，纤维素，甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，水，羟苯基甲酯，羟苯基丙酯，硬脂酸镁和矿物油。
药学组合物还可含有附加的填料，抗凝聚剂，润滑剂，润湿剂，香料，乳化剂和防腐剂。此外，本发明的药学组合物可以使用本领域公知的配方制作，例如，在对哺乳动物给药后提供活性成分的速释、缓释或延迟释的组合物配方。该组合物可以是粉末，颗粒，片剂，乳剂，糖浆剂，气雾剂，软或硬胶囊，无菌注射液，无菌粉末等形式。
在另一个方面，本发明涉及一种抗衰老化妆品组合物，含有任意一种或多种所述的来自人参形成层的细胞系、其提取物、溶解产物和培养物作为活性成分。
本文中所使用的术语“功能性化妆产品”是指通过加入任意一种或多种本发明的细胞系、其提取物、溶解产物和培养物，使功能得到改进的化妆产品。例如，含有本发明的细胞系、其提取物、溶解产物或培养物的抗衰老化妆组合物可用于制备功能性化妆产品。
本发明的化妆品组合物除了含有细胞系或其溶解产物、提取物或培养基作为活性成分，还可包含化妆品的传统性成分。例如，化妆品组合物可含有如抗氧化剂，稳定剂，溶解剂，维生素，色素和香料以及载体的传统助料。
本发明的化妆品组合物可制备成本领域的任意配方产品。优选地，化妆品组合物可配制成如下剂型，该剂型选自由护肤乳液，营养乳液，营养霜，按摩霜，滋养精华，面膜，打底霜，粉底，身体油，发油，香波和柔顺剂组成的组。
本发明的化妆品组合物，其包含一种或多种本发明的细胞系、其提取物、溶解产物和培养物，具有抗氧化作用，因而具有清除皮肤自由基和保护细胞内抗氧化系统的作用。因此，本发明的化妆品组合物能够显示出阻止和延缓，由如自由基氧化导致的皮肤老化的作用。
在另一个方面，本发明涉及包含一种或多种来自人参形成层的细胞系、其溶解产物、提取物和培养物作为活性成分的抗衰老或抗氧化功能性食品。
本文中所使用的术语“功能性食品”指的是通过加入本发明的细胞系、其溶解产物、提取物或培养物，使功能得到改进的食品。
【实施例】
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。可以理解的是，这些实施例仅用于对本发明的说明，不能理解为限制本发明的范围。
特别地，虽然下列实施例证实了来自人参形成层的细胞系的提取物和培养基具有皮肤抗衰老的效果，但对于本领域技术人员来说显然细胞系或其溶解产物的使用可以提供与其相同的结果。
【实施例1：来自野生人参形成层的细胞系的制备】
【1-1植物材料的制备】
图1(a)的“A”展示的是本发明中使用的野山参的典型特征。为了使用购买的野生人参主根，购买主根后，用自来水除去表面的泥土或其他污染物，用液体洗涤剂清洗主根表面。然后，可将主根处于自来水中。水洗的根组织放置在一个净化台的无菌烧瓶里，用70％乙醇消毒30秒到1分钟。然后，用无菌水冲洗，并用含有1-1.5％的次氯酸钠(Junsei，日本)的消毒液处理约5-15分钟。在这个时候，为了让消毒液有效地渗透到组织，往组织上加入几滴TWEEN 20(聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯，Junsei，日本)。在此之后，用无菌水冲洗该组织3-5次。为了防止消毒组织发生褐变，将消毒的主根放置在含有BIM(褐变抑制培养基)的抗氧化剂中，并摇晃培养基约30分钟至1小时。将培养的组织放在无菌滤纸上以除去水分。
所用的BIM的组成成分和成分浓度如表1中所示。
<表1>BIM的组成成分和成分浓度
在表1中，盐的量根据BIM的总体积加入。
为了防止上述处理后的材料褐变，该材料放置在一个装有含抗氧化剂的CS溶液(切割溶液，表2)的板里，并且去皮。然后，该材料切割成两个相等的部分，每个部分切成尺寸为0.5-0.7厘米(宽)×0.5-0.7厘米(长)×0.2-0.5毫米(厚)，每个切割块都含有一个具有活性分裂能力的形成层部分。图1(a)的“B”展示的是通过这种方法将野山参的主根切割成以上尺寸所得到的具有形成层的外植体。
<表格2>CS(切割溶液)
| 组成成分 | 浓度 |
| PVP(聚乙烯吡咯烷酮) | 0.5％(w/v) |
| 抗坏血酸 | 100mg/l |
| 柠檬酸 | 150mg/l |
【1-2：使用渗透剂对含有野山参主根的形成层的外植体的处理】
为坏死分化组织(即韧皮部，木质部，木髓等)并且只允许分生组织形成层存活，用渗透压对实施例1-1制备的外植体进行处理。将含有形成层的外植体放入上面盖有滤纸的预培养基(培养基1，表3)，放置在一个包含1M蔗糖溶液(Duchefa，荷兰)的烧瓶中，在冷态下用渗透压处理16-24小时。然后，将外植体在0.05M蔗糖溶液中处理5分钟，在0.1M蔗糖溶液中处理5分钟，来消除高浓度的蔗糖溶液所形成的压力。将已去除压力的含有形成层的外植体放入上面盖有滤纸的预培养基(培养基1)来除去水分。
<表格3>预培养基的成分(培养基1)
【1-3：对在含有野生人参形成层的外植体中的来源于形成层同源细胞系的诱导】
为了诱导具有细胞分裂能力的来源于形成层的同源细胞系，将实施例1-2中用渗透压处理的外植体转移到细胞系诱导培养基(培养基2，表格4)中。所用培养基的成分见下列表4。转移来的外植体在22±1℃的黑暗条件下进行培养。
<表4>用于诱导来源于形成层的细胞系的培养基的成分(培养基2)
| 成分 | 浓度和状态 |
| 盐 | 全强度WPM |
| 蔗糖 | 3％(w/v) |
| IAA(吲哚-3-乙酸) | 2mg/l |
| pH | 5.8 |
| 脱乙酰吉兰糖胶 | 0.3％(w/v) |
| 抗坏血酸 | 100mg/l |
| 柠檬酸 | 150mg/l |
如下列表5所示，将外植体直接转移入同源细胞系诱导培养基，不进行渗透处理，黄色的显色反应表示形成层处于转移后的初始阶段(2-3天)，然后随着时间推移，整个外植体变成黄色。为了诱导和增殖来源于形成层的细胞系，将已显示形成层黄色显色反应的外植体放入最佳培养基(培养基3)中次级培养进行来源于形成层的细胞系的分离和增殖，但褐变现象变得越严重，随着时间推移越没有出现除褐变以外的任何显色反应。
但是，在用渗透压处理并去除后，据观察，如表5所示，在接种到同源细胞系诱导培养基的外植体中，只有形成层的同源细胞系特别地被诱导，而没有其他组织的细胞系。特别地，观察到在用渗透压处理过并释放了的转移的外植体中，在培养3-7天后外植体的形成层开始变为浅黄色，在大约7-14天后，圆形的细胞系在变为浅黄色的部分被诱导。图1(a)的“C”展示了具有形成层特别分化能力的同源细胞系在具有野山参形成层的外植体中被诱导。
同时，外植体培养在含有2，4-D的培养基中，该培养基不是同源细胞系诱导培养基并且已被用于人参包括人参和野山参的传统培养中。在这种情况下，我们观察到在培养7-10天后整个外植体开始变黄，约7-14天后，诱导细胞布满整个横截面。
<表5>用渗透压处理和不经渗透压处理的外植体的反应对比
【1-4：由野山参形成层分离的同源细胞系的增殖】
由来源于形成层的同源细胞系具有分裂的能力，在实施例1-3中被诱导的细胞系可以增殖。增殖中使用的培养基是对具有分化能力的来源于形成层的同源细胞系的增殖最佳的(表格7)，其含有基础的盐组合物(表格6)。
<表格6>基础盐组合物，对具有分化能力的来源于形成层的同源细胞系的分离和增殖最佳的培养基
<表格7>对于具有分裂能力的来源于形成层的同源细胞系的分离和增殖最佳的培养基组合物(培养基)
| 成分 | 浓度和状态 |
| 盐 | 全强度MS |
| 蔗糖 | 3％(w/v) |
| 2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸) | 2mg/L |
| pH | 5.8 |
| 脱乙酰吉兰糖胶 | 0.3％(w/v) |
| 抗坏血酸 | 100mg/L |
| 柠檬酸 | 150mg/L |
如图1(a)中“C”所示，同源细胞系用渗透压和培养基2处理并且只在特定的形成层增殖之后，同源细胞系在表格7所示的培养基3中进行次培养。结果，来源于形成层的同源细胞系具有继续分裂和增殖的能力，之后培养约10-20天，具有分裂能力的来源于形成层的同源细胞系可以被分离出来。来源于野山参形成层的同源细胞系可以在相同的培养基中培养来再次增殖。图1(a)的“D”展示了经分离的形成层特定同源细胞系可以在培养基3中增殖。
【1-5：经分离的细胞系的特征观察】
将来源于野山参形成层的同源细胞系放置在表格8所示的液体培养基的烧瓶中。随后在25±1℃的黑暗条件下在旋转搅拌器中以100rpm对细胞系进行培养。在此，次级培养的间隔设为2周，这样一来培养的细胞在指数生长期可以保持高活力。同时，也将来源于人参子叶的愈合组织在表格8所示的培养基4中进行培养，与本发明的来源于野山参形成层的同源细胞系进行对比。
<表格8>人参的悬浮培养基(培养基4)
| 成分 | 浓度和条件 |
| 盐 | 全强度MS |
| 蔗糖 | 3％(w/v) |
| 2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸) | 2mg/L |
| pH | 5.8 |
在光学显微镜下观察细胞聚集的量(生物显微镜CX31，Olympus，日本)，结果，可以看到，如下表格9中所示的，超过90％的本发明的细胞系细胞在悬浮培养基中以单个细胞状态存在。如图1(b)中所示，我们观察到本发明的细胞系的形态特征是存在很多液泡，并且处于未分化状态。
<表格9>人参长期培养基的细胞聚集类型
同时，为考察将培养基扩大的可能性，将来源于人参子叶的愈合组织和本发明的来源于野山参形成层的细胞系放在内体积为3L的气升式生物反应器(Sung-Won Cytec，韩国)中培养。使用的培养基是表格8所示的液体培养基，并保持在25±1℃的黑暗条件下。
结果如表格10中所示，来源于人参子叶的愈合组织的倍增时间在烧杯中是21天，反应器中28天。也就是说，我们看到当在烧瓶中培养时，与来自除形成层以外的其他组织的细胞系相比较，本发明的来源于形成层的细胞系显示出约高3-5成的生长速度，当在反应器中培养时，与来自除形成层以外的其他组织的细胞系相比较，本发明的来源于形成层的细胞系显示出高5-9成的生长速度。我们相信异源细胞系的细胞活力快速下降是由于在反应器产生生长轮，植物细胞在培养基中聚集，以及硬细胞壁对切应力的敏感性。
同时，本发明的来源于形成层的细胞在反应器中的倍增时间是3-4天，与在烧瓶中并无区别或区别很小。来源于形成层的同源细胞培养基在生物反应器中形成了一个非常小的环形生长区域，并且当摇晃培养基时生长区域受到简单刺激，在内壁的环就被轻易消除了。并且，本发明的细胞系显示出低聚集度并且含有大量的液泡，因此对切应力具有低敏感度，所以细胞活力没有减少。也就是说，我们看到本发明的来源于形成层的细胞系对由于扩大培养基所致的生物反应器摇晃产生的切应力具有低敏感性，因此可以在生物反应器内大量快速地生产。因此，可以看到与源自除形成层以外的其他组织的细胞系相比，本发明的来源于形成层的细胞系具有低5-9成的切应力敏感度。
<表格10>来源于野山参形成层细胞系和来源于子叶细胞系在液体悬浮培养基和生物反应器中的倍增时间
【1-6：用诱导子处理】
将实施例1-5中所述的在悬浮培养基中培养14天的细胞系分为3组做实验。
也就是说，收集下列细胞系做接下来的实验：(1)在悬浮培养基中培养14天的细胞系(生长阶段)，(2)将悬浮培养基中培养14天的细胞系在黑暗条件下在一种培养基(含有无菌水、3-5wt％(g/L)粗糖和100μM茉莉酮酸甲酯)中培养14天得到的细胞系(诱导1)，以及(3)将悬浮培养基中培养14天的细胞系在黑暗条件下在一种培养基(含有100μM茉莉酮酸甲酯)中培养14天得到的细胞系(诱导2)。
【实施例2：来源于野山参形成层细胞系的提取物的制备】
按以下方式从实施例1制备的3种细胞系中提取活性物质：
(1)DMSO(二甲基亚砜)提取物的制备
(i)取去除培养基的细胞系每种500g，将冻干细胞系溶解在500mlDMSO中，50℃下搅拌6个小时。
(ii)完成溶解后，细胞溶解液以3000g离心10分钟，收集上清液，即获得DMSO溶解物质。
(iii)得到的DMSO溶解物质用旋转真空浓缩器进行浓缩。
(iv)用冻干机将经浓缩的样品干燥，即获得DMSO提取物。
(2)蒸馏水提取物、甲醇提取物和丙酮提取物的制备
(i)取去除培养基的细胞系每种500g，将冻干细胞系溶解在500ml蒸馏水中，50℃下搅拌6个小时。
(ii)完成溶解后，细胞溶解液以3000g离心10分钟，收集上清液，即获得蒸馏水溶解物质。
(iii)得到的蒸馏水溶解物质后，剩余的蒸馏水不溶物质用500ml甲醇在室温下搅拌6个小时进行溶解。
(iv)完成溶解后，将溶解液以3000g离心10分钟，收集上清液，即获得甲醇溶解物质。
(v)得到的甲醇溶解物质后，剩余的甲醇不溶物质用500ml丙酮在室温下搅拌6个小时进行溶解。
(vi)完成溶解后，将溶解液以3000g离心10分钟，收集上清液，即获得丙酮溶解物质。
(vii)按上述方法得到的蒸馏水溶解物、甲醇溶解物、丙酮溶解物用旋转真空浓缩器进行浓缩。
(viii)用冻干机将经浓缩的样品干燥并溶解在蒸馏水、甲醇和丙酮中，即获得蒸馏水提取物、甲醇提取物和丙酮提取物。
(3)对照物的制备
(i)将500g冻干野山参根溶解在500ml DMSO中，在50℃下搅拌6个小时。
(ii)完成溶解后，将溶解液以3000g离心10分钟，收集上清液，即获得DMSO溶解的物质。
(iii)用旋转真空浓缩器浓缩蒸馏水溶解物。
(iv)用冻干机将经浓缩的样品干燥，即获得野山参的DMSO提取物作为对照物。
【实施例3：细胞毒性检测】
为了确定测试所用样品的浓度，用以下方式进行细胞毒性检测。
测试所用的NHF(正常人体成纤维细胞)是从胎儿的包皮分离出来并进行培养。所用的细胞培养基是在DMEM培养基(InvitrogenGibco life tech.Vienna，Austriea)中加入了10％胎牛血清(FBS，Hyclone，Logan，犹他州，美国)，通过加热至56℃失活30分钟，100单元/ml青霉素，100μg/ml链霉素和300μg/ml谷氨酸。将细胞放入上述培养基中，在5％CO2培养箱中37℃、相对湿度95％的条件下培养，并且在细胞互相融合之前立即进行3-4天周期的次级培养。本测试实验用的NHF细胞和实施例4和5的NHF细胞如下。
将NHF(p5)细胞(正常人体成纤维细胞)分配在密度为5000细胞/孔的96孔微量滴定板里，24小时后，分别用各种浓度(来源于野山参形成层细胞系的湿和干的DMSO提取物：ppm；细胞系的培养基：％)实施例2制备的DMSO提取物和来源于野山参形成层细胞系的培养基进行处理。随后，可进行细胞增殖。对照组所用的细胞不用提取物或培养基处理。接下来，WST-1溶液被稀释100倍并加入微量滴定板的每一个孔中，2小时后，测量微量滴定板的吸光度。
结果如下表格11和图2中所示，提取物和培养基在实验所用的浓度范围内不显示毒性。提取物或培养基显示有80％的细胞存活率，确定为无毒性。表格11中，“诱导1”指的是用3-5wt％(g/L)粗糖和100μM茉莉酮酸甲酯处理的实施例1-6的细胞系DMSO提取物，“诱导2”指的是用100μM茉莉酮酸甲酯处理的实施例1-6的细胞系DMSO提取物，“生长”指的是14天悬浮培养细胞系(生长阶段)的DMSO提取物，“培养基”指的是在细胞系提取物的制备中去除的培养基。
<表格11>来源于野山参形成层的同源细胞系的提取物或培养基的细胞毒性检测
【实施例4：成纤维细胞增殖效果的检测-抗老化效果的检测】
将正常人体成纤维细胞(NHF细胞)放入含有3.5％FBS的DMEM培养基(Doubecco′s改良的Eagle′s培养基)中被5,000细胞/孔的96-孔微量滴定板中分发并且断食24小时。随后，在0.5％FBS最低基本培养基中用各种浓度(来源于野山参形成层细胞系的湿和干的DMSO提取物：ppm；细胞系的培养基：％)实施例2制备的DMSO提取物或来源于野山参形成层细胞系的培养基处理这些细胞48小时。
培养细胞完成后，将WST-1溶液稀释100倍并放入微量滴定板中，2小时后，将50μl的2％MTT(3-[4，5-二甲基噻唑-2-]-2，5-二苯基四唑溴化物)溶液加入微量滴定板的每个孔中。随后，在37℃下培养细胞4个小时，并将生产的甲溶解在DMSO(二甲基亚砜)中。使用全自动定量绘图酶标仪在570nm测量所溶解的甲的吸光度。将用来源于野山参形成层细胞系提取物或培养基处理的测试组和没有用提取物或培养基处理的对照物进行对比，所得结果如下列表格12中所示。表格12中，“10％FBS”指的是在10％FBS的培养基中进行细胞培养，该浓度是动物细胞培养的最高生长速率的营养基浓度，“对照物”指的是阴性对照组，指在没有添加细胞系提取物或培养基的0.5％FBS基本培养基中对细胞进行培养。
<表格12>来源于野山参形成层的同源细胞系提取物或培养基对成纤维细胞增殖的效果
由表格12和图3可以看出，本发明的细胞系提取物和培养基对成纤维细胞增殖有效果，特别地与对照物不同的是，冻干细胞系提取物(干)对成纤维细胞增殖具有很好的效果。
并且，将不同阶段的冻干细胞系提取物(干)进行相互比较，诱导-1阶段的提取物对成纤维细胞的增殖具有最好的效果，诱导-2和生长阶段的提取物对成纤维细胞的增殖具有相似的效果。也就是说，我们发现由于成纤维细胞合成胶原(皮肤真皮基本成分)，本发明的细胞系提取物具有增加皮肤弹性的效果。
【实施例5：对由UV辐射引起的MMP-1增加的抑制效果的检测-抗老化效果的检测】
由于暴露于UV辐射下MMPs增加，增加的MMPs会降解皮肤胶原使皮肤产生皱纹。这样一来，为了检测来源于野山参形成层的同源细胞系是否具有抑制由UV辐射引起的MMP-1增加的效果，进行以下测验。
将NHF(p6)细胞分配在密度为75,000细胞/孔的12孔微量滴定板中，并断食24小时。随后，用40mj的UVB辐射细胞并且分别用各种浓度的样品处理48小时。接下来，使用一种试剂盒(Amersham，RPN 2610)进行试验，阳性对照物使用10μM的维生素A酸。
<表格13>来源于野山参形成层的同源细胞系对由UV辐射引起的MMP-1增加的抑制效果
结果，如表格13和图4中所示，与阴性对照组(对照物UV)相比，本发明的细胞系提取物和培养基对MMP-1表现具有有效的抑制作用，表明它们具有阻止和减少皱纹的效果。特别地，当分别用0.1％诱导1和诱导2的粗糖和茉莉酮酸甲酯处理，即只用茉莉酮酸甲酯处理NHF(p6)细胞，与类维生素相比，这些细胞系培养基显示出非常优秀的皱纹减少效果。
【实施例6：对由UV辐射引起的活性氧的抑制效果测试-抗氧化效果的测试】
为了检测来源于野山参形成层的同源细胞系的提取物或培养基是否具有抑制由UV辐射引起的活性氧的效果，将人角化HaCaT细胞(德国癌症研究所，Heidelberg，德国)分配在密度为30,000细胞/孔的96孔黑色微量滴定板中，并用各种浓度的样品处理3个小时。3个小时过后，用HBSS清洗微量滴定板一次，用50μM DCF处理每一个孔并且在37℃下培养20分钟。当用HBSS清洗微量滴定板两次后，用发光体测量细胞的初始吸光度。用30mJ的UVB对细胞进行辐射，并在37℃下培养2个小时，随后测量吸光度。在下列表格14中，“对照物”指的是没有用样品和UVB处理的组，“UVB”指的是只用UVB没有用样品处理的组。
<表格14>来源于野山参形成层的同源细胞系对由UV辐射引起的活性氧的抑制效果
结果，如表格14和图5中所示，如果使用培养基已被去除的本发明的细胞系(湿)以及使用本发明的冻干细胞系(干)，诱导1的细胞提取物显示出优秀的抗氧化效果。诱导2和生长阶段的细胞系提取物显示出相似的抗氧化效果。并且，用50ppm的诱导1的冻干细胞系提取物处理的组，显示出最好的抗氧化效果。
【实施例7：人参皂苷的成分分析】
众所周知野山参提取物中的人参皂苷成分对预防皮肤老化和抗氧化是有效的。因此，为了考察本发明的细胞系提取物和培养基对皮肤的抗老化和抗氧化效果是否是由于这些人参皂苷成分，我们进行人参皂苷的成分分析。特别地，用600μl甲醇对实施例2制备的来源于野山参形成层同源细胞系和冻干野山参，以及20mg冻干细胞系进行1个小时的提取。对提取液进行离心并提取上清液。使用HPLC对所得提取液的人参皂苷成分进行测试，将所测量的成分与标准Re，Rb1，Rb2和Rd进行对比。并且，使用0.2μm的注射过滤器对诱导1的培养基进行过滤，使用HPLC对所含人参皂苷成分进行测量。所测量的成分显示与标准Re，Rb1，Rb2和Rd进行比较。
<表格15>来源于野山参形成层同源细胞系和培养基和野山参之间的人参皂苷成分对比
结果，如表格15中所示，诱导2的细胞系具有最高的人参皂苷含量，但对照组野山参提取物的人参皂苷成分比来源于野山参形成层细胞系的高出167倍。并且，来源于野山参形成层细胞系的成长阶段或培养基中没有检测到人参皂苷。这表示本发明的细胞系提取物和培养基对皮肤的抗老化和抗氧化效果不是由于这些人参皂苷成分，用本发明的方法提取到的细胞系含有与传统野山参细胞不同的活性物。
【实施例8：对由UV辐射引起的胶原蛋白酶(MMP-1)产生的抑制效果的检测(2)】
为了对本发明的来源于野山参形成层细胞系与栽培的野山参的抗老化活性进行比较，由Kyung Hee大学皮肤生物技术中心根据该中心的标准操作准则进行下面的实验。
首先，将成纤维细胞(MCTT，韩国)种植在密度为2x104细胞/孔的24孔微量滴定板中，培养12个小时使其粘附在培养板上。随后，把细胞放在无FBS的培养基中断食12个小时。用DPBS缓冲液冲洗细胞并用100mJ/cm2的365nm UV辐照。然后在无FBS培养基中分别用1、10和50pm的实施例2的冻干细胞系(用3-5wt％(g/L)的粗糖和100μM的茉莉酮酸甲酯处理的)的DMSO提取物(诱导1)处理细胞或分别用0.05、0.1和1体积％的实施例2的培养基处理细胞24个小时。同时，阳性对照细胞是用1μM的维生素A酸处理，附加的对照细胞是分别用1、10和50ppm的实施例2的冻干野山参根的DMSO提取物进行处理。然后，分别收集各个培养基并进行离心，用酶联免疫吸附法(Amersham)测试上清液中的MMP-1含量。用WST-1溶液测量细胞活性并校正。
结果，如图6所示，本发明的细胞系提取物显示的抑制MMP-1活性为约55％(1ppm)，约67％(10ppm)和约83％，细胞系培养基显示的抑制MMP-1活性为约49％(0.05体积％)，约63％(0.1体积％)和70％(1体积％)。并且，当用10ppm或50ppm的细胞系提取物或0.1体积％或1体积％的培养基处理细胞，我们发现与已知具有优秀抗老化效果的阳性对照RA相比，细胞系提取物和培养基表现出优秀的抗老化效果。
特别地，与对照组(野外栽培野山参根的冻干DMSO提取物)相比，本发明的细胞系提取物和培养基对MMP-1的抑制表现出显著优秀的效果。特别地，比种植的野山参，细胞系提取物的抑制MMP-1能力提高了27-51％，细胞系提取物的抑制MMP-1能力提高了16-27％。
因此，我们发现与已知具有优秀抗老化效果的RA和野山参提取物相比，本发明的细胞系提取物和培养基表现出非常优秀的抗老化效果，表明本发明的细胞系提取物和培养基作为抗老化组分是非常有用的。
【实施例9：对由UV辐射引起的活性氧的去除效果的检测(2)】
为了对本发明的来源于野山参形成层细胞系的抗老化活性与野外栽培野山参的抗老化活性进行比较，由Kyung Hee大学皮肤生物技术中心根据该中心的标准操作准则进行下面的实验。
首先，将人类角质形成细胞HaCaT细胞(德国癌症研究所，Heidelberg，德国)培养在含10％FBS的DMEM培养基中。将细胞种植在密度为3x104细胞/孔的96孔微量滴定板中，培养12个小时使其粘附在培养板上。随后，在无FBS的DMEM培养基中分别用1、10和50ppm的实施例2的冻干细胞系(用3-5wt％(g/L)的粗糖和100μM的茉莉酮酸甲酯处理的)的DMSO提取物(诱导1)处理细胞或分别用1、5和10体积％的实施例2的培养基处理细胞3个小时。同时，用10mM NAC(N-乙酰-半胱氨酸)处理阳性对照细胞，分别用1、10和50ppm的实施例2的冻干野山参根的DMSO提取物附加处理对照细胞。
随后，用HBSS缓冲液冲洗细胞并用50μM F-DA(HBSS)在37℃培养20分钟。然后用HBSS缓冲液冲洗细胞两次，加入30μl的HBSS，用200mJ/cm2的UV 365nm辐射细胞。随后在37℃下培养细胞2个小时，并用荧光(激发波长，485nm；发射波长，535nm；Infinite M-200，，Tecan)进行检测，用WST-1溶液测量细胞活性并校正。每组样品的活性氧去除效果与未经UV辐射的进行比较，荧光为100。
如图7中所示，将样品的活性氧去除能力与阴性对照组(UV辐照组)相比，作为对照组的野山参提取物显示出17-26％的抑制活性，然而本发明的细胞系提取物和培养基分别显示出28-36％和35-58％的更增强的抑制活性。因此，我们发现本发明的细胞系提取物和培养基比栽培的野山参的提取物具有更有效的抗氧化效果。
【实施例10：药物产品的制备】
【配方1：片剂的制备】
将100mg实施例2制备的细胞系提取物与100mg玉米淀粉、100mg乳糖以及2mg硬脂酸镁混合，其混合物根据传统方法压制成片剂。
【配方2：胶囊剂的制备】
将500mg实施例2制备的细胞系提取物装入软明胶胶囊中，即制得胶囊产品。
【配方3：糖制剂的制备】
将1g实施例1制备的细胞系与10g异构糖、5g甘露醇和适量的纯化水混合，根据传统方法将该混合物制备成100ml糖制剂。
【配方4：注射液的制备】
将200mg实施例2的细胞系提取物加热并分散在200mg的含聚氧乙烯氢化蓖麻油的生理盐水中，即制成含提取物浓度0.1％的注射液。
【实施例11：化妆产品的制备】
【配方1】
【护肤液的制备】
| 成分 | 重量％ |
| 野山参细胞系提取物或其培养基 | 0.1 |
| 甘油 | 3 |
| 丁二醇 | 2 |
| 丙二醇 | 2 |
| 聚羧乙烯 | 0.1 |
| PEG 12乳化剂 | 0.2 |
| 聚山梨醇酯80 | 0.4 |
| 乙醇 | 10 |
| 三乙醇胺 | 0.1 |
| 防腐剂，颜料，香料 | 适量 |
| 纯化水 | 至100 |
【配方2】
【奶状乳液的制备】
| 成分 | 重量％ |
| 野山参细胞系提取物或其培养基 | 0.5 |
| 角鲨烯 | 5 |
| 蜂蜡 | 4 |
| 聚山梨醇酯60 | 1.5 |
| 失水山梨糖醇倍半油酸酯 | 1.5 |
| 液体石蜡 | 0.5 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 5 |
| 甘油 | 3 |
| 丁二醇 | 3 |
| 丙二醇 | 3 |
| 聚羧乙烯 | 0.1 |
| 三乙醇胺 | 0.2 |
| 防腐剂，颜料，香料 | 适量 |
| 纯化水 | 至100 |
【配方3】
【营养霜的制备】
| 成分 | 重量％ |
| 野山参细胞系提取物或其培养基 | 2 |
| 蜂蜡 | 10 |
| 聚山梨醇酯60 | 1.5 |
| PEG 60氢化蓖麻 | 2 |
| 失水山梨糖醇倍半油酸酯 | 0.5 |
| 液体石蜡 | 10 |
| 角鲨烯 | 5 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 5 |
| 甘油 | 5 |
| 丁二醇 | 3 |
| 丙二醇 | 3 |
| 三乙醇胺 | 0.2 |
| 防腐剂，颜料，香料 | 适量 |
| 纯化水 | 至100 |
【配方4】
【按摩霜的制备】
| 成分 | 重量％ |
| 野山参细胞系提取物或其培养基 | 5 |
| 蜂蜡 | 10 |
| 聚山梨醇酯60 | 1.5 |
| PEG 60氢化蓖麻 | 2 |
| 失水山梨糖醇倍半油酸酯 | 0.8 |
| 液体石蜡 | 40 |
| 角鲨烯 | 5 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 4 |
| 甘油 | 5 |
| 丁二醇 | 3 |
| 丙二醇 | 3 |
| 三乙醇胺 | 0.2 |
| 防腐剂，颜料，香料 | 适量 |
| 纯化水 | 至100 |
【配方5】
【面膜的制备】
| 成分 | 重量％ |
| 野山参细胞系提取物或其培养基 | 5 |
| 聚乙烯醇 | 13 |
| 羧甲基纤维素钠 | 0.2 |
| 甘油 | 5 |
| 1-脲基间二氮杂环戊烷-2，4-二酮 | 0.1 |
| 乙醇 | 6 |
| PEG 12乳化剂 | 0.3 |
| 聚山梨醇酯60 | 0.3 |
| 防腐剂，颜料，香料 | 适量 |
| 纯化水 | 至100 |
【实施例12：功能性食品的制备：功能饮料的制备】
【制备例1】
将200mg实施例1制备的细胞系溶解在96ml水中，加入500mg维生素C作为添加剂，柠檬酸和低聚糖各1g作为香味促进剂，0.05g苯甲酸钠作为防腐剂。随后加入纯化水，即得到100ml的功能饮料。
【制备例2】
将实施例2制备的200mg细胞系提取物溶解在96ml水中，加入500mg维生素C作为添加剂，柠檬酸和低聚糖各1g作为香味促进剂，0.05g苯甲酸钠作为防腐剂。随后加入纯化水，即得到100ml的功能饮料。
【工业实用性】
如上所述，与现存的抗老化剂和抗氧化剂相比，本发明的组合物具有最小的副作用，因此对皮肤是安全的。并且，本发明的组合物显示出抑制由UV辐射引起的活性氧的抗氧化效果，活性氧是皮肤老化的主要原因，本发明的组合物可以有效地减少或抑制与衰老有关的因素。因此，本发明的组合物对预防和抑制老化是有用的。
虽然本发明详细地说明了特定特征，但很显然对于本领域技术人员来说这些说明仅仅是涉及优选的实施例，并不能限制本发明的范围。因此，本发明的实质范围将由附加的权利要求及其等同内容来确定。
Claims (13)
1.来源于人参的形成层并具有以下特征的任意一种或多种细胞系、其提取物、其溶解产物以及其培养物用于生产抗老化或抗氧化组合物的用途：
(a)处于固有未分化的状态；
(b)是同源细胞系；并且
(c)形态学上的特点是有很多液泡，且
其中该细胞系是使用包含以下步骤的分离方法获得：
(i)获得含有人参形成层的贮藏根组织；
(ii)向获得的含有形成层的贮藏根组织施加渗透压，然后在含有吲哚-3乙酸或吲哚-3丁酸的培养基中培养含形成层的贮藏根组织，从而诱导来源于形成层的细胞系；及
(iii)收集诱导的来源于形成层的细胞系。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该细胞系进一步具有：
(a)在悬浮培养基中是单细胞形态；
(b)与来自人参的形成层以外组织的细胞系相比，在生物反应器中对切应力具有低敏感性，以及
(c)与来自人参的形成层以外组织的细胞系相比，具有较高的生长速度，并且培养稳定。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，通过在培养基中培养细胞系获得该培养物，上述培养基含有3-5wt％糖；或至少一个选自由甲基茉莉酮酸酯、真菌提取物、细菌提取物、酵母提取物、壳聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水杨酸、花生四烯酸、星状孢子素、甲羟戊酸盐、N-苯甲酰甘氨酸、脱落酸、硝普钠、异戊烯焦磷酸、丁基化羟基甲苯、2-氯乙基三甲基氯化铵、乙烯利、马尿酸、硝酸铈铵、硝酸银、硫酸氧钒、对氨基苯甲酸、油菜素内酯、海藻酸钠和乙酸钠组成的组中的物质。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，人参是野山参。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该提取物是使用选自由蒸馏水、乙醇、丙酮、二甲基亚砜及其混合溶剂组成的组的溶剂获得。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，提取物是用蒸馏水，甲醇，丙酮按顺序分馏细胞系而获得。
7.来源于人参的形成层并具有以下特征的任意一种或多种细胞系、其提取物、其溶解产物以及其培养物用于生产抗老化化妆品组合物的用途：
(a)处于固有未分化的状态；
(b)是同源细胞系；并且
(c)形态学上的特点是有很多液泡，且
其中该细胞系是使用包含以下步骤的分离方法获得：
(i)取得含有人参形成层的贮藏根组织；
(ii)向取得的含有形成层的贮藏根组织施加渗透压，然后在含有吲哚-3乙酸或吲哚-3丁酸的培养基中培养含形成层的贮藏根组织，从而诱导来源于形成层的细胞系；及
(iii)收集诱导来源于形成层的细胞系。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，该细胞系进一步具有：
(a)在悬浮培养基中是单细胞形态；
(b)与来自人参的形成层以外组织的细胞系相比，在生物反应器中对切应力具有低敏感性，以及
(c)与来自人参的形成层以外组织的细胞系相比，具有较高的生长速度，并且培养稳定。
9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，通过在培养基中培养细胞系获得该培养物，上述培养基舍有3-5wt％糖，或至少一个选自由甲基茉莉酮酸酯、真菌提取物、细菌提取物、酵母提取物、壳聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水杨酸、花生四烯酸、星状孢子素、甲羟戊酸盐、N-苯甲酰甘氨酸、脱落酸、硝普钠、异戊烯焦磷酸、丁基化羟基甲苯、2-氯乙基三甲基氯化铵、乙烯利、马尿酸、硝酸铈铵、硝酸银、硫酸氧钒、对氨基苯甲酸、油菜素内酯、海藻酸钠和乙酸钠组成的组中的物质。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的用途，其特征在于，所述抗老化化妆品组合物抑制MMP-1生成。
11.来源于人参的形成层并具有以下特征的任意一种或多种细胞系、其提取物、其溶解产物以及其培养物用于生产抗老化或抗氧化功能食品组合物的用途：
(a)处于固有未分化的状态；
(b)是同源细胞系；并且
(c)形态学上的特点是有很多液泡，且
其中该细胞系是使用包含以下步骤的分离方法获得：
(i)取得含有人参形成层的贮藏根组织；
(ii)向取得的含有形成层的贮藏根组织施加渗透压，然后在含有吲哚-3乙酸或吲哚-3丁酸的培养基中培养含形成层的贮藏根组织，从而诱导来源于形成层的细胞系；及
(iii)收集诱导的来源于形成层的细胞系。
12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，该细胞系进一步具有：
(a)在悬浮培养基中是单细胞形态；
(b)与来自人参的形成层以外组织的细胞系相比，在生物反应器中对切应力具有低敏感性，以及
(c)与来自人参的形成层以外组织的细胞系相比，具有较高的生长速度，并且培养稳定。
13.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，通过在培养基中培养细胞系获得该培养物，上述培养基含有3-5wt％糖；或至少一个选自由甲基茉莉酮酸酯、真菌提取物、细菌提取物、酵母提取物、壳聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水杨酸、花生四烯酸、星状孢子素、甲羟戊酸盐、N-苯甲酰甘氨酸、脱落酸、硝普钠、异戊烯焦磷酸、丁基化羟基甲苯、2-氯乙基三甲基氯化铵、乙烯利、马尿酸、硝酸铈铵、硝酸银、硫酸氧钒、对氨基苯甲酸、油菜素内酯、海藻酸钠和乙酸钠组成的组中的物质。
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