CN102147416B - 稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂。本发明通过在二硫苏糖醇试剂中加入少量非离子型表面活性剂，大大降低了试剂中DTT与游离氧的结合，从而减缓DTT氧化的速度，显著提高试剂的稳定性。同时，通过增加DTT的浓度，在一定程度上也提高试剂盒的稳定性。本发明试剂盒室温开瓶避光保存稳定30天，2-8℃闭瓶保存稳定12个月，完全满足临床检验的需要。
Description
技术领域
本发明涉及生物化学试剂领域，具体的，涉及一种稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒。
背景技术
缺血修饰白蛋白（Ischemia-modified albumin，简称IMA）是在机体发生缺血或再灌注时，由于自由基等破坏了血清白蛋白的氨基酸序列，导致白蛋白与过渡金属的结合能力改变，而产生的与过渡金属结合能力改变的白蛋白。
1990年，Bar．Or等最早应用白蛋白钴结合试验(albumin cobalt binding test，ACB)来测定血浆IMA浓度。即样本与第一试剂中的氯化钴(CoC12)溶液混合时，Co2 +与结合能力正常的白蛋白结合，加入第二试剂后，游离Co2 +与二硫苏糖醇(DTT)结合产生红色反应，在505nm处检测吸光度。而当机体缺血时，血浆中的白蛋白多处于修饰状态结合Co2 +能力降低，溶液中游离Co2+的浓度就相对较高，与DTT结合产生的显色反应更明显。故IMA含量与颜色程度呈正比，通过与一定浓度的标准品比较，从而间接对IMA进行定量测定。
目前国内外普遍采用检测IMA的试剂盒由液体双试剂组成。第一试剂中为钴离子试剂，第二试剂为二硫苏糖醇试剂。但由于DTT本身是一种很强的还原剂，容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差。目前国外销售的ACB® Test试剂盒，因为DTT易氧化分解，有效期只有14天。
发明内容
本发明的目的在于提供稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，该试剂盒稳定性好，室温开瓶避光保存稳定30天，2-8℃闭瓶保存稳定12个月，完全满足临床检验的需要。
本发明的目的通过下述技术方案实现：稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂组成，
所述钴离子试剂，其组分成分（按重量百分数）是：
六水合氯化钴
0.001%~0.1%
叠氮钠
0.01%~1%
三羟甲基氨基甲烷缓冲液
0.5%~10%
纯化水
88.9%~99.489%，
所述二硫苏糖醇试剂，其组成成分（按重量百分数）是：
二硫苏糖醇
0.05%~1%
叠氮钠
0.01%~1%
稳定剂
0.01%~1%
咪唑缓冲溶液
0.5%~10%
纯化水
87%~99.43%，
并且，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂的体积的混合比例为1:1~4:1。
进一步的，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂的体积的混合比例为3:1。
进一步的，所述稳定剂是曲拉通，聚氧化乙烯烷基酚醚和十二烷基苯磺酸钠中的一种。
本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
（1）、本发明通过在二硫苏糖醇试剂中加入少量非离子型表面活性剂，大大降低了试剂中DTT与游离氧的结合，从而减缓DTT氧化的速度，显著提高试剂的稳定性。
（2）、本发明通过增加DTT的浓度，在一定程度上也提高试剂盒的稳定性。
（3）、本发明试剂盒稳定性好，室温开瓶避光保存稳定30天，2-8℃闭瓶保存稳定12个月，完全满足临床检验的需要。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
本发明包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂，其体积混合比例为：钴离子试剂，50%；二硫苏糖醇试剂，50%。
试剂1：钴离子试剂（按重量百分数），其组分成分是：
六水合氯化钴
0.001%
叠氮钠
0.01%
三羟甲基氨基甲烷缓冲液
0.5%
纯化水
99.489%
将上述成分混合后即钴离子试剂。
试剂2：二硫苏糖醇试剂（按重量百分数），其组成成分是：
二硫苏糖醇
0.05%
叠氮钠
0.01%
曲拉通
0.01%
咪唑缓冲溶液
0.5%
纯化水
99.43%
将上述组分混合后即二硫苏糖醇试剂。
将上述组成成分的试剂盒于2-8℃储存，6个月后测定纯化水，(此时吸光度最大且稳定便于观察）。在37℃条件下，用分光光度计，在505nm的波长下连续测定反应溶液的吸收情况，记录吸光度。以储存试剂中剩余DTT的浓度（相对百分数表示）。结果见表1 。
表1 曲拉通对试剂盒稳定的影响
| 稳定剂 | 浓度（%） | DTT剩余率（%） |
| 无 | 无 | 46.1 |
| 曲拉通 | 0.05 | 95.3 |
上述结果表明通过添加少量的曲拉通可以大幅度降低DTT被消耗的速度，可以有效的提高缺血修饰白蛋白测定试剂的稳定性。
实施例2
本发明包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂，其其体积混合比例为：钴离子试剂，65%；二硫苏糖醇试剂，35%。
钴离子试剂（按重量百分数），其组分成分是：
六水合氯化钴
0.05%
叠氮钠
0.51%
三羟甲基氨基甲烷缓冲液
5%
纯化水
94.44%
将上述成分混合后即钴离子试剂。
试剂2、二硫苏糖醇试剂（按重量百分数），其组成成分是：
二硫苏糖醇
0.51%
叠氮钠
0.51%
聚氧化乙烯烷基酚醚
0.51%
咪唑缓冲溶液
5%
纯化水
93.47%
将上述成分混合后即二硫苏糖醇试剂。
将上述组成成分的试剂盒置于2-8℃储存6个月后测定纯化水。在37℃条件下，用分光光度计，在505nm的波长下连续测定反应溶液的吸收情况，记录吸光度。以储存试剂中剩余DTT的浓度，以相对百分数表示。结果见表2 。
表2聚氧化乙烯烷基酚醚对试剂盒稳定性的影响
| 稳定剂 | 浓度（%） | DTT剩余率（%） |
| 无 | 无 | 46.1 |
| 聚氧化乙烯烷基酚醚 | 0.05 | 95.3 |
上述结果表明通过添加少量的聚氧化乙烯烷基酚醚可以大幅度降低DTT被消耗的速度，可以有效的提高缺血修饰白蛋白测定试剂的稳定性。
实施例3
本发明包括试剂1和试剂2，其其体积混合比例为：试剂1，80%；试剂2，20%。
试剂1：钴离子试剂（按重量百分数），其组分成分是：
六水合氯化钴
0.1%
叠氮钠
1%
三羟甲基氨基甲烷缓冲液
10%
纯化水
88.9%
将上述成分混合后即钴离子试剂。
试剂2、二硫苏糖醇试剂（按重量百分数），其组成成分是：
二硫苏糖醇
1%
叠氮钠
1%
十二烷基苯磺酸钠
1%
咪唑缓冲溶液
10%
纯化水
87%
将上述成分混合后即二硫苏糖醇试剂。
将上述组成成分的试剂盒置于2-8℃储存6个月后测定纯化水。在37℃条件下，用分光光度计，在505nm的波长下连续测定反应溶液的吸收情况，记录吸光度。以储存试剂中剩余DTT的浓度，以相对百分数表示。结果见表1。
表3 十二烷基苯磺酸钠对试剂盒稳定性的影响
| 稳定剂 | 浓度（%） | DTT剩余率（%） |
| 无 | 无 | 46.1 |
| 十二烷基苯磺酸钠 | 0.05 | 95.3 |
上述结果表明通过添加少量的十二烷基苯磺酸钠可以大幅度降低DTT被消耗的速度，可以有效的提高缺血修饰白蛋白测定试剂的稳定性。
如上，便可以很好的实现本发明。
Claims (2)
1.稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于：包括钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂，
所述钴离子试剂，其组分成分，按重量百分数是：
六水合氯化钴 0.001%~0.1%
叠氮钠 0.01%~1%
三羟甲基氨基甲烷缓冲液 0.5%~10%
纯化水 88.9%~99.489%，
所述二硫苏糖醇试剂，其组成成分，按重量百分数是：
二硫苏糖醇 0.05%~1%
叠氮钠 0.01%~1%
稳定剂 0.01%~1%
咪唑缓冲溶液 0.5%~10%
纯化水 87%~99.43%；
并且，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂在检测时的体积的混合比例为1:1~4:1，所述稳定剂是曲拉通，聚氧化乙烯烷基酚醚和十二烷基苯磺酸钠中的一种。
2.根据权利要求1所述的稳定的缺血修饰白蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述钴离子试剂和二硫苏糖醇试剂在检测时的体积的混合比例为3:1。
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Date of cancellation: 20171222 Granted publication date: 20150422 Pledgee: Chengdu technology transfer (Group) Co., Ltd. Pledgor: SICHUAN XINJIAN KANGCHENG BIOLOGICAL CO., LTD. Registration number: 2016990001096 |