CN102145022B - 一种具有增强免疫力和抗辐射作用的灵芝组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种以灵芝提取物和灵芝孢子油为主要原料制成的真菌组合物，以及所述的组合物在制备增强免疫力和抗辐射功能的保健药品中的应用。本发明活性成分中，灵芝提取物占15-35％，而灵芝孢子油占65-85％。与以单一灵芝或灵芝孢子粉为原料制成的保健品相比，功能更为强大，具有增强免疫力、对辐射危害有辅助保护的显著功能，尤其适宜于免疫力低下者、接触辐射者，而且本品在加工过程中采取了超临界CO₂萃取、超微纳米破壁和超声波萃取技术，提高灵芝组合物中活性成分的含量，使得原料损耗率小，活性成分不易分解，药效高，防止了对人和环境的污染，工艺稳定，具有可以工业化规模生产的特点。

Description

一种具有增强免疫力和抗辐射作用的灵芝组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及保健品领域，涉及保健品组合物，具体来说是一种具有增强免疫力和抗辐射作用的灵芝活性成分组合物及其提取制作工艺。

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)又称为瑞草、灵芝草，其英文名称为Reishimushroom，是我国传统的扶正固本、滋补强壮的中药，历代医书中将之列为中药中的上品。我国传统的中医药学称灵芝为：“性温、味甘、能益精气、强筋骨，主治心悸、失眠、健忘、神疲乏力等症。”现代研究表明灵芝具有抗肿瘤作用、降血糖作用、调节心血管系统和免疫调节、抗病毒等作用；还有在临床方面的应用，主要用于治疗慢性支气管炎、哮喘、消化不良、神经衰弱、冠心病、肝炎、高血脂、高血压、白细胞减少症、糖尿病、癌症、风湿性关节炎、过敏症、肾病等疾病；在保健食品方面主要用于免疫调节、护肝、改善睡眠、抗辐射和增强抵抗力等方面，灵芝具有上述功效的有效成分主要是灵芝多糖和三萜类物质(孢子油)。

免疫，即是人体对疾病的抵抗力，亦是机体的一种保护性功能。众所周知，人体的主要防线，是由数以百亿计的免疫细胞所组成，担负着防止病原微生物(指细菌、病毒等)侵入，识别和清除衰老及死亡的细胞、监视可能发生染色体畸变或基因突变细胞的任务，一旦发现这些异常现象，就能及时清除以防病变。人体免疫系统是抵御疾病侵袭的免疫屏障，由骨髓、淋巴结、扁桃体、淋巴组织等免疫器官及其产生的淋巴细胞和巨噬细胞等免疫细胞组成。医学研究证明，灵芝提取物、灵芝孢子油可有效提高免疫细胞的抗病能力；能消除免疫抑制剂对机体免疫系统的抑制；提高淋巴细胞活性，保护机体组织免受癌症等疾病侵袭，全面增强机体抵抗力。

核能的广泛使用使从事放射性工作的军事、医务、研究等人员，经常面临受辐射危害的可能。同时，日常生活中广泛存在的辐射源，对人们的健康也存在一定程度的影响。因此，能够生产出一种具有增强免疫力和抗辐射功能的天然中药制剂日益受到消费者的关注。

目前市场上销售的以灵芝/灵芝孢子粉为主要原料制成的保健食品不少，这类保健食品主要以单一灵芝或灵芝孢子粉为原料制成，产品成分标示物仅为单一成分灵芝多糖或灵芝三萜类物质(孢子油)，缺乏将灵芝提取物和灵芝孢子油共同作为活性成分提取而得到的产品。而且现有的制备工艺均为通用的多功能提取、烘箱干燥法工艺，由于多功能提取设备对活性成分选择性提取效率低、提取所得浸膏长期处于高温烘箱内干燥，故活性成分易受分解，导致药效有所降低。

下面对在中药有效成分的提取中常用的技术做一些介绍

A.超声波萃取

超声波是频率高于2万赫兹的声波，它具有频率高、波长短，传播方向性好、穿透力强等特点。超声波萃取设备通过配备的超声装置，在常、低温条件下，使用各种挥发性有机溶剂，可以从植物药材和药用真菌中提取各种有效成分。提取时间缩短，确保了连续化作业及动态逆流提取，提高生产效率，减少溶剂用量，降低提取温度，保证产品质量，增强产品功效。实现了连续化全封闭管道内作业，是一套高效、安全、环保的中药和药用真菌高精度萃取设备，广泛应用于使用各种溶剂从单味中药中提取各种天然有效成分，超声波连续逆流萃取生产线，实现了全程低温萃取，最大限度的保持中药和真菌多糖有效成分的活性，增强产品的功效，实现了中药西制，结束了高温萃取有效成分的活性被破坏，传统中药显效慢的历史。

B.超临界CO2萃取

超临界CO2流体萃取分离过程的原理，是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。对各压力范围所得到的萃取物不可能是单一的，但可控制条件得到最佳比例的混合成分，然后借助减压、升温的方法使超临界流体变成普通气体，被萃取物质则完全或基本析出，达到分离提纯的目的，所以超临界CO2流体萃取过程是由萃取和分离过程组合而成。

C.超微纳米破壁

20世纪90年代，人们才开始真正有效地对分离的纳米粒子进行研究，纳米是十亿分之一米，又称为超微粉或超细粉，一般指粒度在100纳米以下的粉末或颗粒，是介于原子、分子与宏观物体之间处于中间物态的固体颗粒材料，根据粉碎技术的深度和粉体物料物理化学性质及应用性能的变化，一般将细粉体和微细粉体分为10-1000μm(细粉)，加工0.1-10μ的超细粉体和相应的分级技术称为超微纳米破壁或超微纳米粉碎。

超微纳米破壁，是指利用机械超音速和流体动力的方法克服固体物料内部凝聚力使之破碎，外界激振力的作用，筒内介质进行自转和公转，对物料进行敲击、剪切、研磨等混合作用力，使物料粉碎到一定细度。从而将3毫米以上的物料颗粒粉碎至10微米以下，与以往的纯机械粉碎方法完全不同。在粉碎过程中不会产生局部过热现象，在低温状态下进行快速粉碎，也称为物理破壁，解决了目前粉碎领域无法解决的难题。最大限度地保留粉体的生物活性成分，以利于制成所需的高质量产品。超微细粉末是超微纳米破壁的最终产品，具有一般颗粒所没有的特殊理化性质，如良好的溶解性、分散性、吸附性、化学反应活性等。

发明内容

本发明目的为提供一种以灵芝提取物和灵芝孢子油为主要原料制成的中药组合物，提高灵芝组合物中活性成分的含量，并且采用超声波萃取技术、超临界CO2萃取技术和超微纳米破壁技术，使得原料损耗率小，活性成分不易分解，药效高。

本发明的技术内容如下：

一、产品配方

本发明活性成分中，灵芝提取物占15-35％，而灵芝孢子油占65-85％。

二、工艺路线

本品将原料经调配、压丸、洗丸、干燥、装瓶、外包装、检验、入库等为主要工艺制成，工艺科学合理。

三、灵芝提取物及灵芝孢子油生产工艺

(一)灵芝提取物生产过程(全程低温提取干燥)

原料粉碎→投料→超声波水提→膜过滤→醇沉→微波干燥→包装→检验

1、粉碎：将灵芝用粉碎机粉碎至10-30目备用；

2、投料：将粗粉粒投入提取管料桶内；

3、超声波水提：原料加8-10倍纯化水进行超声波连续逆流提取，超声波频率为2-3万赫兹，提取温度为50-60℃，200目过滤获取含水量85-90％的提取液；

4.膜过滤：经超滤膜(截留分子量为10kDa)过滤，去掉小分子物质和水，获取含水量30-60％的浓缩物；

5.醇沉：浓缩物边搅拌边加入4倍量95度食用酒精，静置24h，去上清液，离心甩干获取含酒精量5-15％的浸膏；

6.微波干燥：浸膏装入微波料盘，抽真空干燥，温度40℃--50℃，时间60-80分钟，干燥物含水率≤6％；

7、包装：干燥物80目粉碎过筛，包装；

8、检验：检验各项指标，全部合格进库；

9.本工艺为1∶20提取比例。

(二)灵芝孢子油生产工艺

原料(破壁灵芝孢子粉)→制粒→干燥→超临界CO₂萃取→再度提纯→获得金黄色灵芝孢子油→包装、检验

(1)原料：采用破壁率为95-98％的破壁灵芝孢子粉；

(2)制粒：为了保证提取的出油率和产品的质量，制粒时料液比为1∶1，

粘合液为纯化水和酒精混合液，若直接采用破壁的灵芝孢子粉进行超临界CO₂萃取，由于少量孢子微粉进入CO₂管道，造成堵塞；

(3)干燥：制粒后在50～60℃温度下，进行热风循环干燥8～9小时，使颗粒的含水量小于5％，如果颗粒的含水量大于5％，不但孢子油的得率低，而且容易造成循环系统结冰而导致CO₂气路堵塞；

(4)超临界CO₂萃取：压力25-35MPa，温度40-50℃，提取时间3-4h，CO₂流量为30-40kg/h；

(5)再度提纯：用超滤膜在25-30℃进行过滤，获得金黄色灵芝孢子油；

(6)包装，成品检验各项指标，全部合格方能出厂。

(三)将灵芝提取物与灵芝孢子油进行混合得到组合物包括以下步骤：

(1)将经过检验的灵芝提取物和灵芝孢子油经混合搅拌30分钟后，再经研磨三次和在-0.06MPa条件下脱气后待用；

(2)明胶、水和甘油经70-80℃的化胶后，减压浓缩后至水分小于40％，然后在50-60℃的条件下保存备用；

(3)将上述得到的灵芝提取物和灵芝孢子油以及明胶、水和甘油经化胶和减压浓缩后的物质混合在一起进行压丸处理，然后在18-28℃下定形4-6小时，醇洗3次，冷风干燥24小时，然后再进行灯检和装瓶，上述过程都是在无菌环境下进行的；

(4)将产品进行贴标和检验，最后装箱到成品。

四、本发明的工艺特点

1、本发明所用超声波萃取的特点：

超声波连续逆流萃取生产线，实现了全程低温萃取，最大限度的保持中药和真菌多糖有效成分的活性，增强产品的功效，实现了中药西制，结束了高温萃取有效成分的活性被破坏，传统中药显效慢的历史。极大地促进了中药天然产物和药用真菌多糖产业化和现代化建设。

2、本发明所用超临界CO2萃取的特点：

a.超临界萃取可以在接近室温(35～40℃)及CO2气体笼罩下进行提取，有效地防止了热敏性物质的氧化和逸散，因此，在萃取物中保持着药用植物的有效成分，而且能把高沸点、低挥发性、易热解的物质在远低于其沸点温度下萃取出来。

b.由于全过程不用有机溶剂，因此萃取物绝无残留的溶剂物质，从而防止了提取过程中对人体有害物的存在和对环境的污染，保证了100％的纯天然性。

c.萃取和分离合二为一，当饱和溶解物的CO2流体进入分离器时，由于压力的下降或温度的变化，使得CO2与萃取物迅速成为两相(气液分离)而立即分开，不仅萃取的效率高而且提高了生产效率。

d.食用级的CO2是一种不活泼气体，萃取过程中不发生化学反应，且属于不燃性气体，无味、无臭、无毒、安全性非常好。

3、超临界CO2萃取+再度提纯(用超滤膜在25-30℃进行过滤)

本发明使用的超临界CO2萃取灵芝孢子油技术，是以破壁灵芝孢子粉为原料，通过控制杂质，经破壁、造粒、低温干燥等多道工序，经最佳温控、压力下分离萃取出高三萜的脂溶性物质，创新对最新分离萃取技术的更新、改良和优化的结果，它根据分子运动理论，使萃取物在一定条件下，其中一部分成分成为挥发性气相分子，从而达到分离有效成分的目的。本发明申请的灵芝孢子油独有的萃取提纯工艺，其有效成分的最大优化提纯使灵芝三萜大于20％和灵芝总三萜大于40％。

4、本发明超微纳米粉碎的特点

(1)全封闭作业，无粉尘污染及气味泄漏，很好保证物料的洁净度；

(2)设计合理，数字控制，计时操作，24小时连续工作；

(3)随时调整出物料细度，大多数物料可以粉碎达到10000目；

(4)超微品种多，适用面广，适用于植物、动物、矿物等；

(5)加冷却系统、在连续运转情况下，生产温度不超过45度；

(6)控温粉碎，避免高温影响药物的药性和活性。

本品是以灵芝提取物、灵芝孢子油为主要原料制成的保健食品，二者复合应用为本产品具有的特点，其优点主要有以下两方面：

1、其标志性成分含量高于现有产品，稳定性试验最低值，每100克中含灵芝多糖5.3克、灵芝三萜15.8克，与以单一灵芝或灵芝孢子粉为原料制成的保健品相比，功能更为强大，具有增强免疫力、对辐射危害有辅助保护的显著功能，尤其适宜于免疫力低下者、接触辐射者。

2、而且本品在加工过程中采取了超临界CO₂萃取、超微纳米破壁和超声波萃取技术，对原材料的损耗小，防止了对人和环境的污染，工艺稳定，可以工业化规模生产的特点。

附图说明

附图为本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面以含有本发明所述的中药组合物的胶囊剂为例来说明本发明的实施过程，应该明确的是实施例只是为了更好的说明本发明，不应理解为对本发明的限制，事实上，任何在药学上可以接受的辅剂都可以用于该组合物中以得到不同的剂型，包括：胶囊剂、片剂、颗粒剂和粉针剂等。

一、灵芝提取物生产过程(全程低温提取干燥)

原料粉碎→投料→超声波水提→膜过滤→醇沉→微波干燥→包装→检验

1、粉碎：将灵芝用粉碎机粉碎至10-30目备用；

2、投料：将粗粉粒投入提取管料桶内；

3、超声波水提：原料加8-10倍纯化水进行超声波连续逆流提取，超声波频率为2-3万赫兹，提取温度为50-60℃，200目获取含水量85-90％的提取液；

4.膜过滤：经超滤膜(截留分子量为10kDa)过滤，去掉小分子物质和水，获取含水量30-60％的浓缩物；

5.醇沉：浓缩物边搅拌边加入4倍量95度食用酒精，静置24h，去上清液，离心甩干获取含酒精量5-15％的浸膏；

6.微波干燥：浸膏装入微波料盘，抽真空干燥，温度40℃--50℃，时间60-80分钟，干燥物含水率≤6％；

7、包装：干燥物80目粉碎过筛，包装；

8、检验：检验各项指标，全部合格进库；

9.本工艺为1∶20提取比例。

二、灵芝孢子油生产工艺

原料(破壁灵芝孢子粉)→制粒→干燥→超临界CO₂萃取→再度提纯→获得金黄色灵芝孢子油→包装、检验

(1)原料：采用破壁率为95-98％的破壁灵芝孢子粉；

(2)制粒：为了保证提取的出油率和产品的质量，制粒时料液比为1∶1，粘合液为纯化水和酒精混合液，若直接采用破壁的灵芝孢子粉进行超临界CO₂萃取，由于少量孢子微粉进入CO₂管道，造成堵塞；

(3)干燥：制粒后在50～60℃温度下，进行热风循环干燥8～9小时，使颗粒的含水量小于5％，如果颗粒的含水量大于5％，不但孢子油的得率低，而且容易造成循环系统结冰而导致CO₂气路堵塞；

(4)超临界CO₂萃取：压力25-35MPa，温度40-50℃，提取时间3-4h，CO₂流量为30-40kg/h；

(5)再度提纯：用超滤膜在25-30℃进行过滤，获得金黄色灵芝孢子油；

(6)包装，成品检验各项指标，全部合格方能出厂。

三、结合附图来说明本发明组合物的制备过程(见附图)

(1)将经过检验的灵芝提取物和灵芝孢子油经搅拌30分钟后，再经研磨(三次)和脱气(-0.06MPa条件下)后待用；

(2)明胶、水和甘油经70-80℃的化胶后，减压浓缩后至水分小于40％，然后在50-60℃的条件下保存备用；

(3)将上述得到的灵芝提取物和灵芝孢子油以及明胶、水和甘油经化胶和减压浓缩后的物质混合在一起进行压丸处理，然后在18-28℃下定形4-6小时，醇洗3次，冷风干燥24小时，然后再进行灯检和装瓶，上述过程都是在无菌环境下进行的；

(4)将产品进行贴标和检验，最后装箱到成品。

四、下面以动物学实验来验证本发明所述的组合物的效果：

目的：探讨灵芝提取混合物(含有按本发明配方的活性成分灵芝提取物和灵芝孢子油)的抗辐射和增强免疫功能的双重作用。方法：选用小鼠进行抗辐射和增强免疫功能试验。结果：1、灵芝提取混合物可恢复辐照后小鼠外周血白细胞数量，明显增加辐射后骨髓有核细胞数和血清SOD(超氧化物歧化酶)活性及显著提高半数溶血值，骨髓细胞微核率明显降低。2、灵芝提取混合物中、高剂量组能增强小鼠迟发型变态反应和抗体生成细胞数，高剂量组可增强小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力，血清半数溶血值和NK细胞活性，各剂量组对小鼠体重增长，脾脏/体重比值，胸腺/体重比值，ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力和小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞无明显影响。结论：灵芝提取混合物(含有按本发明配方的活性成分灵芝提取物和灵芝孢子油)具有抗辐射和增强免疫功能的双重作用。

1.材料和方法：

1.1样品：由深圳市汇康生物科技有限公司提供，软胶囊，内容物为棕色油性膏状物，含有按本发明配方的活性成分灵芝提取物和灵芝孢子油。300mg/粒，置阴凉干燥处保存，取内容物进行试验。

1.2实验动物：18-22g健康雄性清洁级昆明种小鼠，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，生产许可证SCXK(湘)2006-001。

1.3实验环境：屏障系统，温度22-24℃，湿度52-58％。

1.4剂量：分低、中、高三个试验组，按人体推荐量的5、10、30倍，分为0.1g/kg.bw，0.2g/kg.bw，0.6g/kg.bw剂量，分别称1.0g，2.0g，6.0g样品内容物，加植物油至100ml，对照组予以等体积食用植物油。分别给予受试动物每天灌胃一次，灌胃体积为0.1ml/10g.bw。抗辐射试验连续灌胃21天后，剂量组与辐射模型对照组均以同一剂量γ射线全身照射一次，据不同指标选择不同照射剂量，照射后继续灌胃至每项实验结束，而提高免疫试验需连续灌胃30天。

1.5主要仪器试剂：血球计数板，显微镜，722分光光度计，绵羊红细胞等。

1.6实验方法：

1.6.1外周血白细胞计数：各组均以3Gy γ射线全身照射一次，于照射前，照射后第3天，照射后第14天三次采尾尖血20μl，加入0.38ml 1％盐酸中，

混匀后加入血球计数板中，计算外周血白细胞数目。

白细胞数(10⁹/L)＝四个大方格白细胞总数/4×稀释倍数×10⁷

1.6.2骨髓有核细胞数实验：各组均以3Gyγ射线全身照射一次，于照射后第3天，颈椎脱臼处死小鼠，剥离出股骨，用1ml注射器共吸取5ml Hank’s液，冲出股骨中的全部骨髓细胞，细胞悬液通过4号针头注射器使细胞在悬液中分散，镜下计数，计算每毫升骨髓细胞中的有核细胞数。

1.6.3小鼠骨髓细胞微核试验：各组均以3Gy γ射线全身照射一次，照射后第3天，颈椎脱臼处死小白鼠，取出胸骨，用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀，常规涂片自然干燥后甲醇固定10min，Giemsa染色蒸馏水冲洗晾干，光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞中微核细胞数，微核率以千分率表示。

1.6.4血清超氧化物歧化酶(SOD)活性实验：各组均以6Gy γ射线全身照射一次，照射后第7天，摘眼球采血，离心取血清，按试剂盒说明书测定SOD活力。1.6.5血清溶血素实验：各组均以2Gyγ射线全身照射一次，照射后20天内，每鼠腹腔注射2％(v/v)压积SRBC，0.2ml致敏，免疫5天后，摘小鼠眼球采血，取血清测溶血反应，另设不加血清(以SA缓冲液代替)的对照管为比色空白，于540nm分别测定各管光离度值，计算各鼠的HC₅₀。(HC₅₀＝样品光离度值/SRBC半数溶血时的光度值×稀释倍数)。

1.6.6免疫功能试验：按卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)，进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)，小鼠迟发性变态反应(DTH)(足跖增原法)，抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)和半数溶血值(HC₅₀)的测定，小鼠碳廓清试验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)脏器/体重比值测定。

1.7实验数据统计：用SPss(11.0)软件进行统计分析。

2.结果：

2.1灵芝提取混合物对小鼠外周血白细胞计数的影响

表1灵芝提取混合物对小鼠照射前后外周血白细胞计数的影响

见表1.照射前各组小鼠外周血白细胞计数差异具无显著性。照射后第3天辐射模型对照组的白细胞计数与照射前比较，差异具有显著性(P＜0.01)，说明辐射损伤模型成立。照射后第3天高剂量组和第14天低、中、高剂量组的白细胞计数明显高于辐射模型对照组，差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。

结果显示该药物组合物可以有效的提高辐射损伤后血液白细胞的水平，具有抗辐射的作用。

2.2灵芝提取混合物对小鼠骨髓有核细胞数的影响

表2灵芝提取混合物对小鼠骨髓有核细胞数的影响

见表2.辐照后第3天，中、高剂量组小鼠的骨髓有核细胞数明显高于对照组，差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05)。

结果显示该药物组合物可以有效的提高辐射损伤后骨髓有核细胞的水平，具有抗辐射的作用。

2.3灵芝提取混合物对小鼠骨髓细胞微核率的影响

表3灵芝提取混合物对小鼠骨髓细胞微核率影响

见表3.辐照后第3天，高剂量组小鼠的骨髓细胞微核率明显低于对照组，差异有显著性(P＜0.05)。

2.4灵芝提取混合物对小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响

表4灵芝提取混合物对小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响

见表4.辐照后第7天，中、高剂量组小鼠的血清超氧化物歧化酶(SOD)活性与对照组比较，差异有显著性(P＜0.05)。

2.5灵芝提取混合物对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响

表5灵芝提取混合物对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响

由表5可见，辐照后第14天，高剂量小鼠的血清半数溶血值(HC₅₀)明显高于对照组，差异有显著性(P＜0.05)。

2.6灵芝提取混合物对小鼠细胞免疫功能的影响

2.6.1灵芝提取混合物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

由表6可知，经口给予小鼠不同剂量的灵芝提取混合物30天，中、高剂量组足跖肿胀度明显高于对照组，差异具有显著性(P＜0.05)。

表6灵芝提取混合物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

2.6.2灵芝提取混合物对小鼠ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响

表7灵芝提取混合物对小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响

由表7可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝提取混合物30天，各剂量组小鼠淋巴细胞转化能力与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。

2.7灵芝提取混合物对体液免疫的影响

灵芝提取混合物对小鼠抗体生成细胞数和半数溶血值(HC₅₀)的影响

由表8可知，经口给予小鼠不同剂量的灵芝提取混合物30天，中、高剂量组小鼠抗体生成细胞数明显高于对照组，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，剂量组小鼠半数溶血值明显高于对照组。差异有显著性(P＜0.05)。

表8灵芝提取混合物对小鼠抗体生成细胞数和半数溶血值(HC₅₀)的影响

2.8灵芝提取混合物对小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能的影响

2.8.1灵芝提取混合物对小鼠单核一巨噬细胞碳廓清的影响

表9灵芝提取混合物对小鼠单核一巨噬细胞碳廓清的影响

由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝提取混合物30天，高剂量组小鼠吞噬指数显著高于对照组，差异有显著性(P＜0.05)。

2.8.2灵芝提取混合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

由表10可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝提取混合物30天，各剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力未见明显影响。

表10灵芝提取混合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率和吞噬指数的影响

2.9灵芝提取混合物对小鼠NK细胞活性的影响

由表11可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝提取混合物30天，高剂量组小鼠NK细胞活性明显高于对照组，差异有显著性(P＜0.01)。

表11灵芝提取混合物对小鼠NK细胞活性的影响

2.10灵芝提取混合物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝提取混合物30天，对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值无显著影响(P＞0.05)。

表12灵芝提取混合物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

3讨论：

本发明利用中药组合物灵芝多糖和灵芝三萜类等有效成份，得到了高纯度灵芝水溶性和脂溶性有效成份互容的配方，更好的发挥灵芝多种药理活性，实验结果证明该组合物具有抗辐射和提高免疫功能的双重作用，可预防细胞突变，保护机体免受辐射引发的多种损伤，改善免疫功能低下状态，对肿瘤患者放疗导致的骨髓造血功能损伤，机体免疫降低和康复有一定辅助作用。

Claims (1)

1.一种具有增强免疫力和抗辐射功能的组合物的制作工艺，特征在于：所述组合物的活性成分以灵芝提取物、灵芝孢子油为原料制成，其中灵芝孢子油占65-85％，灵芝提取物占15-35％，

其中，灵芝提取物的提取包括以下步骤：

a)粉碎：将灵芝用粉碎机粉碎至10-30目备用；

b)投料：将粗粉粒投入提取管料桶内；

c)超声波水提：原料加8-10倍纯化水进行超声波连续逆流提取，超声波频率为2-3万赫兹，提取温度为50-60℃，200目过滤获取含水量85-90％的提取液；

d)膜过滤：经超滤膜过滤，去掉小分子物质和水，获取含水量30-60％的浓缩物；

e)醇沉：浓缩物边搅拌边加入4倍量95度酒精，静置24h，去上清液，离心甩干获取含酒精量5-15％的浸膏；

f)微波干燥：浸膏装入微波料盘，抽真空干燥，温度40℃--50℃，时间60-80分钟，干燥物含水率≤6％；

g)包装：干燥物80目粉碎过筛，包装；

i)检验：检验各项指标，全部合格进库；

灵芝孢子油的提取包括以下步骤：

a)原料：采用破壁率为95-98％的破壁灵芝孢子粉；

b)制粒：为了保证提取的出油率和产品的质量，制粒时料液比为1∶1，粘合液为纯化水和酒精混合液；

c)干燥：制粒后在50-60℃温度下，进行热风循环干燥8-9小时，使颗粒的含水量小于5％；

d)超临界CO₂萃取：压力25-35MPa，温度40-50℃，提取时间3-4h，CO₂流量为30-40kg/h；

e)再度提纯：用超滤膜在25-30℃进行过滤，获得金黄色灵芝孢子油；

将灵芝提取物与灵芝孢子油进行混合得到组合物包括以下步骤：

(1)将经过检验的灵芝提取物和灵芝孢子油经混合搅拌30分钟后，再经研磨三次和在-0.06MPa条件下脱气后待用；

(2)明胶、水和甘油经70-80℃的化胶后，减压浓缩后至水分小于40％，然后在50-60℃的条件下保存备用；

(3)将上述得到的灵芝提取物和灵芝孢子油以及明胶、水和甘油经化胶和减压浓缩后的物质混合在一起进行压丸处理，然后在18-28℃下定形4-6小时，醇洗3次，冷风干燥24小时，然后再进行灯检和装瓶，上述过程都是在无菌环境下进行的；

(4)将产品进行贴标和检验，最后装箱到成品。

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