CN102128873A - 使用电泳的试样的分析方法及其利用 - Google Patents
使用电泳的试样的分析方法及其利用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102128873A CN102128873A CN2011100094467A CN201110009446A CN102128873A CN 102128873 A CN102128873 A CN 102128873A CN 2011100094467 A CN2011100094467 A CN 2011100094467A CN 201110009446 A CN201110009446 A CN 201110009446A CN 102128873 A CN102128873 A CN 102128873A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- ion
- electrophoresis
- concentration
- testing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 title claims abstract description 150
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 135
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 236
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 180
- 230000009182 swimming Effects 0.000 claims description 165
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 107
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 31
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 21
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 claims description 19
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 8
- 108010085682 Hemoglobin A Proteins 0.000 claims description 5
- 102000007513 Hemoglobin A Human genes 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 18
- 239000012491 analyte Substances 0.000 abstract 3
- 239000012147 electrophoresis running buffer Substances 0.000 abstract 2
- 238000012284 sample analysis method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 344
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 216
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 47
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 41
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 33
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 30
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 30
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 28
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 28
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 28
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 25
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 23
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 22
- 230000008859 change Effects 0.000 description 19
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 17
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 17
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 17
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 14
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 14
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 14
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 14
- 230000001915 proofreading effect Effects 0.000 description 11
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 10
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 10
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 8
- -1 alkaline matter Substances 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 8
- KXKPYJOVDUMHGS-OSRGNVMNSA-N chondroitin sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)O1 KXKPYJOVDUMHGS-OSRGNVMNSA-N 0.000 description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 8
- 235000013905 glycine and its sodium salt Nutrition 0.000 description 8
- 230000008676 import Effects 0.000 description 8
- GBHSCKFAHCEEAZ-UHFFFAOYSA-N 2-[hydroxymethyl(methyl)amino]acetic acid Chemical compound OCN(C)CC(O)=O GBHSCKFAHCEEAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000002989 correction material Substances 0.000 description 7
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 6
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 238000004193 electrokinetic chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000370738 Chlorion Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 2
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical class NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004696 Poly ether ether ketone Substances 0.000 description 2
- NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N Potassium ion Chemical compound [K+] NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005370 electroosmosis Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010036302 hemoglobin AS Proteins 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000005499 meniscus Effects 0.000 description 2
- 238000001012 micellar electrokinetic chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229920002530 polyetherether ketone Polymers 0.000 description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000006884 silylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical class OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZVZFHCZCIBYFMZ-UHFFFAOYSA-N 6-methylheptoxybenzene Chemical compound CC(C)CCCCCOC1=CC=CC=C1 ZVZFHCZCIBYFMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007991 ACES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007988 ADA buffer Substances 0.000 description 1
- PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N Aldosterone Chemical compound C([C@@]1([C@@H](C(=O)CO)CC[C@H]1[C@@H]1CC2)C=O)[C@H](O)[C@@H]1[C@]1(C)C2=CC(=O)CC1 PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N 0.000 description 1
- PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N Aldosterone Natural products C1CC2C3CCC(C(=O)CO)C3(C=O)CC(O)C2C2(C)C1=CC(=O)CC2 PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007992 BES buffer Substances 0.000 description 1
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 1
- 108010044495 Fetal Hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108091005880 Hemoglobin F Proteins 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010061951 Methemoglobin Proteins 0.000 description 1
- BLTXUMDEYLYXLJ-UHFFFAOYSA-N OCN(C)CC(O)=O.OCC(CO)(CO)NCC(O)=O Chemical compound OCN(C)CC(O)=O.OCC(CO)(CO)NCC(O)=O BLTXUMDEYLYXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007994 TES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229960002478 aldosterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000007767 bonding agent Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005515 capillary zone electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000005443 coulometric titration Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 108010074807 diaspirin-cross-linked hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011209 electrochromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 239000005350 fused silica glass Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002410 histidine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000000864 hyperglycemic agent Substances 0.000 description 1
- 238000002354 inductively-coupled plasma atomic emission spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 1
- 229910003002 lithium salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000002 lithium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 1
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 230000001072 progestational effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000003566 sealing material Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 229940083542 sodium Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000007785 strong electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44747—Composition of gel or of carrier mixture
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44756—Apparatus specially adapted therefor
- G01N27/44769—Continuous electrophoresis, i.e. the sample being continuously introduced, e.g. free flow electrophoresis [FFE]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44756—Apparatus specially adapted therefor
- G01N27/44791—Microapparatus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供一种分离精度得到了提高的试样的分析方法。涉及一种试样分析方法,其是利用电泳法进行的试样的分析方法,所述电泳法使用了具备流路和形成于上述流路中的试样贮存槽的电泳装置,所述分析方法包括:向在上述流路中填充有泳动液的上述电泳装置的上述试样贮存槽中配置试样的步骤;以及通过对上述流路的两端施加电压来进行电泳的步骤,并包括使上述试样及上述泳动液中的下述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同的步骤:a)通过上述电泳向与上述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于上述分析对象物的移动度的离子的浓度,b)向与上述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度。
Description
技术领域
本发明涉及一种使用电泳的试样的分析方法及其利用。
背景技术
作为以高精度分离和分析各种化合物或核酸、蛋白质等分析对象物的方法,已知有电泳法。电泳法是利用了电场的分离和分析方法,由于能够根据物质的电荷、分子量、立体结构等的不同来分离物质,因此正被广泛用于各种物质的分离和分析中。
根据支撑体的有无、支撑体的种类等,电泳存在各种方法,例如已知有聚丙烯酰胺电泳、琼脂糖凝胶电泳、淀粉凝胶电泳、滤纸电泳、醋酸纤维素膜电泳、电色谱法、无载体(自由流)电泳、毛细管电泳法等。作为采用琼脂糖凝胶电泳法的分析,例如提出了使用添加有硫酸软骨素等硫酸化多糖类的琼脂糖凝胶来分离糖化血红蛋白的方法(日本特开平05-133938号公报)等。作为采用毛细管电泳的分析方法,例如提出了使用毛细管电泳法的一种即电动色谱法并通过使泳动用缓冲液中含有硫酸软骨素等聚阴离子或聚阳离子从而以短时间分析试样的方法(日本专利第3124993号);将泳动装置微芯片化从而使分析装置小型化的方法(日本专利第2790067号及日本专利第3656165号)等。
另一方面,将泳动装置微芯片化时,用于分离试样的流路的长度(分离长)与以往相比变短,由此产生分离能力降低的问题。为了解决该问题提出了各种方法。例如,提出了使试样注入容积及分离长增大的方法、分离前在流路内将分析对象物浓缩的方法、与碱堆积(base stacking)法组合的方法(Kim等,J.Chromatgr.A,1064,121-127,2005)、作为泳动用缓冲液使用与用于调制试样的缓冲液不同的缓冲液的方法(日本特开2009-74811号公报)等。然而,在以高精度进行试样分析的方面,上述现有的方法不能说是充分的。
作为其他的方法,提出了使用按照试样贮存槽和回收槽在流路内连通的方式形成的电泳芯片来进行分析的方法(国际公开2008/136465号)。具体而言,该方法是向电泳芯片的试样导入槽中供给试样后,通过使试样导入槽与回收槽之间产生电位差从而进行从试样导入槽的试样的导入和分离的方法。此外,提出了使用该方法例如来分离血浆中的胆红素的方法(NieZ等,Electrophoresis,29(9):1924-31,2008)等。
发明内容
然而,需求以高精度进行试样的分析的更高技术。
本发明提供能够提高分离能力的新方法,该方法利用电泳来进行试样的分析,所述电泳采用了通过对流路施加电压来进行试样的导入和分离的前沿分析(frontal analysis)。
本发明涉及一种试样分析方法,其是利用电泳法进行的试样分析方法,所述电泳法使用了具备流路和形成于上述流路中的试样贮存槽的电泳装置,所述试样分析方法包括:向在上述流路中填充有泳动液的上述电泳装置的上述试样贮存槽中配置试样的步骤;以及通过对上述流路的两端施加电压来进行电泳的步骤,并包括使上述试样及上述泳动液中的下述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同的步骤。
a)通过上述电泳向与上述分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于上述分析对象物的移动度的离子的浓度
b)向与上述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度
附图说明
图1A是表示本发明的方法中可以使用的电泳芯片的一个例子的构成的概念图,
图1B是图1A所示的电泳芯片的I-I线的截面图。
图2是表示实施例1的结果的一个例子的图表。
图3是表示比较例1的结果的一个例子的图表。
图4是表示实施例2的结果的一个例子的图表。
图5是表示比较例2的结果的一个例子的图表。
图6是表示实施例3的结果的一个例子的图表。
图7是表示实施例7的结果的一个例子的图表。
图8是表示比较例3的结果的一个例子的图表。
图9是表示实施例8及比较例4的结果的一个例子的图表。
具体实施方式
作为1个方式,本发明涉及一种试样分析方法,其是利用电泳法进行的试样分析方法,所述电泳法使用了具备流路和形成于上述流路中的试样贮存槽的电泳装置,所述分析方法包括:向在上述流路中填充有泳动液的上述电泳装置的上述试样贮存槽中配置试样的步骤;以及通过对上述流路的两端施加电压来进行电泳的步骤,并包括使上述试样及上述泳动液中的下述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同的步骤。
a)通过上述电泳向与上述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于上述分析对象物的移动度的离子的浓度
b)向与上述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度
根据本发明,例如在利用采用了前沿分析法的电泳进行的试样分析中,可发挥能够提高分析对象物的分离能力的效果。此外,根据本发明,优选发挥能够以比以往短的时间进行分析的效果。进而,本发明的方法特别适合于使用了小型化的毛细管电泳芯片的试样的分析,更优选适合于利用了微芯片化的电泳芯片中的前沿分析法连续毛细管电泳(frontal analysisContinuous Capillary Electrophoresis)的试样的分析。
本发明者们在上述国际公开2008/136465号那样通过施加电压来进行从试样贮存槽的试样的导入和试样的分离的方法、即一边连续地进行取样一边进行电泳的方法中,为了实现分离能力的进一步提高而重复进行了研究,其中着眼于流路内的离子的分布。具体而言,发现相对于泳动液注入微量的试样时对分离基本没有影响而可以忽视的试样中的离子在一边连续地进行取样一边进行电泳的情况下,能够对分离精度造成影响。进而发现,该问题在将电泳装置小型化时、即像电泳芯片那样用于分离试样的长度(分离长)较短时显著产生。更具体而言,发现在分离长较短的情况下,由离子分布的偏差引起的试样的电荷变动导致的峰宽的扩大显著,其结果是,分离能力降低。
本发明基于如下认识:在采用了包括通过对流路的两端施加电压从而将试样贮存槽内的试样导入到流路内并对试样进行电泳的步骤的电泳的试样分析方法中,通过使试样及泳动液中的下述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同,能够提高分析对象物的分离能力,即使在分离长较短的情况下也能够提高分离精度。
a)通过上述电泳向与上述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于上述分析对象物的移动度的离子的浓度
b)向与上述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度
通过本发明的分析方法,分离能力得到提高的原因并不确定,但推测如下。在前沿分析中,泳动液与试样接触的幅度成为峰宽。并且,该峰宽通常受到1)试样的电荷变动、2)由温度或布朗运动等引起的扩散、3)不均匀的流动、4)试样导入时的弯液面(meniscus)等的影响而扩大。其中在分离长较短的电泳中导致峰宽扩大的最大原因被认为是1)试样的电荷变动。本发明的方法由于使试样及泳动液中的上述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同,因此可抑制试样的电荷变动。认为其结果是,由于能够抑制峰宽的扩大,因此能够提高分离能力。但是,这些只是推测,本发明并不限定于这些机理。
本说明书中“电泳法”是指利用根据物质的大小和电荷的不同等而造成的在电场中的移动速度之差来进行分离的方法。本发明的方法例如可以用于采用了聚丙烯酰胺电泳、琼脂糖凝胶电泳、淀粉凝胶电泳、滤纸电泳、醋酸纤维素膜电泳、电动色谱、无载体(自由流)电泳、毛细管电泳等各种电泳法的分析方法中。其中,本发明适于毛细管电泳,例如电动色谱、毛细管区带电泳、胶束电动色谱、毛细管凝胶电泳,优选适于电动色谱、胶束电动色谱,特别适于使用了微芯片化了的电泳芯片的毛细管电泳。
本说明书中“移动度”是指在通过对流路的两端施加电压从而在流路内产生的电场中物质移动的速度,例如根据物质的电荷、大小及形状、以及流路内的环境(例如流路内的液体的成分、pH、电渗流等)等而决定。本说明书中“电渗流”是指,例如使用具备具有负电荷的内壁的流路来进行毛细管电泳等时,起因于上述流路的内壁的负电荷而产生的从阳极向阴极的流动。
本说明书中“离子”包括泳动液和/或试样中以能够对分离能力造成影响的程度所含的、具有负电荷的成分及具有正电荷的成分,例如可列举出缓冲剂、酸性物质、弱电解质、碱性物质、强电解质、蛋白质、其他具有正或负电荷的成分等。
本说明书中“使试样及泳动液中的‘通过泳动向与分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于分析对象物的移动度的离子的浓度’及‘向与分析对象物相反的方向移动的离子的浓度’中的至少一者的浓度大致相同”包括使泳动液和试样中移动度大致相同的离子的离子浓度大致相同,例如优选使试样和泳动液中相对应的上述具有负电荷的成分及具有正电荷的成分达到大致相同的浓度。此外,当试样和/或泳动液中存在多种“通过电泳向与分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于分析对象物的移动度的离子”或“向与分析对象物相反的方向移动的离子”时,只要使前者的离子及后者的离子各自中至少一种离子的浓度大致相同即可,优选使前者的离子及后者的离子各自中全部种类的离子为大致相同的浓度。
大致相同的浓度包括浓度相同或者具有对分离能力实质上不会造成影响的程度的差的情况。对分离能力实质上不会造成影响的程度的浓度的差,例如根据用于分离试样的长度等适当决定。当分离长(试样贮存槽的流路侧的端部与分析部的距离)为10~30mm时,泳动液中所含的离子与对应于该泳动液的离子的试样中的离子的浓度之差例如为超过-10mmol/L且不到+10mmol/L时可以视为大致相同的浓度,优选为-5mmol/L~+5mmol/L等。此外,同样地当分离长为10~30mm时,泳动液中所含的离子与对应于该泳动液的离子的试样中的离子的浓度之差例如为超过-10重量%~不到+10重量%时可以视为大致相同的浓度,优选为-5重量%~+5重量%。泳动液及试样中的离子的种类及浓度例如可以采用电感耦合等离子体原子发射光谱法、离子色谱法、电量滴定法、电导度计等来测定。
此外,作为移动度大致相同的离子,例如可列举出移动度相同或者具有对分离能力实质上不会造成影响的程度的移动度的差的离子。对分离能力实质上不会造成影响的程度的移动度的差例如可以根据用于分离试样的长度等适当决定。例如当分离长(试样贮存槽的流路侧的端部与分析部的距离)为20~30mm时,泳动液中所含的离子与对应于该泳动液的离子的试样中的离子的移动度的差例如为±5%,优选为±2%等。
泳动液和/或试样中的离子(以下也称为“对象离子”)是否为“通过泳动向与分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于分析对象物的移动度的离子”(上述a)的离子),例如可以通过下述的方法来进行判断。首先,准备对象离子的浓度不同的2种泳动液,分别填充到毛细管电泳装置的阳极侧和阴极侧。在连接阳极侧和阴极侧的毛细管部中,当对象离子为阳离子时填充与阴极侧相同的泳动液,当对象离子为阴离子时填充与阳极侧相同的泳动液。如果在该状态下对阳极和阴极施加电压,则对象离子在毛细管部移动,毛细管部中的该离子的浓度发生变动。该离子浓度的变动例如可以通过测定对对象离子特异性的吸收或电流值的变动等来进行检测。由此,能够测定对象离子在毛细管部中的移动度,通过比较所得到的对象离子的移动度与分析对象物的移动度,能够判断对象离子是否为上述a)的离子。另外,在制作用于测定移动度的泳动液时,也可以添加与对象离子成对的对离子。作为添加的对离子,例如优选为比对象离子的移动度快的离子,例如可列举出Na、K及Cl等。
此外,关于对象离子是否为“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子),当对象离子为阴离子时,如果分析对象物为阳离子即可判定为上述b)的离子,当对象离子为阳离子时,如果分析对象物为阴离子即可判定为上述b)的离子。
本说明书中作为“分析对象物”,例如可列举出蛋白质、生物体内物质、血液中物质等,作为蛋白质的具体例子,可列举出血红蛋白、白蛋白、球蛋白等。作为血红蛋白,可列举出糖化血红蛋白、突变血红蛋白、次要(minor)血红蛋白、修饰血红蛋白等,更具体而言,可列举出血红蛋白A0(HbA0)、血红蛋白Alc(HbAlc)、血红蛋白A2(HbA2)、血红蛋白S(HbS、镰刀形红细胞血红蛋白)、血红蛋白F(HbF、胎儿血红蛋白)、血红蛋白M(HbM)、血红蛋白C(HbC)、高铁血红蛋白、氨基甲酰化血红蛋白、乙酰化血红蛋白等。作为HbAlc,有稳定型HbAlc、不稳定型HbAlc。作为生物体内物质及血中物质等的具体例子,可列举出胆红素、激素、代谢物质等。作为激素,可列举出甲状腺刺激激素、副肾皮质刺激激素、绒毛膜促性腺激素、胰岛素、胰高血糖素、副肾髓质激素、肾上腺素、去甲肾上腺素、雄性激素、雌激素、孕激素、醛固酮、皮质醇等。
本说明书中作为“试样”是指由试样原料调制的物质。作为试样原料,可列举出生物试样,优选含有上述分析对象物,更优选为含有血红蛋白的试样。作为生物试样,包括血液、含有红细胞成分的血液来源物、唾液、髓液等。作为血液,可列举出从生物体采集的血液,优选为动物的血液,更优选为哺乳类的血液,进一步优选为人的血液。作为含有红细胞成分的血液来源物,可列举出由血液分离或调制得到的含有红细胞成分的物质,例如包括除去了血浆的血细胞级分、或血细胞浓缩物、血液或血细胞的冷冻干燥物、对全血进行溶血处理而得到的溶血试样、离心分离血液、自然沉降血液、洗涤血细胞等。
在使用了电泳的试样的分析中,为了提高分析的准确性和再现性,有时使用校正用物质(Calibration Material)。此外,为了管理或维持分析的准确性和再现性,有时使用精度管理用物质(Control Material)。因此,本说明书中的“试样”或“试样原料”可以含有校正用物质或精度管理用物质。另外,本说明书中“校正用物质”例如含有用于校正装置等的标准物质,“精度管理用物质”含有用于管理或维持分析的准确性和/或再现性的试样,例如可列举出管理血清、混合血清(pooled serum)及标准液等。
[试样分析方法]
本发明的试样分析方法涉及下述试样分析方法,在一个方式中,其是利用电泳法进行的试样分析方法,所述电泳法使用了具备流路和形成于上述流路中的试样贮存槽的电泳装置,所述试样分析方法包括:向在上述流路中填充有泳动液的上述电泳装置的上述试样贮存槽中配置试样的步骤;以及通过对上述流路的两端施加电压来进行电泳的步骤,并包括使上述试样及上述泳动液中的下述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同的步骤。
a)通过上述电泳向与上述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于上述分析对象物的移动度的离子的浓度
b)向与上述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度
此外,本发明的试样分析方法也可以说是一边连续地进行取样一边进行电泳的方法。因此,作为其他的方式,本发明的试样分析方法涉及下述试样分析方法,其是一边连续地进行取样一边通过电泳来分析试样的方法,所述试样分析方法包括使试样及泳动液中的下述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同的步骤。本方式的试样分析方法中,优选为前沿分析连续毛细管电泳。
a)通过上述电泳向与上述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于上述分析对象物的移动度的离子的浓度
b)向与上述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度
本发明的试样分析方法中,从能够进一步提高分离能力的方面出发,优选使试样及泳动液中的上述a)及b)的浓度大致相同。作为使试样及泳动液中的上述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同的方法,例如可列举出:为了达到与泳动液中所含的离子成分大致相同的浓度,使用具有与泳动液相同或类似成分的试样调制液来稀释(混合)试样原料从而调制试样的方法;按照泳动液和试样中所含的离子成分的浓度大致相同的方式分别调制泳动液及试样的方法等。此外,可列举出:准备使泳动液和稀释后的试样中上述a)及b)中的至少一者的浓度成为大致相同的试样调制液(试样稀释液),准备上述a)及b)中的至少一者中记载的离子组成(成分比)与泳动液相同、并且上述a)及b)中的至少一者的浓度高于泳动液的添加剂,通过将所准备的添加剂添加到试样原料或稀释后的试样中,从而使泳动液和试样中上述a)及b)中的至少一者的浓度相同等。另外,本说明书中“试样调制液(试样稀释液)”是指用于与试样原料混合而调制试样的溶液,例如包括用于稀释试样原料的溶液。
因此,本发明的试样分析方法还可以包括调制试样的工序。试样调制工序优选包括为了达到与泳动液中的离子成分为大致相同的浓度,使用具有与泳动液相同或类似的离子成分的试样调制液来稀释试样原料从而调制试样的步骤,此外,除此以外,还可以包括调制上述试样调制液(试样稀释液)、调制上述添加剂的步骤。另外,关于用于稀释的试样调制液中的上述离子成分的浓度,鉴于用于稀释试样原料,优选比泳动液的浓度高。此外,本发明的试样分析方法还可以包括调制泳动液的工序,还可以包括将所调制的泳动液填充到流路中的工序。
本发明的试样分析方法中,优选包括:通过使试样及泳动液中上述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同,从而使电泳中的流路内的处于试样周围的离子成为与配置于试样贮存槽中的试样大致相同的状态。本申请说明书中“试样的周围”包括能够对试样的电荷造成影响而可以改变电荷的范围,优选包括能够对试样中的分析对象物的电荷造成影响的范围。
本发明的试样分析方法中,从进一步提高分离能力的方面出发,优选流路包含离子性的模拟固定相。本说明书中“离子性的模拟固定相”是指能够与试样中的分析对象物结合而形成复合体的物质。离子性的模拟固定相可以含有在泳动液中而导入到流路中,也可以含有在试样中而导入到流路中,此外,也可以与泳动液及试样分开导入到流路中,但从提高分离能力的方面出发,优选添加到泳动液及试样这两者中。
作为离子性的模拟固定相,当对像血红蛋白那样具有正电荷的分析对象物进行分析时,例如可以使用硫酸化多糖类、羧酸化多糖类、磺酸化多糖类、磷酸化多糖类等具有阴极性基团的多糖类,其中,优选为硫酸化多糖类及羧酸化多糖类,更优选为硫酸化多糖类。作为硫酸化多糖类,例如可列举出硫酸软骨素、肝素、乙酰肝素、褐藻糖胶、或其盐等,其中优选为硫酸软骨素或其盐。作为硫酸软骨素,可列举出硫酸软骨素A、硫酸软骨素C、硫酸软骨素D、硫酸软骨素E等。作为羧酸化多糖类,可列举出海藻酸、透明质酸或其盐等。为盐的情况下,作为对离子,可列举出碱金属、碱土类金属、胺化合物、有机碱等的离子。作为羧酸化多糖类的盐,例如有钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、铵盐、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)盐、精氨酸盐、赖氨酸盐、组氨酸盐等。
本发明的试样分析方法也可以包括通过光学手法来检测利用电泳的分离的工序。作为利用光学手法的检测,例如可列举出吸光度的测定。吸光度的波长可以根据试样、分析对象物的种类而适当决定。
本发明的试样分析方法也可以包括对通过光学手法而得到的电泳图进行解析的工序。一边连续地进行取样一边进行分离(电泳)的情况下,由所得到的电泳图对试样中的分析对象物个别地进行分析是很困难的,但是通过进行解析处理,能够对试样中的分析对象物个别地进行分离和分析。解析工序可以包括通过对电泳图进行演算处理从而得到对应于移动度(分离时间)而分离的电泳图的步骤,也可以包括根据处理后的电泳图中的各峰的高度和/或峰的面积而求出试样中的分析对象物的成分比的步骤。作为演算处理,例如可列举出微分处理、差分处理。
本发明的试样分析方法中,流路优选为毛细管。由此能够进行毛细管电泳。本说明书中“毛细管”是指内径为100μm以下的管。管的截面形状可以是圆形,也可以是矩形。此外,毛细管的长度没有特别限制,本发明的试样分析方法由于即使在分离长较短的情况下也可获得充分的分离能力,因此例如为10~150mm,优选为20~60mm。
本发明的试样分析方法由于即使在分离长较短的情况下也可获得充分的分离能力,因此电泳装置优选为微芯片化了的电泳芯片。电泳芯片的大小例如为长10~200mm、宽10~60mm、厚0.3~5mm,优选为长30~70mm、宽10~60mm、厚0.3~5mm。作为电泳芯片,可以使用后述的电泳芯片。
本发明的试样分析方法中,可以将对于前沿分析而言为充分量的试样供给到流路中后,代替试样而将泳动液和/或洗涤液导入到流路中。这种情况下,泳动液优选与流路中填充的泳动液相同。
本发明的试样分析方法也可以使用校正用物质或精度管理用物质作为试样或试样原料。本方式中,本发明的试样分析方法优选包括以校正用物质和/或精度管理用物质作为试样原料来调制试样的工序。试样调制工序例如也可以包括:确认校正用物质和/或精度管理用物质中所含的离子的工序;对校正用物质和/或精度管理用物质中所含的离子和作为分析对象的生物试样(以下称为“分析对象试样”)中所含的离子进行对比的工序;根据校正用物质和/或精度管理用物质中的上述“通过泳动向与分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于分析对象物的移动度的离子”(上述a)的离子)或“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)或其他离子的有无和/或它们的浓度,按照与分析对象试样或其试样原料的离子浓度大致相同的方式调整校正用物质和/或精度管理用物质或调制后的试样的离子浓度的工序。由此,能够使校正用物质及精度管理用物质在与分析对象试样大致相同的条件下进行电泳,例如能够提高装置的校正精度、或进行充分的精度管理。另外,作为其他的离子,例如可列举出通过泳动向与分析对象物相同的方向移动、并且移动度大于分析对象物的移动度的离子等。
本方式是发现如下问题:有时一般的校正用物质和/或精度管理用物质与生物试样的离子浓度不同,使用这样的物质进行校正及精度管理时得不到充分的精度,并基于如下认识的:通过使校正用物质或精度管理用物质的离子的状态与生物试样大致相同,例如可以提高装置的校正精度、或进行充分的精度管理。
上述的血清或血浆等生物试样通常含有各种离子。该离子例如可以包括“通过泳动向与分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于分析对象物的移动度的离子”(上述a)的离子)或向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)。例如血清或血浆中含有约140mmol/L的钠离子、约4mmol/L的钾离子、约100mmol/L的氯离子,红细胞中含有约100mmol/L的钠离子、约50mmol/L的钾离子、约100mmol/L的氯离子。
另一方面,为了在能够稳定地保存分析对象物的条件下供给校正用物质及精度管理用物质,通常添加用于使分析对象物稳定化的添加物等。当分析对象物为血红蛋白或白蛋白时,为了它们的稳定化,例如添加缓冲液、盐类或蔗糖等添加物(血红蛋白:日本特开平6-308120、日本专利3686482、日本专利4061365、日本特开2004-125560、白蛋白:日本专利4183116、W02001-094618)。由于以分析对象物的稳定化为目的,因此对起因于这些添加物的离子或这些离子在电泳时造成的影响等基本不予考虑。因此,将校正用物质及精度管理用物质与分析对象试样进行比较时,存在校正用物质及精度管理用物质中的上述a)离子和/或上述b)离子的浓度为低于分析对象试样的浓度的情况和高于分析对象试样的浓度的情况。此外,通常,生物试样中所含的离子成分在制造过程中通过透析等而被除去,有时校正用物质及精度管理用物质中基本不含上述离子。
本发明者们使用这样的校正用物质及精度管理用物质利用电泳来进行分析时,发现所得到的结果与进行实际分析的分析对象试样(例如,来源于生物试样的试样等)的分析结果不同,有时无法充分达到校正用物质及精度管理用物质的目的。
进而发现,如上所述,在校正用物质及精度管理用物质和分析对象试样中,上述a)的离子、上述b)的离子及其他离子等离子浓度经常不同,起因于该浓度的不同而产生分离精度等分析精度、或测定时间等发生变动的问题。例如,当校正用物质及精度管理用物质与分析对象试样相比离子浓度为低浓度或者基本不含离子时,与生物试样相比,来源于试样的离子浓度变成低浓度,由此导致电流难以流动,其结果是,电泳的速度变慢,测定需要花费大量时间。另一方面,当校正用物质及精度管理用物质与分析对象试样相比离子浓度为高浓度时,与生物试样相比,电流变得容易流动,其结果是,电泳的速度变快,得不到充分的分离精度。
本方式的方法中,由于包括上述的试样调制工序,因此即使在例如校正用物质或精度管理用物质的测定中也能够提高分离精度,能够提高装置的校正精度、或进行充分的精度管理。
在试样调制工序中,所谓使离子的状态大致相同是指,当分析对象试样含有上述a)的离子和/或上述b)的离子时,包括按照调制后的试样中的离子浓度与分析对象试样大致相同的方式以校正用物质或精度管理用物质作为试样原料来调制试样的步骤,当分析对象试样含有上述a)的离子、上述b)的离子及其他的离子时,包括按照调制后的试样中的上述a)的离子、上述b)的离子及其他离子的离子浓度与分析对象试样大致相同的方式以校正用物质或精度管理用物质作为试样原料来调制试样的步骤。作为使浓度大致相同的方法,例如当在制造校正用物质和/或精度管理用物质时添加不会损害稳定性的离子时,可列举出按照使其浓度达到与生物试样相同程度的浓度的方式来添加的方法;当将校正用物质和/或精度管理用物质溶解后使用时,可列举出使用其溶解液以达到与生物试样相同程度的浓度、或者使用与生物试样的离子浓度为相同程度的泳动液来进行溶解的方法等。
通过上述的以校正用物质和/或精度管理用物质作为试样原料的试样调制工序,例如即使在校正用物质或精度管理用物质的测定中也能够提高分离精度,能够提高装置的校正精度、或进行充分的精度管理。因此,作为又一其他的方式,本发明涉及包括该试样调制工序的、使用校正用物质的校正方法及使用精度管理用物质的精度管理方法。
[分析对象物的测定方法]
作为又一其他的方式,本发明涉及试样中的分析对象物的测定方法,该方法包括采用本发明的试样分析方法来测定试样中的分析对象物。试样及分析对象物如上所述。作为分析对象物,优选为血红蛋白,更优选为HbAlc,进一步优选为作为糖尿病诊断的指标的稳定型HbAlc。此外,本发明的测定方法优选测定作为糖尿病诊断的指标的稳定型HbAlc和其他的血红蛋白成分。因此,作为又一其他的方式,本发明涉及包括采用本发明的试样分析方法来测定HbAlc的HbAlc测定方法,从进行糖尿病的诊断的观点出发,优选采用本发明的试样分析方法将稳定型HbAlc与其他血红蛋白成分分离后进行测定。
[测定用试剂盒]
作为又一其他的方式,本发明涉及包括泳动液、用于调制试样的试样调制液、以及说明书的测定用试剂盒,所述说明书记载了按照泳动液及调制后的试样中的下述a)及b)中的至少一者的浓度成为大致相同的方式使用上述试样调制液来调制试样。另外,本发明的测定试剂盒也可以包括说明书不与本发明的测定试剂盒绑在一起而由万维网提供的情况。
a)通过上述电泳向与上述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于上述分析对象物的移动度的离子的浓度
b)向与上述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度
本发明的测定用试剂盒中,泳动液及试样调制液如上所述。此外,本发明的测定用试剂盒优选还包含电泳芯片。电泳芯片优选为包含试样贮存槽、泳动液贮存槽及流路、且试样贮存槽和泳动液贮存槽通过流路而连通的电泳芯片。此外,电泳芯片的流路中也可以填充上述泳动液。作为电泳芯片,例如可列举出国际公开第2008/136465号中记载的电泳芯片、或后述图1中所示的电泳芯片等。
本发明的测定用试剂盒中代替上述试样调制液、或者与上述试样调制液一起含有如下添加剂:上述a)及b)中的至少一者中记载的离子组成(成分比)与泳动液相同,并且,上述a)及b)中的至少一者的浓度高于泳动液。
本发明的测定用试剂盒例如也可以含有校正用物质及精度管理用物质。本方式的测定用试剂盒优选包含记载了以试剂盒中所含的校正物质和/或精度管理用物质作为试样原料来调制试样的方法的说明书,更优选包含记载了按照校正用物质和/或精度管理用物质中的上述“通过泳动向与分析对象物相同的方向移动、且移动度小于分析对象物的移动度的离子”(上述a)的离子)、“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)或其他离子浓度与分析对象试样的离子浓度为大致相同的方式进行调制的说明书。此外,校正用物质及精度管理用物质也可以是后述的校正用物质和/或精度管理用物质。
本发明的测定用试剂盒例如也可以包含记载了以市售的校正物质和/或精度管理用物质作为试样原料来调制试样的方法的说明书。由此,在试剂盒中不含校正用物质和/或精度管理用物质的情况下、或者使用试剂盒中所含的校正用物质和/或精度管理用物质以外的校正用物质和/或精度管理用物质的情况下,也能够使来源于校正物质及精度管理用物质的试样与生物试样的离子浓度大致相同,能够容易地进行装置的校正精度的提高、和充分的精度管理。说明书中优选记载了例如有关各种校正物质和/或精度管理用物质的制品的调制方法,例如只要记载了对于某种制品用纯化水进行溶解,对于别的制品用生理食水(0.9%的食盐水)进行溶解,对于其他别的制品用泳动液进行溶解等方法即可。此外,当校正用物质及精度管理用物质为液体系时,例如可以记载通过用纯化水、生理盐水及泳动液等溶液稀释来进行调制,此外,当校正用物质及精度管理用物质为冷冻干燥品等干的体系时,也可以记载通过利用上述溶液等溶解来进行调制。进而,通过记载稀释倍率、液量等,能够进行更恰当的调制,能够提高校正精度和/或精度管理。
[试样的调制方法]
作为又一其他的方式,本发明涉及一种试样的调制方法,其是通过使用了电泳法的分析方法来进行分析的试样的调制方法,包括按照用于电泳的泳动液及所调制的试样中的下述a)及b)中的至少一者的浓度成为大致相同的方式来调制试样。根据本发明的试样调制方法,能够更简便地进行本发明的试样分析方法。
a)通过上述电泳向与上述试样中的分析对象物相同的方向移动、且移动度小于上述分析对象物的移动度的离子的浓度
b)向与上述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度
作为上述试样的调制,例如可列举出:使用具有与泳动液相同或类似成分的试样调制液来稀释试样原料以达到与泳动液中的离子成分为大致相同的浓度从而调制试样;分别调制泳动液及试样以达到泳动液与试样中离子成分为大致相同的浓度等。此外,除此以外可以包括:准备使泳动液和稀释后的试样中上述a)及b)中的至少一者的浓度成为大致相同的试样调制液(试样稀释液);准备上述a)及b)中的至少一者中记载的离子的组成(成分比)与泳动液相同、且上述a)及b)中的至少一者的浓度高于泳动液的添加剂,通过将所准备的添加剂添加到试样原料或稀释后的试样中从而使得泳动液和试样中上述a)及b)中的至少一者的浓度相同等。
本发明的试样分析方法、分析对象物的测定方法、测定用试剂盒及试样的调制方法可以用于以糖尿病等的诊断、治疗或经过观察为目的的用途中,但不限定于此,例如也可以用于单纯的化学分析、或突变血红蛋白等的基因多型的检测、酶的同工酶的比率的确认、或者食品、饮料、调味料、洗涤剂、化妆品或医药品等的成分的分析、粘合剂(例如粘合胶带等)、涂料及油墨等的提取物或溶解物的分析之类的不以诊断为目的的用途中。
[校正用物质·精度管理用物质]
作为又一其他的方式,本发明涉及校正用物质、及包含校正用物质的试剂盒。本发明的校正用物质涉及含有分析对象物、还以与该生物试样中的浓度大致相同的离子浓度含有包含分析对象物的生物试样中可以含有的离子成分的校正用物质。根据本发明的校正用物质,例如能够提高装置的校正精度。此外,含有本发明的校正用物质的试剂盒包含校正用物质、和记载了以试剂盒中所含的校正用物质作为试样原料的试样的调制方法的说明书。校正用物质可以是本发明的校正用物质,也可以是市售的校正用物质。当含有市售的校正用物质时,本方式的试剂盒优选包含记载了按照校正用物质中的上述“通过泳动向与分析对象物相同的方向移动、且移动度小于分析对象物的移动度的离子”(上述a)的离子)、“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)或其他离子浓度与分析对象试样的离子浓度为大致相同的方式进行调制的说明书。
作为又一其他的方式,本发明涉及精度管理用物质、及含有精度管理用物质的试剂盒。本发明的精度管理用物质涉及含有分析对象物、还以与该生物试样中的浓度大致相同的离子浓度含有包含分析对象物的生物试样中可以含有的离子成分的精度管理用物质。根据本发明的精度管理用物质,例如可以提高装置的校正精度。此外,含有本发明的精度管理用物质的试剂盒包含精度管理用物质、和记载了以试剂盒中所含的精度管理用物质作为试样原料的试样的调制方法的说明书。精度管理用物质可以是本发明的精度管理用物质,也可以是市售的精度管理用物质。当含有市售的精度管理用物质时,本方式的试剂盒优选包含记载了按照精度管理用物质中的上述“通过泳动向与分析对象物相同的方向移动、且移动度小于分析对象物的移动度的离子”(上述a)的离子)、“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)或其他离子浓度与分析对象试样的离子浓度为大致相同的方式进行调制的说明书。
关于本发明的校正用物质及精度管理用物质,除了包括按照与该生物试样中的浓度成为大致相同的离子浓度的方式来添加或调制含有分析对象物的生物试样中可以含有的离子成分的工序以外,可以与一般的校正用物质或精度管理用物质的制造方法同样地进行。
本发明的校正用物质及精度管理用物质、以及含有它们的试剂盒并非仅适用于本发明的试样分析方法、及分析对象物的测定方法,也可以作为其他的利用电泳的测定、或利用电泳以外的测定原理的测定中使用的校正用物质及精度管理用物质而适用。在其他的利用电泳的测定、或利用电泳以外的测定原理的测定中使用的情况下,也同样地只要进行上述试样的调制方法即可。另外,本发明的校正用物质及精度管理用物质例如不包括将溶血试样等上述生物试样直接冷冻干燥或稀释而得到的物质。
以下,举例对本发明的试样分析方法进行说明。但是,以下的说明只不过是一个例子,不用说本发明并不限定于此。
(实施方式1)
本实施方式以使用图1所示的微芯片化了的毛细管电泳芯片、试样原料为全血、分析对象物为血红蛋白的情况为例进行说明。
图1是表示本发明的试样分析方法中使用的电泳芯片的构成的一个例子的概念图。图1所示的电泳芯片具有流路3、试样贮存槽2a及泳动液贮存槽2b,试样贮存槽2a及泳动液贮存槽2b分别形成于流路3的两端。
电泳芯片整体的大小例如为长10~200mm、宽10~60mm、厚0.3~5mm,优选为长30~70mm、宽10~60mm、厚0.3~5mm。
流路3的长度可以根据电泳芯片的长度适当决定,例如为50~150mm,优选为50~60mm。此外,流路3的内径例如为200μm以下,优选为10~200μm,更优选为25~100μm。流路3的形状没有特别限制,可以是圆形,也可以是矩形。
流路3的材质可列举出玻璃、熔融二氧化硅、塑料等。作为塑料制,例如可列举出聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、聚醚醚酮(PEEK)等。流路3的内壁例如可以用甲硅烷化剂等被覆。利用甲硅烷化剂等对流路3的内壁的被覆例如可以与国际公开2008/029685号、国际公开2008/136465号、日本特开2009-186445号公报中记载的方法等同样地进行。此外,流路3也可以是市售的毛细管。
试样贮存槽2a及泳动液贮存槽2b的容积可以根据流路的内径及长度等适当决定,例如分别为1~1000mm3的范围,更优选为50~100mm3的范围。试样贮存槽2a及泳动液贮存槽2b也可以分别具备用于对流路3的两端施加电压的电极。
从抑制试样及泳动液的蒸发、减少浓度变化的观点出发,流路3、试样贮存槽2a及泳动液贮存槽2b的上表面优选用密封材等覆盖。
接下来,对使用了图1所示的电泳芯片的试样分析方法的一个例子进行说明。
首先,向电泳芯片的流路3中填充泳动液。
向流路3中填充泳动液例如可以通过压力或毛细管现象而进行。此外,也可以使用在流路3中填充有泳动液的电泳芯片。
作为泳动液,例如可以使用有机酸、缓冲液、氨基酸类等,优选为有机酸。作为有机酸,可列举出马来酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、邻苯二甲酸、丙二酸、苹果酸等。作为缓冲液,例如可列举出MES、ADA、ACES、BES、MOPS、TES、HEPES、TRICINE等。作为氨基酸类,可列举出甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸等。泳动液中,除了有机酸和/或缓冲液以外,还可以含有弱碱或1,4-二氨基丁烷。作为弱碱,例如可列举出精氨酸、赖氨酸、组氨酸、Tris等。泳动液的pH例如为pH4.5~6。此外,像本实施方式那样分析对象物为血红蛋白时,泳动液优选含有硫酸软骨素或其盐之类的硫酸化多糖类等离子性的模拟固定相。由此,可以在血红蛋白的β链N末端的氨基上结合硫酸化多糖类而形成复合体,从而进一步提高分离精度。
接着,在流路3中填充有泳动液的上述电泳芯片的试样贮存槽2a中配置试样。
试样贮存槽2a中配置的试样可以通过将作为试样原料的全血利用上述试样调制液等稀释来进行调制。在该试样的调制中,优选使泳动液和试样中的“通过电泳向与作为分析对象物的血红蛋白相同的方向移动、且移动度小于作为分析对象物的血红蛋白的移动度的离子的浓度”及“向与作为分析对象物的血红蛋白相反的方向移动的离子的浓度”的至少一者大致相同。例如,当泳动液含有硫酸软骨素、钠、酒石酸、精氨酸作为离子成分时,由于作为分析对象物的血红蛋白与硫酸软骨素形成复合体,变成阴性的状态,因此优选使具有负电荷的硫酸软骨素及酒石酸的离子(即,向与分析对象物相反的方向移动的离子)的浓度大致相同。
使上述离子的浓度大致相同是指,如上所述,当分离长(试样贮存槽的流路侧的端部与分析部的距离)为10~30mm时,泳动液中所含的离子与对应于该泳动液的离子的试样中的离子的浓度之差例如超过-10mmol/L且不足+10mmol/L时可以视为大致相同的浓度,优选为-5mmol/L~+5mmol/L等。当以血清、血浆或红细胞作为试样原料时,它们中例如存在Na、K及Cl等,当分析对象物为血红蛋白时,Cl成为“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)。血清、血浆及红细胞中的Cl(分子量:35.5)的浓度通常为100mmol/L=3.55g/L左右,将其稀释10倍来调制试样的情况下,试样中变成含有0.355g/L左右浓度的Cl。因此,可以设定泳动液及试样中的Cl以外的上述b)的离子的浓度,使得泳动液和试样中的Cl的离子浓度之差在上述范围内。当泳动液及试样含有酒石酸(分子量:150)时,酒石酸成为b)的离子,因此通过使泳动液及试样中的酒石酸的浓度例如为3.55g/L=24mmol/L以上、优选为7.1g/L=48mmoI/L以上,可以将泳动液中所含的离子与对应于该泳动液的离子的试样中的离子的浓度之差调整至上述范围。另外,试样中例如可以含有磷酸根离子或硫酸根离子等离子,但它们的浓度约为1mmoI/L。因此,关于这些离子,可以包含在上述优选的范围(-5mmol/L~+5mmol/L)内。
试样原料的稀释率例如为1.2~100倍,优选为2~30倍,更优选为3~15倍。此外,当试样原料中以能给分离能力造成影响的程度含有离子成分时,试样原料的稀释率例如为2~1000倍,优选为5~300倍,更优选为10~200倍。
此外,试样及泳动液的pH优选为大致相同。因此,可以向试样和/或泳动液中添加pH缓冲物质来调节pH。作为pH缓冲物质,没有特别限制,可以使用任意离子,其中,从能够以更稳定的离子状态进行电泳的方面出发,优选为其pKa包含在pH调节后的试样及泳动液的pH的±1.0以内的离子,更优选为包含在±0.7以内的离子。作为pH缓冲物质的浓度,当对于全部离子而言时,例如为10~3000mmol/L,优选为50~1500mmol/L,更优选为100~800mmol/L。当为pKa包含在调节后的试样及泳动液的pH中的离子的情况下,例如为5~2000mmol/L,优选为20~1000mmol/L,更优选为50~600mmol/L,进一步优选为100~400mmol/L。
接着,对流路3的两端、即试样贮存槽2a及泳动液贮存槽2b之间施加电压。由此,从试样贮存槽2a向流路3中导入试样并在流路3中进行分离,含有血红蛋白的试样从试样贮存槽2a向泳动液贮存槽2b移动。
对流路3的两端施加的电压例如为0.5~10kV,优选为0.5~5kV。
然后,在规定的位置进行测定。测定例如可以通过吸光度测定等光学方法进行。当分析对象物为血红蛋白时,例如优选进行波长415nm的吸光度的测定。
进行测定的位置、即分离所需要的长度(图1中的y)可以根据流路3的长度等适当决定。例如当流路3的长度为50~150mm时,优选在流路3的距离试样贮存槽2a侧的端部5~140mm的位置进行,更优选为10~100mm,进一步优选为15~50mnn。
通过如上所述进行分析,从而可以进行血红蛋白的测定,优选可以将HbAlc与其他血红蛋白成分、进一步优选将作为糖尿病诊断指标的稳定型HbAlc与其他血红蛋白成分分离而测定。作为其他的血红蛋白成分,可列举出不稳定型HbAlc、HbS、HbF、HbA2、HbC等。进而,通过对所得到的电泳图进行解析,例如可以测定HbAlc的比率(%HbAlc)或HbAlc的量。因此,本发明的分析方法可以利用于糖尿病的预防、诊断及治疗等用途中。
另外,上述实施方式中,以使用将全血进行溶血处理而得到的溶血试样作为试样原料、并使用将其用试样调制液稀释而得到的试样的情况为例进行了说明,但本发明并不限定于此。试样例如可以是从生物体采集的试样原料(例如溶血了的血液)本身,也可以是将试样原料用溶剂(试样调制液)稀释而得到的试样。试样原料例如可以是含有血液的血液试样,也可以是包含含有血红蛋白的市售品的试样。作为血液试样,没有特别限制,例如可列举出将全血等血细胞含有物进行溶血处理而得到的溶血试样等。上述溶血处理没有特别限制,例如可列举出超声波处理、冷冻解冻处理、加压处理、渗透压处理、表面活性剂处理等。上述渗透压处理没有特别限制,也可以将全血等血细胞含有物用低渗液等进行处理。作为上述低渗液,没有特别限制,例如可列举出水、缓冲液等。上述缓冲液没有特别限制,例如可以含有前述的缓冲剂、添加剂等。作为上述表面活性剂处理,没有特别限制,例如可列举出非离子性表面活性剂等。作为上述非离子性表面活性剂,没有特别限制,例如可列举出聚氧乙烯异辛基苯基醚(商品名“Triton(注册商标)X-100”)等。
以下,利用实施例及比较例进一步详细说明本发明。但是,本发明并不限定于以下的实施例来解释。
实施例
[微芯片]
使用具有图1所示结构的电泳芯片(聚甲基丙烯酸酯制,长:70mm、宽30mm)。电泳芯片具有矩形的流路3,在流路3的两端分别形成有试样贮存槽2a(容积:0.05mL)和泳动液贮存槽2b(容积:0.05mL)。流路3的长度(图1中的x)为40mm,流路3的宽度及深度分别为40μm(流路的内径:40μm)。此外,试样贮存槽2a的中心与泳动液贮存槽2b的中心的距离为46mm。
(实施例1)
实施例1示出了分析对象物为稳定型HbAlc的例子。
[泳动液]
泳动液使用将含有1.0重量%硫酸软骨素C钠(生化学工业)、1mMNaN3及0.01%Triton(注册商标)X-100的100mmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸调节至pH4.8而得到的溶液。
[试样]
准备将含有1.11重量%硫酸软骨素C钠(生化学工业)、1.1mM NaN3及0.011%Triton(注册商标)X-100的111mmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸调节至pH4.8而得到的溶液,作为试样调制液。准备血红蛋白浓度为140g/L的血红蛋白溶液作为试样原料。另外,该血红蛋白溶液含有蔗糖作为添加剂,但不含上述a)的离子及b)的离子或上述其他的离子。通过将试样原料0.01mL用试样调制液0.09mL稀释,从而来调制试样(稀释10倍)。即,按照硫酸软骨素C钠的浓度为1.0重量%、L-酒石酸的浓度为100mmol/L的方式调制试样。将泳动液及试样中的硫酸软骨素、酒石酸及精氨酸的离子浓度示于下述表1中。另外,硫酸软骨素及酒石酸相当于“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)。此外,作为试样原料,使用含有不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc及HbA0的血红蛋白溶液(不含HbS及HbF的血红蛋白溶液)。
[电泳]
向电泳芯片的泳动液贮存槽2b中导入泳动液,通过毛细管作用,向流路3中填充泳动液。接下来,向试样贮存槽2a中导入试样。向试样贮存槽2a及泳动液贮存槽2b中分别插入电极,对所插入的电极施加1400V的电压,从而进行电泳。在距离试样贮存槽2a侧的流路3的端部20mm(图1中的y)的位置,测定415nm下的吸光度。将所得到的电泳图的一个例子示于图2中。
(比较例1)
比较例1中,除了使用泳动液(将含有1.0重量%硫酸软骨素C钠(生化学工业)、1mM NaN3及0.01%Triton(注册商标)X-100的100mmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸调节至pH4.8而得到的溶液)作为试样调制液以外,与实施例1同样地进行测定。将泳动液及试样中的硫酸软骨素、酒石酸及精氨酸的离子浓度示于下述表1中。将所得到的电泳图的一个例子示于图3中。
图2及3中,细线表示实际得到的电泳图,粗线表示对电泳图进行处理后得到的吸光度的变化,X轴表示泳动时间(秒),Y轴(左侧)表示实测的吸光度(mAbs),Y轴(右侧)表示对实测的吸光度进行处理后得到的每单位时间的吸光度(mAbs/sec)。此外,图2及3中,不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc、HbA0分别表示不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc及HbA0的峰。另外,将电泳图转换成表示吸光度变化的图表的处理采用微软公司的Excel来进行。
如图2所示,根据实施例1的本发明的方法,能够将HbAlc与HbA0明确分离,并且能够将HbAlc明确分离成不稳定型HbAlc和稳定型HbAlc。此外,如图2及3所示,由于实施例1的电泳图与比较例1的电泳图相比各峰较尖锐(峰宽较窄),因此可以确认,实施例1的本发明的方法与比较例1的方法相比,分离能力明显提高。
进而,比较例1的方法中,至不稳定型HbAlc的峰出现为止,从泳动开始需要30秒以上,至HbA0的峰出现为止需要50秒以上,与此相对,根据实施例1的本发明的方法,不稳定型HbAlc及稳定型HbAlc从泳动开始30秒以内出现峰,HbA0从泳动开始40秒以内出现峰。也就是说,根据实施例1的本发明的方法,能够以约40秒的电泳时间将不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc及HbA0分离。因此,根据实施例1的本发明的方法,能够以短时间且良好的精度将不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc及HbA0分离。
(实施例2)
实施例2示出了分析对象物为稳定型HbAlc的例子,作为试样原料,使用含有稳定型HbAlc、HbA0、HbS及HbF的血红蛋白浓度为100g/L的血红蛋白溶液,除此以外与实施例1同样地进行测定。将所得到的电泳图的一个例子示于图4中。另外,所使用的血红蛋白溶液含有蔗糖作为添加剂,但不含上述a)的离子及b)的离子或上述其他的离子,实施例2中的泳动液及试样中的硫酸软骨素、酒石酸及精氨酸的离子浓度与上述实施例1相同。
(比较例2)
比较例2中,除了使用泳动液(将含有1.0重量%硫酸软骨素C钠(生化学工业)、1mM NaN3及0.01%Triton(注册商标)X-100的100mmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸调节至pH4.8而得到的溶液)作为试样调制液以外,与实施例2同样地进行测定。将所得到的电泳图的一个例子示于图5中。另外,比较例2中的泳动液及试样中的硫酸软骨素、酒石酸及精氨酸的离子浓度与上述比较例1相同。
图4及5中,细线表示实际得到的电泳图,粗线表示对电泳图进行处理后得到的吸光度的变化。此外,图4及5中,HbF、稳定型HbAlc、HbA0及HbS分别表示各血红蛋白的峰。如图4所示,根据实施例2的方法,能够将HbF、稳定型HbAlc、HbA0及HbS分离。此外,如图4及5所示,实施例2的电泳图与比较例2的电泳图相比,各峰较锐,明确呈现。因此可以确认,实施例2的本发明的方法与比较例2的方法相比,分离能力明显提高。
进而,如图4及5所示,根据实施例2的方法,分离所需要的时间为短时间。具体而言,从泳动开始40秒内就可以检测到HbA0,45秒内就可以检测到HbS。也就是说,根据实施例2的本发明的方法,能够以约45秒的电泳时间将HbF、稳定型HbAlc、HbA0及HbS分离。因此,根据实施例2的本发明的方法,能够以短时间且良好的精度将HbF、稳定型HbAlc、HbA0及HbS分离。
(实施例3)
除了使用健康人血作为试样原料以外,与实施例1同样地进行测定。将所得到的电泳图的一个例子示于图6中。另外,实施例3中的泳动液及试样中的硫酸软骨素、酒石酸、精氨酸的离子浓度与上述实施例1相同。
图6中,细线表示实际得到的电泳图,粗线表示对电泳图进行处理后得到的吸光度的变化。此外,图6中,不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc、HbA0分别表示各血红蛋白的峰。如图6所示,根据实施例3的方法,能够将健康人血进行溶血处理而得到的溶血试样中的不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc及HbA0分离。进而,如图6所示,根据实施例3的方法,能够以短时间进行分离。
(实施例4)
实施例4是通过将全血中所含的Cl离子添加到泳动液中从而使泳动液和试样中的硫酸软骨素、酒石酸及Cl的离子浓度大致相同来进行电泳的例子。实施例4除了使用下述泳动液以外,与实施例3同样地进行测定。另外,硫酸软骨素、酒石酸及Cl相当于“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)。
[泳动液]
泳动液使用将含有1.0重量%硫酸软骨素C钠(生化学工业)、1mMNaN3及0.01%Triton(注册商标)X-100及10mmol/L NaCl的100mmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸调节至pH4.8而得到的溶液。
将泳动液及试样中的硫酸软骨素、酒石酸、精氨酸及Cl的离子浓度示于下述表2中。测定的结果是,根据实施例4的本发明的方法,与实施例3同样地能够将健康人血进行溶血处理而得到的溶血试样中的不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc及HbA0分离,进而,能够以短时间进行它们的分离。
(表2) | 泳动液 | 试样 |
硫酸软骨素 | 1.0重量% | 1.0重量% |
酒石酸 | 100mM | 100mM |
精氨酸 | 190mM | 190mM |
Cl | 10mmol/L | 约10mmol/L |
(实施例5)
实施例5是通过向试样调制液及泳动液中添加Cl离子从而使泳动液和试样中的硫酸软骨素、酒石酸及Cl的离子浓度大致相同而进行电泳的例子。实施例5除了使用下述试样以外,与实施例4同样地进行测定。另外,硫酸软骨素、酒石酸及Cl相当于“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)。
[试样]
准备将含有1.11重量%硫酸软骨素C钠(生化学工业)、1.1mM NaN3及0.011%Triton(注册商标)X-100及11mmol/L NaCl的111mmol/L L-酒石酸溶液用L-精氨酸调节至pH4.8而得到的溶液,作为试样调制液。准备血红蛋白浓度为140g/L的血红蛋白溶液作为试样原料。通过将试样原料0.01mL用试样调制液0.09mL稀释,从而调制试样(稀释10倍)。另外,该血红蛋白溶液含有蔗糖,但不含上述a)的离子及b)的离子或上述其他的离子。
将泳动液及试样中的硫酸软骨素、酒石酸、精氨酸及Cl的离子浓度示于下述表3中。测定的结果是,根据实施例5的本发明的方法,与实施例1同样地能够将HbAlc与HbA0明确分离,并且能够将HbAlc明确地分离成不稳定型HbAlc和稳定型HbAlc。此外,根据实施例5的本发明的方法,能够以短时间且良好的精度将不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc及HbA0分离。
(表3) | 泳动液 | 试样 |
硫酸软骨素 | 1.0重量% | 1.0重量% |
酒石酸 | 100mM | 100mM |
精氨酸 | 190mM | 190mM |
Cl | 10mmol/L | 10mmol/L |
(实施例6)
实施例6是使用将血红蛋白冷冻干燥品用纯化水溶解而得到的溶液作为试样原料、并通过向泳动液中添加Cl离子从而使泳动液和试样中的硫酸软骨素、酒石酸及Cl的离子浓度大致相同来进行电泳的例子。实施例6除了使用下述试样以外,与实施例4同样地进行测定。另外,硫酸软骨素、酒石酸及Cl相当于“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)。
[试样]
准备与实施例1相同的溶液作为试样调制液。此外,准备向将溶血试样冷冻干燥而得到的血红蛋白冷冻干燥品中加入1mL的纯化水而含有血红蛋白浓度为140g/L及NaCl 100mmol/L的溶液作为试样原料。通过将试样原料0.01mL用试样调制液0.09mL稀释,从而调制试样(稀释10倍)。
将泳动液及试样中的硫酸软骨素、酒石酸、精氨酸及Cl的离子浓度示于下述表4中。测定的结果是,根据实施例6的本发明的方法,与实施例1同样地能够将HbAlc与HbA0明确分离,并且能够将HbAlc明确分离成不稳定型HbAlc和稳定型HbAlc。此外,根据实施例6的本发明的方法,能够以短时间且良好的精度将不稳定型HbAlc、稳定型HbAlc及HbA0分离。
(表4) | 泳动液 | 试样 |
硫酸软骨素 | 1.0重量% | 1.0重量% |
酒石酸 | 100mM | 100mM |
精氨酸 | 190mM | 190mM |
Cl | 10mmol/L | 10mmol/L |
(实施例7)
实施例7示出了利用毛细管电泳来检测突变Hb(HbF、HbS及HbA2)的例子。
[泳动液]
泳动液使用将含有200mM的三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)及15mM的1,4-二氨基丁烷的溶液用NaOH调节至pH9.4而得到的溶液。
[试样]
准备将含有222mM三(羟甲基)甲基甘氨酸及16.7mM 1,4-二氨基丁烷的溶液用NaOH调节至pH9.4而得到的溶液,作为试样调制液。作为试样原料,准备将含有HbA、HbA2、HbF及HbS的Lyphocheck A2对照液(Bio-Rad公司制造)用纯化水溶解而得到的血红蛋白浓度为80g/L的血红蛋白溶液。通过将试样原料0.01mL用试样调制液0.09mL稀释,从而调制试样(稀释10倍)。即,按照三(羟甲基)甲基甘氨酸的浓度为200mmol/L的方式调制试样。将泳动液及试样中的三(羟甲基)甲基甘氨酸及1,4-二氨基丁烷的浓度示于下述表5中。另外,三(羟甲基)甲基甘氨酸相当于“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)。
使用上述泳动液及试样,通过与实施例1同样的方法进行电泳。将所得到的电泳图的一个例子示于图7中。
图7中,细线表示实际得到的电泳图,粗线表示对电泳图进行处理后得到的吸光度的变化。此外,图7中,分别表示HbA、HbF、HbS及HbA2的各血红蛋白的峰。如图7所示,根据实施例7的方法,能够以短时间且良好的精度将HbF、HbS及HbA2等突变Hb分离。
(比较例3)
作为比较例3,除了使用下述试样以外,通过与实施例7同样的方法利用毛细管电泳进行突变Hb的测定。将所得到的电泳图的一个例子示于图8中。另外,将泳动液及试样中的三(羟甲基)甲基甘氨酸及1,4-二氨基丁烷的浓度示于下述表5中。
[试样]
准备将含有200mM三(羟甲基)甲基甘氨酸及15mM 1,4-二氨基丁烷的溶液用NaOH调节至pH9.4而得到的溶液,作为试样调制液。作为试样原料,准备将含有HbA、HbA2、HbF及HbS的Lyphocheck A2对照液(Bio-Rad公司制造)用纯化水溶解而血红蛋白浓度为80g/L的血红蛋白溶液。通过将试样原料0.01mL用试样调制液0.09mL稀释,从而调制试样(稀释10倍)。即,按照三(羟甲基)甲基甘氨酸的浓度为180mmol/L的方式调制试样。
图8中,细线表示实际得到的电泳图,粗线表示对电泳图进行处理后得到的吸光度的变化。此外,图8中,分别表示HbA、HbF、HbS及HbA2的各血红蛋白的峰。
如图7及8所示,实施例7的电泳图与比较例3的电泳图相比,各峰的宽度较窄,能够以优异的分离度分离各血红蛋白。因此可以确认,实施例7的本发明的方法与比较例3的方法相比,分离能力提高。
(实施例8)
实施例8示出了利用毛细管电泳来检测血清蛋白质的例子。
[泳动液]
将含有150mM甘氨酸的溶液用NaOH调节至pH10.0。
[试样]
准备将含有167mM甘氨酸的溶液用NaOH调节至pH10.0而得到的溶液,作为试样调制液。作为试样原料,准备白蛋白浓度为40g/L的溶液。通过将试样原料0.01mL用试样调制液0.09mL稀释,从而调制试样(稀释10倍)。即,按照甘氨酸的浓度为150mmol/L的方式调制试样。将泳动液及试样中的甘氨酸的浓度示于下述表6中。另外,甘氨酸相当于“向与分析对象物相反的方向移动的离子”(上述b)的离子)。
除了以280nm下的吸光度进行检测以外,通过与实施例1同样的方法进行电泳。将所得到的电泳图的一个例子示于图9中。
(比较例4)
作为比较例4,除了使用泳动液(含有150mM的甘氨酸的溶液,pH10.0)作为试样调制液以外,通过与实施例8同样的方法利用毛细管电泳来进行突变Hb的测定。将所得到的电泳图的一个例子与实施例8的结果一并示于图9中。另外,将泳动液及试样中的甘氨酸的浓度示于下述表6中。
图9是表示对电泳图进行处理后得到的吸光度变化的图表,粗线表示实施例8,细线表示比较例4。如图9所示,实施例8的电泳图(粗线)与比较例4的电泳图(细线)相比峰宽较窄,能够以良好的分离度分离血清蛋白质(白蛋白)。因此可以确认,实施例8的本发明的方法与比较例4的方法相比,分离能力提高。
本发明的试样分析方法例如在医疗领域、临床检查的领域、糖尿病的治疗/预防领域等各种领域中是有用的。
本发明在不脱离其精神或本质特征的其他方式中也可以实施。应该认为本申请公开的实施方式均用于在全部方面帮助说明,而并非限制事项。本发明的范围与其说通过上述详细说明而示出,不如说通过所附的权利要求而示出。并且,与权利要求均等的手段及范围内的变更也包含在权利要求的范围内。
Claims (10)
1.一种试样分析方法,其是利用电泳法进行的试样分析方法,所述电泳法使用了具备流路和形成于所述流路中的试样贮存槽的电泳装置,所述试样分析方法包括:
向在所述流路中填充有泳动液的所述电泳装置的所述试样贮存槽中配置试样的步骤;以及
通过对所述流路的两端施加电压来进行电泳的步骤,
并且包括使所述试样及所述泳动液中的下述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同的步骤,
a)通过所述电泳向与所述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于所述分析对象物的移动度的离子的浓度,
b)向与所述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度。
2.根据权利要求1所述的试样分析方法,在所述试样及所述泳动液中,使所述a)及b)的浓度大致相同。
3.根据权利要求1所述的试样分析方法,其包括下述步骤:通过使所述试样及所述泳动液中所述a)及b)中的至少一者的浓度大致相同,从而使所述电泳中的所述流路内的位于试样周围的离子成为与所述试样贮存槽中配置的试样大致相同的状态。
4.根据权利要求1所述的试样分析方法,所述流路为毛细管,所述电泳法为毛细管电泳法。
5.根据权利要求1所述的试样分析方法,所述试样是含有血红蛋白的试样。
6.一种血红蛋白Alc的测定方法,所述血红蛋白Alc的测定方法包括利用权利要求1~5中任一项所述的试样分析方法来测定血红蛋白Alc的步骤。
7.一种测定用试剂盒,其包含泳动液、用于调制试样的试样调制液和说明书,所述说明书记载了按照泳动液及调制后的试样中的下述a)及b)中的至少一者的浓度成为大致相同的方式使用所述试样调制液来调制试样,
a)通过所述电泳向与所述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于所述分析对象物的移动度的离子的浓度,
b)向与所述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度。
8.根据权利要求7所述的测定用试剂盒,其还包含电泳芯片,所述电泳芯片是包含试样贮存槽、泳动液贮存槽及流路,并且所述试样贮存槽与所述泳动液贮存槽通过所述流路而连通的电泳芯片。
9.根据权利要求7或8所述的测定用试剂盒,其还包含校正用物质和/或精度管理用物质。
10.一种试样的调制方法,其是通过利用电泳法的分析方法来进行分析的试样的调制方法,其包括下述步骤:
按照用于电泳的泳动液及所调制的试样中的下述a)及b)中的至少一者的浓度成为大致相同的方式来调制试样,
a)通过所述电泳向与所述试样中的分析对象物相同的方向移动、并且移动度小于所述分析对象物的移动度的离子的浓度,
b)向与所述分析对象物相反的方向移动的离子的浓度。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010009364 | 2010-01-19 | ||
JP009364/2010 | 2010-01-19 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102128873A true CN102128873A (zh) | 2011-07-20 |
Family
ID=44065167
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2011100094467A Pending CN102128873A (zh) | 2010-01-19 | 2011-01-17 | 使用电泳的试样的分析方法及其利用 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20110174621A1 (zh) |
EP (1) | EP2352020A3 (zh) |
JP (1) | JP5551092B2 (zh) |
CN (1) | CN102128873A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103940887A (zh) * | 2013-01-22 | 2014-07-23 | 爱科来株式会社 | 试样的分析方法、其中使用的溶液以及试样分析用盒 |
CN104598767A (zh) * | 2015-01-16 | 2015-05-06 | 上海市第一人民医院 | 一种利用计算机鉴定免疫固定电泳m蛋白成份的方法 |
CN105403609A (zh) * | 2014-09-04 | 2016-03-16 | 爱科来株式会社 | 分析方法和分析系统 |
CN107884562A (zh) * | 2016-09-30 | 2018-04-06 | 爱科来株式会社 | 粒子的磁标记方法和标记装置 |
CN112424595A (zh) * | 2018-07-13 | 2021-02-26 | 浜松光子学株式会社 | 电泳方法、电泳系统及电泳用的收纳容器 |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5990440B2 (ja) * | 2012-09-26 | 2016-09-14 | テルモ株式会社 | ヘマトクリット値の測定方法 |
CN103235027B (zh) * | 2013-04-17 | 2015-07-08 | 普瑞麦迪(北京)实验室技术有限公司 | 一种电泳系统的压紧装置 |
JP6153972B2 (ja) * | 2014-07-09 | 2017-06-28 | アークレイ株式会社 | 緩衝剤組成物 |
JP6871575B2 (ja) * | 2017-12-11 | 2021-05-12 | 日本電信電話株式会社 | 生体分子移動制御方法およびデバイス |
US20200407425A1 (en) * | 2018-03-02 | 2020-12-31 | Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha | Method of stabilizing protein contained in specimen and solution for stabilizing protein contained in specimen |
JP7085943B2 (ja) * | 2018-08-23 | 2022-06-17 | アークレイ株式会社 | 成分分析方法及び成分分析装置 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1910450A (zh) * | 2004-01-30 | 2007-02-07 | 卡钳生命科学股份有限公司 | 表征蛋白质的方法、装置和系统 |
CN1967194A (zh) * | 2004-11-18 | 2007-05-23 | 莎碧亚公司 | 分析血红蛋白的毛细管电泳方法,用于毛细管电泳的试剂盒,和流动抑制剂在所述方法中的用途 |
WO2008029684A1 (fr) * | 2006-09-04 | 2008-03-13 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Procédé pour analyse d'échantillon par électrophorèse capillaire |
WO2008078781A1 (ja) * | 2006-12-26 | 2008-07-03 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | ヘモグロビン類の測定方法及び電気泳動装置 |
JP2009186445A (ja) * | 2008-02-08 | 2009-08-20 | Arkray Inc | キャピラリー電気泳動法によるヘモグロビンの分析方法およびそれに用いる試薬 |
CN101529238A (zh) * | 2006-10-16 | 2009-09-09 | 积水化学工业株式会社 | 血红蛋白类的测定方法 |
CN101568830A (zh) * | 2007-04-27 | 2009-10-28 | 独立行政法人产业技术综合研究所 | 电泳芯片、电泳装置以及利用毛细电泳法的试样分析方法 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60112110A (ja) | 1983-11-24 | 1985-06-18 | Toyota Central Res & Dev Lab Inc | 無人車の誘導制御装置 |
BE1004336A3 (fr) | 1991-01-15 | 1992-11-03 | Analis Sa | Procede de separation et de quantification de l'hemoglobine glycosylee hb a1c. |
EP1296134B1 (en) | 1993-04-15 | 2013-05-29 | Bayer Intellectual Property GmbH | Sampling device and its use for controlling sample introduction in microcolumn separation techniques |
JP3262631B2 (ja) | 1993-04-27 | 2002-03-04 | 積水化学工業株式会社 | 糖化ヘモグロビン測定用標準物質およびその製造法 |
JP2790067B2 (ja) | 1994-12-27 | 1998-08-27 | 株式会社島津製作所 | 電気泳動装置 |
US5611903A (en) * | 1995-03-22 | 1997-03-18 | Analis S. A. | Capillary electrophoresis method using initialized capillary and polyanion-containing buffer and chemical kit therefor |
JP3686482B2 (ja) | 1996-06-27 | 2005-08-24 | 株式会社ビー・エム・エル | ヘモグロビンa1cの管理試料 |
WO2001094618A1 (fr) | 2000-06-07 | 2001-12-13 | Bml, Inc. | Procede de detection d'albumine saccharifiee |
JP4183116B2 (ja) | 2002-06-18 | 2008-11-19 | 旭化成ファーマ株式会社 | 糖化タンパク質測定用検量物質および標準測定法 |
JP2004125560A (ja) | 2002-10-01 | 2004-04-22 | Sekisui Chem Co Ltd | ヘモグロビン標準試料調製液、ヘモグロビン標準試料溶液およびヘモグロビン類の測定方法 |
JP2007506092A (ja) * | 2003-09-22 | 2007-03-15 | 株式会社島津製作所 | 電気泳動装置及び方法、並びに電気泳動部材及び試料分注プローブ |
EP2060913B1 (en) | 2006-09-04 | 2016-11-02 | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology | Method for analysis of sample by capillary electrophoresis |
JP5600434B2 (ja) * | 2007-04-27 | 2014-10-01 | アークレイ株式会社 | 分析チップおよび分析装置 |
JP5057451B2 (ja) | 2007-09-18 | 2012-10-24 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 異種緩衝液を使用する電気泳動法 |
-
2011
- 2011-01-13 JP JP2011005139A patent/JP5551092B2/ja active Active
- 2011-01-13 US US13/006,197 patent/US20110174621A1/en not_active Abandoned
- 2011-01-17 CN CN2011100094467A patent/CN102128873A/zh active Pending
- 2011-01-19 EP EP20110151413 patent/EP2352020A3/en not_active Withdrawn
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1910450A (zh) * | 2004-01-30 | 2007-02-07 | 卡钳生命科学股份有限公司 | 表征蛋白质的方法、装置和系统 |
CN1967194A (zh) * | 2004-11-18 | 2007-05-23 | 莎碧亚公司 | 分析血红蛋白的毛细管电泳方法,用于毛细管电泳的试剂盒,和流动抑制剂在所述方法中的用途 |
WO2008029684A1 (fr) * | 2006-09-04 | 2008-03-13 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Procédé pour analyse d'échantillon par électrophorèse capillaire |
CN101529238A (zh) * | 2006-10-16 | 2009-09-09 | 积水化学工业株式会社 | 血红蛋白类的测定方法 |
WO2008078781A1 (ja) * | 2006-12-26 | 2008-07-03 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | ヘモグロビン類の測定方法及び電気泳動装置 |
CN101568830A (zh) * | 2007-04-27 | 2009-10-28 | 独立行政法人产业技术综合研究所 | 电泳芯片、电泳装置以及利用毛细电泳法的试样分析方法 |
JP2009186445A (ja) * | 2008-02-08 | 2009-08-20 | Arkray Inc | キャピラリー電気泳動法によるヘモグロビンの分析方法およびそれに用いる試薬 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ZAK K.SHIHABI: "Effect of sample composition on electrophoretic migration Application to hemoglobin analysis by capillary electrophoresis and agarose electrophoresis", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 * |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103940887A (zh) * | 2013-01-22 | 2014-07-23 | 爱科来株式会社 | 试样的分析方法、其中使用的溶液以及试样分析用盒 |
US9618478B2 (en) | 2013-01-22 | 2017-04-11 | Arkray, Inc. | Sample analysis method and solution to be used therein |
CN105403609A (zh) * | 2014-09-04 | 2016-03-16 | 爱科来株式会社 | 分析方法和分析系统 |
US10018589B2 (en) | 2014-09-04 | 2018-07-10 | Arkray, Inc. | Analysis method and analysis system |
CN104598767A (zh) * | 2015-01-16 | 2015-05-06 | 上海市第一人民医院 | 一种利用计算机鉴定免疫固定电泳m蛋白成份的方法 |
CN104598767B (zh) * | 2015-01-16 | 2018-03-30 | 上海市第一人民医院 | 一种利用计算机鉴定免疫固定电泳m蛋白成份的方法 |
CN107884562A (zh) * | 2016-09-30 | 2018-04-06 | 爱科来株式会社 | 粒子的磁标记方法和标记装置 |
CN107884562B (zh) * | 2016-09-30 | 2020-10-16 | 爱科来株式会社 | 粒子的磁标记方法和标记装置 |
CN112424595A (zh) * | 2018-07-13 | 2021-02-26 | 浜松光子学株式会社 | 电泳方法、电泳系统及电泳用的收纳容器 |
TWI809139B (zh) * | 2018-07-13 | 2023-07-21 | 日商濱松赫德尼古斯股份有限公司 | 電泳方法、電泳系統及電泳用之收容容器 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2011169892A (ja) | 2011-09-01 |
EP2352020A2 (en) | 2011-08-03 |
EP2352020A3 (en) | 2013-04-24 |
US20110174621A1 (en) | 2011-07-21 |
JP5551092B2 (ja) | 2014-07-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102128873A (zh) | 使用电泳的试样的分析方法及其利用 | |
Quirino et al. | Approaching a million-fold sensitivity increase in capillary electrophoresis with direct ultraviolet detection: cation-selective exhaustive injection and sweeping | |
Monnig et al. | Capillary electrophoresis | |
Veraart et al. | Coupling of biological sample handling and capillary electrophoresis | |
Kraly et al. | Bioanalytical applications of capillary electrophoresis | |
Poinsot et al. | Recent advances in amino acid analysis by capillary electrophoresis | |
JP5977269B2 (ja) | 試料の分析方法及びそれに用いる溶液 | |
Krivácsy et al. | Electrokinetic injection in capillary electrophoresis and its application to the analysis of inorganic compounds | |
Sekhon | An overview of capillary electrophoresis: pharmaceutical, biopharmaceutical and biotechnology applications | |
US10545117B2 (en) | Sample analysis method and solution therefor | |
US20090200166A1 (en) | Method of Analyzing Hemoglobin by Capillary Eletrophoresis | |
Xu et al. | Dynamic pH junction–sweeping technique for on-line concentration of acidic amino acids in human serum by capillary electrophoresis with indirect UV detection | |
Pantůčková et al. | Electrolyte systems for on‐line CE–MS: Detection requirements and separation possibilities | |
Kartsova et al. | Preconcentration techniques in capillary electrophoresis | |
JPWO2008136321A1 (ja) | キャピラリー電気泳動法によるヘモグロビンの分析方法およびそれに用いる添加剤 | |
Žúborová et al. | Zone electrophoresis of proteins on a poly (methyl methacrylate) chip with conductivity detection | |
Ren et al. | Determination of inorganic anions in saliva by electroosmotic flow controlled counterflow isotachophoretic stacking under field-amplified sample injection | |
Huang et al. | On-line concentration of microheterogeneous proteins by capillary electrophoresis using SDS and PEO as additives | |
EP3507590B1 (en) | Stepped merged injection for surface plasmon resonance assays | |
Corradini | Buffering agents and additives for the background electrolyte solutions used for peptide and protein capillary zone electrophoresis | |
Scriba | Separation of peptides by capillary electrophoresis | |
Zhao | Applications of capillary electrophoresis-mass spectrometry interfaced by a flow-thourgh microvial electrospray ionization sprayer | |
Natishan | Capillary Electrophoresis | |
Maddukuri | Enhancing detection sensitivity for measuring amino neurotransmitters with flow-gated capillary electrophoresis | |
da Silva et al. | The Role of Capillary Electromigration Separation Techniques in Bioanalysis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20110720 |