CN102115504A - 软枣猕猴桃多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本方法涉及从一种水果中制备多糖的方法，尤其是涉及一种从软枣猕猴桃中提取软枣猕猴桃多糖的制备方法。本发明有效的从软枣猕猴桃中提取出软枣猕猴桃多糖，对软枣猕猴桃多糖功效及临床应用的研究有重要意义。
Description
技术领域
本方法涉及从一种水果中制备多糖的方法，尤其是涉及一种从软枣猕猴桃中提取软枣猕猴桃多糖的制备方法。
背景技术
软枣猕猴桃（Actinidia arguta Sieb.et Zucc），又名软枣子，为猕猴桃科，猕猴桃属的一种大藤本植物。生于阔叶林或针阔混交林中，分布于我国东北、西北及长江流域。软枣猕猴桃果实鲜美营养丰富。软枣猕猴桃果实营养价值很高，含大量维生素C、淀粉，果胶质等，同时含有脂肪、蛋白、钙、磷、铁、镁等多种微量元素和多种氨基酸及果胶等营养成分。软枣猕猴桃还含有较为丰富的多糖。多糖是由10个以上单糖通过糖苷键连接而成的线性或分支的聚合物。多糖具有多种临床作用，如抗氧化、抗病毒、抗癌作用，免疫调节作用，降血糖、降血脂作用等。因此，对软枣猕猴桃多糖功效及临床应用的研究有重要意义。但是，从东北野生软枣猕猴桃中制备多糖还未见报道，这对了解软枣猕猴桃多糖组成与结构，以及为今后软枣猕猴桃综合开发利用带来了一些问题。
发明内容
发明目的：本发明提供一种从软枣猕猴桃中提取软枣猕猴桃多糖的制备方法，其目的是解决以往无法很好的从软枣猕猴桃中提取软枣猕猴桃多糖的问题。
技术方案：本发明是通过以下技术方案来实现的：
软枣猕猴桃多糖的制备方法，其特征在于：该制备方法从软枣猕猴桃中提取分离纯化多糖，具体操作步骤如下：
a、粗多糖的提取：取软枣猕猴桃鲜果洗净，吸干表面水分，搅碎，按比例1:2～4加入浓度为75～85%的乙醇，于75～85℃水浴提取0.5～1h，离心；沉淀按比例1: 5～7加蒸馏水，在85～95℃下水浴提取2～4h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩，然后将该浓缩物按比例1: 6～8加入浓度为90～95%乙醇沉淀5～8小时，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物冷冻干燥至恒重，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在45～55℃下,用石油醚索氏提取4～6h对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成1～2mg/ml的水溶液，按所得的多糖水溶液体积的15～25%加入三氯甲烷；再加入三氯甲烷体积15～25%的正丁醇；萃取振摇15～30min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制8～12g/L脱蛋白多糖溶液4～6ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰；收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
a、粗多糖的提取：取鲜软枣猕猴桃果洗净，吸干表面水分，搅碎；按比例1:3加入浓度为80%的乙醇，于80℃水浴提取0.5h，离心；沉淀按比例1:6加蒸馏水，在90℃下水浴提取3h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩；然后将该浓缩物按比例1:7加入浓度为95%乙醇沉淀5～8小时，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物冷冻干燥至恒重，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在50℃下,用石油醚索氏提取5h，对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成1～2mg/ml的水溶液按所得的多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷；加入三氯甲烷体积20%的正丁醇；萃取振摇20min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制10g/L脱蛋白多糖溶液5ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，分别先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱；洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl，该洗脱剂的两种多糖组分没有完全分离，需进一步分离纯化；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰，收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
优点及效果：本发明提供从软枣猕猴桃中提取软枣猕猴桃多糖的制备方法。本发明以软枣猕猴桃果实为原料，经过长期的实验，研制出用于软枣猕猴桃多糖的制备方法，可最大程度提取软枣猕猴桃多糖，较好地解决了从果实中制备多糖的方法问题，从而为了解软枣猕猴桃多糖组成与结构以及为软枣猕猴桃功效及临床应用的研究提供支持。通过实施，可以得到四种多糖单一组分。该制备方法具有可操作性强，提取效率高，提取成本低，所用试剂毒性较小，安全等优点。
附图说明：
图1是本发明的DEAE-纤维素 52 柱层析结果图；
图2是本发明的0.2mol/LNaCl洗脱组分Sephadex G-100柱层析结果图。
具体实施方式：
下面结合附图对本发明作进一步的详细说明，但不因具体的实施例限制本发明。
本发明提供一种软枣猕猴桃多糖的制备方法，具体步骤如下：
实施例1：
a、粗多糖的提取：取鲜软枣猕猴桃果洗净，吸干表面水分，搅碎；按比例1:3加入浓度为80%的乙醇，于80℃水浴提取0.5h，离心；沉淀按比例1:6加蒸馏水，在90℃下水浴提取3h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩；然后将该浓缩物按比例1:7加入浓度为95%乙醇沉淀5小时，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物冷冻干燥至恒重，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在50℃下,用石油醚索氏提取5h，对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成1mg/ml的水溶液，按所得的多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷；加入三氯甲烷体积20%的正丁醇；萃取振摇20min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制10g/L脱蛋白多糖溶液5ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，分别先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱；洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl，该洗脱剂的两种多糖组分没有完全分离，需进一步分离纯化；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰，收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
实施例2：
a、粗多糖的提取：取鲜软枣猕猴桃果洗净，吸干表面水分，搅碎；按比例1:4加入浓度为75%的乙醇，于85℃水浴提取1h，离心；沉淀按比例1:5加蒸馏水，在85℃下水浴提取2h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩；然后将该浓缩物按比例1:8加入浓度为90%乙醇沉淀8小时，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物真空干燥1h，继续烘干，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在45℃下,用石油醚索氏提取6h，对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成2mg/ml的水溶液，按所得的多糖水溶液体积的25%加入三氯甲烷；加入三氯甲烷体积15%的正丁醇；萃取振摇30min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制8g/L脱蛋白多糖溶液6ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，分别先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱；洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl，该洗脱剂的两种多糖组分没有完全分离，需进一步分离纯化；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰，收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
实施例3：
a、粗多糖的提取：取鲜软枣猕猴桃果洗净，吸干表面水分，搅碎；按比例1:2加入85%的乙醇，于75℃水浴提取0.7h，离心；沉淀按比例1:7加蒸馏水，在95℃下水浴提取4h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩；然后将该浓缩物按比例1:6加入浓度为90%的乙醇沉淀8小时，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物冷冻干燥至恒重，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在55℃下,用石油醚索氏提取4.5h，对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成1.5mg/ml的水溶液，按所得的多糖水溶液体积的15%加入三氯甲烷；加入三氯甲烷体积25%的正丁醇；萃取振摇15min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制12g/L脱蛋白多糖溶液4ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，分别先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱；洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl，该洗脱剂的两种多糖组分没有完全分离，需进一步分离纯化；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰，收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
实施例4：
a、粗多糖的提取：取鲜软枣猕猴桃果洗净，吸干表面水分，匀浆；按比例1:3加入85%的乙醇，于75℃水浴提取1h，离心；沉淀按比例1:6加蒸馏水，在95℃下水浴提取2h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩；然后将该浓缩物按比例1:6加入浓度为90%的乙醇沉8小时，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物冷冻干燥至恒重，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在55℃下,用石油醚索氏提取4h，对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成2mg/ml的水溶液，按所得的多糖水溶液体积的15%加入三氯甲烷；加入三氯甲烷体积20%的正丁醇；萃取振摇15min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制10g/L脱蛋白多糖溶液5ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，分别先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱；洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl，该洗脱剂的两种多糖组分没有完全分离，需进一步分离纯化；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰，收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
实施例5：
a、粗多糖的提取：取鲜软枣猕猴桃果洗净，吸干表面水分，搅碎；按比例1:3加入78%的乙醇，于80℃水浴提取1h，离心；沉淀按比例1:5加蒸馏水，在90℃下水浴提取3h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩；然后将该浓缩物按比例1:7加入浓度为90%的乙醇沉淀过夜，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物冷冻干燥至恒重，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在55℃下,用石油醚索氏提取4.5h，对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成1mg/ml的水溶液，按“第一步”中所得的多糖水溶液体积的15%加入三氯甲烷；加入三氯甲烷体积25%的正丁醇；萃取振摇15min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制8g/L脱蛋白多糖溶液5ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，分别先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱；洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl，该洗脱剂的两种多糖组分没有完全分离，需进一步分离纯化；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰，收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
上述“d”步骤中用相应洗脱剂洗脱的意思是枣猕猴桃多糖-Ⅰ用蒸馏水洗脱；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ用0.2mol/LNaCl洗脱剂；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ用0.3mol/LNaCl洗脱。
本发明有效的从软枣猕猴桃中提取出软枣猕猴桃多糖，对软枣猕猴桃多糖功效及临床应用的研究有重要意义。
Claims (2)
1.软枣猕猴桃多糖的制备方法，其特征在于：该制备方法从软枣猕猴桃中提取分离纯化多糖，具体操作步骤如下：
a、粗多糖的提取：取软枣猕猴桃鲜果洗净，吸干表面水分，搅碎，按比例1:2～4加入浓度为75～85%的乙醇，于75～85℃水浴提取0.5～1h，离心；沉淀按比例1: 5～7加蒸馏水，在85～95℃下水浴提取2～4h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩，然后将该浓缩物按比例1: 6～8加入浓度为90～95%乙醇沉淀5～8小时，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物冷冻干燥至恒重，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在45～55℃下,用石油醚索氏提取4～6h对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成1～2mg/ml的水溶液，按所得的多糖水溶液体积的15～25%加入三氯甲烷；再加入三氯甲烷体积15～25%的正丁醇；萃取振摇15～30min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制8～12g/L脱蛋白多糖溶液4～6ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰；收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
2.根据权利要求1所述的软枣猕猴桃多糖的制备方法，其特征在于：
a、粗多糖的提取：取鲜软枣猕猴桃果洗净，吸干表面水分，搅碎；按比例1:3加入浓度为80%的乙醇，于80℃水浴提取0.5h，离心；沉淀按比例1:6加蒸馏水，在90℃下水浴提取3h，离心，得上清液；上清液采用旋转蒸发器真空浓缩；然后将该浓缩物按比例1:7加入浓度为95%乙醇沉淀5～8小时，过滤；滤渣先后用无水乙醇、丙酮和无水乙醚淋洗，过滤得沉淀；将沉淀物冷冻干燥至恒重，得到粗多糖；
b、除杂：
第一步：索氏提取法脱脂：在50℃下,用石油醚索氏提取5h，对“a”步骤中的粗多糖进行脱脂；
第二步： Sevage法脱蛋白：将脱脂后的粗多糖配成1～2mg/ml的水溶液按所得的多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷；加入三氯甲烷体积20%的正丁醇；萃取振摇20min；除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，收集上清液，重复操作至无变性蛋白，得到脱蛋白多糖水溶液；
c、DEAE-纤维素 52对软枣猕猴桃多糖进行初步分离：配制10g/L脱蛋白多糖溶液5ml，加到已平衡好的DEAE-纤维素 52柱内，分别先后用蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl梯度洗脱；洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；洗脱得到4个明显洗脱峰，其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ为蒸馏水洗脱产物；软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ为0.2mol/LNaCl，该洗脱剂的两种多糖组分没有完全分离，需进一步分离纯化；软枣猕猴桃多糖-Ⅳ为0.3mol/LNaCl洗脱产物；根据洗脱曲线收集洗脱产物各均一组分，透析，浓缩，冻干，得半纯品多糖；
d、Sephadex G-100柱层析分离纯化：将上述洗脱产物复溶，用相应洗脱剂洗脱，进行Sephadex G-100柱层析，洗脱剂流速为2ml/min，4min/管，分部收集，洗脱液用苯酚-硫酸法检测绘制洗脱曲线；其中，软枣猕猴桃多糖-Ⅱ和软枣猕猴桃多糖-Ⅲ组分完全分离，软枣猕猴桃多糖-Ⅰ和软枣猕猴桃多糖-Ⅳ组分洗脱结果仍为单一洗脱峰，收集均一组分，透析，浓缩，冻干，得到四种纯品软枣猕猴桃多糖组分。
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