CN101817884A - 沙枣多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
沙枣多糖的提取方法,其步骤为:沙枣果肉干粉先以95%的乙醇浸提,剩余残渣晾干后,再加入蒸馏水回流提取,提取液浓缩,离心除去不溶物,然后向上清液再加入95%的乙醇,静置分层,下层离心分离,收集沉淀物,复溶于水,再经Sevag脱蛋白法去除残留的蛋白质,活性炭脱色,减压浓缩,P2O5真空干燥,得到沙枣多糖粗品。多糖粗品再上DEAE-纤维柱,以pH=7.6,含NaCl的PBS溶液梯度洗脱,分别收集各主峰部分的洗脱液,减压浓缩,浓缩液对水透析,真空冷冻干燥后分别得到各纯化的级分。
Description
技术领域
本发明属于生物工程药品领域。
背景技术
沙枣果肉中糖含量占43~59%,多糖能够降低血脂,改善脂质代谢紊乱;减缓脂质过氧化物的生成和/或加速过氧化物的清除,提高机体抗氧化能力,起到降脂减肥和抗氧化的作用。沙枣多糖具有多种药物用途和营养价值,在医药、保健食品和日用化工等领域有广阔的应用前景。
申请号为03134384.8沙枣中天然抗氧化剂的提取方法。该发明提取过程复杂,成本较高,使用了乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂,很难大规模工业生产。
申请号200410078837.4的沙枣胶粉末的制备方法。该发明生产沙枣胶粉末需要分级筛选清洗除杂、粉碎过筛、水溶、离心过滤、杀菌、脱色、喷雾干燥、过筛等步骤,虽不使用有机溶剂但工艺复杂纯度不高。
迄今为止,有关沙枣食品及沙枣胶的专利文献较多,但国内外未见沙枣多糖提取分析的相关专利文献。
发明内容
本发明的目的是提供一种沙枣多糖的提取方法。
本发明是沙枣多糖的提取方法,其步骤为:
(1)采用沙枣果肉干粉,在95%的乙醇溶液中在室温下浸提,至少进行3次浸提,得提取液;
(2)滤渣于通风处自然凉干后,按1∶10的固液比向滤渣中加入蒸馏水,回流提取2.5小时,至少进行5次提取;
(3)合并上述提取液,进行蒸发浓缩,采用离心作用除去不溶物,进行活性炭脱色后向上清液中加入3倍量的95%的乙醇,低温静置,时间超过12小时;
(4)去除上清液,在4℃的温度下施加离心作用,收集沉淀物,复溶于水,先用三氯乙酸除蛋白质后,再经四次Sevag脱蛋白法去除残留的蛋白质,减压浓缩,进行真空干燥,得到沙枣多糖粗品;
(5)将多糖粗品加入DEAE-纤维柱中,用pH为7.6、含NaCl 0.05~1.5mol/L的PBS溶液梯度洗脱,控制流速为1ml/min,每管按4ml进行收集,隔管检测,采用苯酚-硫酸显色,作洗脱曲线;
(6)分别收集各主峰部分的洗脱液,进行减压浓缩,将浓缩液对水透析,真空冷冻干燥后分别得到各纯化的级分。
本发明的操作步骤简单、条件易于控制的特点。所制得的沙枣多糖纯度较高,安全性好,可用于制备多种沙枣多糖保健品。
具体实施方式
本发明具体是这样实施的:
(1)采用1230g沙枣果肉干粉,在1600ml浓度为95%的乙醇溶液中在室温下浸提,至少进行3次浸提,得提取液;
(2)将700g滤渣置于通风处自然凉干后,按1∶10的固液比在85~95℃向滤渣中加入蒸馏水,回流提取2.5小时,至少进行5次提取;
(3)合并上述提取液,总计1800ml滤液,进行蒸发浓缩,采用离心作用除去不溶物,离心采取3000r/min,离心时间持续30分钟;加入20g酸性活性炭进行活性炭脱色,然后向上清液中加入3倍量的95%的乙醇,低温静置,时间超过12小时;
(4)采用虹吸方式去除上清液,在4℃的温度下施加离心作用,离心采取2500r/min,离心时间持续30分钟,收集沉淀物,放置24小时;
(5)将沉淀物溶于水中,先用三氯乙酸除蛋白质后,再经四次Sevag脱蛋白法去除残留的蛋白质;
(6)向以上溶液中加入20g酸性活性炭进行活性炭脱色,减压,进行蒸发浓缩,然后进行真空干燥,得到9.8沙枣多糖粗品;
(7)将多糖粗品加入DEAE-纤维柱中,溶于相当于层床2%体积的缓冲溶液中,离心除去不溶物,上清夜过DEAE-cellulose阴离子交换柱进行层析分离,分别以含NaCl为0.05、0.1、0.25、0.5和1.0mol/l的NaCl-PBS(pH-7.6)缓冲溶液各175mL,进行梯度洗脱,控制流速为1mL/min,合并主峰部分,得到3个级分;
(8)将沙枣多糖各级分的主峰部分浓缩至一定体积后装入透析袋中,然后用蒸馏水进行透析,直至袋内盐分透析完毕。真空冷冻干燥后分别得到各纯化的级分;
(9)再称取25mg级分2干品,溶于3ml的蒸馏水中,用Sephadex-150葡聚糖凝胶过滤层析,用0.1mol/L的NaCl溶液洗脱,控制流速为1ml/min,以苯酚-硫酸法检测,测吸光度值,作洗脱曲线,合并主峰部分,真空浓缩,冷冻干燥,得到级分2干品。
本发明采用的柱层析设备及参数为:
层析柱:DEAE-纤维柱(2.6×60cm)、Sephadex-150葡聚糖凝胶40×2.6cm);
U-2001紫外分光光度计,日本Hitachi公司,波长为490nm;
透析袋:RC-38-1000进口分装,上海绿鸟科技发展公司。
Claims (2)
1.沙枣多糖的提取方法,其步骤为:
(1)采用沙枣果肉干粉,在95%的乙醇溶液中在室温下浸提,至少进行3次浸提,得提取液;
(2)滤渣于通风处自然凉干后,按1∶10的固液比向滤渣中加入蒸馏水,回流提取2.5小时,至少进行5次提取;
(3)合并上述提取液,进行蒸发浓缩,采用离心作用除去不溶物,进行活性炭脱色后向上清液中加入3倍量的95%的乙醇,低温静置,时间超过12小时;
(4)去除上清液,在4℃的温度下施加离心作用,收集沉淀物,复溶于水,先用三氯乙酸除蛋白质后,再经四次Sevag脱蛋白法去除残留的蛋白质,减压浓缩,进行真空干燥,得到沙枣多糖粗品;
(5)将多糖粗品加入DEAE-纤维柱中,用pH为7.6、含NaCl0.05~1.5mol/L的PBS溶液梯度洗脱,控制流速为1ml/min;
(6)分别收集各主峰部分的洗脱液,进行减压浓缩,将浓缩液对水透析,真空冷冻干燥后分别得到各纯化的级分。
2.根据权利要求1所述的沙枣多糖的提取方法,其步骤为:将多糖粗品加入DEAE-纤维柱中,分别以含NaCl为0.05、0.1、0.25、0.5和1.0mol/l的NaCl-PBS缓冲溶液各175mL,进行梯度洗脱。
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