CN101817884A - 沙枣多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
沙枣多糖的提取方法，其步骤为：沙枣果肉干粉先以95％的乙醇浸提，剩余残渣晾干后，再加入蒸馏水回流提取，提取液浓缩，离心除去不溶物，然后向上清液再加入95％的乙醇，静置分层，下层离心分离，收集沉淀物，复溶于水，再经Sevag脱蛋白法去除残留的蛋白质，活性炭脱色，减压浓缩，P2O5真空干燥，得到沙枣多糖粗品。多糖粗品再上DEAE-纤维柱，以pH＝7.6，含NaCl的PBS溶液梯度洗脱，分别收集各主峰部分的洗脱液，减压浓缩，浓缩液对水透析，真空冷冻干燥后分别得到各纯化的级分。
Description
技术领域
本发明属于生物工程药品领域。
背景技术
沙枣果肉中糖含量占43～59％，多糖能够降低血脂，改善脂质代谢紊乱；减缓脂质过氧化物的生成和/或加速过氧化物的清除，提高机体抗氧化能力，起到降脂减肥和抗氧化的作用。沙枣多糖具有多种药物用途和营养价值，在医药、保健食品和日用化工等领域有广阔的应用前景。
申请号为03134384.8沙枣中天然抗氧化剂的提取方法。该发明提取过程复杂，成本较高，使用了乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂，很难大规模工业生产。
申请号200410078837.4的沙枣胶粉末的制备方法。该发明生产沙枣胶粉末需要分级筛选清洗除杂、粉碎过筛、水溶、离心过滤、杀菌、脱色、喷雾干燥、过筛等步骤，虽不使用有机溶剂但工艺复杂纯度不高。
迄今为止，有关沙枣食品及沙枣胶的专利文献较多，但国内外未见沙枣多糖提取分析的相关专利文献。
发明内容
本发明的目的是提供一种沙枣多糖的提取方法。
本发明是沙枣多糖的提取方法，其步骤为：
(1)采用沙枣果肉干粉，在95％的乙醇溶液中在室温下浸提，至少进行3次浸提，得提取液；
(2)滤渣于通风处自然凉干后，按1∶10的固液比向滤渣中加入蒸馏水，回流提取2.5小时，至少进行5次提取；
(3)合并上述提取液，进行蒸发浓缩，采用离心作用除去不溶物，进行活性炭脱色后向上清液中加入3倍量的95％的乙醇，低温静置，时间超过12小时；
(4)去除上清液，在4℃的温度下施加离心作用，收集沉淀物，复溶于水，先用三氯乙酸除蛋白质后，再经四次Sevag脱蛋白法去除残留的蛋白质，减压浓缩，进行真空干燥，得到沙枣多糖粗品；
(5)将多糖粗品加入DEAE-纤维柱中，用pH为7.6、含NaCl 0.05～1.5mol/L的PBS溶液梯度洗脱，控制流速为1ml/min，每管按4ml进行收集，隔管检测，采用苯酚-硫酸显色，作洗脱曲线；
(6)分别收集各主峰部分的洗脱液，进行减压浓缩，将浓缩液对水透析，真空冷冻干燥后分别得到各纯化的级分。
本发明的操作步骤简单、条件易于控制的特点。所制得的沙枣多糖纯度较高，安全性好，可用于制备多种沙枣多糖保健品。
具体实施方式
本发明具体是这样实施的：
(1)采用1230g沙枣果肉干粉，在1600ml浓度为95％的乙醇溶液中在室温下浸提，至少进行3次浸提，得提取液；
(2)将700g滤渣置于通风处自然凉干后，按1∶10的固液比在85～95℃向滤渣中加入蒸馏水，回流提取2.5小时，至少进行5次提取；
(3)合并上述提取液，总计1800ml滤液，进行蒸发浓缩，采用离心作用除去不溶物，离心采取3000r/min，离心时间持续30分钟；加入20g酸性活性炭进行活性炭脱色，然后向上清液中加入3倍量的95％的乙醇，低温静置，时间超过12小时；
(4)采用虹吸方式去除上清液，在4℃的温度下施加离心作用，离心采取2500r/min，离心时间持续30分钟，收集沉淀物，放置24小时；
(5)将沉淀物溶于水中，先用三氯乙酸除蛋白质后，再经四次Sevag脱蛋白法去除残留的蛋白质；
(6)向以上溶液中加入20g酸性活性炭进行活性炭脱色，减压，进行蒸发浓缩，然后进行真空干燥，得到9.8沙枣多糖粗品；
(7)将多糖粗品加入DEAE-纤维柱中，溶于相当于层床2％体积的缓冲溶液中，离心除去不溶物，上清夜过DEAE-cellulose阴离子交换柱进行层析分离，分别以含NaCl为0.05、0.1、0.25、0.5和1.0mol/l的NaCl-PBS(pH-7.6)缓冲溶液各175mL，进行梯度洗脱，控制流速为1mL/min，合并主峰部分，得到3个级分；
(8)将沙枣多糖各级分的主峰部分浓缩至一定体积后装入透析袋中，然后用蒸馏水进行透析，直至袋内盐分透析完毕。真空冷冻干燥后分别得到各纯化的级分；
(9)再称取25mg级分2干品，溶于3ml的蒸馏水中，用Sephadex-150葡聚糖凝胶过滤层析，用0.1mol/L的NaCl溶液洗脱，控制流速为1ml/min，以苯酚-硫酸法检测，测吸光度值，作洗脱曲线，合并主峰部分，真空浓缩，冷冻干燥，得到级分2干品。
本发明采用的柱层析设备及参数为：
层析柱：DEAE-纤维柱(2.6×60cm)、Sephadex-150葡聚糖凝胶40×2.6cm)；
U-2001紫外分光光度计，日本Hitachi公司，波长为490nm；
透析袋：RC-38-1000进口分装，上海绿鸟科技发展公司。
Claims (2)
1.沙枣多糖的提取方法，其步骤为：
(1)采用沙枣果肉干粉，在95％的乙醇溶液中在室温下浸提，至少进行3次浸提，得提取液；
(2)滤渣于通风处自然凉干后，按1∶10的固液比向滤渣中加入蒸馏水，回流提取2.5小时，至少进行5次提取；
(3)合并上述提取液，进行蒸发浓缩，采用离心作用除去不溶物，进行活性炭脱色后向上清液中加入3倍量的95％的乙醇，低温静置，时间超过12小时；
(4)去除上清液，在4℃的温度下施加离心作用，收集沉淀物，复溶于水，先用三氯乙酸除蛋白质后，再经四次Sevag脱蛋白法去除残留的蛋白质，减压浓缩，进行真空干燥，得到沙枣多糖粗品；
(5)将多糖粗品加入DEAE-纤维柱中，用pH为7.6、含NaCl0.05～1.5mol/L的PBS溶液梯度洗脱，控制流速为1ml/min；
(6)分别收集各主峰部分的洗脱液，进行减压浓缩，将浓缩液对水透析，真空冷冻干燥后分别得到各纯化的级分。
2.根据权利要求1所述的沙枣多糖的提取方法，其步骤为：将多糖粗品加入DEAE-纤维柱中，分别以含NaCl为0.05、0.1、0.25、0.5和1.0mol/l的NaCl-PBS缓冲溶液各175mL，进行梯度洗脱。
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