CN102088990A

CN102088990A - 癫痫的治疗

Info

Publication number: CN102088990A
Application number: CN2009801274025A
Authority: CN
Inventors: J·古尔德; C·戴克斯特拉; M·蒂米安斯基
Original assignee: NoNO Inc; Arbor Vita Corp
Current assignee: NoNO Inc
Priority date: 2008-05-16
Filing date: 2009-05-13
Publication date: 2011-06-08
Also published as: AU2009246316B2; US20100160240A1; CA2724483A1; WO2009140416A3; JP2011520900A; DK2307035T3; ES2446306T3; AU2009246316A1; EP2307035A2; CA2724483C; JP2016199553A; US9161965B2; EP2307035B1; EP2307035A4; WO2009140416A2; JP6005357B2

Abstract

本发明提供治疗患有癫痫的患者的方法，其中对患者施用药剂的有效方案，该药剂抑制PSD-95与NMDA受体的特异性结合。

Description

癫痫的治疗

本申请要求2008年5月16日提交的美国临时申请号61/054,109的权益，该美国临时申请在此为了所有目的以其整体引入作为参考。

背景技术

癫痫是表征为反复无缘无故发作的神经病症(Blume等，Epilepsia.2001；42：1212-1218)。这些发作是由脑中异常的、过度的或同步的神经元活动引起的瞬时病征和/或症状(Fisher等，Epilepsia 46(4)：470-2)。不应将癫痫理解为单一障碍，而应理解为具有差异极大的症状，但均涉及脑中发作性异常电活动的一组综合症。在美国，它是最常见的严重神经障碍之一，通常需要长期治疗。在美国，每年有150000人被新诊断为患有癫痫，累积终生发病率接近3％(Hauser等，Epilepsia.1991；32：429-445；Begley等，Epilepsia.1994；35：1230-1243)。发病率在出生第一年和在老年人中最高。尽管单独或组合使用了现有的抗癫痫药物，但30％至40％的患者继续具有发作(Kwan等，N Engl J Med.2000；342：314-319)。具有不受控制的发作的患者经历显著的发病率和死亡率，还面对社会性耻辱和歧视。

已知的抗癫痫药物包含诸如苯巴比妥、扑米酮、苯妥英、卡马西平和丙戊酸盐的“传统”药物；以及较新的诱导电压依赖性离子通道封闭、抑制性神经传递增强和/或兴奋性神经传递减弱的抗癫痫药物。实例包含N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体(例如非尔氨酯)和α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸(AMPA)受体(例如非尔氨酯、托吡酯)处的谷氨酸拮抗作用，以及神经元和星形胶质细胞中γ-氨基丁酸(GABA)重摄取的抑制(例如噻加宾(tiagabine))。

突触后密集区蛋白质95(PSD-95)将NMDAR与介导兴奋性神经毒性和缺血性脑损伤的途径偶联(Aarts等，Science 298，846-850(2002))。通过用在PSD-95/NMDAR相互作用复合物的任一侧与模块结构域(modular domain)结合的肽转导神经元破坏此偶联。此处理减弱了下游NMDAR信号发放而不阻断NMDAR活性、保护培养的皮层神经元免受兴奋性神经毒性损伤和减小遭受瞬时病灶性大脑缺血的大鼠中的脑梗塞体积。此结果已导致将PSD-95/NMDAR的肽拮抗剂用于治疗中风和其他由兴奋性神经毒性介导的疾病的提议。在一个这种拮抗剂的I期试验中尚未观察到明显的副作用。

发明概述

本发明提供治疗或有效预防具有癫痫症状或处于发展癫痫症状的风险的患者的方法，其包括对患者施用药剂(agent)的有效方案，该药剂抑制PSD-95PDZ结构域与PDZ结合配体(也称为“PL”)，例如NMDA受体的特异性结合。可选地，药剂是包含活性肽的嵌合肽，该活性肽具有与内化肽连接的由来自NMDA受体C端的3-25个氨基酸组成的氨基酸序列或来自PSD-95受体的PDZ结构域1和/或2。可选地，活性肽具有包含[E/D/N/Q]-[S/T]-[D/E/Q/N]-[V/L]的氨基酸序列。可选地，活性肽包含选自ESDV(SEQ ID NO：1)、ESEV(SEQ ID NO：2)、ETDV(SEQ ID NO：3)、ETEV(SEQ ID NO：4)、DTDV(SEQ ID NO：5)、DTEV(SEQ ID NO：6)的羧基端氨基酸序列。可选地，活性肽具有包含KLSSIETDV(SEQ ID NO：7)的氨基酸序列。可选地，嵌合肽具有包含YGRKKRRQRRRKLSSIETDV(SEQ ID NO：8)的氨基酸。可选地，嵌合肽具有由YGRKKRRQRRRKLSSIETDV(SEQ ID NO：8)组成的氨基酸序列。可选地，活性肽具有包含KLSSIESDV(SEQ ID NO：9)的氨基酸序列。可选地，嵌合肽具有包含YGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：10)的氨基酸序列。可选地，氨基酸序列由YGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ IDNO：10)组成。

本发明还提供治疗癫痫的方法，其包括施用PSD-95抑制剂的有效方案，该抑制剂阻断PDZ结合配体与PSD-95的PDZ结构域的结合。可选地，PSD-95的该PDZ结构域是PSD-95PDZ结构域2。可选地，癫痫发作起始后至少约1小时，例如癫痫发作起始后至少约3小时施用抑制剂。发作具有小于约10分钟的持续时间时，这可以是尤其适合的。可选地，癫痫发作终止后至少约1小时施用抑制剂。例如，癫痫发作终止后至少约3小时施用抑制剂。如果希望，可在癫痫发作终止后不迟于约1周，例如不迟于1天施用抑制剂。可选地，抑制剂是Tat-NR2B9c。可选地，抑制剂是F-Tat-NR2B9c。可选地，抑制剂具有以下结构：

例如，抑制剂是0625-0057。可以例如通过视频脑电图(V-EEG)监测，用脑电描记术测定癫痫发作的起始、终止和/或持续。

在优选的方法中，可以在癫痫发作(例如发作)后至少1小时施用药剂。可以在癫痫发作后例如至少约3、4、5、6、8、10、12、16或24小时施用药剂。还可以在癫痫发作后数天，例如起始后至少约1、2、3、4、5、7、8、9、10或12天施用药剂。还可以在癫痫发作后至少1周，例如发作后至少约1、2或3周施用药剂。可选地，在癫痫发作后施用抑制剂，但不迟于一个或多个小时，例如不迟于发作后1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、18或24小时。可选地，在癫痫发作后施用抑制剂，但不迟于一天或多天，例如不迟于发作后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或14天。可选地，在癫痫发作后施用抑制剂，但不迟于一周或多周，例如不迟于发作后1、1.5、2、2.5或3周。

可选地，癫痫发作后施用的时间可以从发作起始的时间测量(例如发作短暂时)，或从发作结束的时间测量(例如癫痫发作具有较长持续时间时)，或从观察到脑中癫痫活动病征的任意时间点测量。

可选地，不在癫痫发作前或癫痫发作过程中施用药剂。在其他情况下，还可以在癫痫发作，例如发作过程中施用药剂。

可选地，患者无除癫痫之外的需要用拮抗剂治疗的疾病。可选地，患者无除癫痫之外的由兴奋性神经毒性介导的疾病。可选地，患者无中风。可选地，患者无由兴奋性神经毒性介导的疾病。可选地，作为对已经历了促进癫痫的事件的患者的反应而施用药剂。可选地，患者具有急性癫痫的发作。

可选地，作为对患者癫痫的诊断的反应而施用有效方案。可选地，该方法进一步包括施用对治疗或有效预防癫痫有效的第二方案。可选地，第二方案包括施用第二药剂。可选地，第二方案包括抗癫痫药剂或抗癫痫药剂的组合。

在一些方法中，患者是人类。可选地，通过静脉输注或皮下施用药剂。可选地，将药剂与可药用载体一起作为药物组合物施用。

一些方法进一步包括监测患者以评估治疗对癫痫的症状和/或病征的影响。可选地，按从0.05至500mg，可选地，按0.1至100mg、0.5至50mg或1至20mg的剂量施用嵌合肽。

本发明还提供用于在患者中预防或治疗癫痫症状的药物组合物，其包含可药用载体和上文定义的药剂。可选地，药物组合物带有表明适合用于治疗或有效预防癫痫症状的标签。

本发明还提供上文定义的药剂在制备用于治疗或有效预防癫痫的药物中的用途。

本发明还提供治疗或有效预防患有癫痫或处于癫痫风险的患者的癫痫症状的方法，其包括对患者施用与内化肽连接的tSXV肽的有效方案。

可选地，在患者中诊断癫痫症状后施用有效方案以减轻该症状，或阻断或抑制症状的进一步发展。

附图简述

图1.癫痫发作后神经元细胞随时间的减少。(A)脑切片视图，显示首次用于实验的大鼠和诱导癫痫发作后3、24和3天的大鼠中用NeuN(神经元特异性)抗体染色的细胞数。(B)癫痫发作(癫痫持续状态)终止后NeuN阳性细胞密度的定量时程。

图2.(A)癫痫发作后多个时间点海马的多个部分中的神经元细胞减少。对每一区域，柱从左至右显示对照中、癫痫发作后3小时、6小时、12小时、1天、3天、7天、14天和90天时的百分比NeuN阳性细胞(与对照相比)。(B)快速和严重的细胞丢失存在于其他脑区域中。每组中总计有4-8只动物。

图3.60分钟的癫痫持续状态后神经变性的时间格局。值表示为细胞密度(#细胞/mm³)±标准差。每组具有至少4只动物。

图4.(A)Tat-NR2B9c而非Tat-NR2BAA在海马前CA1区中具有神经保护作用。每个点代表一只动物。破折号代表组平均值。(B)当在癫痫发作后而非癫痫发作过程中施用时，Tat-NR2B9c具有神经保护作用。

图5.当在癫痫发作后3小时而非癫痫发作过程中施用时，Tat-NR2B9c赋予剂量依赖性神经保护作用。柱1和2：分别为施用盐水的假诱导(未在其中诱导癫痫发作的大鼠)和诱导发作的大鼠。柱3、4、5：SE起始后10分钟分别按0.3nmol/gm、3hmol/gm和9nmol/gm的剂量施用Tat-NR2B9c。柱6：SE终止后3小时施用3nmol/gm的Tat-NR2B9c。

图6.在未用Tat-NR2B9c处理的动物中诱导60分钟持续的癫痫发作状态后1、3、7和14天的神经元(NeuN阳性)细胞丢失时程。400X放大率的脑切片显示于左侧。柱形图显示多个时间点上每个视野的NeuN阳性细胞总数±标准差。

图7.在癫痫持续状态过程中用Tat-NR2B9c处理的动物中诱导60分钟持续的癫痫发作后7天的神经元(NeuN阳性)细胞丢失时程。400X放大率的脑切片显示于左侧。柱形图显示不同Tat-NR2B9c浓度下每个视野的NeuN阳性细胞总数±标准差。

图8.在癫痫发作后3小时用Tat-NR2B9c处理的大鼠中诱导癫痫发作后的神经元(NeuN阳性)细胞丢失时程。低放大率的免疫染色脑切片视图显示于左侧。柱形图显示在不同Tat-NR2B9c浓度下恢复14天后每个视野的NeuN阳性细胞总数±标准差。

图9.Tat-NR2B9c在CA1区下托边缘附近的神经保护作用。与盐水处理的动物相比，Tat-NR2B9c增加了存活神经细胞的数目，而Tat-NR2BAA则不能。

图10.Tat-NR2B9c在CA4区中赋予神经保护作用，而Tat-NR2BAA则不能。

图11.SE后14天未处理(对照)或SE后3小时用Tat-NR2B9c(0.3nmol/gm和3nmol/gm)处理的大鼠中海马和侧脑室中的容量变化，与尼氏染色切片并排比较。

图12.Tat-NR2B9c在大鼠中降低由癫痫持续状态引起的认知损伤。在SE后8周，将动物置于高架十字迷宫上5分钟并录像。

图13.在SE后8周通过Morris水迷宫测试视觉空间记忆，以检测慢性认知损伤。Tat-NR2B9c处理改善了逃离等待期表现，尤其是在获得性学习的前5天中。

图14.脑及脑内多个区域的图示。

定义

“嵌合多肽”指由正常情况下不在单个氨基酸序列中融合在一起的两种(或多种)不同的异源多肽组成的复合多肽，即单条连续氨基酸序列。

术语“PDZ结构域”指具有约90个氨基酸的模块蛋白质结构域，其特征在于与脑突触蛋白质PSD-95、分隔连接蛋白质Drosophila discslarge(DLG)和上皮细胞紧密连接蛋白质紧密连接(zonula occludens)-1蛋白质(ZO1)的显著的序列同一性(例如至少60％)。PDZ结构域也称为DLG同源区(“DHR)和GLGF(SEQ ID NO：11)重复。PDZ结构域一般表现为保留核心共有序列(Doyle，D.A.，1996，Cell 85：1067-76)。示例性包含PDZ结构域的蛋白质和PDZ结构域序列公开于US 2006-0148711A1中，其在此以其整体引入作为参考。

术语“PL蛋白质”或“PDZ配体蛋白质”指与PDZ结构域形成分子复合物的天然存在的蛋白质，或指将其羧基端从全长蛋白质分开(例如作为3-25个残基，例如3、4、5、8、10、12、14或16个残基的肽片段)表达时形成这种分子复合物的蛋白质。可以用描述于例如US 2006-0148711中的“A测定”或“G测定”在体外或在体内观察分子复合物。

“PL基序”指PL蛋白质C端的氨基酸序列(例如C端3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、20或25个连续的残基)(“C端PL序列”)或已知结合PDZ结构域的内部序列(“内部PL序列”)。

“PL肽”是包含特异性结合PDZ结构域的PL基序或由该基序组成或以其他方式基于该基序的肽。

术语“分离的”或“纯化的”指已从存在于样品，如获自包含目的种类的天然来源的样品中的杂质纯化出该目的种类(例如肽)。若目的种类是分离的或纯化的，则其是存在于样品中的主要的大分子(例如多肽)种类(即按照摩尔量，其丰度比组合物中任意其他单个种类高)，优选地，目的种类包含所存在的所有大分子种类的至少约50％(按照摩尔量)。一般，分离的、纯化的或基本上纯化的组合物包含存在于组合物中的所有大分子种类的超过80％至90％。最优选地，将目的种类纯化至基本同质(即通过常规检测方法不能在组合物中检测到杂质种类)，其中该组合物基本上由单个大分子种类组成。

“拟肽(peptidomimetic)”指合成的化合物，其具有基本上与本发明的肽相同的结构和/或功能特征。拟肽可以包含完全合成的非天然的氨基酸类似物，或是部分天然的肽氨基酸和部分非天然的氨基酸类似物的嵌合分子。拟肽还可以掺入任意量的天然氨基酸保守性取代，只要这类取代也基本上不改变该模拟物的结构和/或抑制或结合活性。多肽模拟物组合物可以包含非天然结构成分的任意组合，该非天然结构成分通常来自3个结构组：a)天然酰胺键(“肽键”)连接之外的残基连接基团；b)非天然残基取代天然存在的氨基酸残基；或c)诱导二级结构模拟，即诱导或稳定二级结构，如β转角、γ转角、β折叠、α螺旋构象等的残基。

术语“特异性结合”指两个分子，例如，配体和受体间的结合，其特征在于分子(配体)甚至在存在许多其他不同分子的情况下与另一特异性分子(受体)结合，即一分子在多种分子的异源混合物中显示对另一分子的优先结合的能力。还通过可检测的标记配体在存在过量未标记配体的情况下的降低的结合(即结合竞争测定)显示配体与受体的特异性结合。

统计显著的指＜0.05，优选＜0.01和最优选＜0.001的p值。

“患者”指人类、驯养动物(例如猫、狗)、家畜(例如鸡、牛、绵羊、马、猪)和实验动物(例如大鼠、小鼠)。

术语抗体用来包含完整抗体及其结合片段。通常，片段与其所衍生自的完整抗体及其他抗体竞争特异性结合抗原。

术语“药剂”用来描述具有或可以具有药理学活性的化合物。药剂包含是已知药物的化合物、已针对其鉴定了药理学活性但其正接受疗效评价的化合物和是待针对药理学活性筛选的集合和文库的成员的化合物。该术语包含有机或无机化学品(如包含抗体的肽、蛋白质和小分子(小于500D))和天然产物。

术语“症状”或“临床症状”包含病人感知的疾病的主观迹象，如先兆，以及医生观察到的疾病的客观迹象，例如癫痫神经活动。发明详述I.综述

已作出了令人惊奇的发现，PDZ蛋白质与一个或多个PL结合的抑制剂在癫痫中是治疗性的。例如，这类抑制剂可以降低癫痫引起的神经损伤。抑制剂可以是PSD-95结合PL的抑制剂。在一方面，抑制剂有效降低癫痫发作(例如发作)后发生的神经元细胞死亡。

本发明提供用于治疗或有效预防癫痫症状的方法。本发明部分地基于实施例中所描述的结果，其中发现，破坏PSD-95与NMDAR 2B的特异性结合的PSD-95拮抗剂在癫痫的大鼠模型中减轻此障碍。癫痫与其中已提出可以使用这类拮抗剂的其他疾病的不同在于不知道癫痫是兴奋性神经毒性的结果。虽然对机制的理解不是实施本发明所需的，但据信，本发明的这类药剂至少部分地通过抑制NMDAR(尤其是NR2A、2B、2C和D)与突触后密集区95蛋白质(即PSD-95抑制剂)间的相互作用起作用。这些药剂还可以抑制PSD-95与nNOS(GenBank NM_008712)间的相互作用。这些药剂还可以抑制PSD-95家族成员SAP102(Muller，Neuron 17，255-265(1996))、SAP97(GenBank NM_007862)和PSD93(GenBankNM_0011807)，以及包含PDZ的蛋白质TIP1(GenBank NM_029564)的相互作用。其他可以使用的抑制剂公开于申请人的共同未决的美国申请号12/040,851(2008年2月29日提交)和60/947883(2007年7月3日提交)中，二者都以其整体引入作为参考。还可以使用本文提到或引入作为参考的抑制剂的任意适合的组合或衍生物。虽然本发明的方法可以用于癫痫的任意形式，但在癫痫发作后施用时它们尤其有用。II.药剂

药剂包含具有至少两种成分的嵌合肽和拟肽。第一种成分是活性肽，其可选地具有包含或基于NMDA受体(即PL肽)的PL基序或PSD-95的PDZ结构域的氨基酸序列。用于本发明的活性肽抑制突触后密集区蛋白质95(PSD-95)(Stathakism，Genomics 44(1)：71-82(1997)提供的人氨基酸序列)的PDZ结构域1和2与包括神经N-甲基-D-天冬氨酸受体NR2B亚基的一个或多个NMDA受体2亚基的C端PL序列间的相互作用(Mandich等，Genomics 22，216-8(1994))。NMDAR2B具有GenBank ID 4099612、C端20个氨基酸FNGSSNGHVYEKLSSIESDV(SEQ ID NO：12)和PL基序ESDV(SEQ ID NO：1)。但是，还可以从这些蛋白质的物种变体显示抑制。可以使用的NMDA和谷氨酸受体的列表显示于下文：表1：具有PL序列的NMDA受体

上表中的Glutamate receptor：谷氨酸受体

一些活性肽抑制PSD-95与多个NMDAR亚基间的相互作用。在这类情况下，肽的使用并非必然要求理解不同NMDAR各自对兴奋性神经传递的贡献。其他活性肽对单个NMDAR特异。

活性肽包含或基于来自任意以上亚基C端的PL基序，并具有包含[S/T]-X-[V/L]的氨基酸序列。优选地，此序列存在于本发明的肽的C端。优选的肽在其C端具有包含[E/D/N/Q]-[S/T]-[D/E/Q/N]-[V/L]的氨基酸序列。示例性肽包含ESDV(SEQ ID NO：1)、ESEV(SEQ ID NO：2)、ESTV(SEQ ID NO：37)、ETDV(SEQ ID NO：3)、ETEV(SEQ ID NO：4)、DTDV(SEQ ID NO：5)和DTEV(SEQ ID NO：6)作为C端氨基酸。两种尤其优选的肽是KLSSIESDV(SEQ ID NO：9)和KLSSIETDV(SEQ ID NO：7)。无内化肽的本发明的肽通常具有3-25个氨基酸，优选肽长度(也无内化肽)为5-10个氨基酸，尤其是9个氨基酸。在一些这类活性肽中，所有氨基酸均来自NMDA受体的C端。

其他活性肽包含PSD-95的PDZ结构域1和/或2，或抑制PSD-95与NMDA受体，如NMDA 2B间的相互作用的任意这些结构域的亚片段。这类活性肽包含至少50、60、70、80或90个来自PSD-95的PDZ结构域1和/或PDZ结构域2的氨基酸，这些氨基酸大致存在于Stathakism，Genomics 44(1)：71-82(1997)提供的PSD-95(人序列)或NP_031890.1，GI：6681195(小鼠序列)的氨基酸65-248或其他物种变体的对应区域内。

优选地，本发明的任意肽可以在其N端连接便于转运通过细胞质膜的内化肽。这些肽的实例包含衍生自HIV的tat(Viyes等，1997，J.Biol.Chem.272：16010；Nagahara等，1998，Nat.Med.4：1449)、来自果蝇的触角足(antennapedia)(Derossi等，1994，J.Biol.Chem.261：10444)、来自单纯疱疹病毒的VP22(Elliot和D′Hare，1997，Cell 88：223-233)、抗DNA抗体的互补决定区(CDR)2和3(Avrameas等，1998，Proc.Natl Acad.Sci.U.S.A.，95：5601-5606)、70kDa热休克蛋白(Fujihara，1999，EMBO J.18：411-419)和transportan(Pooga等，1998，FASEB J.12：67-77)。例如，可以使用HIV TAT内化肽YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：38)。包含此HIV Tat内化肽和活性肽的两种优选的肽是YGRKKRRQRRRKLSSIETDV(SEQ ID NO：8，Tat-NR2B9c(TDV))和YGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：10，Tat-NR2B9c(SDV))。

还可以使用标准tat序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：38)的变体。2007年3月2日提交的共同未决的申请60/904507报道，标准tat肽结合并抑制N型钙通道，该结合可以导致多种副作用。虽然本发明的实施不依赖于对机制的理解，但据信，tat跨膜和结合N型钙通道的两种能力都由正电荷残基Y、R和K在该肽中异常高的出现率赋予。用于本发明的变体肽应保留便于摄入细胞的能力，但具有降低的结合N型钙通道的能力。一些适合的内化肽包含氨基酸序列XGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：39)或由其组成，其中X是除Y以外的氨基酸。优选的tat变体具有用F取代的N端Y残基。因此，优选包含FGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：40)或由其组成的tat变体。另一优选的变体tat内化肽由GRKKRRQRRR(SEQ IDNO：41)组成。如果XGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：39)两侧存在其他残基(除活性肽外)，则该残基可以是例如来自tat蛋白质的位于此片段两侧的天然氨基酸；通常用于连接两个肽结构域的一类间隔区或接头氨基酸，例如Gly(Ser)4(SEQ ID NO：42)、TGEKP(SEQ ID NO：43)、GGRRGGGS(SEQ ID NO：44)或LRQRDGERP(SEQ ID NO：45)(见例如Tang等(1996)，J.Bi0l.Chem.271，15682-15686；Hennecke等(1998)，Protein Eng.11，405-410))；或可以是任意其他氨基酸，其在无侧翼残基的情况下不可检测地降低赋予变体摄入的能力，且相对于无侧翼残基的变体，不显著提高N型钙通道的抑制。优选地，除活性肽以外的侧翼氨基酸的数目在XGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：39)的任一侧不超过10个。优选地，不存在侧翼氨基酸，内化肽在其C端直接与活性肽连接。

可以用于允许本发明的任意活性肽的摄取，以抑制PDS-95相互作用而不抑制N型钙通道的其他tat变体包含以下表2中所示的变体。建议可以筛选这些内化肽，以确认所希望的摄取和N型钙通道抑制的缺乏。本文预测这些序列保留转运能力而不抑制N型钙通道，从而允许治疗癫痫的更高的治疗指数。表2

X-FGRKKRRQRRRKLSSIESDV(F-TatNR2B9c(SDV)；SEQ ID NOS：46-48)
	X-GKKKKKQKKKKLSSIESDV(SEQ ID NOS：49-51)
X-RKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：52-54)
	X-GAKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：55-57)
X-AKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：58-60)
	X-GRKARRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：61-63)
X-RKARRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：64-66)
	X-GRKKARQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：67-69)
X-RKKARQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：70-72)
	X-GRKKRRQARRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：73-75)
X-RKKRRQARRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：76-78)
	X-GRKKRRQRARKLSSIESDV(SEQ ID NOS：79-81)
X-RKKRRQRARKLSSIESDV(SEQ ID NOS：82-84)
	X-RRPRRPRRPRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：85-87)
X-RRARRARRARRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：88-90)
	X-RRRARRRARRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：91-93)

X-RRRPRRRPRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：94-96)
	X-RRPRRPRRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：97-99)
X-RRARRARRKLSSIESDV(SEQ ID NOS：100-102)

X可以表示自由氨基端、生物素分子或其他封端部分，其包含但不限于H、乙酰基、苯甲酰基、烷基(脂肪族)、焦谷氨酸、末端具有环烷基的烷基、具有烷基间隔区的生物素或5，6-羧基荧光素(5，6-FAM)。可以通过酰胺化学、硫酸二酰胺化学、砜化学、烷基化化学将封端基团与N端肽化学偶联。此外，X还可以是除酪氨酸以外的氨基酸。

通常将内化肽与活性肽连接为融合肽，但也可以通过化学连接结合。可以通过偶联剂或缀合剂实现两种组分的偶联。大量这类试剂是市售的并由Wong，Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking，CRCPress(1991)综述。交联试剂的一些实例包含3-(2-吡啶联硫基)丙酸-J-琥珀酰亚胺酯(J-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate，SPDP)或N，N′-(1，3-亚苯基)双马来酰亚胺；N，N′-亚乙基-双-(碘乙酰胺)或具有6至11碳亚甲桥的其他这种试剂(其对巯基相对特异)；和1，5-二氟-2，4-二硝基苯(其与氨基和酪氨酸基团形成不可逆的连接)。其他交联试剂包含p，p′-二氟-m，m′-二硝基二苯基砜(其与氨基和酚基形成不可逆的交联)；二甲基己二酸(dimethyl adipimidate)(其对氨基特异)；苯酚-1，4-二磺酰氯(其主要与氨基反应)；己二异氰酸酯或二异硫氰酸酯，或苯偶氮基-对-二异氰酸酯(其主要与氨基反应)；戊二醛(其与几种不同的侧链反应)和disdiazobenzidine(其主要与酪氨酸和组氨酸反应)。

可以可选地衍生(例如乙酰化、磷酸化和/或糖基化)诸如上述肽的肽，以提高抑制剂的结合亲和力、提高抑制剂跨细胞膜转运的能力或提高稳定性。作为具体实例，对于其中来自C端的第三个残基是S或T的抑制剂，可以在使用该肽前磷酸化此残基。

可以通过固相合成或重组方法合成可选地与内化结构域融合的本发明的肽。可以用描述于科学和专利文献，例如Organic SynthesesCollective Volumes，Gilman等(编辑)John Wiley&Sons，Inc.，NY，al-Obeidi(1998)Mol.Biotechnol.9：205-223；Hruby(1997)Curr.Opin.Chem.Biol.1：114-119；Ostergaard(1997)Mol.Divers.3：17-27；Ostresh(1996)Methods Enzymol.267：220-234中的多种流程和方法合成拟肽。

无内化肽的本发明的肽通常具有3-25个氨基酸，优选肽长度(也无内化肽)为5-10个氨基酸，尤其是9个氨基酸。

如果希望，可以用本文所述的动物模型来确认肽或拟肽的适合的药理学活性。可选地，还可以用描述于例如US 20050059597(其引入作为参考)中的测定，针对抑制PSD-95和NMDAR 2B间相互作用的能力筛选肽或拟肽。在这种测定中，有用的肽通常具有低于50μM、25μM、10μM、0.1μM或0.01μM的IC50值。优选的肽通常具有0.001-1μM，更优选0.05-0.5或0.05-0.1μM间的IC50值。

药剂还包含抑制PSD-95和NMDAR 2B间的相互作用和/或上文所述的其他相互作用的小分子。适合的小分子抑制剂描述于共同未决的国际申请号PCT/US2006/062715中，其于2005年12月29日提交，在此以其整体引入作为参考。通过在计算机芯片上(in silico)针对结合PSD-95筛选化合物文库来鉴定这些分子，并实验验证示例性化合物的结合。适合的化合物包含具有P0-A-B-C-D-E的一般结构的化合物，其中D和E是可选的，P₀是：其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵之一是-COOH，其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵的剩余部分选自F、H、OCH₃和CH₃；X是-A-B-C-D-E，其中A、B、C、D和E通过单键连接，和A选自C＝O、NH、SO₂和(CH₂)_m，其中m＝0、1、2、3、4或5；B是-OCH₂-、C＝O，

其中R⁶-R¹⁰之一结合-C-D-E，其中R⁶-R¹⁰的剩余部分选自H、OH、F、Cl、Br、I、CH₃、CH₂CH₃和OCH₃，n＝0或1；或选自饱和或不饱和环烷基或杂环的环系统；或

其中o和p＝0或1，q＝0、1、2、3或4，R¹¹选自取代或非取代低级烷基、酰胺、硫醚、苯基、苯酚、吲哚、咪唑、NH(NH₂)(N(+)H₂)、COOH、SH、OH或H；C选自-O-、C＝O、NH、CONH、S、邻苯二酰胺、CH₃、H、SO₂和(CH₂)_r，其中r＝0、1、2、3、4或5；D是可选的，当C不是终端时，D选自-CN-、C＝O、NH、S、O、SO₂、(CH₂)_s(其中s＝0、1、2、3、4或5)和(CH₂)_t-OH(其中t＝0、1、2、3、4或5)，和和E是可选的，当D不是终端时，E是用低级烷基、低级烷氧基、酮、OH、COOH、亚硝基、N取代二氢吲哚取代的环己基或苯基，或细胞膜转运肽；或-(CH₂)_u-(CHR¹²R¹³)，其中u＝0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17，R¹²和R¹³独立地选自H、OH、环己烷、环戊烷、苯基、取代的苯基、环戊二烯；或包含异丙基、异丁基、1-异丙基-2-甲基-丁基、1-乙基-丙基的支链低级烷基；或-NH-COR¹⁴，其中R¹⁴是(CR¹⁵R¹⁶)vH，其中v＝0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17，R¹⁵和R¹⁶独立地选自H、环己烷、苯基和细胞膜转运肽。

备选地，P0是：

其中t＝0、1或2，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵或R⁶是COOH，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵或R⁶的剩余部分选自H、CH₃、F和OCH₃，X是-A-B-C-D-E，其中A、B、C、D和E通过单键连接，和A选自C＝O、SO₂、NH和(CH₂)_m，其中m＝0、1、2、3、4或5；B是：-OCH₂-、C＝O；或

其中R⁵-R⁹之一结合-C-D-E，其中R⁵-R⁹的剩余部分选自H、OH、F、Cl、Br、I、CH₃、CH₂CH₃和OCH₃，n＝0或1；或选自饱和或不饱和环烷基或杂环的环系统；或

其中o和p＝0或1，R¹⁰选自取代或非取代烷基、酰胺、硫醚、苯基、苯酚、吲哚、咪唑、NH(NH₂)(N(+)H₂)、COOH、SH、OH或H；C选自C＝O、NH、S、邻苯二酰胺、-O-、CH₃、H、SO₂和(CH₂)_r，其中r＝0、1、2、3、4或5；D是可选的，当C未终止时，D选自C＝O、-CN-、NH、S、O、SO₂、(CH₂)_s(其中s＝0、1、2、3、4或5)和

E是用低级烷基、低级烷氧基、酮、OH、COOH、亚硝基、N取代二氢吲哚取代的苯基或环己基；或-(CHR¹¹R¹²)_u，其中u＝0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17，R¹¹和R₁₂独立地选自H、OH、环己烷、环戊烷、苯基、取代苯基、环戊二烯；或包含异丙基、异丁基、1-异丙基-2-甲基-丁基、1-乙基-丙基的支链低级烷基；或-NH-COR¹¹，其中R¹¹是(CHR¹²R¹³)s，其中s＝0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17，R¹²和R¹³独立地选自H、环己烷、苯基和细胞膜转运肽。

一些优选的化合物具有以下结构：

其中R¹是选自0-4R⁷取代的环己基、0-4R⁷取代的苯基、-(CH₂)_u-(CHR⁸R⁹)、支链C_1-6烷基(异丙基、异丁基、1-异丙基-2-甲基-丁基、1-乙基-丙基)和-NH-C(O)-(CR¹⁰R¹¹)_vH的成员；各R⁷独立地是选自C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、-C(O)R¹²、OH、COOH、-NO、N取代二氢吲哚和细胞膜转运肽的成员；各R⁸和R⁹独立地选自H、OH、环己烷、环戊烷、苯基、取代苯基(例如，卤素、烷基和/或羟基取代)和环戊二烯；各R¹⁰和R¹¹独立地选自H、环己烷、苯基和细胞膜转运肽；R¹²是选自C_1-6烷基和芳基的成员；和各u和v独立地为从0至20；其中R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶之一是COOH，其中R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶的剩余部分各独立地选自F、H、OCH₃和CH₃。

在一实施方案中，R¹是-(CH₂)_u-(CHR⁸R⁹)。在另一实施方案中，R¹是除-(CH₂)_u-(CHR⁸R⁹)以外的上文定义的R1取代基组的成员。

优选的药剂具有以下结构：

可以从天然存在的或合成的分子筛选其他化合物。待筛选的药剂还可以获自天然来源，如海洋微生物、藻类、植物、真菌。还可以针对结合PSD-95和抑制PSD-95与NMDAR和/或以上I部分中所述的分子的相互作用的能力筛选肽或其他化合物的随机文库。可以以逐步的方式合成的许多类型的化合物产生组合文库。这类化合物包含多肽、β-转角模拟物、多糖、磷脂类、激素、前列腺素、类固醇、芳香族化合物、杂环化合物、苯二氮

、寡聚N取代甘氨酸和寡聚氨基甲酸酯。可以通过描述于Affymax的WO 95/12608、Affymax的WO 93/06121、哥伦比亚大学的WO94/08051、Pharmacopeia的WO 95/35503和Scripps的WO 95/30642(每一专利为了所有目的引入作为参考)中的编码合成文库(ESL)法构建巨大的化合物组合文库。还可以通过噬菌体展示法产生肽文库。见例如Devlin，W091/18980。可以以类似于抗体的方式使用组成A结构域多聚体的avimer(Silverman等Nat.Biotechnol.23，1493-4(2005))。还可以在癫痫的动物模型中进一步筛选具有上文所述的结合和抑制特性的化合物。可选地，将任意以上化合物与药物赋形剂混合为药物组合物。III.癫痫

癫痫是CNS障碍，其特征在于脑中不受控制的电活动的复发的无缘无故的事件，一般以过度和/或同步的神经活动形式出现。癫痫是全都涉及脑中发作性异常电活动的一组综合症。复发的癫痫发作可以从非常罕见(例如许多年不出现)到非常频繁(例如一天多次)地出现。许多个体在发作之间是无症状的。一般而言，大部分癫痫发作是自发的(在无已知触发物或原因的情况下发生)、突然的(在无预先指示的情况下发生)、短暂的(持续几秒钟或几分钟)和自限的(在无医疗帮助的情况下中止)。癫痫的一般症状

几乎任意类型反复发生的行为都可以指示癫痫发作，包括惊厥、肌肉痉挛、意识丧失、奇怪的感觉、情绪和/或行为。任意一种或多种以下症状可以指示癫痫：眩晕；晕厥；意识错乱；记忆丧失；头疼；情绪或能量水平的变化；伴随或不伴随发烧的惊厥；周期性黑视或记忆混乱；膀胱或肠控制丧失，随后极度疲劳的偶然发作；空白凝视发作；短期对询问或指令无反应；无明显原因地突然僵硬或摔倒；在不适当的时候眨眼或咀嚼的发作；茫然行为；短时间不能对话或交流；看起来不自在或不自然的重复运动；无缘无故地突然恐惧、愤怒或惊慌；看、听、闻或感觉事物的方式的奇怪变化；手臂、腿或身体的肌肉抽搐；和/或婴儿中成串的快速抽搐运动。癫痫分类的不同类型

可以通过许多不同标准分类癫痫，其包括：(1)首要原因(或病原学)；(2)可观察到的发作现象，称为症状学；(3)脑中起始发作的位置；(4)作为离散的、可鉴定的医学综合症的部分；和(5)引起发作的事件(若存在)。International League Against Epilepsy(ILAE)的1981分类体系仍被普遍使用，该体系基于观察(基于临床和电生理学数据)而不是病理生理学或解剖学。1989年，ILAE提出了癫痫和癫痫综合症的分类体系，该体系可以视为原因在一个轴上，脑内定位的广度在另一轴上的双轴体系。从1997年起，ILAE一直致力于具有发作现象、发作类型、综合症、病原学和损伤5个轴的新体系。当然，许多癫痫病例仍处于“未确定”组中，因为它们的症状不限于任意单个分类的症状。基于癫痫发作的定位的分类

癫痫发作涉及脑中神经元的癫痫活动(通常是过度和/或超同步的和通常是自限的活动)。癫痫发作的国际分类(International Classificationof Epileptic Seizures)将癫痫发作大致分为病灶性(也称为部分性)和全身性癫痫发作。部分性发作通常是其起始症状学显示最初仅激活一个大脑半球的部分，或与最初仅激活一个大脑半球的部分一致的发作。全身性发作通常是其起始症状学显示至少涉及两个大脑半球，或与至少涉及两个大脑半球一致的发作。部分性发作可以在脑内扩散，该过程称为继发性全身化(secondary generalization)。

根据意识受影响的程度进一步分类部分性发作。如果意识不受影响，则它是简单部分性发作，其通常涉及相对小的脑区，如额叶、颞叶、枕叶或顶叶。

个体所显示的发作症状可以指示脑中起始潜在的异常神经活动的部分。作为实例，可选地与局部或全身肌肉痉挛、颤搐、抽搐和/或幻觉组合的意识停滞可以指示病灶性癫痫。颞叶SPS症状可以包含似曾经历或从未有过的“上腹部上升感”、记忆反闪、突然强烈地感觉到恐惧或喜悦和/或奇怪的味道或气味、突然的行为变化、非常行为、攻击、愤怒或激动。额叶SPS可以与最初定位于身体一部分但可以扩散至其他部分的奇怪的运动、僵硬或抽搐(jerking)相关。顶叶SPS可以包含奇怪的感觉，如麻木或麻刺感、灼热感或感觉到热和/或感觉身体的部分比其真实大小更大或更小。枕叶SPS可以涉及视觉，如视力扭曲或丧失、注视闪光或彩色形状和/或幻觉。

复杂部分性(精神运动性)发作一般涉及受损的意识(个体仅部分有意识)、受损的反应性和受损的大部分或全部发作的记忆。颞叶CPS通常表现为自动症或以混乱的方式左右看。这种类型的CPS通常持续约2到3分钟(约为广播中一首歌的长度)，然后患者花费5到10分钟来完全恢复正常功能。相反，额叶CPS通常比颞叶CPS更短，通常持续约15到30秒钟，通常表征为四肢运动，随后快速恢复。

根据对身体的影响分类全身性发作，但一般涉及意识丧失。这些分类包含失神发作(小发作)、肌阵挛性发作、阵挛性发作、强直性发作、强直阵挛性发作(大发作)和无张力性发作。主要根据它们的运动现象分类全身性发作。基于症状学的分类

癫痫发作可以伴随特征性运动事件，其可以包含肌肉收缩的增加(正)或减少(负)以产生运动。可以根据所伴随的运动现象按以下分类癫痫发作：1)强直性：持续几秒钟至几分钟的肌肉收缩持久增加。2)癫痫性痉挛：主要是近身体中央的和躯干的肌肉的突然弯曲、伸展或弯曲-伸展混合，其通常比肌阵挛性运动持久，但不如强直性发作持久，即约1秒钟。可以出现有限的形式：面部歪扭、点头。癫痫性痉挛常成串发生。3)张力障碍性：产生手足徐动症样运动或扭曲运动的主动肌和拮抗肌都持久收缩，其延长时可以产生异常姿势。4)肌阵挛性：可变局部解剖学(中轴、近肢、远端)的一块或多块肌肉或肌群的突然的、短暂的(＜100毫秒)、无意识的单次或多次收缩。5)负肌阵挛性：强直性肌肉活动在之前无肌阵挛迹象的情况下中断＜500毫秒。6)阵挛性：定期反复、涉及相同肌群、频率约为2-3c/sec且时间延长的肌阵挛。7)强直阵挛性：强直期接着痉挛期组成的序列。可以观察到如痉挛性-强直性-痉挛性的变型。8)全身性强直阵挛性发作(也称为两侧强直阵挛性发作，之前称为“癫痫大发作”)：通常与自主现象相关的躯体肌的两侧对称强直性收缩，然后两侧痉挛性收缩。9)无张力性：无明显肌阵挛性或强直性事件的肌紧张突然丧失或减少，持续1到2秒钟或更长。

有时根据所经历的其他症状分类不表现为明显的运动事件的发作。“失神”发作通常是短暂的发作，其中个体例如通过茫然(going blank)和凝视丧失意识。发作可以非常精细和难以观察到，因为可以不存在明显的运动。失神在儿童中趋于更频繁(高达每天数百次发作)，但也可以发生在成人中。一些儿童每天可以具有数百次失神。“非典型”失神发作持续超过几秒钟，并可以涉及一些身体运动，如肩抽搐。

感觉性发作包含并非由外部世界中的适当刺激引起的知觉经历。“先兆”构成在给定患者中可以先于可观察到的发作症状的主观发作现象。如果单独出现，则它构成感觉性发作。自主性先兆包含与涉及包含心血管、胃肠、催汗、血管舒缩和体温调节功能的自主神经系统一致的感觉。自主性发作通常包含例如涉及心血管、瞳孔、胃肠、催汗、血管舒缩和体温调节功能的自主神经系统功能的客观记录的和不同的改变。基于病原学的分类

基于潜在的原因，可以将癫痫划分为自发性(即无明显的潜在原因)、症状性和隐源性类型。隐源性癫痫是疑似具有尚未鉴定的特定的潜在原因的癫痫。症状性癫痫由已知的脑中结构异常或损伤引起或由潜在的疾病，如先天性脑畸形、损伤或创伤(出生时或以后)、引起损伤的脑缺氧、具有永久性损伤的感染、肿瘤、血管缠结、中风和/或代谢紊乱引起。癫痫持续状态(SE)

虽然许多癫痫发作不频繁且持续时间短(例如短于几分钟)，但在一些情况下，个体可以遭受癫痫持续状态，其特征在于持续时间比癫痫发作一般持续的时间长的连续发作，例如至少约5、10或30分钟。癫痫持续状态还可以以两次或多次复发性发作的形式发生，其间个体不回到基线意识。发作可以是全身性的和/或惊厥性的；具有意识损伤的延长的的惊厥构成全身性惊厥性SE(GCSE)。虽然易于识别患有惊厥的患者，但一些已处于GCSE中的患者可以进展为在脑电图机(EEG)上具有最小运动活动或无明显的运动活动但仍然显示发作。患有非惊厥性SE(NCSE)的个体可以显示多种临床现象，其包含昏迷、意识错乱、瞌睡、改变的情感、神游状态、失语、异常的自主性/植物性症状、妄想、幻觉和偏执狂。NCSE可以划分为全身性(失神)、病灶性(复杂部分性)或其他类型。“癫痫性朦胧状态”(其过程中存在具有注意力损伤的完整唤醒)可以代表全身性和病灶性NCSE间的临床重叠。简单部分性SE通常由与完整意识相关的延长的病灶性发作，如分离的手抽搐显示。其他常见的癫痫障碍

可以通过本文所述的药剂和方法治疗的一些更常见的癫痫障碍和相关病症包含以下一种或多种：良性家族性新生儿发作；早期肌阵挛性脑病；Ohtahara综合症；婴儿游走性部分性发作；韦斯特综合症；良性婴儿肌阵挛性癫痫；良性家族性和非家族性婴儿期发作；Dravet′s综合症；HH综合症；非进行性脑病中的肌阵挛持续状态；伴中央颞区棘波的良性儿童癫痫；早发性良性儿童枕叶癫痫(Panayiotopoulos型)；迟发性儿童枕叶癫痫(Gastaut型)；肌阵挛失神性癫痫；肌阵挛失张力发作性癫痫；Lennox-Gastaut综合症；Landau-Kleffner综合症；慢波睡眠期具有连续棘波的癫痫(除LKS外)；儿童失神癫痫；进行性肌阵挛癫痫；不同表型的自发性全身性癫痫，如青少年失神癫痫或青少年肌阵挛性癫痫或仅具有全身性强直阵挛性发作的癫痫；反射性癫痫；自发性光敏性枕叶癫痫；其他视觉敏感性癫痫；原发性阅读性癫痫；惊愕性癫痫；常染色体显性遗传夜间枕叶癫痫；家族性颞叶癫痫；全身性癫痫伴热性惊厥叠加症；不同病灶的家族性病灶性癫痫；症状性(或可能为症状性的)病灶性癫痫；边缘叶癫痫；伴海马硬化的颞叶正中性癫痫；具体病原限定的颞叶正中性癫痫；位置和病原限定的其他类型；新皮质癫痫；和/或Rasmussen综合症。

颞叶癫痫(TLE)是成人病灶性癫痫的最常见和抗药的类型。TLE作为整体构成癫痫的常见类型。不清楚确切的发病率，但怀疑其占抗药性癫痫的显著的比例。约30％(在美国的二百七十万癫痫病例中)不充分地对药物反应。高达这些的一半可以是由TLE引起。通过手术从TLE患者切除海马揭示了海马硬化，其特征在于神经胶质增生和神经元丧失，以及轴突出芽、神经发生和突触发生。在良好建立的TLE的锂-毛果芸香碱动物模型中再现了人TLE的这些特征。化学惊厥剂毛果芸香碱诱导癫痫状态，其特征在于连续发作，导致一系列神经病理学变化和随后在3至5周内发生自发性再发作(SRS)。杏仁核、梨状皮质和背CA1海马中存在广泛的细胞丧失。癫痫的诊断和/或检测

除可观察到的症状的现象外，可以通过使用多种方法来检测和/或诊断癫痫。这些方法可以包括脑电描记术(EEG)、视频EEG、计算机化断层显像(CT)扫描、磁共振成像(MRI)、正电子成像术(PET)和/或单光子发射计算机断层显像(SPECT)。

EEG广泛用于辅助癫痫的检测或诊断。发作间癫痫样放电(IED)的存在可以指示癫痫。一些类型的癫痫样现象，例如3至7赫兹的棘波放电、高度节律失调和/或全身性光致发作反应与临床癫痫强烈相关。中央颞区或枕区中的病灶性尖波，或中央颞区或罗朗多EEG放电也可以指示癫痫。致癫痫区的位置是相关的：大部分患有颞叶癫痫的患者显示IED，而癫痫病灶在远离头皮电极的中央或基底皮质区的患者显示棘波的可能性较小。可选地，可以在觉醒和睡眠期间在多个时间点采集EEG。见例如Smith等，Journal of Neurology Neurosurgery and Psychiatry 2005；76：ii2-ii7，以其整体引入作为参考。IV.顺从治疗的患者

顺从治疗的患者包含具有癫痫的一种或多种症状或障碍(包含上文所述的症状或障碍)的人类。

顺从治疗的患者可以患有或不患有之前已提出用PSD-95拮抗剂治疗的疾病或障碍。这些疾病和病症包含兴奋性神经毒性介导的疾病、中风、癫痫、缺氧、与中风不相关的CNS的外伤性损伤如外伤性脑损伤和脊髓损伤、阿尔茨海默病和帕金森病。在存在这种共存疾病的患者中，本发明的药剂可以对癫痫和该共存疾病有效。

可选地，可以对诊断为患有癫痫的受试者施用本发明的药剂，该受试者无中风和/或兴奋性神经毒性和/或缺血性脑损伤介导的其他障碍或另一疾病的病史。还可以对患有癫痫的受试者施用本发明的药剂，未知该受试者易感第二种疾病或具有罹患第二种疾病的增加的风险。可选地，还可以对患有癫痫的受试者施用本发明的药剂，已知该受试者具有降低的罹患第二种疾病的风险，或已知其不具有提高的罹患第二种疾病的风险。在其他情况下，还可以优选对患有癫痫的受试者施用本发明的药剂，该受试者未曾罹患第二种疾病，但可以易感第二种疾病或处于提高的罹患第二种疾病的风险。还可以对具有罹患第二种疾病未知风险的受试者施用药剂。第二种疾病是PSD-95介导的疾病。可选地，第二种疾病是中风、兴奋性神经毒性介导的疾病、中风、癫痫、缺氧、与中风不相关的CNS外伤性损伤如外伤性脑损伤和脊髓损伤、阿尔茨海默病或帕金森病、先天性脑畸形、具有永久性损伤的感染、CNS肿瘤、血管缠结和/或代谢紊乱。V.疗法，施用时间

本发明的药剂用于治疗患有癫痫障碍的任意症状，或处于发生癫痫障碍的任意症状的风险的患者，该症状包含上文所述的症状。

在优选的方法中，可以在癫痫发作(例如发作)后至少30分钟或1小时施用药剂。可以在癫痫发作后例如至少约2、3、4、5、6、8、10、12、16或24小时施用药剂。还可以在癫痫发作后多天，例如起始后至少约1、2、3、4、5、7、8、9、10或12天施用药剂。还可以在癫痫发作后至少1周，例如发作后至少约1、2或3周施用药剂。

可选地，在癫痫发作后施用抑制剂，但不迟于一个或多个小时，例如不迟于发作后约1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、18或24小时。可选地，在癫痫发作后施用抑制剂，但不迟于一天或多天，例如不迟于发作后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或14天。可选地，在癫痫发作后施用抑制剂，但不迟于一周或多周，例如不迟于发作后约1、1.5、2、2.5或3周。

可选地，癫痫发作后在一个时间范围内施用抑制剂。该时间范围可以基于上文所述时间点的任意组合。例如，可以在癫痫发作后至少约1小时和不迟于发作后约2周，如癫痫发作后至少约2小时和不迟于发作后1周，例如癫痫发作后至少约3个小时和不迟于发作后约3天(或备选地1周)的时间范围内施用抑制剂。

可选地，癫痫发作后施用的时间可以从发作起始的时间测量(例如发作短暂时)，或从发作结束的时间测量(例如癫痫发作具有较长持续时间时)，或从在脑中观察到癫痫活动病征的任意时间点测量。为了本发明的目的，所经历或所观察到的脑中癫痫发作活动的症状(不包含非特异性发作预感或发作后状态)的起始可以视为癫痫发作的起始。同样，所经历或所观察到的脑中癫痫发作活动的症状的停止可以视为癫痫发作的结束。

可选地，不在癫痫发作前或癫痫发作过程中施用药剂。在其他情况下，也可以在癫痫发作(例如发作)过程中施用药剂。

如果在发作已开始后施用治疗，则可选地在癫痫发作结束后至少约0.5、1、2、3、4、5、6、8、12、24或48小时施用治疗。本发明的药剂的单个剂量通常是足够的。但是，也可以按6-24小时的间隔使用多个剂量。

希望时，可以在促进发作的触发事件之前或受试者刚经历了通常先于受试者中可观察到的发作起始的先兆后起始治疗。可选地在癫痫发作前至少约50.5、1、2、3、4、5、6、8、12、24或48小时施用药剂。

在其他情况下，癫痫发作起始后可以在所希望的时间点施用治疗。在癫痫发作起始后例如至少约0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、8、12、24或48小时施用药剂。癫痫发作可以是短暂的，例如持续1秒钟以下，或几秒钟，或约一分钟或几分钟，或约半小时。

本发明的方法可以与其他用于癫痫的治疗组合。这类常规治疗包括行为治疗、生活方式变化和/或药物治疗。已知的抗癫痫药物包含“传统”药物，如苯巴比妥、扑米酮、苯妥英、卡马西平和丙戊酸盐；以及诱导电压依赖性离子通道封闭、抑制性神经传递增强和/或兴奋性神经传递减弱的较新的抗癫痫药物。实例包含N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体(例如非尔氨酯)和α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸受体(例如非尔氨酯、托吡酯)上的谷氨酸拮抗作用，以及神经元和星形胶质细胞中γ-氨基丁酸(GABA)重摄取的抑制(例如噻加宾)。

适合的抗癫痫药包含钠通道封阻剂、GABA受体激动剂、GABA重摄取抑制剂、GABA氨基转移酶抑制剂、谷氨酸封阻剂，以及具有其他作用机制的抗癫痫药。抗癫痫药物包含醛类、芳香族烯丙醇类、巴比妥酸盐类、苯二氮

类、溴化物、氨甲酸酯类、甲酰胺类、脂肪酸类、果糖衍生物、gaba类似物、乙内酰脲类、噁唑烷二酮类、丙酸盐类、嘧啶二酮类、吡咯烷类、琥珀酰亚胺类、磺酰类、三嗪类、脲类、valproylamides(丙戊酸盐的酰胺衍生物)。常用的抗癫痫剂的具体实例包含乙酰唑胺、控释乙酰唑胺、卡马西平、控释卡马西平、氯巴占、氯硝西泮、乙琥胺、加巴喷丁、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥(苯巴比通(phenobarbitone))、苯妥英、普加巴林(pregabalin)、扑米酮、卢非酰胺、丙戊酸钠、控释丙戊酸钠、噻加宾、托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸或唑尼沙胺。可以使用这类药物或它们的衍生物的任意组合。VI.药物组合物、剂量和给药途径

可以以药物组合物的形式施用本发明的肽和拟肽。在GMP条件下制备药物组合物。可以以包含下文所示的任意剂量的单位剂量形式(即用于单次施用的剂量)提供药物组合物。可以利用常规的混合、溶解、粒化、糖锭剂产生、磨细、乳化、胶囊化、包埋或低压冻干方法制备药物组合物。尤其是，可以将本发明的低压冻干的(lypholyized)肽或拟肽用于下文所述的制剂和组合物中。

可以使用一种或多种便于将肽或拟肽加工入可药用制剂的生理学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或辅料，以常规方式配制药物组合物。适合的制剂依赖于所选择的给药途径。

施用可以是胃肠外、静脉内、口服、皮下、动脉内、颅内、鞘内、腹膜内、局部、鼻内或肌内施用。优选磷酸缓冲盐溶液中的药物的静脉内施用。

本发明旨在治疗脑的任意部分中的神经变性。脑的多种区域显示于图14中。

用于胃肠外施用的药物组合物优选是无菌的和基本上等渗的。对于注射，可以将肽或拟肽配制在水溶液中，优选在生理学上相容的缓冲液如Hanks’s溶液、Ringer’s溶液，或生理盐水或乙酸盐缓冲液中(以在注射部位处降低不适)。溶液可以含有配制药剂如混悬剂、稳定剂和/或分散剂。

备选地，肽或拟肽可以以粉末形式用于在使用前与适合的载体，例如无菌无热原水组合。

对于跨黏膜施用，将适于待渗透屏障的渗透剂用于制剂中。此给药途径可以用于递送化合物至鼻腔或用于舌下给药。

对于口服施用，可以通过将肽或拟肽与可药用载体组合为片剂、丸剂、锭剂、胶囊剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、膏剂、混悬剂等来配制化合物，用于待治疗的患者口服法。对于口服固体制剂，例如粉剂、胶囊剂和片剂，适合的赋形剂包含填充物如糖类，如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨醇；纤维素制剂，如玉米淀粉、小麦淀粉、稻淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍树胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；颗粒剂；和粘合剂。如果希望，可以加入崩解剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或褐藻酸或其盐，如褐藻酸钠。如果希望，可以用标准技术对固体剂型进行糖包被或肠溶衣包被。对于口服液体制剂，例如混悬剂、酏剂和溶液，适合的载体、赋形剂或稀释剂包含水、乙二醇、油、醇类。此外，可以加入调味剂、防腐剂、着色剂等。

除前述制剂外，还可以将化合物配制为贮存制剂。可以通过植入(如皮下或肌内)或通过肌内注射施用这类长效制剂。因此，例如，可以用适合的聚合物质或疏水物质(例如在可接受油中的乳剂)或离子交换树脂，或作为微溶衍生物，例如作为微溶盐，配制化合物。

备选地，可以使用其他药物递送系统。可以用脂质体和乳剂递送肽和拟肽。虽然通常要以更大的毒性为代价，但也可以使用某些有机溶剂，如二甲基亚砜。此外，可以使用持续释放系统，如含有治疗剂的固体聚合物的半透性基质递送化合物。

依赖于它们的化学性质，持续释放胶囊可以释放肽或拟肽几周至100天以上。依赖于治疗剂的化学性质和生物稳定性，可以使用用于蛋白质稳定化的其他策略。

本发明的肽或拟肽可以包含带电荷的侧链或末端，因此可以将它们作为游离酸或碱或作为可药用盐包含于任意上述制剂中。可药用盐是基本保留了游离碱的生物学活性，且其通过与无机酸反应制备的那些盐。在水性溶剂和其他质子溶剂中，药用盐趋于比对应的游离碱形式更易于溶解。

以对达到预期目的有效的量使用本发明的药剂。治疗有效量指足以在目前正经历癫痫症状的患者中消除、减轻癫痫或其亚型的至少一种病征和/或症状，或抑制该病征和/或症状的恶化的量。例如，如果与对照未治疗患者群体相比，其在治疗患者(人或动物)群体中显著减轻癫痫的至少一种病症或症状，则认为该量是治疗有效的。如果单个治疗患者达到比未通过本发明的方法治疗的可比较患者的对照群体中的平均结果更有利的结果，则也认为该量是治疗有效的。药剂的预防有效量指足以在目前未经历症状，但被认为相对于一般群体处于增强的发生这类症状的风险的患者中延迟、抑制或预防癫痫或其亚型的至少一种病症或症状的发生的药剂量。例如，如果相对于未用药剂治疗的对照群体，用药剂治疗的处于发生癫痫症状风险的患者群体发生减少的病征或症状，则认为该量是预防有效的。提到有效量时指治疗或预防有效量。提到有效方案时指有效量和达到上文所述的预期目的所需的给药频率的组合。

优选的剂量范围包含约0.01至100μmol药剂每千克患者体重，可选地，0.1至10μmol药剂每千克患者体重，例如，0.5至2μmol药剂每千克患者体重，或约1μmol药剂每千克患者体重。在一些方法中，施用0.1-10μmol药剂每千克患者体重。在一些方法中，在6小时内施用0.5-5μmol药剂每千克患者体重，更优选癫痫发作后约3-6小时施用约1μmol药剂每千克患者体重。在其他情况下，剂量范围是0.05至0.5μmol药剂每千克患者体重。可以通过除以6.2以补偿不同的表面积质量比，将每千克体重的剂量从大鼠变换至人类。类似地，可以通过除以12.3，将每千克体重的剂量从小鼠变换至人类。可以通过乘以肽的摩尔质量(在此，Tat-NR2B9c为2519)，将剂量从摩尔单位变换为克单位。可以通过乘以肽的摩尔质量，将剂量从摩尔单位变换为克单位。对于用于人类，本发明的肽或拟肽的适合的剂量可以包含约0.01至100mg/kg患者体重、或更优选约0.1至10mg/kg患者体重或约0.5至5mg/kg、或约1-4mg/kg，例如2.6mg/kg。在绝对体重为75kg的患者中，这些剂量转换为0.75-7500mg、7.5至750mg、37.5-3750mg或约75-300mg，例如约200mg。近似为涵盖例如患者体重中的变异，剂量通常在0.05至500mg，优选0.1至100mg、0.5至50mg或1-20mg内。

备选地，之前已报道，预期用于本方法的药剂如Tat-NR2B9c可用于治疗中风，并已针对此适应症进行了I期临床试验而无严重不良事件。用于治疗中风的剂量和方案也可以用于癫痫，尤其是癫痫的短间歇发作。

所施用的药剂量依赖于所治疗的受试者、受试者的体重、痛苦的严重度、施用的方式和处方医师的判断。可以在可检测到症状时或甚至检测不到症状时间歇性反复治疗。可以单独或与其他药物组合提供治疗。

药剂的治疗有效剂量可以提供治疗裨益而不引起实质性毒性。可以在细胞培养物或实验动物中通过标准的药学方法测定肽或拟肽的毒性，例如通过测定LD₅₀(群体50％致死剂量)或LD₁₀₀(群体100％致死剂量)。治疗指数是毒性效应和疗效间的剂量比。优选显示高治疗指数的肽或拟肽(见例如Fingl等，1975，The Pharmacological Basis of Therapeutics，第1章，第1页中)。VII.筛选方法

本发明还提供针对用于治疗癫痫的活性筛选肽、拟肽和其他化合物的方法。对癫痫的动物模型施用化合物。下文讨论多种动物模型。

适合在该方法中筛选的化合物包含已知抑制配体(包含NDMAR 2B)与PSD-95的PDZ结构域的相互作用的肽、拟肽和小分子(即小于500Da)。还可以筛选已知抑制显示于表1中的其他NDMAR和PDZ结构域蛋白质对间相互作用的其他肽、拟肽和小分子。

待筛选的化合物可以是天然存在的和合成的、有机的和无机的，并包含聚合物(例如寡肽、多肽、寡核苷酸和多核苷酸)、小分子、抗体、糖类、脂肪酸、核苷酸及核苷酸类似物、天然存在的结构的类似物(例如肽模拟物、核酸类似物等)和大量其他化合物。可以从多样性文库，如随机的或组合的肽或非肽文库制备化合物。文库包含化学合成文库、重组(例如噬菌体展示文库)和基于体外翻译的文库。化学合成文库的实例描述于Fodor等，1991，Science 251：767-773；Houghten等，1991，Nature354：84-86；Lam等，1991，Nature 354：82-84；Medynski，1994，Bio/Technology 12：709-710；Gallop等，1994，J.Medicinal Chemistry37(9)：1233-1251；Ohlmeyer等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：10922-10926；Erb等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：11422-11426；Houghten等，1992，Biotechniques 13：412；Jayawickreme等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：1614-1618；Salmon等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：11708-11712；WO 93/20242；和Brenner和Lerner，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5381-5383中。噬菌体展示文库的实例描述于Scott和Smith，1990，Science 249：386-390；Devlin等，1990，Science，249：404-406；Christian，R.B.等，1992，J.Mol.Biol.227：711-718)；Lenstra，1992，J.Immunol.Meth.152：149-157；Kay等，1993，Gene 128：59-65；日期为1994年8月18日的WO 94/18318中。基于体外翻译的文库包含描述于WO91/05058；和Mattheakis等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：9022-9026中的文库。作为非肽文库的实例，苯二氮

文库(见例如Bunin等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：4708-4712)可以适于使用。还可以使用拟肽(peptoid)文库(Simon等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：9367-9371)。Ostresh等(1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：11138-11142)描述了可以使用的文库的另一个实例，其中已使肽中的酰胺官能团超甲基化(permethylate)，以产生化学转化的组合文库。癫痫的动物模型：

已良好地表征了不同癫痫病症的大量动物模型。见例如Models of Seizures and Epilepsy，Asla

Philip A.Schwartzkroin和Solomon L.Moshe编辑，ISBN：978-0-12-088554-1；Elsevier Inc.，2006，以其整体引入作为参考。动物可以从果蝇到灵长类动物不同，其中以多种方式产生癫痫，其包括通过施用化学品或针对自发发生发作和/或癫痫的标本的遗传筛选。动物模型的实例包含模拟热性发作的大鼠中体温过高诱导的发作，小鼠突变体如蹒跚者(totterer)、占星师(stargazer)、昏睡的(lethargic)，以及具有与人失神癫痫类似的特征如短暂行为停止(即凝视或注视)的慢波癫痫(SWE)小鼠。

还已描述了良好表征的动物模型用于在患有颞叶癫痫(TLE)的患者中观察到的复杂部分性发作。红藻氨酸和毛果芸香碱(PILO)发作模型可能是最普遍研究的化学品诱导的TLE动物模型。点燃(kindling)(通过反复局部应用最初的惊厥阈下(subconvulsive)电刺激，最终导致剧烈的部分性和全身性惊厥性发作的现象)仍然是TLE的有益模型。

此外，已描述了几种遗传上有癫痫倾向的种类作为用于研究光敏感性和音原反射性癫痫的动物模型。这些模型包含几内亚狒狒(baboon Papio papio)、鸡的Fayoumi癫痫(Fepi)品系、遗传上有癫痫倾向的大鼠(GEPR)和DBA/2小鼠。

可获得多种方法用于在动物中诱导全身性强直-阵挛性发作或失神发作，如有高度发作倾向或具有自发性发作的一些遗传动物模型。以下是引起这类发作类型的几种传统方法。

通过最大电休克可靠地诱导表征为强直性后肢伸展/弯曲接着阵挛性活动的惊厥性发作，最大电休克仍然是用于快速筛选新的抗惊厥剂的受欢迎的方法。

戊四氮(PTZ)可能是使用最广泛的全身施用的惊厥剂。可以反复注射PTZ，以产生一种类似电点燃的化学点燃。在高剂量下，PTZ(通常皮下或静脉内施用)可靠地在大鼠或小鼠中产生强直-阵挛性惊厥，是发作易感性和新药物筛选二者的快速和有效的度量。在低剂量下全身施用时，PTZ还可以用于引起失神样发作。

氟替尔(一种六氟化醚)是用于在啮齿类动物中诱导可再现的惊厥性发作模式的化学吸入剂。在此方法中，将大鼠或小鼠置于不通气的室内，在中央施用的氟替尔扩散进入其中；10-20分钟后，氟替尔最初引起肌阵挛性抽搐，随后引起剧烈的阵挛性-强直性惊厥。最后，已描述了用于包含丘脑刺激的全身性失神发作的其他实验动物模型、在猫中全身施用青霉素、g-羟基丁酸盐处理(GHB)和脑室内阿片制剂，以及大鼠(GAERS、WAG/Rij、SER)和小鼠(占星师、蹒跚的、昏睡的、慢波癫痫小鼠、mocha和ducky)中遗传模型的数目。

动物模型，如上文所述的动物模型在体内和体外都在理解部分性或全身性发作相关现象的基本机制中具有价值，且是用于评估新疗法的标准技术。Sarkisian，Epilepsy&Behavior 2，201-216(2001)，以其整体引入作为参考。

实施例实施例1癫痫的毛果芸香碱大鼠模型A.股静脉插管

将动物在连续供给3％异氟醚下麻醉约40分钟，并在手术过程中将其置于背卧在加热垫上。用聚乙烯吡咯酮碘(Betadine)皂清洁，并剃净手术部位。从右下腹部开始并沿着右大腿、紧靠可辨别的标记股静脉、股动脉和坐骨神经位置的皱褶产生3cm的腹部皮肤切口。进行收肌的最小解剖以显示血管束，并小心地将股静脉、股动脉和坐骨神经分开。在股静脉中产生小切口，将预填充了含有肝素(1mL肝素/1L PBS)的生理盐水的P10聚乙烯插管插入4至5厘米。围绕股静脉、股动脉、坐骨神经结扎多条4.0丝缝线以保护插管。将动物置于腹卧位置，在肩胛骨之间产生0.5厘米的背中线皮肤切口。通过背中线切口插入具有锋利端的15cm长的金属管，并从皮下穿至腹侧大腿切口。将插管的自由端插入金属管，并从背中线切口拉出。去除金属管，并封闭腹侧皮肤切口。通过编织穿过塑料手术扣来紧固插管，用含有肝素的生理盐水冲洗，并用23线规大头针密封。封闭背侧切口，用4.0丝线将塑料手术扣植于肩胛骨之间(保持动物在随后5天的恢复期中够不着的策略区域)。B.癫痫发作的诱导

在全身注射化学惊厥剂毛果芸香碱之前17至24小时用氯化锂(腹膜内；3mEq/kg)预处理350至400克之间的雄性Wistar大鼠。每30分钟施用毛果芸香碱(腹膜内；10mg/kg)直到起始癫痫持续状态(SE)，其定义为丧失意识和连续的明显的发作活动。在低剂量毛果芸香碱(LDP)法中，对LEH或Wistar大鼠施用毛果芸香碱的初始注射(30mg/kg，腹膜内)。如果60分钟内未出现SE，则施用第二毛果芸香碱注射(15mg/kg)。在第二种方法(反复的低剂量毛果芸香碱(RLDP)法)中，按Glien等，(Epilepsy Res.2001年8月；46(2)：111-9)所述每30分钟对LEH或Wistar大鼠施用毛果芸香碱(10mg/kg，腹膜内)，直至大鼠经历全身性4/5类发作。大鼠一般在其后短时间内发生SE。第一次4/5类发作的30分钟内未发生的SE的动物按30分钟的间隔接受额外的毛果芸香碱注射，直到至多6次注射。SE起始后1、3和5小时用地西泮(腹膜内；4mg/kg)终止SE。按以下用经修改的Racine标尺(Racine，1972)将SE过程中发生的明显的发作活动记录为多个阶段：1)口运动；2)口运动和点头；3)前肢连续阵挛；4)前肢连续阵挛和直立(rearing)；5)前肢连续阵挛、直立和一次摔倒；6)前肢连续阵挛、直立和多次摔倒；和7)跑和跳。我们的经修改的Racine标尺进一步将原来的第五类分为三个阶段，以解释涉及多次摔倒(6)及跑和跳(7)的发作活动。C.癫痫发作后的神经变性的评估

SE诱导后两周，用氯胺酮和Romptum麻醉动物，并穿心灌注多聚甲醛(PFA；4％于0.1M磷酸盐缓冲液，pH 7.4中)。移出脑，在PFA中过夜固定，然后在PBS中的30％蔗糖中平衡。然后将脑在闪烁瓶中于-35℃下在甲基丁烷中冷冻并在进一步使用前于-70℃保存，闪烁瓶中包含冷冻的PBS中的30％蔗糖以防止冻干。用冷冻切片机按40μm对脑进行冠状切片，并于-20℃下保存在含有防冻溶液(15％葡萄糖，30％乙二醇，50mMol磷酸盐缓冲液，pH7.4)的24孔板中。

对每一动物，通过用神经元细胞特异性抗体NeuN进行免疫组织化学染色来定量神经元细胞。在0.1M PBS中漂洗(3分钟x2)自由漂浮的切片，然后于4℃下缓慢摇动，在神经元特异性一抗NeuN(1∶1000)、0.3％Triton X-100和2％山羊血清中过夜孵育。在0.1M PBS中洗涤(3分钟x 3)切片，并用与Cy3缀合的抗小鼠的二抗(1∶200)和0.3％TritonX-100于室温孵育2小时。漂洗脑切片(3分钟x 3)并封固在明胶包被的载玻片上。使切片风干，然后置于100％醇中1分钟，在二甲苯中清洁3分钟，并用Permount封上盖玻片。

用光学解剖法(40X物镜)在沿背海马的rostrocaudal轴间隔240μm(前囟点-2.8至-3.8mm)的3个切片中计数NeuN反应性细胞。所选择的切片在动物间是可比较的。在CA1区内，使每个切片的3个计数框(计数框＝60X120μm，解剖高度＝40μm)以系统随机方式分布。保存按重叠0.7μm的间隔采集的计数框的Z堆积图像，并在Zeiss LSM ImageBrowser软件中输出为2564x2051JPEG库图(gallery image)。用ADOBEPhotoshop 7.0输入并定量JPEG库图。每只动物针对前CA1区定量了总计9个计算框。结果表示为每个计数框定量的总细胞数的平均值。实施例2大鼠模型中癫痫发作对脑的影响

按实施例1中所述在雄性Wistar大鼠中诱导癫痫持续状态。按下文所述表征癫痫发作对这些大鼠脑的影响。A.SE诱导的神经病理学的表征

用光学解剖法和NeuN染色以定量神经元进行立体学分析来评估神经变性。在首次用于实验的动物中，每只动物分析了3个冠状切片，每个脑切片计数了60-100个神经元。在SE终止后3小时、6小时、12小时、24小时、3天、7天、14天和3个月进行了细胞计数。所有动物在3和8周之间出现SRS。所有组中均包含至少4只动物。迄今为止，已分析了以下脑区：海马亚区前CA1、CA2、CA3、CA4的锥体层；后背CA1和后腹CA1(D和V)；基底外侧杏仁核(BLN)；外侧后丘脑核(LPTN)；和梨状皮质。

除后CA1外，所有脑区都在3天内发生最大细胞丢失(见图1和2)。自发性再发作的出现并不促成这些脑区中进一步的细胞丢失，这表明神经变性特异性地作为持久的SE的结果而发生。海马CA2和CA3子域表现得对细胞丢失较不敏感(图2和3)。前CA1和后CA1是受影响最严重的海马区(＞70％细胞丢失)。此外，LPTN、BLN和梨状皮质也严重地受影响(＜80％细胞丢失)。

神经元特异性抗体NeuN染色通过NeuN阳性细胞的存在，即在神经变性过程的终点检测神经变性。相反，fluoro-jade B(FJB)染色在终点病理学之前检测死亡中的神经元。SE后用NeuN和FJB双染色允许神经变性的早期检测。例如，在基底外侧杏仁核中，FJB染色在SE后3小时出现在8±13％神经元中，SE后6小时出现在30±6％神经元中，SE后24小时出现在54±7％神经元中。从而用早在SE后6小时所检测的细胞丢失来检测SE后促成神经变性的过程的快速起始。实施例3Tat-NR2B9C挽救癫痫发作后背CA1区中的神经元丢失

按实施例1中所述在雄性Wistar大鼠中诱导癫痫发作状态。SE终止后3小时，按每分钟60μm的恒定速率经股静脉施用Tat-NR2B9c(3nmol/gm于生理盐水中)。SE后使大鼠恢复14天，然后进行分析。

按实施例1和2中所述根据NeuN阳性细胞的丢失评估神经变性。诱导癫痫发作后神经元细胞丢失的典型时程显示于图6中。细胞丢失在SE后7天最大，其是保持14天的减少。

如图8中所示，当在诱导癫痫发作后约3小时对大鼠施用时，Tat-NR2B9c以剂量依赖性方式挽救神经元丢失。相反，对照肽Tat-NR2BAA未减少神经变性(图4A)。

令人惊奇地相反，在连续的癫痫发作状态过程中对大鼠施用Tat-NR2B9c未减少神经元丢失(图7)。鉴于之前的研究，此结果尤其令人惊奇，之前的研究显示，在中风前或中风后1小时应用时，Tat-NR2B9c在中风的动物模型中具有高度的神经保护作用(Aarts等2002)，且在神经损伤和错乱(beyond)后3小时有效。

Tat-NR2B9c在前CA1区中尤其具有神经保护作用，而阴性对照肽Tat-NR2BAA(其不能作为PSD-95拮抗剂起作用)没有这种作用(图4A)。依赖相对于癫痫发作的施用时间的Tat-NR2B9c的不同作用的比较显示于图5和4B中。甚至在高剂量Tat-NR2B9c(9hmol/gm)下，癫痫持续状态过程中施用Tat-NR2B9c的大鼠中的神经元丢失也与未处理的大鼠中的神经元丢失相当(图4B、5和7)。惊人地相反，当在癫痫持续状态终止后施用时，较低剂量的Tat-NR2B9c(0.3nmol/gm和3nmol/gm)赋予神经保护作用(图4B、5和7)。实施例4癫痫发作后Tat-NR2B9C的神经保护作用的组织化学显示

按实施例1和2中所述，在雄性Wistar大鼠中诱导发作，并在损伤后3小时施用Tat-NR2B9c。按上文所述对脑进行固定、切片和用NeuN进行免疫染色。按2.5x在显微镜下显示背海马的冠状切片，代表性的图片显示于下文。图8，左部分显示由于施用Tat-NR2B9c而提高的NeuN免疫染色，用较高的Tat-NR2B9c量获得最佳结果(最接近于无SE的对照)。

当在40x放大率下观察海马背CA1区的切片时，与用盐水处理的大鼠相比，在用毛果芸香碱处理的大鼠中NeuN染色的细胞数目显著减少。通过施用Tat-NR2B9c逆转此作用(图8，左部分)。实施例5SE后-Tat-NR2B9C显著减小侧脑室的大小

按上文所述施用毛果芸香碱和Tat-NR2B9c并固定脑切片后，将各第6切片用来用甲酚紫进行尼氏染色。在明胶包被的载玻片上封固切片并使其风干。将切片在100％、95％、70％和50％的醇系列中各再水化5分钟。然后将切片置于水中1分钟，然后用甲酚紫染色20至30分钟。在水中漂洗(30秒钟x2)切片，并在醇系列中脱水：50％5分钟(或更短)、70％5分钟(或更短)、95％5分钟(或更短)、100％5分钟(或更短)和100％5分钟(或更短)。在50％和70％醇梯度下出现最大区别(Differentiation)。将切片在二甲苯中清洁5分钟，用Permount封上盖玻片，并例如在40X放大率下观察。

当经历发作的大鼠具有非常大的侧脑室时，Tat-NR2B9c的施用将它们减小至见于未施用毛果芸香碱的大鼠中的大小。

图11显示在SE后3小时用Tat-NR2B9c处理的动物中侧脑室大小的显著减小。在可比较的尼氏染色切片上，与未处理的动物相比，在SE后3小时用Tat-NR2B9c处理的动物具有显著较小的侧脑室。实施例6Tat-NR2B9c缓解癫痫发作引起的认知损伤

我们研究了用RLDP法诱导的60分钟SE的可能的行为影响。在SE后8周用Morris水迷宫(MWM)研究了视觉空间记忆，以检测慢性认知损伤。MWM对涉及治疗剂的研究尤其有用，因为前CA1区中神经变性的严重度与表现(逃离等待期)强相关(Clasussen等，2005)。在本分析中比较了四组动物：1)接受盐水代替毛果芸香碱且未进入SE的对照；2)接受至多6次反复的低剂量毛果芸香碱但未进入SE的无SE组；3)进入通过RLDP法诱导的SE的SE组；和4)进入通过RLDP法诱导的SE并在SE后3小时经股静脉插管施用Tat-NR2B9c药物的Tat-NR2B9c组(用Tat-NR2B9c获得的结果将在第4部分中讨论)。所有组都包含至少6只动物。

按以下评估用Tat-NR2B9c处理或未处理的癫痫小鼠的多种认知功能：i)高架十字迷宫(elevated plus maze)：

用高架十字迷宫研究探究行为。在SE后8周，将动物放置于高架十字迷宫上5分钟并录像。与对照相比，SE动物在封闭臂中花费较少时间(50％)，进入开放臂中的次数更多，而进入封闭臂中的次数更少(图12A-D)。此外，与对照相比，SE动物具有降低的往开放臂内看和直立发作的频率(图12E和F)。与未处理的动物相比，Tat-NR2B9c处理的动物降低了SE对探究行为的这些影响。ii)Morris水迷宫(morris water maze)

我们发现，在重复的试验和天数内，SE大鼠显示了表现的明显改进(图13)。在我们的研究中，在MWM任务上训练动物连续14天，每天完成6次试验。如图13B中所示，SE动物在所有训练日显示试验间改进(检测为试验4-5与试验1-2间的差异)。相反，无SE动物在第6天后不显示进一步改进，因为它们已经掌握了平台位置。图13A显示，SE动物在重复的天数内显示逃离等待期的适度改进。但是，无SE的动物在连续6天内学掌握任务，此后逃离等待期无进一步改进。

虽然已为了理解的清晰性的目的详述了本发明，但是显然，可以在所附权利要求的范围内实施某些修改。上文引用的所有出版物、文件、检索号等在此以相同的程度为了所有目的以其整体引入作为参考，就如同单独地指明这样引用每一出版物、文件、检索号等一样。如果在不同时间有一种以上的序列版本与同一检索号相关，则提到该检索号时指在提交追溯至也包含该检索号的任意优先申请的本申请时与其相关的版本。除非从上下文明确，任意步骤、特征、要素或实施方案可以与任意其他步骤、特征、要素或实施方案组合使用。

Claims

1.阻断PDZ结合配体与PSD-95的PDZ结构域结合的PSD-95抑制剂在治疗癫痫中的用途。

2.权利要求1的用途，其中所述PSD-95的PDZ结构域是PSD-95PDZ结构域2。

3.前述权利要求中任一项的用途，其中所述癫痫发作包含持续超过约20分钟的连续的癫痫发作，或包含至少两次癫痫发作而在两次发作间不恢复清醒。

4.前述权利要求中任一项的用途，其中所述癫痫包含颞叶癫痫。

5.前述权利要求中任一项的用途，其中在脑CA1区中观察到癫痫活动。

6.前述权利要求中任一项的用途，其中所述癫痫发作具有少于约10分钟的持续时间。

7.前述权利要求中任一项的用途，其中用脑电描记术测定所述癫痫发作的持续时间。

8.前述权利要求中任一项的用途，其中在癫痫发作终止后至少约1小时施用所述抑制剂。

9.前述权利要求中任一项的用途，其中在癫痫发作终止后至少约3小时施用所述抑制剂。

10.前述权利要求中任一项的用途，其中在癫痫发作终止后不迟于约1周施用所述抑制剂。

11.前述权利要求中任一项的用途，其中在癫痫发作终止后不迟于约1天施用所述抑制剂。

12.前述权利要求中任一项的用途，其中所述抑制剂是Tat-NR2B9c。

13.前述权利要求中任一项的用途，其中所述抑制剂是F-Tat-NR2B9c。

14.前述权利要求中任一项的用途，其中所述抑制剂是0625-0057。