EA039314B1 - Фармацевтически приемлемые соли полипептидов и их применение - Google Patents
Фармацевтически приемлемые соли полипептидов и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA039314B1 EA039314B1 EA202090143A EA202090143A EA039314B1 EA 039314 B1 EA039314 B1 EA 039314B1 EA 202090143 A EA202090143 A EA 202090143A EA 202090143 A EA202090143 A EA 202090143A EA 039314 B1 EA039314 B1 EA 039314B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- stroke
- seq
- nervous system
- injury
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 104
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 76
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 63
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 53
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 37
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 18
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 61
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 claims description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 31
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 30
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims description 27
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 claims description 25
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 25
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 23
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 21
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 21
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 20
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 20
- 208000001738 Nervous System Trauma Diseases 0.000 claims description 19
- 208000028412 nervous system injury Diseases 0.000 claims description 19
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 claims description 18
- 208000016988 Hemorrhagic Stroke Diseases 0.000 claims description 17
- 208000020658 intracerebral hemorrhage Diseases 0.000 claims description 17
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 claims description 16
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 claims description 16
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 claims description 16
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 claims description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 16
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 claims description 16
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 claims description 16
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 claims description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims description 11
- 230000036407 pain Effects 0.000 claims description 11
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 10
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 claims description 9
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 claims description 9
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 7
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims description 7
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 claims description 6
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 claims description 6
- 208000037906 ischaemic injury Diseases 0.000 claims description 6
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 108700000788 Human immunodeficiency virus 1 tat peptide (47-57) Proteins 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- RAVVEEJGALCVIN-AGVBWZICSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]acetyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-(diamino Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 RAVVEEJGALCVIN-AGVBWZICSA-N 0.000 claims description 3
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 23
- 101100240646 Scheffersomyces stipitis (strain ATCC 58785 / CBS 6054 / NBRC 10063 / NRRL Y-11545) NMA111 gene Proteins 0.000 description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 14
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 12
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 12
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108700019745 Disks Large Homolog 4 Proteins 0.000 description 10
- 102000047174 Disks Large Homolog 4 Human genes 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 108090001041 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Proteins 0.000 description 9
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- XWQVQFBTSBCKLI-FKXNDIMNSA-N dnc008987 Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 XWQVQFBTSBCKLI-FKXNDIMNSA-N 0.000 description 8
- 102000014649 NMDA glutamate receptor activity proteins Human genes 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 4
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 4
- 102100022630 Glutamate receptor ionotropic, NMDA 2B Human genes 0.000 description 4
- 101710195187 Glutamate receptor ionotropic, NMDA 2B Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 4
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 4
- 210000001168 carotid artery common Anatomy 0.000 description 4
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 3
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 3
- -1 persanthin) Substances 0.000 description 3
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- AJXONGJARXYRDO-YVNDNENWSA-N (4s)-4-amino-5-[[(2s)-1-[[(2s)-3-carboxy-1-[[(1s)-1-carboxy-2-methylpropyl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O AJXONGJARXYRDO-YVNDNENWSA-N 0.000 description 2
- UUDAMDVQRQNNHZ-UHFFFAOYSA-N (S)-AMPA Chemical compound CC=1ONC(=O)C=1CC(N)C(O)=O UUDAMDVQRQNNHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010008089 Cerebral artery occlusion Diseases 0.000 description 2
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 2
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 102000004868 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Human genes 0.000 description 2
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 2
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 2
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 2
- 210000000269 carotid artery external Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 2
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 230000001242 postsynaptic effect Effects 0.000 description 2
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZZPYUKWXDLMGI-UHFFFAOYSA-N 1,6-diisothiocyanatohexane Chemical compound S=C=NCCCCCCN=C=S VZZPYUKWXDLMGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940008841 1,6-hexamethylene diisocyanate Drugs 0.000 description 1
- IPJGAEWUPXWFPL-UHFFFAOYSA-N 1-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1C1=CC=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=C1 IPJGAEWUPXWFPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxynonadecane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(C(O)=O)C(O)(C(O)=O)CC(O)=O HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZGCFXINYYAKJB-UHFFFAOYSA-N 2-iodo-N-[1-[(2-iodoacetyl)amino]ethyl]acetamide Chemical compound C(C)(NC(CI)=O)NC(CI)=O DZGCFXINYYAKJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJBUBXIDMQBSQW-UHFFFAOYSA-N 4-(4-diazoniophenyl)benzenediazonium Chemical compound C1=CC([N+]#N)=CC=C1C1=CC=C([N+]#N)C=C1 HJBUBXIDMQBSQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035657 Abasia Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 101100364962 Arabidopsis thaliana STE1 gene Proteins 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008088 Cerebral artery embolism Diseases 0.000 description 1
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010008132 Cerebral thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- GKRLWXFIHKHQEH-UHFFFAOYSA-N Cl.CC(O)=O.OC(=O)C(F)(F)F Chemical compound Cl.CC(O)=O.OC(=O)C(F)(F)F GKRLWXFIHKHQEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069729 Collateral circulation Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000034347 Faecal incontinence Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 208000010496 Heart Arrest Diseases 0.000 description 1
- 201000001429 Intracranial Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000032984 Intraoperative Complications Diseases 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100096884 Rattus norvegicus Sult1e1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101100219191 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) byr1 gene Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010046543 Urinary incontinence Diseases 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 229940040563 agaric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008238 biochemical pathway Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920003123 carboxymethyl cellulose sodium Polymers 0.000 description 1
- 229940063834 carboxymethylcellulose sodium Drugs 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001627 cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000004720 cerebrum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 229940119744 dextran 40 Drugs 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003883 furosemide Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000000285 glutaminergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003979 granulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000000642 iatrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 201000010849 intracranial embolism Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 229960002900 methylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 201000007309 middle cerebral artery infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000007971 neurological deficit Effects 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000956 olfactory bulb Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035778 pathophysiological process Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000307 polymer substrate Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 229940116317 potato starch Drugs 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/22—Anxiolytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
В настоящем изобретении предложена фармацевтически приемлемая соль полипептида и содержащая ее фармацевтическая композиция, указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность YEKLLDTEI или ее функциональный вариант.
Description
Область техники
Настоящая заявка в целом относится к биомедицинской области. В частности, в настоящем изобретении предложены фармацевтически приемлемые соли полипептидов, композиции и способы лечения, облегчения или предупреждения расстройств, связанных с нервной системой.
Предшествующий уровень техники
Заболевания, связанные с нервной системой, проявляются в различных формах и представляют серьезную опасность для здоровья и качества жизни человека.
Инсульт представляет собой распространенное острое цереброваскулярное заболевание у людей среднего и пожилого возраста, которому также подвержены и лица более молодого возраста. Сегодня во всем мире он является одним из трех самых опасных заболеваний человека наряду со злокачественными новообразованиями, сердечно-сосудистыми заболеваниями и сахарным диабетом. Установлено, что в КНР около трех миллионов человек ежегодно умирает от цереброваскулярных заболеваний. Эта цифра в 4-5 раз выше, чем в США и странах Европы, в 3,5 раз выше, чем в Японии, и даже выше, чем в развивающихся странах, таких как Таиланд и Индия. Частота новых случаев растет со скоростью 8,7% в год. Частота рецидивов превышает 30%, а частота рецидивов в течение 5 лет достигает 54%. 75% перенесших инсульт в большей или меньшей степени утрачивают трудоспособность, а 40% получают тяжелую инвалидность.
Инсульт можно приблизительно разделить на две категории, а именно ишемический инсульт и геморрагический инсульт, из которых ишемический инсульт насчитывает 85% от общего числа заболевших инсультом. В настоящее время терапевтические лекарственные средства для лечения ишемического инсульта включают главным образом следующие типы: вазодилататоры (такие как персантин), лекарственные средства, улучшающие микроциркуляцию и увеличивающие объем крови (такие как низкомолекулярный декстран), тромболитические лекарственные средства (такие как урокиназа), антикоагулянты, лекарственные средства, предотвращающие агрегацию тромбоцитов (такие как аспирин), средства китайской медицины, нейропротективные средства и т.д. Тем не менее, в связи с тем, что большинство этих лекарственных средств вызывает проблемы, такие как существенные побочные эффекты, потенциальные риски или недостаточная терапевтическая эффективность, изучение патогенеза инсульта и разработка лекарственных средств, направленно действующих на патогенез, имеет важное общественное значение для предупреждения и лечения возникновения и развития цереброваскулярных заболеваний.
Инсульт характеризуется гибелью нейронов в участках локальной ишемии, церебрального кровоизлияния и/или травмы. Гибель или повреждения нейронов, вызываемые церебральной ишемией, претерпевают каскадный процесс повреждения, т.е. после возникновения церебральной ишемии уменьшается кровоснабжение ткани, нарастает количество возбуждающих нейротрансмиттеров, которые, в свою очередь, активируют рецепторы К-метилШ-аспартата (NMDA) и альфа-амино-3-гидрокси-5-метил-4изоксазол-пропионовой кислоты (AMPA), вызывают открытие ионных каналов и приток ионов кальция и дополнительно активируют широкий ряд ферментов, которые запускают сигнальный каскад, приводящий к повреждению нервных клеток различными путями. Следующий по каскаду белок постсинаптического уплотнения 95 (PSD-95) запускает серии ишемических повреждений посредством взаимодействия с различными белками и, таким образом, является критическим фактором повреждений, вызванных церебральной ишемией, а также возможной мишенью фармакотерапии. Следовательно, разработка ингибиторов PSD-95 имеет огромное медицинское значение для повреждений нервной системы, вызванных различными видами возбуждающей нейротоксичности, включая инсульт.
Кроме того, исследования показали, что возбуждающий нейротрансмиттер NMDA играет важную роль в развитии тревоги, эпилепсии и различных нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (БАС), болезнь Паркинсона или болезнь Хантингтона. Например, исследования показали, что избыточное возбуждение центральной глутаминергической системы может вызывать тревогу, тогда как рецептор NMDA (NMDAR) является основным элементом, ответственным за возбуждающую нейротоксичность глутаминовой кислоты. Начало эпилепсии включает три различных, но непрерывных патофизиологических процесса, включая инициацию, поддержание и распространение судорожного разряда и ингибирование судорожного разряда. В ходе этого процесса важную роль играют возбуждающие нейротрансмиттеры, такие как глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота. При болезни Альцгеймера PSD-95 вовлечен в нейротоксический механизм заболевания через биохимический путь GluR6-PSD-95-MLK3. Кроме того, при болезни Хантингтона PSD-95 является медиатором нейротоксичности, вызванной рецепторами NMDA и мутациями в гене гентингтина. Таким образом, разработка ингибиторов PSD-95 также важна для лечения, облегчения и предупреждения описанных выше заболеваний.
Краткое изложение сущности изобретения
В первом аспекте в настоящем изобретении предложена фармацевтически приемлемая соль полипептида, содержащего аминокислотную последовательность YEKLLDTEI (SEQ ID NO: 1) или ее функциональный вариант.
В некоторых воплощениях изобретения функциональный вариант представляет собой вариант, образованный в результате одной или более консервативных замен в участке LDTEI последовательности
- 1 039314
SEQ ID NO: 1.
В некоторых воплощениях изобретения консервативная замена выбрана из группы, состоящей из замены между аминокислотами D и Е, замены между L, V и I и замены между Т и S.
В некоторых воплощениях изобретения функциональный вариант представляет собой вариант, образованный в результате замены участка LDTEI (SEQ ID NO: 6) последовательности SEQ ID NO: 1 последовательностью, выбранной из группы, состоящей из
LDTEL (SEQ Ш NO: 7), LDTEV (SEQ Ш NO: 8), LDTDI (SEQ Ш NO: 9), LDTDL (SEQ Ш NO: 10), LDTDV (SEQ ID NO: 11), LDSEI (SEQ Ш NO: 12), LDSEL (SEQ ID NO: 13), LDSEV (SEQ ID NO: 14), LDSDI (SEQ ID NO: 15), LDSDL (SEQ ID NO: 16), LDSDV (SEQ ID NO: 17), LETEI (SEQ ID NO: 18), LETEL (SEQ ID NO: 19), LETEV (SEQ ID NO: 20), LETDI (SEQ ID NO: 21), LETDL (SEQ ID NO: 22), LETDV (SEQ ID NO: 23), VDTEI (SEQ ID NO: 24), VDTEL (SEQ ID NO: 25), VDTEV (SEQ ID NO: 26), VDTDI (SEQ ID NO: 27), VDTDL (SEQ ID NO: 28), VDTDV (SEQ ID NO: 29), ШТЕ1 (SEQ ID NO: 30), IDTEL (SEQ ID NO: 31), IDTEV (SEQ ID NO: 32), IDTDI (SEQ ID NO: 33), IDTDL (SEQ ID NO: 34), IDTDV (SEQ ID NO: 35), IETEI (SEQ ID NO: 36), IETEL (SEQ ID NO: 37), IETEV (SEQ ID NO: 38), IETDI (SEQ ID NO: 39), IETDL (SEQ ID NO: 40) и IETDV(SEQ ID NO: 41).
В некоторых воплощениях изобретения полипептид представляет собой химерный пептид, содержащий группировку интернализации пептида и активную пептидную группировку, где активная пептидная группировка представляет собой аминокислотную последовательность YEKLLDTEI (SEQ ID NO: 1) или ее функциональный вариант, и группировка интернализации пептида способна облегчать захват химерного пептида клеткой.
В некоторых воплощениях изобретения группировка интернализации пептида содержит аминокислотную последовательность YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 2).
В некоторых воплощениях изобретения химерный пептид содержит аминокислотную последовательность YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI (SEQ ID NO: 3).
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтически приемлемая соль выбрана из группы, состоящей из трифторацетата, ацетата, гидрохлорида и фосфата.
Во втором аспекте в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемую соль полипептида в соответствии с первым аспектом и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент и/или разбавитель.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическая композиция представляет собой прелиофилизированный препарат, предпочтительно содержащий гистидин и трегалозу.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный препарат, предпочтительно полученный лиофилизацией прелиофилизированного препарата, как описано выше.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическая композиция представляет собой восстановленный препарат, предпочтительно полученный объединением лиофилизированного препарата, как описано выше, с водным раствором.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическая композиция предназначена для применения в лечении, облегчении или предупреждении повреждения нервной системы, заболевания или боли, ассоциированных с повреждением нервной системы, нейродегенеративного заболевания, тревоги или эпилепсии у субъекта.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическая композиция предназначена для применения в качестве нейропротективного агента.
В третьем аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения, облегчения или предупреждения повреждения нервной системы, заболевания или боли, ассоциированных с повреждением нервной системы, нейродегенеративного заболевания, тревоги или эпилепсии у субъекта, включающий введение этому субъекту фармацевтически приемлемой соли полипептида в соответствии с первым аспектом или фармацевтической композиции в соответствии со вторым аспектом.
В четвертом аспекте в настоящем изобретении предложено применение фармацевтически приемлемой соли полипептида в соответствии с первым аспектом или фармацевтической композиции в соответствии со вторым аспектом в изготовлении лекарственного средства для лечения, облегчения или предупреждения повреждения нервной системы, заболевания или боли, ассоциированных с повреждением нервной системы, нейродегенеративного заболевания, тревоги или эпилепсии у субъекта или в изготовлении нейропротективного агента.
В некоторых воплощениях второго, третьего или четвертого аспекта повреждение нервной системы
- 2 039314 представляет собой повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью.
В некоторых воплощениях изобретения повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью, включает повреждение, выбранное из группы, состоящей из инсульта, повреждения спинного мозга, ишемического или травматического повреждения головного или спинного мозга, повреждение нейронов в центральной нервной системе (ЦНС), включая острое повреждение ЦНС, ишемический инсульт или повреждение спинного мозга, гипоксию, ишемию или механическое повреждение и повреждение, вызванное нейродегенеративным заболеванием, тревогой, эпилепсией или инсультом.
В некоторых воплощениях второго, третьего и четвертого аспектов нейродегенеративное заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза (БАС), болезни Паркинсона и болезни Хантингтона.
В некоторых воплощениях второго, третьего или четвертого аспекта повреждение нервной системы или боль локализованы в периферической нервной системе или в центральной нервной системе.
В некоторых воплощениях второго, третьего или четвертого аспекта заболевание, ассоциированное с повреждением нервной системы, представляет собой инсульт. В некоторых воплощениях инсульт включает в себя ишемический инсульт, геморрагический инсульт и геморрагический инсульт, преобразованный из ишемического инсульта. В некоторых воплощениях изобретения инсульт представляет собой ишемический инсульт.
В некоторых воплощениях второго, третьего или четвертого аспекта субъект представляет собой млекопитающее, такое как млекопитающее, не относящееся или относящееся к приматам, например человека.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показан результат анализа с соосаждением для обнаружения взаимодействия между Р5 и доменом PDZ1/2. М представляет собой маркер молекулярной массы; на дорожке 1 показаны His+PDZ1/2+P5; на дорожке 2 показан только Р5; на дорожке 3 показаны His+P5; и на дорожке 4 показаны His+PDZ1/2. Полоса элюции, показанная на дорожке 1, содержит как Р5, так и PDZ1/2, что подтверждает, что Р5 способен к связыванию с доменом PDZ1/2.
На фиг. 2 показано сравнение экспериментальных данных фармакодинамики различных солей полипептида у крыс.
На фиг. 3 показаны результаты анализов цитотоксичности для различных солей полипептида.
На фиг. 4 показана стабильность различных солей полипептида, где на панелях А и В соответственно показано содержание и количество молекул примесей различных солей полипептида в форме твердого вещества после воздействия обработки, включающей освещение и УФ свет, высокую температуру и высокую влажность; и на панелях С и D соответственно показано содержание и количество молекул примесей различных солей полипептида в форме водного раствора после воздействия на них обработки освещением и высокой температурой.
Подробное описание изобретения
Авторы настоящего изобретения провели обширные исследования пептидов, уменьшающих повреждающее влияние неврологических расстройств, по меньшей мере, частично опосредованных возбуждающей нейротоксичностью NMDAR. Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, считают, что такие пептиды, по меньшей мере, частично функционируют посредством ингибирования взаимодействия между NMDAR и белком постсинаптического уплотнения 95 (PSD-95), т.е. в качестве ингибиторов PSD-95. На основании вышеописанного авторы настоящего изобретения тщательно рассмотрели различные мишени для лечения заболеваний нервной системы, сконструировали и провели скрининг полипептидных нейропротективных агентов посредством фармакологических и фармакодинамических экспериментов in vivo и in vitro и дополнительно усовершенствовали полученные пептиды с получением фармацевтически приемлемых солей полипептидов с желаемыми свойствами.
Если не указано иное, термины, используемые в настоящем изобретении, имеют значение, обычно понятное для специалистов среднего уровня в данной области техники.
Однобуквенные или трехбуквенные сокращения для аминокислот, используемые в настоящем изобретении, соответствуют международным конвенциям.
В описании и формуле изобретения слова включающий, включающий в себя и содержащий означают включающий без ограничений и не предусматривают исключения других частей, дополнений, компонентов или стадий.
В первом аспекте в настоящем изобретении предложена фармацевтически приемлемая соль полипептида, содержащего аминокислотную последовательность YEKLLDTEI (SEQ ID NO: 1) или ее функциональный вариант.
Термин функциональный вариант относится к варианту, обладающему такой же или подобной биологической функцией или свойством, что и родительский вариант. В качестве неограничивающего примера функциональный вариант может быть получен выполнением одной или более консервативных замен в родительском варианте. Аминокислотную последовательность YEKLLDTEI (SEQ ID NO: 1) или ее функциональный вариант в настоящем документе также относят к активной пептидной группировке, которая действует в качестве активной группировки в лечении повреждения центральной нервной сис
- 3 039314 темы или при применении в качестве нейропротективного агента в настоящем изобретении.
В некоторых исследованиях сообщалось, что некоторые активные пептиды, ингибирующие взаимодействие между NMDAR и PSD-95, основаны на структуре NMDAR. Например, NMDAR2B (идентификатор 4099612 в базе данных GenBank) имеет 20 аминокислот FNGSSNGHVYEKLSSLESDV (SEQ ID NO: 42) на его С-конце, включая PL мотив ESDV (SEQ ID NO: 43). Некоторые известные активные пептиды содержат часть этой аминокислотной последовательности С-конца NMDAR2B, таким образом, полностью ингибируя PSD-95 посредством NMDAR2B. В исследованиях выдвинуто предположение, что участок ESDV или LESDV (SEQ ID NO: 44) в вышеописанных пептидах играет важную роль в ингибировании взаимодействия между NMDAR и PSD-95. Авторы настоящего изобретения получили пептидную последовательность YEKLLDTEI посредством анализа и валидации. По сравнению с составом аминокислот на С-конце описанного выше NMDAR2B, в этом пептиде отсутствуют два остатка SS после KL, при этом он имеет аминокислотную последовательность YEKL (SEQ ID NO: 45), продолжающуюся от Nконца PL-мотива. Авторы настоящего изобретения доказали, что эта последовательность может усиливать взаимодействие активного пептида с доменом PDZ1/2. Участок LDTEI на С-конце пептида относительно мотива YEKL может быть модифицирован, и ожидают, что такая модификация не повлияет на активность активного пептида или может даже повысит его активность. Соответственно в некоторых воплощениях изобретения предложенный в настоящем документе функциональный вариант представляет собой вариант, образованный в результате одной или более консервативных замен в участке LDTEI последовательности SEQ ID NO: 1.
В некоторых воплощениях изобретения консервативная замена выбрана из группы, состоящей из замены между аминокислотами D и Е, замены между L, V и I и замены между Т и S.
В некоторых более конкретных воплощениях изобретения функциональный вариант представляет собой вариант, образованный замещением участка LDTEI последовательности SEQ ID NO: 1 последовательностью, выбранной из группы, состоящей из
LDTEL, LDTEV, LDTDI, LDTDL, LDTDV, LDSEI, LDSEL, LDSEV, LDSDI,
LDSDL, LDSDV, LETEI, LETEL, LETEV, LETDI, LETDL, LETDV, VDTEI, VDTEL, VDTEV, VDTDI, VDTDL, VDTDV, ШТЕ1, IDTEL, ШТЕУ, ШТО1, IDTDL, IDTDV, IETEI, IETEL, IETEV, IETDI, IETDL и IETDV.
В некоторых воплощениях изобретения функциональные варианты, раскрытые в настоящем документе, также включают аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или даже более высокой идентичностью упомянутым выше пептидам. В данной области техники известно, что идентичность между двумя белками может быть определена путем выравнивания аминокислотной последовательности первого белка с последовательностью второго белка, которая содержит консервативную замену аминокислоты относительно первого белка. Степень идентичности между двумя белками можно определить с помощью компьютерных алгоритмов и способов, хорошо известных специалистам в данной области техники. Идентичность между двумя аминокислотными последовательностями предпочтительно определяют с использованием алгоритма BLASTP.
В некоторых воплощениях изобретения функциональные варианты, раскрытые в настоящем документе, включают варианты, имеющие замены, делеции, добавления и/или вставки аминокислотных остатков в 1, 2, 3, 4, 5 или более положениях по сравнению с упомянутыми выше пептидами и тем самым отличающиеся от конкретных пептидов, раскрытых выше.
Как описано выше, функциональный вариант может отличаться от конкретного пептида, раскрытого выше, одной или более заменами, делециями, добавлениями и/или вставками. Таким варианты могут иметь природное происхождение или могут быть получены синтетическим путем. Например, одна или более из описанных выше пептидных последовательностей, раскрытых в настоящем документе, могут быть модифицированы, и оценку их биологических активностей можно проводить, следуя любой из разнообразных методик, хорошо известных в данной области техники или описанных в настоящем документе.
В некоторых воплощениях изобретения полипептид представляет собой химерный пептид, содержащий группировку интернализации пептида и активную пептидную группировку, представляющую собой аминокислотную последовательность YEKLLDTEI (SEQ ID NO: 1) или ее функциональный вариант, и группировка интернализации пептида способна облегчать захват химерного пептида клеткой.
Специалистам в данной области техники должно быть понятно, что главная цель объединения активного пептида и пептида интернализации в химерном пептиде состоит в улучшении доставки активного пептида к мишени его действия. Таким образом, пептиды интернализации, подходящие для настоящего изобретения, не ограничены определенными типами, если может быть достигнута цель проникновения в клетку. Специалистам в данной области техники также должно быть понятно, что, поскольку мишень действия активного пептида главным образом локализована внутри нейронов, предпочтительно, чтобы пептид интернализации специфично подходил к нейронам. В некоторых воплощениях изобретения пептид интернализации может представлять собой пептид Tat. В некоторых воплощениях изобрете
- 4 039314 ния аминокислотная последовательность пептида Tat представляет собой YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 2). В некоторых воплощениях изобретения химерный пептид содержит аминокислотную последовательность YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI (SEQ ID NO: 3).
Следует принимать во внимание, что пептид интернализации может быть связан с активным пептидом амидной связью с образованием слитого пептида, при этом они также могут быть связаны другими подходящими средствами, такими как химическая связь. Сочетание двух компонентов может быть достигнуто с помощью агента сочетания или агента конъюгации. В продаже имеется большое количество таких реактивов, и их можно обнаружить в работе S.S. Wong, Chemistry of Protein Conjugation and CrossLinking, CRC Press (1991). Примеры реактивов поперечной сшивки включают 1-сукцинимид-3-(2пиридиндитио)пропионат (SPOP) или N,N'-(1,3-фенилен)бисмалеимид; N,N'-этилиден-бис-(йодацетамид) или другие такие реактивы, имеющие от 6 до 11 углеродных метиленовых мостиков (которые являются относительно специфичными к тиольным группам); и 1,5-дифтор-2,4-динитробензол (образующий необратимую связь с аминогруппой и группой тирозина). Другие реактивы поперечной сшивки включают Р,Р-дифтор-м,м'-динитрофенилсульфон (образующий необратимую поперечную сшивку с аминогруппой и фенольной группой); диметилдиэтиламингексаноат (специфичный к аминогруппе); фенол-1,4дисульфонилхлорид (главным образом взаимодействующий с аминогруппой); 1,6гексаметилендиизоцианат, или диизотиоцианат, или диизотиоцианат, либо фенилазо-п-диизоцианат (главным образом взаимодействующий с аминогруппой); глутаральдегид, (взаимодействующий с несколькими различными боковыми цепями), и бис-диазотированный бензидин (главным образом взаимодействующий с тирозином и гистидином).
Активный пептид и слитый пептид с активным пептидом, слитым с пептидом интернализации по настоящему изобретению, можно синтезировать способами твердофазного синтеза или рекомбинантными способами. Пептидомиметики можно синтезировать с использованием разнообразных протоколов и способов, описанных в научных трудах и патентных документах, таких как Organic Syntheses Collective Volumes, Gilman et al. (ed.) John Wiley & Sons, Inc., NY, al-Obeidi (1998) Mol. Biotechnol. 9:205-223; Hruby (1997) Curr. Opin. Chem. Biol. 1: 114-119; Ostergaard (1997) Mol. Divers. 3: 17-27; Ostresh (1996) Methods Enzymol. 267: 220-234.
He желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, ожидают, что молекула или ион с зарядом, противоположным заряду лекарственного вещества, при объединении с лекарственным веществом с образованием соли может улучшить некоторые нежелательные физико-химические или биофармацевтические свойства лекарственного вещества, например изменить растворимость или растворение, уменьшить гигроксопичность, улучшить стабильность или изменить температуру плавления лекарственного вещества. Для окончательного определения идеальной солевой формы требуется надлежащее равновесие между физико-химическими свойствами и биофармацевтическими свойствами. При выборе фармацевтически приемлемой солевой формы лекарственного вещества приоритет должен быть отдан таким требованиям как растворимость, гигроскопичность и устойчивость к факторам окружающей среды в различных состояниях. Фармацевтически приемлемые соли полипептидов согласно настоящему изобретению могут быть в любой подходящей фармацевтически приемлемой форме. В некоторых воплощениях изобретения фармацевтически приемлемая соль полипептида представляет собой трифторацетат. В некоторых воплощениях изобретения фармацевтически приемлемая соль полипептида представляет собой ацетат. В некоторых воплощениях изобретения фармацевтически приемлемая соль полипептида представляет собой гидрохлорид. В некоторых воплощениях изобретения фармацевтически приемлемая соль полипептида представляет собой фосфат. В некоторых конкретных воплощениях изобретения фармацевтически приемлемая соль полипептида представляет собой ацетат или гидрохлорид.
Во втором аспекте в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемую соль полипептида, как описано в соответствии с первым аспектом, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент и/или разбавитель.
Описанные в настоящем документе соединения могут быть получены в форме лиофилизированной композиции. В некоторых воплощениях изобретения в настоящем изобретении предложена лиофилизированная композиция. Лиофилизированная композиция может быть получена путем лиофилизации прелиофилизированной композиции, содержащей по меньшей мере один активный ингредиент, буфер, наполнитель и воду, где активный ингредиент представляет собой соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых воплощениях изобретения предпочтительным буфером является гистидин. Другие буферы могут быть выбраны из сукцината, цитрата, глюконата, ацетата, фосфата, Трис и т.д. Наполнитель придает структуру лиофилизированному соединению. В некоторых воплощениях изобретения наполнитель выбран из маннита, трегалозы, декстрана-40, глицина, лактозы, сорбита, сахарозы и тому подобного, при этом предпочтительна трегалоза. В некоторых воплощениях изобретения лиофилизированная композиция согласно настоящему изобретению содержит описанное выше соединение или его фармацевтически приемлемую соль и гистидин и трегалозу.
Лиофилизированная композиция может быть восстановлена. Таким образом, лиофилизированную композицию регидратируют раствором с образованием раствора частиц, невидимых невооруженным глазом. В некоторых воплощениях в настоящем изобретении предложена восстановленная композиция,
- 5 039314 полученная путем объединения лиофилизированной композиции с водным раствором. В некоторых воплощениях изобретения водный раствор представляет собой воду для инъекций. В некоторых воплощениях изобретения водный раствор представляет собой физиологический соляной раствор.
Термин лиофилизация относится к процессу, при котором исходное сырье, подлежащее высушиванию, сначала замораживают, а потом сублимируют в условиях вакуума, чтобы удалить лед или замороженные растворители.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтически приемлемую соль раскрытого в настоящем документе полипептида можно вводить в форме фармацевтической композиции. Фармацевтическая композиция может быть приготовлена традиционными способами, например смешиванием, растворением, гранулированием, таблетированием, размалыванием, эмульгированием, инкапсуляцией, иммобилизацией или лиофилизацией.
Фармацевтическая композиция может быть приготовлена традиционным способом, с использованием одного или более физиологически приемлемых носителей, разбавителей, эксципиентов или ингредиентов, подходящих для приготовления фармацевтически приемлемой композиции фармацевтически приемлемой соли полипептида. Подходящее приготовление зависит от выбранных путей введения.
В некоторых воплощениях изобретения введение может быть парентеральным, внутривенным, пероральным, подкожным, внутриартериальным, внутричерепным, подоболочечным, внутрибрюшинным, местным, интраназальным или внутримышечным. Предпочтительно внутривенное введение.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическая композиция для внутривенного введения является предпочтительно стерильной и по существу изотоничной. Для инъекций фармацевтически приемлемая соль полипептида может быть приготовлена в водном растворе, предпочтительно в физиологически совместимом буфере, таком как раствор Хэнка, раствор Рингера, либо в физиологическом солевом растворе или ацетатном буфере (чтобы уменьшить дискомфорт в месте инъекции). Раствор может содержать агенты, образующие препарат, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты.
Альтернативно фармацевтически приемлемая соль полипептида может быть в форме порошка для восстановления непосредственно перед применением с помощью подходящего носителя, такого как стерильная апирогенная вода.
В случае трансмукозального введения в составе применяют пенетранты, подходящие для проникновения через интересующий барьер. Этот путь введения можно использовать для доставки соединения в носовую полость или для сублингвального введения.
В некоторых воплощениях изобретения для перорального введения фармацевтически приемлемую соль полипептида можно объединять с фармацевтически приемлемым носителем в таблетки, пилюли, пастилки, капсулы, жидкости, гели, сиропы, взвеси, суспензии и тому подобное, для приема внутрь пациентом, подлежащим лечению. Для твердых пероральных композиций, таких как порошки, капсулы и таблетки, подходящие эксципиенты включают наполнители, такие как сахара, такие как лактоза, сахароза, маннит и сорбит; препараты целлюлозы, такие как кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксипропилметилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, и/или повидон (ПВП); гранулирующие агенты и связующие агенты. Если требуется, можно добавлять разрыхлитель, такой как поперечно-сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота или ее соль (такая как альгинат натрия). Если требуется, твердые композиции можно покрывать сахаром или энтеросолюбильным покрытием, используя стандартные методики. Для жидких пероральных композиций, таких как эликсиры и растворы, подходящие носители, эксципиенты или растворители включают воду, глицерин, масло и спирт. Кроме того, можно добавлять корригент, консервант, красящее вещество или тому подобное.
В дополнение к описанным выше композициям фармацевтически приемлемую соль полипептида можно включать в резервуарную лекарственную форму. Такие композиции пролонгированного действия можно вводить путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. Таким образом, например, соединение можно объединять с подходящим полимерным или гидрофобным материалом (например, приготовленным в виде эмульсии в приемлемом масле), либо с ионообменной смолой, либо приготовить в виде умеренно растворимого производного, например в виде умеренно растворимой соли.
Альтернативно можно использовать другие системы доставки лекарственного препарата. Химерный пептид может быть доставлен с помощью липосом и эмульсий. Можно также использовать некоторые органические растворители, такие как диметилсульфоксид. Дополнительно соединение может быть доставлено с помощью системы с замедленным высвобождением, такой как полупроницаемый субстрат из твердых полимеров, содержащий терапевтический агент.
Капсулы пролонгированного высвобождения могут высвобождать химерный пептид в течение нескольких недель или даже более чем до 100 дней в зависимости от их химических свойств. В зависимости от химических свойств и биологической стабильности терапевтического агента могут быть использованы другие стратегии стабилизации белка.
Фармацевтически приемлемую соль полипептида применяют в количестве, эффективном для дос
- 6 039314 тижения предусмотренной цели (например, уменьшение повреждающего воздействия, вызванного инсультом и родственными состояниями). Терапевтически эффективное количество означает количество фармацевтически приемлемой соли полипептида, достаточное для значимого уменьшения вызванных инсультом повреждений у пациентов (или в модельной популяции животных), получивших лечение раскрытой в настоящем документе фармацевтически приемлемой солью полипептида, по сравнению с повреждением центральной нервной системы в контрольной популяции пациентов (или животных моделей), не получивших лечение раскрытой в настоящем документе фармацевтически приемлемой солью полипептида. Количество также считают терапевтически эффективным, если у получившего лечение пациента достигается лучший результат по сравнению со средним результатом (определяемым объемом очага омертвения или индексом инвалидизации) в сопоставимой контрольной популяции пациентов, не получивших лечение раскрытым в настоящем документе способом. Это количество также считают терапевтически эффективным количеством. Это количество также считают терапевтически эффективным, если получивший лечение пациент характеризуется балльной оценкой инвалидизации 2 или менее по шкале Рэнкина и 75 или более по шкале Бартела. Дозу также считают терапевтически эффективной, если популяция получивших лечение пациентов демонстрирует значимо улучшенное распределение балльных оценок (т.е. меньшую инвалидизацию) по шкале инвалидизации по сравнению с сопоставимыми популяциями не получивших лечение пациентов, см. Lees et al., N Engl J Med 2006; 354: 588-600. Терапевтически эффективная схема лечения представляет собой сочетание терапевтически эффективной дозы и периодичности введения, необходимой для достижения описанной выше предусмотренной цели.
В некоторых воплощениях изобретения предпочтительный диапазон дозы фармацевтически приемлемой соли полипептида в соответствии с настоящим изобретением включает в себя от 0,001 до 20 мкмоль соли на кг массы тела пациента, возможно, от 0,03 до 3 мкмоль соли на кг массы тела пациента, включая любую величину или любой диапазон в этих пределах. В некоторых способах вводят 0,1-20 мкмоль соли в соответствии с настоящим изобретением на кг массы тела пациента в течение 6 ч. В некоторых способах вводят 0,1-10 мкмоль соли в соответствии с настоящим изобретением на кг массы тела пациента в течение 6 ч, более предпочтительно около 0,3 мкмоль соли в соответствии с настоящим изобретением на кг массы тела пациента в течение 6 ч. В других случаях диапазон дозы составляет от 0,005 до 0,5 мкмоль соли в соответствии с настоящим изобретением на кг массы тела пациента. Дозу на кг массы тела для крысы можно преобразовать в дозу для человека путем деления на 6,2, чтобы компенсировать различия отношения площади поверхности к массе тела. Приемлемая доза соли в соответствии с настоящим изобретением для применения у человека в граммах может включать от 0,01 до 100 мг/кг массы тела пациента, или более предпочтительно от 0,01 до 30 мг/кг массы тела пациента, или от 0,01 до 10 мг/кг, или от 0,01 до 1 мг/кг, включая любую величину или любой диапазон в этих пределах.
В некоторых воплощениях изобретения вводимое количество фармацевтически приемлемой соли полипептида зависит от подлежащего лечению субъекта, массы тела субъекта, выраженности боли, способа введения и корректировки врачом, назначающим препарат. Терапию можно повторять при определяемых или даже не определяемых симптомах. Терапию можно проводить отдельно или в комбинации с другими лекарственными препаратами.
В некоторых воплощениях изобретения терапевтически эффективная доза раскрытой в настоящем документе фармацевтически приемлемой соли полипептида способна обеспечивать благоприятный терапевтический эффект, не вызывая значимой токсичности. Токсичность химерного пептида можно определять на культурах клеток или у экспериментальных животных с помощью стандартных фармацевтических процедур, например путем определения LD50 (дозы, летальной для 50% популяции), или LD100 (дозы, летальной для 100% популяции). Отношение дозы, вызывающей токсический эффект, к дозе, вызывающей терапевтический эффект, представляет собой терапевтический индекс. Предпочтительна фармацевтически приемлемая соль полипептида, демонстрирующая высокий терапевтический индекс (см., например, Fingl et al., 1975, In: The Pharmacological Basis of Therapeutics, Chapter 1, page 1).
Во втором аспекте в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемую соль полипептида, как описано в первом аспекте, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент и/или разбавитель.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическую композицию применяют для лечения, облегчения или профилактики повреждения нервной системы, заболевания или боли, ассоциированных с повреждением нервной системы, нейродегенеративного заболевания, тревоги или эпилепсии у субъекта.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическую композицию применяют в качестве нейропротективного агента.
В некоторых воплощениях изобретения повреждение нервной системы представляет собой повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью.
В некоторых воплощениях изобретения повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью, включает повреждение, выбранное из группы, состоящей из инсульта, повреждения спинного мозга, ишемического или травматического повреждения головного или спинного мозга, повреждения нейронов в центральной нервной системе (ЦНС), включая острое повреждение ЦНС, инсульт или повреждение спинного мозга, гипоксию, ишемию или механическое повреждение и повреждение,
- 7 039314 вызванное нейродегенеративным заболеванием, тревогой, эпилепсией или инсультом.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическую композицию применяют для лечения, облегчения или профилактики ишемического инсульта или повреждения нервной системы, вызванного ишемическим инсультом. В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическую композицию применяют для лечения, облегчения или профилактики геморрагического инсульта или повреждения нервной системы, вызванного геморрагическим инсультом. В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическую композицию применяют для лечения, облегчения или профилактики геморрагического инсульта, преобразованного из ишемического инсульта, или повреждения нервной системы, вызванного геморрагическим инсультом, преобразованным из ишемического инсульта.
Инсульт представляет собой состояние, вызванное нарушением кровотока в ЦНС. Возможные причины включают эмболию, кровотечение и тромбоз. Из-за нарушения кровотока некоторые нейроны погибают мгновенно. Эти клетки высвобождают свои молекулы-компоненты (включая глутаминовую кислоту), которые, в свою очередь, активируют рецепторы NMDA, в результате чего повышаются внутриклеточные уровни кальция и внутриклеточные уровни ферментов, приводя к гибели все большего количества нейронов (каскадной амплификации возбуждающей нейротоксичности). Гибель тканей ЦНС называют омертвением (инфарктом). Объем очага омертвения (т.е. объем погибших вследствие инсульта нейронов в головном мозге) можно использовать в качестве показателя степени вызванных инсультом патологических повреждений. Симптоматические эффекты зависят как от объема очага омертвения, так и от локализации очага омертвения в головном мозге. Индекс инвалидизации можно использовать как меру симптоматических повреждений, такую как шкала исходов инсульта Рэнкина (Rankin, Scott MedJ; 2: 200-15 (1957) и индекс Бартела. Шкала Рэнкина основана на прямой оценке пациентом системного состояния, как описано ниже:
0: симптомы полностью отсутствуют;
1: симптомы есть, но без значимого снижения трудоспособности, пациент способен выполнять все виды повседневной работы и занятий;
2: незначительное снижение трудоспособности, пациент не может выполнять все виды деятельности, как прежде, но способен ухаживать за собой без посторонней помощи;
3: умеренная инвалидизация, требующая некоторой помощи, но пациент может самостоятельно ходить;
4: инвалидизация от умеренной до тяжелой степени, пациент не способен ходить без посторонней помощи и не может удовлетворять естественные потребности своего организма без посторонней помощи;
5: тяжелая инвалидизация; пациент прикован к постели, недержание мочи и кала, и нуждается в постоянном уходе и внимании.
Индекс Бартела основан на группах вопросов о способности пациента выполнять 10 основных видов повседневной деятельности, которые оценивают в баллах по шкале от 0 до 100, где более низкие баллы указывают на более высокую степень инвалидизации (Mahoney et al., Maryland State Medical Journal) 14:56-61 (1965).
Альтернативно степень тяжести/исход инсульта можно измерять с помощью шкалы инсульта Национальных институтов здравоохранения (NIH), которая доступна на международном портале ninds.nih.gov/doctors/NIHStrokeScaleBooklet.pdf. Эта шкала основана на способности пациента к выполнению 11 комплектов действий, включая оценку уровня сознания, двигательных, сенсорных и речевых функций пациента.
Ишемический инсульт более четко определяют как тип инсульта, вызванный блокадой кровотока в головном мозге. Потенциальный патогенез таких блокад чаще всего связан с появлением жировых отложений вдоль стенок кровеносных сосудов. Это состояние называют атеросклерозом. Эти жировые отложения вызывают два типа закупорки. Тромбоз сосудов головного мозга относится к тромбу (сгустку крови), образующемуся в заблокированном участке кровеносного сосуда. Эмболия головного мозга обычно означает, что различные эмболы (такие как пристеночный тромб в сердце, атеросклеротическая бляшка, жир, опухолевые клетки, соединительно-тканный хрящ или воздух), находящиеся в крови, проникают в мозговую артерию вместе с кровотоком и блокируют кровеносные сосуды. Если коллатерального кровообращения недостаточно для компенсации, это вызывает ишемический некроз ткани головного мозга, которую эта артерия снабжает кровью, и очаговый неврологический дефицит. Второй важной причиной эмболии являются нерегулярные сердечные сокращения, называемые фибрилляцией предсердий. Это вызывает состояние, при котором сгусток крови может образоваться в сердце, а затем сместиться и переместиться в головной мозг. Другими возможными причинами ишемического инсульта являются кровоизлияние, тромбоз, разрыв артерии или вены, остановка сердца, шок по любым причинам (включая кровотечение) и ятрогенные причины, такие как прямые хирургические повреждения кровеносных сосудов головного мозга или кровеносных сосудов, идущих к головному мозгу, или операция на сердце. Ишемические инсульты насчитывают приблизительно 83% всех случаев инсульта.
Несколько других неврологических расстройств также могут вызывать гибель нейронов в результате опосредованной NDMAR возбуждающей нейротоксичности. Эти расстройства включают нейродегенеративные заболевания, тревогу, эпилепсию, гипоксию, повреждение ЦНС, не связанное с инсультом,
- 8 039314 такое как травматическое повреждение головного мозга и повреждение спинного мозга. Соответственно в некоторых воплощениях изобретения фармацевтическую композицию применяют для лечения, облегчения или профилактики нейродегенеративных заболеваний, тревоги или эпилепсии, где нейродегенеративные заболевания могут включать болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (БАС), болезнь Паркинсона или болезнь Хантингтона.
В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическую композицию применяют в качестве нейропротективного агента.
В третьем аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения, облегчения или профилактики повреждения нервной системы, заболевания или боли, ассоциированных с повреждением нервной системы, нейродегенеративного заболевания, тревоги или эпилепсии у субъекта, включающий введение этому субъекту фармацевтически приемлемой соли полипептида, как описано в первом аспекте, или фармацевтической композиции, как описано во втором аспекте.
В некоторых воплощениях изобретения повреждение нервной системы представляет собой повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью, где повреждение или боль могут быть локализованы в периферической нервной системе или в центральной нервной системе. В некоторых воплощениях изобретения повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью, включает повреждение, выбранное из группы, состоящей из инсульта, повреждения спинного мозга, ишемического или травматического повреждения головного или спинного мозга, повреждения нейронов в центральной нервной системе (ЦНС), включая острое повреждение ЦНС, инсульта или повреждения спинного мозга, гипоксии, ишемии или механического повреждения и повреждения, вызванного нейродегенеративным заболеванием, тревогой, эпилепсией или инсультом.
В некоторых воплощениях изобретения нейродегенеративное заболевание включает болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (БАС), болезнь Паркинсона или болезнь Хантингтона.
В некоторых воплощениях изобретения заболевание представляет собой ишемический инсульт или повреждение нервной системы, вызванное ишемическим инсультом. В некоторых воплощениях изобретения заболевание представляет собой геморрагический инсульт или повреждение нервной системы, вызванное геморрагическим инсультом. В некоторых воплощениях изобретения заболевание представляет собой геморрагический инсульт, преобразованный из ишемического инсульта, или повреждение нервной системы, вызванное геморрагическим инсультом, преобразованным из ишемического инсульта.
В четвертом аспекте в настоящем изобретении предложено применение фармацевтически приемлемой соли полипептида, как описано в первом аспекте, или фармацевтической композиции, как описано во втором аспекте, в изготовлении лекарственного средства для лечения, облегчения или профилактики повреждения нервной системы, заболевания или боли, ассоциированных с повреждением нервной системы, нейродегенеративного заболевания, тревоги или эпилепсии у субъекта или в изготовлении нейропротективного агента.
В некоторых воплощениях изобретения повреждение нервной системы представляет собой повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью, где повреждение или боль могут быть локализованы в периферической нервной системе или в центральной нервной системе. В некоторых воплощениях изобретения повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью, включает повреждение, выбранное из группы, состоящей из инсульта, повреждения спинного мозга, ишемического или травматического повреждения головного или спинного мозга, повреждения нейронов в центральной нервной системе (ЦНС), включая острое повреждение ЦНС, инсульт или повреждение спинного мозга, гипоксии, ишемии или механического повреждения и повреждения, вызванного нейродегенеративным заболеванием, тревогой, эпилепсией или инсультом.
В некоторых воплощениях изобретения нейродегенеративное заболевание включает болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (БАС), болезнь Паркинсона или болезнь Хантингтона.
В некоторых воплощениях изобретения заболевание представляет собой ишемический инсульт или повреждение нервной системы, вызванное ишемическим инсультом. В некоторых воплощениях изобретения заболевание представляет собой геморрагический инсульт или повреждение нервной системы, вызванное геморрагическим инсультом. В некоторых воплощениях изобретения заболевание представляет собой геморрагический инсульт, преобразованный из ишемического инсульта, или повреждение нервной системы, вызванное геморрагическим инсультом, преобразованным из ишемического инсульта.
Используемый в настоящем документе термин субъект относится к животным, включая птиц, рептилий и млекопитающих. В некоторых воплощениях изобретения субъект представляет собой млекопитающее, включающее приматов и не являющихся приматами, например человека, шимпанзе, крупный рогатый скот, лошадей, свиней, овец, коз, собак, кошек и животных отряда грызунов, таких как крысы и мыши.
Следует понимать, что цель приведенного выше подробного описания состоит лишь в том, чтобы помочь специалистам в данной области техники более четко понять настоящее изобретение, но оно никоим образом не предусматривает ограничения настоящего изобретения. Специалисты в данной области техники могут выполнять различные модификации и изменения описанных воплощений.
- 9 039314
Примеры
Приведенные ниже примеры представлены только для иллюстрации некоторых воплощений настоящего изобретения и не имеют какой-либо ограничительной цели или характера.
Пример 1. Скрининг активных пептидных молекул.
На основании описанных результатов исследования был выбран трансмембранный пептид Tat YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 2), который лигировали с различными количествами аминокислот с образованием пептидной библиотеки. Молекулы химерного пептида в библиотеке пептидов исследовали на взаимодействие с доменом PDZ1/2, полученным в результате экспрессии и очистки in vitro, и подвергали полипептиды предварительному скринингу для определения прочности силы взаимодействия.
Молекулой иммобилизованной фазы (лигандом) был белок PDZ1/2 с молекулярной массой приблизительно 20 кД в концентрации 2 мг/мл. Молекулой подвижной фазы (определяемым веществом) был подлежащий скринингу полипептид с молекулярной массой приблизительно 2 кД в концентрации 10 мг/мл. Для фиксации с помощью прибора Biacore 3000 использовали микрочип СМ5. Электрофоретический буфер представлял собой фосфатно-солевой буфер (ФСБ) с добавлением 0,005% Твин 20. Фиксацию проводили, используя метод аминного сочетания. Концентрация лиганда составляла 10 мкг/мл. Буфер для фиксации представлял собой 10 ммоль/л ацетата натрия, pH 4,0. Фиксируемое количество для проточной кюветы 2 составляло 1400 единиц ответа (ЕО). Используемая скорость потока составляла 10 мкл/мин, и лиганд наносили в течение 1 мин. В качестве регенерирующего раствора использовали 10 ммоль/л глицина при pH 2,0+2,5. Регенерацию проводили со скоростью потока 30 мкл/мин. Время нанесения составляло 30 с.
Анализ кинетики выполняли, используя описанные ниже условия.
Контрольный канал: проточная кювета 1.
Электрофоретический буфер: ФСБ.
Режим: Мастер анализа кинетики (Kinetic Analysis Wizard).
Градиенты концентрации: 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 нмоль.
Время нанесения: 1 мин.
Время диссоциации: 2 мин.
Скорость потока: 30 мкл/мин.
Аппроксимацию данных выполняли с помощью программного обеспечения аппроксимации Biaevaluation 4.1. Модель аппроксимации представляла собой модель связывания 1:1. Значение константы диссоциации KD было обратно пропорционально силе взаимодействия.
В результате скрининга был получен химерный пептид, обладающий сильной способностью к взаимодействию с доменом PDZ1/2, и обозначен Р5. Последовательность этого химерного пептида приведена ниже.
Р5: YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI
Чтобы провести прямое сравнение с аналогичным химерным пептидом в опубликованных исследованиях, был введен контрольный химерный пептид NA-1 с приведенной ниже последовательностью.
NA-1: YGRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO: 4)
Кроме того, с учетом структурного различия между Р5 и NA-1 был дополнительно введен химерный пептид YE-NA-1, в котором два остатка YE были присоединены к N-концу активного пептида химерного пептида NA-1, и его последовательность приведена ниже.
YE-NA-1: YGRKKRRQRRRYEKLSSIESDV (SEQ ID NO: 5)
Химерные пептиды NA-1, YE-NA-1 и Р5 одновременно подвергали исследованиям на взаимодействие с доменом PDZ1/2, как указано выше, и результаты представлены в табл. 1 ниже.
Таблица 1. Определение силы взаимодействия между тремя химерными пептидами и доменом PDZ1/2
| химерные пептиды | NA-1 | YE-NA-1 | Р5 |
| KD (М) | 7,53Е-08 | 5,44Е-08 | 2,99Е-08 |
Как показано в табл. 1, химерные пептиды YE-NA-1 и Р5 более интенсивно взаимодействовали с доменом PDZ1/2 по сравнению с контрольным химерным пептидом NA-1, и характеристики Р5 были даже лучше. Таким образом, на основании предположений авторов изобретения два дополнительных аминокислотных остатка YE на N-конце активного пептида оказали некоторое благоприятное влияние на взаимодействие полипептида с доменом PDZ1/2. Кроме того, в Р5 отсутствуют два слабо гидрофобных остатка серина (SS) относительно карбокси-конца YE-NA-1. Как предполагают авторы изобретения, это может дополнительно усиливать взаимодействие полипептида с доменом PDZ1/2.
Пример 2. Анализ с соосаждением для подтверждения взаимодействия Р5 с доменом PDZ1/2.
Для подтверждения того, что Р5 может взаимодействовать с доменом PDZ1/2, был проведен анализ с соосаждением.
Колонку уравновешивали 100 мкл гранул с гистидином и 1 мл буфера МСАС-0 в течение 5 мин и затем перемешивали встряхиванием при 4°С. Смесь центрифугировали при 5000 g в течение 1 мин при
- 10 039314
4°С и отбрасывали супернатант. К смеси добавляли 1 мг белка PDZ1/2 и добавляли буфер до достижения объема 1 мл. Смесь вращали для связывания в течение 1 ч при 4°С. Смесь центрифугировали при 5000 g в течение 1 мин при 4°С и супернатант отбрасывали. Смесь промывали три раза 1 мл буфера МСАС-0, каждый раз по 5 мин (промывка при 4°С со встряхиванием). К смеси добавляли 1 мг белка Р5 и добавляли буфер до достижения объема 1 мл. Смесь вращали для связывания в течение 2 ч при 4°С. Смесь центрифугировали при 5000 g в течение 1 мин при 4°С и супернатант отбрасывали. Смесь промывали три раза 1 мл буфера для лизиса, каждый раз по 5 мин (промывка при 4°С со встряхиванием). После промывки добавляли 20 мкл МСАС-300. После центрифугирования элюат отбирали на анализ с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ДСН-ПААГЭ). Результаты эксперимента представлены на фиг. 1.
Как показано на фиг. 1, в полосе элюата химерного пептида Р5 присутствовали как пептид Р5, так и домен PDZ1/2, что подтверждает способность химерного пептида Р5 к связыванию с доменом PDZ1/2.
Пример 3. Терапевтические эффекты солей Р5 в модели МСАО (модель окклюзии срединной церебральной артерии) на крысах.
На основе химерного пептида Р5, полученного в примерах 1 и 2, авторы настоящего изобретения сконструировали Р5-трифторацетат (Р5-ТФА), Р5-ацетат (Р5-Ас) и Р5-гидрохлорид (Р5-а) и передали для синтеза в компанию Hangzhou Chinese Peptide Co., Ltd. Исследование терапевтических эффектов этих трех полученных солей Р5 проводили в модели МСАО на крысах.
Экспериментальные животные и материалы.
Животные представляли собой взрослых самцов крыс линии Спрег-Доули (СД) (Vittalia), маркированных как свободные от специфической патогенной микрофлоры (СПФ), с массой тела 220-250 г.
Инструменты включали односторонние ножницы, две пары глазных хирургических ножниц, четыре пинцета с изогнутыми концами, хирургический шовный материал №4, №5, треугольные иглы 6x17, окклюзионную систему (0,26 мм в диаметре) и один иглодержатель. Препараты включали раствор хлорида натрия для инъекций Enbipu (Shijiazhuang Group NBP Pharmaceutical Co., Ltd.), хлоралгидрат, фуросемид (20 мг/флакон), гентамицина сульфат (80 мг/флакон), ватные тампоны и медицинские лотки.
Моделирование МСАО.
Модель очаговой церебральной ишемии-реперфузии была подготовлена в соответствии с методикой наложения швов для создания обратимой окклюзии средней мозговой артерии (МСАО; middle cerebral artery occlusion), предложенной Лонга (Longa), с модификациями с учетом анатомической структуры головного мозга крысы. Крыс анестезировали с помощью интраперитонеального введения 10% хлоралгидрата в дозе 0,3 мл/кг. После анестезии делали разрез по срединной линии шеи и обнажали общую сонную артерию (ОСА), наружную сонную артерию (НСА) и крылонебную артерию. Рабочую часть (0,5 см) монофиламентной нейлоновой хирургической лески (0,26 мм) покрывали парафином и делали отметку на 20 мм. Ее вводили всем крысам через надрез ОСА справа, и для предотвращения ошибочного введения на крылонебную артерию накладывали временный зажим. Длина окклюзионной системы составляла около 18-20 мм от разветвления ОСА в зависимости от массы тела животного, в результате чего создавалась окклюзия средней мозговой артерии с правой стороны. Затем кожу зашивали, хвостовой конец окклюзионной системы частично закрепляли на коже. После периода ишемии в течение 2 ч окклюзионную линию осторожно извлекали, чтобы создать реперфузию. В течение периода ишемии и 2 ч после реперфузии температуру тела поддерживали при 37±0,5°С. Успешным маркером для модели является то, что после пробуждения крыс от анестезии у них наблюдали паралич левой конечности, неустойчивую стойку и переворот на одну сторону при поднятии за хвост.
Разделение на экспериментальные группы.
Экспериментальных животных распределяли в контрольную группу (нормальная группа), модельную группу (группу, получавшую физиологический раствор), положительную контрольную группу, получавшую препарат Enbipu (NBP), и группы, получавшие соль Р5. Физиологический раствор, положительный контрольный препарат Enbipu (2,5 мг/кг) и каждую из солей Р5 (10 мг/кг) соответственно вводили соответствующим группам крыс путем инъекции в хвостовую вену через 1 ч после ишемии.
Расчет объема очага омертвения.
Через 24 ч после введения препаратов крыс умерщвляли путем декапитации. Ткани головного мозга быстро извлекали и помещали в холодильник на -20°С. Через 10 мин ткани помещали в окружающую среду комнатной температуры. Головной мозг помещали в секционную форму для головного мозга крысы. После удаления обонятельной луковицы, мозжечка и нижнего ствола головного мозга проводили пять коронарных разрезов головного мозга толщиной 2 мм, как показано в профиле, с получением шести непрерывных необработанных коронарных срезов. Затем срезы головного мозга быстро помещали в 5 мл раствора, содержащего 2% тетразолия хлорида (ТТС), и инкубировали при 37°С в течение 30 мин в темноте, в течение которых срезы переворачивали один раз каждые 5 мин. При окрашивании ТТС нормальная ткань будет иметь розово-красный цвет, а омертвевшая ткань не окрасится и останется белой. Аккуратно располагали каждую группу срезов и фотографировали. Фотографии обрабатывали с помощью программного обеспечения системы анализа изображений и проводили статистический анализ. На каж
- 11 039314 дом срезе головного мозга рассчитывали площадь очага омертвения и умножали на толщину каждого среза головного мозга (2 мм). Произведения площади очага омертвения в рассматриваемом срезе головного мозга и толщины среза суммировали с получением общего объема очага омертвения головного мозга у каждого животного. Чтобы устранить влияние отека головного мозга, эти значения выражали в процентах от объема полушария головного мозга.
Результаты эксперимента представлены на фиг. 2. Эти результаты показали, что введение Р5-ТФА, Р5-Ас и Р5-С1 приводило к статистически значимому уменьшению объема очага омертвения в головном мозге крыс по сравнению с модельной группой (p менее 0,01); при этом при сравнении с положительным контрольным препаратом NBP эффекты введения Р5-ТФА, Р5-Ас и Р5-С1 по уменьшению объема очага омертвения у крыс статистически значимо превосходили эффекты положительного контрольного препарата NBP (р менее 0,05).
Пример 4. Определение цитотоксичности солей Р5.
В этом примере проводили исследование цитотоксичности двух солей полипептида Р5-Ас и Р5-С1 из примера 3.
Материалы эксперимента.
Использовали линию клеток PC 12. Другие материалы эксперимента включали чистый лабораторный стол с вертикальным ламинарным потоком воздуха, паровой стерилизатор, центрифугу, микроскоп, ридер микропланшетов, покровные стекла, чашку для подсчета клеток крови, ручной счетчик, спиртовую горелку, микродозаторы, пипетки, наконечники для автоматических пипеток, центрифужные пробирки, 96-луночные планшеты, фосфатно-солевой буфер (ФСБ)/физиологический раствор, модифицированную Дульбекко среду Игла (DMEM) с высоким содержанием глюкозы (содержащая 10% фетальную телячью сыворотку (ФТС) и 1%-ный раствор двух антибиотиков). ССК8 приобретали у компании Solvay.
Протоколы экспериментов.
Клетки в логарифмической фазе роста собирали и высевали в 96-луночный планшет при плотности 4х104 клеток/лунка в трех повторностях и культивировали в течение ночи. Готовили препарат соли Р5 (например, 5 мкмоль) в культуральной среде. Супернатант в 96-луночном планшете отбрасывали, планшет промывали 2-3 раза ФСБ/физиологическим раствором, а затем в каждую лунку добавляли 100 мкл препарата соли Р5. Тот же препарат соли Р5 также добавляли в контрольные лунки с холостой средой (не содержащие клеток). Клетки культивировали в течение 24 ч. В каждую лунку 96-луночного планшета добавляли 10 мкл CCK8 и инкубировали планшет в течение 1 ч. Оптическую плотность в каждой лунке 96-луночного планшета измеряли при 450 нм с помощью ридера для микропланшетов. Жизнеспособность клеток рассчитывали на основании показаний по следующему уравнению.
Жизнеспособность клеток (%)=(экспериментальная группа - соответствующая контрольная группа с холостой пробой)/(экспериментальная группа 0 мкмоль - контрольная группа с холостой пробой, 0 мкмоль)х100%.
Результаты эксперимента представлены на фиг. 3. Результаты показали, что две фармацевтически приемлемые соли полипептида Р5, т.е. Р5-Ас и Р5-С1, не обладают значимой цитотоксичностью в концентрации 5 мкмоль.
Пример 5. Стабильность солей Р5.
В данном примере проводили исследование стабильности трех солей Р5 из примера 3 в различных условиях, включая освещение, высокую температуру и высокую влажность.
Анализ стабильности порошков солей Р5.
Три соли Р5 примера 3 в форме порошка подвергали воздействиям освещения (3000 Люкс) и ультрафиолетового света (УФ), высокой температуры (60°С) и высокой влажности (ОВ 75%) в течение 10 дней. После обработки порошки растворяли в воде с получением раствора концентрации 2 мг/мл. Точно отмеряли 10 мкл каждого раствора, вводили в жидкостный хроматограф и записывали хроматограммы. Для анализа содержания и количества видов примесей рассчитывали содержание соответствующих веществ методом нормализации площади пика.
Приборы и реактивы.
Высокоэффективный жидкостный хроматограф (Agilent, 1260 EZChrom); хроматографическая колонка (Agilent, ZORBAX 300SB-C18 (4,6x250 мм, 5 мкм) SN: USHH008416); аналитические весы (Sartoris, BT25S); фильтрационная мембрана (Millipore, 0,45 мкм ПТФЭ (политетрафторэтилен)); ацетонитрил (MREDA); вода (Aqua); трифторуксусная кислота (ТФУ) (MREDA); и испытательная камера для полного исследования стабильности лекарственных препаратов (трехкамерного типа) (Shanghai Zuocheng Experimental Instrument Co. Ltd, № изделия SHH-3SDT).
Параметры хроматографирования.
Подвижная фаза: А 0,065% ТФУ в воде; В 0,05% ТФУ в ацетонитриле (ACN).
Длина волны детектора λ=220 нм; скорость потока V=1,0 мл/мин; температура Т=36°С.
Объем вводимой пробы (Inj)=10 мкл.
Условия градиента: 0-30 мин, В% = 5-65%.
Результаты анализа.
- 12 039314
Результаты анализа стабильности порошков трех солей Р5 представлены ниже в табл. 2 и на панелях А и В на фиг. 4.
Таблица 2
| Освещение + | Процент площади основного пика | Г идрохлорид 90,59% | Ацетат 96,47% | Трифторацетат 98,34% |
| ультрафиолетовый свет | Количество видов примесей | 18 | 14 | 6 |
| Высокая температура | Процент площади основного пика Количество видов примесей | 99,50% 3 | 99,79% 1 | 99,56% 3 |
| Высокая влажность | Процент площади основного пика | 99,44% | 95,75% | 99,73% |
| Количество видов примесей | 3 | 2 | 1 |
Результаты.
После воздействия освещения и ультрафиолетового света проценты площади основного пика и количества видов примесей трех солей статистически значимо различались. Относительный порядок стабильности был таким: трифторацетат > ацетат > гидрохлорид.
После воздействия высокой температуры проценты площади основного пика всех трех солей превышали 99,5% без значимого различия. Ацетат был наиболее стабильным при сравнении количества видов примесей.
После воздействия высокой влажности процент площади основного пика ацетата был статистически значимо снижен. Относительный порядок стабильности был таким: трифторацетат > гидрохлорид > ацетат.
В целом для всех трех солей показана надлежащая стабильность в различных условиях.
Анализ стабильности растворов солей Р5.
Три соли Р5 примера 3 растворяли в воде с получением раствора концентрации 2 мг/мл. Растворы подвергали воздействиям освещения (3000 Люкс) и высокой температуры (60°С) в течение 10 дней. После обработки точно отмеряли 10 мкл каждого раствора, вводили в жидкостный хроматограф и записывали хроматограммы. Для анализа содержания и количества видов примесей рассчитывали содержание соответствующих веществ методом нормализации площади пика.
Приборы и реактивы.
Высокоэффективный жидкостный хроматограф (Agilent, 1260 EZChrom); хроматографическая колонка (Agilent, ZORBAX 300SB-C18 (4,6x250 мм, 5 мкм) SN: USHH008416); аналитические весы (Sartoris, BT25S); фильтрационная мембрана (Millipore, 0,45 мкм ПТФЭ); ацетонитрил (MREDA); вода (Aqua); трифторуксусная кислота (ТФУ) (MREDA); и испытательная камера для полного исследования стабильности лекарственных препаратов (трехкамерного типа) (Shanghai Zuocheng Experimental Instrument Co. Ltd, № изделия SHH-3SDT).
Условия хроматографирования.
Подвижная фаза: А 0,065% ТФУ в воде; В 0,05% ТФУ в ацетонитриле (ACN).
Длина волны детектора λ=220 нм; скорость потока V=1,0 мл/мин; температура Т=36°С.
Объем вводимой пробы (Inj) =10 мкл.
Условия градиента: 0-30 мин, В%=5-65%.
Результаты анализа.
Результаты анализа стабильности водных растворов трех солей Р5 представлены ниже в табл. 3 и на панелях С и D на фиг. 4.
- 13 039314
Таблица 3
| Г идрохлорид | Ацетат | Трифторацетат | ||
| Освещение | Процент площади основного пика | 96,73% | 98,51% | 97,28% |
| Количество видов примесей | 7 | 4 | 10 | |
| Высокая температура | Процент площади основного пика | 58,63% | 90,07% | |
| Количество видов примесей | И | 7 |
Результаты.
После воздействия освещения проценты площади основного пика и количества видов примесей трех солей различались. Относительный порядок стабильности был таким: ацетат > трифторацетат > гидрохлорид.
После воздействия высокой температуры проценты площади основного пика и количества видов примесей гидрохлорида и ацетата различались. Относительный порядок стабильности был таким: ацетат > гидрохлорид.
В целом для всех трех растворов солей также показана надлежащая стабильность в различных условиях.
Все публикации и патентные документы, цитируемые в описании, включены в настоящий документ посредством ссылки так, как если бы каждая публикация или патент был бы особо и отдельно указан как включенный посредством ссылки. В различные воплощения изобретения, раскрытые в настоящем документе, могут быть внесены различные изменения и эквивалентные замены без отклонения от истинной сущности и объема защиты изобретения. Любой элемент, стадию или вариант осуществления воплощения настоящего описания можно использовать в комбинации с любыми другими элементами, стадиями или вариантами осуществления, если в контексте не указано иное.
Claims (13)
1. Фармацевтическая композиция для лечения, облегчения или предупреждения повреждения нервной системы, заболевания или боли, ассоциированных с повреждением нервной системы, нейродегенеративного заболевания, тревоги или эпилепсии или использования в качестве нейропротективного агента у субъекта, содержащая фармацевтически приемлемую соль полипептида и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент и/или разбавитель, где полипептид содержит аминокислотную последовательность YEKLLDTEI (SEQ ID NO: 1) или ее функциональный вариант в качестве активной пептидной группировки и где функциональный вариант представляет собой вариант, включающий одну или более консервативных замен в последовательности YEKLLDTEI (SEQ ID NO: 1).
2. Фармацевтическая композиция по п.1, где функциональный вариант представляет собой вариант, образованный в результате одной или более консервативных замен в участке LDTEI последовательности SEQ ID NO: 1, и консервативная замена выбрана из группы, состоящей из замены между аминокислотами D и Е, замены между L, V и I и замены между Т и S.
3. Фармацевтическая композиция по п.2, где функциональный вариант представляет собой вариант, образованный в результате замены участка LDTEI последовательности SEQ ID NO: 1 последовательностью, выбранной из группы, состоящей из LDTEL, LDTEV, LDTDI, LDTDL, LDTDV, LDSEI, LDSEL, LDSEV, LDSDI, LDSDL, LDSDV, LETEI, LETEL, LETEV, LETDI, LETDL, LETDV, VDTEI, VDTEL, VDTEV, VDTDI, VDTDL, VDTDV, IDTEI, IDTEL, IDTEV, IDTDI, IDTDL, IDTDV, IETEI, IETEL, IETEV, IETDI, IETDL и IETDV.
4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-3, где полипептид дополнительно содержит группировку интернализации пептида, которая способна облегчать захват полипептида клеткой.
5. Фармацевтическая композиция по п.4, где группировка интернализации пептида содержит аминокислотную последовательность YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 2).
6. Фармацевтическая композиция по п.5, где полипептид содержит аминокислотную последовательность YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI (SEQ ID NO: 3).
7. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-6, где соль выбрана из группы, состоящей из трифторацетата, ацетата, гидрохлорида и фосфата.
8. Фармацевтическая композиция по п.1, представляющая собой прелиофилизированную композицию, или лиофилизированную композицию, или восстановленную композицию.
- 14 039314
9. Фармацевтическая композиция по п.1, где повреждение нервной системы представляет собой повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью.
10. Фармацевтическая композиция по п.9, где повреждение нервной системы, вызванное возбуждающей нейротоксичностью, включает повреждение, выбранное из группы, состоящей из инсульта, повреждения спинного мозга, ишемического или травматического повреждения головного или спинного мозга, повреждение нейрона в центральной нервной системе (ЦНС), включая острое повреждение ЦНС, ишемический инсульт или повреждение спинного мозга, гипоксию, ишемию, или механическое повреждение и повреждение, вызванное нейродегенеративным заболеванием, тревогой, эпилепсией или инсультом.
11. Фармацевтическая композиция по π. 1, где нейродегенеративное заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза (БАС), болезни Паркинсона и болезни Хантингтона.
12. Фармацевтическая композиция по п.1, где заболевание, ассоциированное с повреждением нервной системы, представляет собой инсульт.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, где инсульт выбран из группы, состоящей из ишемического инсульта, геморрагического инсульта и геморрагического инсульта, преобразованного из ишемического инсульта.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/CN2017/091792 WO2019006690A1 (zh) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | 多肽的药学可接受的盐及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA202090143A1 EA202090143A1 (ru) | 2020-06-03 |
| EA039314B1 true EA039314B1 (ru) | 2022-01-12 |
Family
ID=64949624
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA202090143A EA039314B1 (ru) | 2017-07-05 | 2017-07-05 | Фармацевтически приемлемые соли полипептидов и их применение |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11767344B2 (ru) |
| EP (1) | EP3650460A4 (ru) |
| JP (1) | JP7002788B2 (ru) |
| KR (1) | KR102403089B1 (ru) |
| CN (1) | CN110809579B (ru) |
| AU (1) | AU2017422458B2 (ru) |
| BR (1) | BR112020000115A2 (ru) |
| EA (1) | EA039314B1 (ru) |
| WO (1) | WO2019006690A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107913395B (zh) * | 2016-10-10 | 2019-12-13 | 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 | 神经兴奋性损伤相关多肽在预防、缓解或治疗疼痛的用途 |
| BR112020006321A2 (pt) | 2017-09-30 | 2020-11-17 | Biocells (Beijing) Biotech Co., Ltd. | composição de peptídeos para tratamento de lesões relacionadas a neurotoxicidade excitatória |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101827604A (zh) * | 2007-07-03 | 2010-09-08 | 诺诺公司 | 焦虑治疗 |
| CN103648518A (zh) * | 2011-06-24 | 2014-03-19 | 诺诺公司 | 局部缺血的组合治疗 |
| WO2017185249A1 (zh) * | 2016-04-27 | 2017-11-02 | 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 | 兴奋性神经毒性相关损伤的治疗肽 |
| CN107312069A (zh) * | 2016-04-27 | 2017-11-03 | 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 | 兴奋性神经毒性相关损伤的治疗肽 |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050019841A1 (en) * | 1999-05-14 | 2005-01-27 | Arbor Vita Corporation | Modulation of signaling pathways |
| US20060148711A1 (en) | 1999-05-14 | 2006-07-06 | Arbor Vita Corporation | Molecular interactions in neurons |
| US7510824B2 (en) | 1999-06-02 | 2009-03-31 | Nono Inc. | Method of screening peptides useful in treating traumatic injury to the brain or spinal cord |
| US20040181830A1 (en) * | 2001-05-07 | 2004-09-16 | Kovalic David K. | Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement |
| EP1443951A4 (en) | 2001-08-03 | 2006-05-03 | Arbor Vita Corp | MOLECULAR INTERACTIONS IN CELLS |
| US20050282743A1 (en) * | 2001-08-03 | 2005-12-22 | Arbor Vita Corporation | Molecular interactions in cells |
| MX2007007590A (es) * | 2004-12-22 | 2007-12-10 | Ambrx Inc | Composiciones que contienen, metodos que involucran y usos de aminoacidos no naturales y polipeptidos. |
| US8685925B2 (en) * | 2006-07-11 | 2014-04-01 | Nono Inc. | Method and compositions for treating stroke with fever |
| EP1884521A1 (en) | 2006-07-31 | 2008-02-06 | Xigen S.A. | Fusion peptide for inhibiting interaction of neuronal NMDA receptor (NMDAR) and NMDAR interacting proteins |
| DK2120987T3 (en) * | 2007-03-02 | 2014-02-24 | Nono Inc | Treatment of stroke and other diseases without inhibiting N-type calcium channels |
| CN101134780A (zh) | 2007-07-09 | 2008-03-05 | 南京医科大学 | 阻断nr2b信号通路的多肽类似物及其制备方法和药物用途 |
| US8933013B2 (en) | 2007-12-05 | 2015-01-13 | Nono Inc. | Co-administration of an agent linked to an internalization peptide with an anti-inflammatory |
| DK2307035T3 (da) | 2008-05-16 | 2014-01-20 | Nono Inc | Anvendelse af en PSD-95 inhibitor ved behandlingen af epilepsi |
| WO2010028089A2 (en) | 2008-09-03 | 2010-03-11 | Arbor Vita Corporation | Agents and methods for treatment of pain |
| CN102458441A (zh) | 2009-06-10 | 2012-05-16 | 诺诺公司 | 用于治疗神经疾病的模型系统和治疗方案 |
| US9073990B2 (en) * | 2010-04-05 | 2015-07-07 | Bar-Llan University | Protease-activatable pore-forming polypeptides |
| CA2807946C (en) | 2010-08-12 | 2018-09-25 | Nono Inc. | Treatment of penetrative injury to the brain |
| WO2012156308A1 (en) | 2011-05-13 | 2012-11-22 | Københavns Universitet (University Of Copenhagen) | High-affinity, dimeric inhibitors of psd-95 as efficient neuroprotectants against ischemic brain damage and for treatment of pain |
| US9241970B2 (en) | 2011-12-13 | 2016-01-26 | Nono Inc. | Therapy for subarachnoid hemorrhage and ischemia |
| US9163227B2 (en) * | 2011-12-22 | 2015-10-20 | Covx Technologies Ireland Limited | Anti-diabetic compounds |
| AU2013251426A1 (en) | 2012-04-27 | 2014-11-20 | Indiana University Research And Technology Corporation | Compositions and methods for treating PTSD and related diseases |
| EP2906583A4 (en) * | 2012-10-09 | 2016-05-18 | Univ Ramot | PEPTIDES FOR THE TREATMENT OF NEURODEEGENERATIVE DISEASES |
| AU2015265487B2 (en) | 2014-05-28 | 2020-08-13 | Nono Inc. | Chloride salt of TAT-NR2B9c |
| US10028298B2 (en) * | 2016-01-18 | 2018-07-17 | Futurewei Technologies, Inc. | System and method for indicating periodic allocations |
| CN107913395B (zh) | 2016-10-10 | 2019-12-13 | 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 | 神经兴奋性损伤相关多肽在预防、缓解或治疗疼痛的用途 |
| CN109718363B (zh) | 2017-10-26 | 2019-12-13 | 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 | 预防、缓解或治疗阿尔茨海默病的肽及其应用 |
-
2017
- 2017-07-05 BR BR112020000115-5A patent/BR112020000115A2/pt unknown
- 2017-07-05 WO PCT/CN2017/091792 patent/WO2019006690A1/zh unknown
- 2017-07-05 EA EA202090143A patent/EA039314B1/ru unknown
- 2017-07-05 CN CN201780092744.2A patent/CN110809579B/zh active Active
- 2017-07-05 US US16/628,083 patent/US11767344B2/en active Active
- 2017-07-05 JP JP2020522762A patent/JP7002788B2/ja active Active
- 2017-07-05 KR KR1020207003472A patent/KR102403089B1/ko active IP Right Grant
- 2017-07-05 AU AU2017422458A patent/AU2017422458B2/en active Active
- 2017-07-05 EP EP17916979.2A patent/EP3650460A4/en active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101827604A (zh) * | 2007-07-03 | 2010-09-08 | 诺诺公司 | 焦虑治疗 |
| CN103648518A (zh) * | 2011-06-24 | 2014-03-19 | 诺诺公司 | 局部缺血的组合治疗 |
| WO2017185249A1 (zh) * | 2016-04-27 | 2017-11-02 | 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 | 兴奋性神经毒性相关损伤的治疗肽 |
| CN107312069A (zh) * | 2016-04-27 | 2017-11-03 | 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 | 兴奋性神经毒性相关损伤的治疗肽 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| GenBank Accession number WP_062612638, Version WP_062612638.1. GenBank. 15 May 2016 (15.05.2016), page 1 * |
| GenBank Accession number WP_065739501, Version WP_065739501.1. GenBank. 27 July 2016 (27.07.2016), page 1 * |
| GenBank Accession number XP_014940570, Version XP_014940570.1. GenBank. 15 December 2015 (15.12.2015), page 1 * |
| LIN, K. et al. GenBank Accession number EXX70775, Version EXX70775.1. GenBank. 18 March 2014 (18.03.2014), page 1 * |
| NIELSEN, H.B. et al. GenBank Accession number CDC10956, Version CDC10956.1. GenBank. 31 May 2013 (31.05.2013), page 1 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110809579A (zh) | 2020-02-18 |
| BR112020000115A2 (pt) | 2020-07-07 |
| EA202090143A1 (ru) | 2020-06-03 |
| AU2017422458B2 (en) | 2021-07-15 |
| US20200385425A1 (en) | 2020-12-10 |
| AU2017422458A1 (en) | 2020-02-20 |
| KR102403089B1 (ko) | 2022-06-02 |
| EP3650460A1 (en) | 2020-05-13 |
| EP3650460A4 (en) | 2021-03-17 |
| JP7002788B2 (ja) | 2022-03-03 |
| JP2020525552A (ja) | 2020-08-27 |
| US11767344B2 (en) | 2023-09-26 |
| KR20200028968A (ko) | 2020-03-17 |
| CN110809579B (zh) | 2023-04-04 |
| WO2019006690A1 (zh) | 2019-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20190067219A (ko) | 통증 예방, 경감 또는 치료에서의 신경 흥분성 상해 관련 폴리펩타이드의 용도 | |
| CN109718363B (zh) | 预防、缓解或治疗阿尔茨海默病的肽及其应用 | |
| CN110799522B (zh) | 用于治疗、改善或预防脑出血的肽及其用途 | |
| CN110799547B (zh) | 用于治疗、改善或预防神经系统相关病症的化合物及其用途 | |
| EA039314B1 (ru) | Фармацевтически приемлемые соли полипептидов и их применение | |
| US11541098B2 (en) | Peptide composition for treating excitatory neurotoxicity related injuries | |
| US11229675B2 (en) | Therapeutic peptides for excitatory neurotoxicity-related injuries | |
| US20190134150A1 (en) | Therapeutic methods for excitatory neurotoxicity-related injuries | |
| EA044400B1 (ru) | Пептидная композиция для лечения повреждений, связанных с возбуждающей нейротоксичностью |