CN102088969A - 沙帕他滨或cndac与dna甲基转移酶抑制剂如地西他滨和普鲁卡因的组合 - Google Patents

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Abstract

本发明的第一个方面涉及包含DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物的组合。本发明的第二方面涉及包含DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物的药物产品，其作为组合制剂用于在治疗中同时、依次或分别使用。本发明的第三个方面涉及治疗增生性疾病的方法，所述方法包括同时、依次或分别向患者给药DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物。

Description

沙帕他滨或CNDAC与DNA甲基转移酶抑制剂如地西他滨和普鲁卡因的组合
技术领域
本发明涉及适于治疗癌症和其它增生性疾病的药物组合。
发明背景
DNA甲基转移酶是一类促进甲基共价加成至DNA分子中的特异的核苷酸碱基的酶家族。所有已知的DNA甲基转移酶使用S-腺苷基蛋氨酸(SAM)作为甲基供体。已经在哺乳动物中鉴定了四种活性DNA甲基转移酶。它们命名为DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B。
DNMT1是哺乳动物细胞中最丰富的DNA甲基转移酶，且被认为是哺乳动物中关键的维持性甲基转移酶(maintenance methyltransferase)。其主要甲基化哺乳动物基因组中的半甲基化的CpG二-核苷酸，且负责维持发育中确定的甲基化模式。该酶大约1620个氨基酸长度，前1100个氨基酸组成调节区，且剩余残基组成催化区。这些通过Gly-Lys重复部分结合。对于DNMT1的催化功能，同时需要这两个区域。DNMT3是DNA甲基转移酶的家族，其可以相同速率甲基化半甲基化的和未甲基化的CpG。DNMT3酶的结构类似于DNMT1，其调节区连接至催化区。
最近的工作已经揭示了在分子水平DNA甲基化如何与染色质结构相关，和在肿瘤发生和遗传疾病中甲基化异常如何起到直接的促进作用。还已经发现了许多新的关于DNA甲基转移酶的信息，关于其在哺乳动物发育中的作用及其已知的相互作用的蛋白质的类型。不同于在复制后单独作用以复制甲基化模式的酶，至今发现的相互作用的类型指出，DNA甲基转移酶可为积极参与转录控制和染色质结构调节的更大复合物的成分。这些发现会增进理解疾病中DNA甲基化的众多作用，以及产生用于预防或修复这些缺陷的新颖的治疗。
本领域已经确定有活性的药物常常可以组合给予以优化治疗方案。因此，本发明旨在寻求提供特别适于治疗增生性疾病，尤其是癌症的已知药物的新组合。更具体地，本发明关注在组合中使用具体药物的令人吃惊的且意想不到的效果。
发明内容
在第一方面中，本发明提供包含DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶(1-(2-C-cyano-2-dioxy-β-D-arabino-pentofuranosyl)-N4-palmitoyl cytosine)(也已知为“CYC682”或沙帕他滨(sapacitabine))或其代谢产物的组合。
Qin T等人(2007，13，Clin.Cancer Res.4225-4232)公开了阿糖胞苷和地西他滨的组合在多种人白血病细胞系中的作用。同样，Kong XB等人(1991，Molecular Pharmacol.39，250-257)教导了在对阿糖胞苷耐药的细胞系中5-阿扎胞苷促使dCK的上调，导致阿糖胞苷的IC50值由12.5降低至0.55μM。然而，至今尚无教导组合使用DNA甲基转移酶抑制剂与沙帕他滨，后者具有不同于其它核苷代谢产物的独特作用方式。
第二个方面提供药物组合物，其包含本发明的组合，并混有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
第三个方面涉及本发明的组合在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途。
第四个方面涉及药物产品，其包含DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物，作为组合制剂用于在治疗中同时、依次或分别使用。
第五个方面涉及一种治疗增生性疾病的方法，所述方法包括向患者同时、依次或分别给药DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物。
第六个方面涉及DNA甲基转移酶抑制剂在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途，其中所述的治疗包括向患者同时、依次或分别给药DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物。
第七个方面涉及DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途。
第八个方面涉及DNA甲基转移酶抑制剂在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途，其中所述的药物用于与1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物的组合治疗。
第九个方面涉及1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途，其中所述的药物用于与DNA甲基转移酶抑制剂的组合治疗。
本发明的第十个方面涉及上述用于治疗增生性疾病的组合。
发明详述
药物组合的效果本质上是不可预测的，且常常存在一种药物部分或完全抑制另一种的效果的倾向。本发明基于以下令人吃惊的结果：以组合按同时、分别或连续给药1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶和DNA甲基转移酶抑制剂不导致两种药物之间的任何不利的相互作用。不可预期地不存在任何拮抗性相互作用是临床应用的关键。
在一个优选的实施方案中，比较于任一药物单独给药，1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶和DNA甲基转移酶抑制剂的组合(combination)产生增强的效果。与基于现有技术的预期相比，该观察的性质是令人吃惊的。
如下展示的优选的实施方案应用于本发明的所有上述方面。
1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶(I)，也已知为2’-氰基-2-脱氧-N4-棕榈酰基-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(2’-cyano-2-deoxy-N4-palimotoyl-1-β-D-arabinofuranosylcytosine)(Hanaoka，K.等人，Int.J.Cancer，1999：82：226-236；Donehower R等人，Proc Am Soc Clin Oncol，2000：abstract 764；Burch，PA等人，Proc Am Soc Clin Oncol，2001：abstract 364)，其为口服给予的核苷CNDAC(1-(2-C-氰基-2-脱氧-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧啶)的新的2’-脱氧胞苷酸抗代谢前药。
1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶(I)(也已知为“CYC682”或沙帕他滨)具有不同于其它核苷代谢产物如吉西他滨的独特作用方式，其具有自发DNA链断裂作用，导致在多种细胞系、异种移植和转移癌模型中强效的抗肿瘤活性。
根据在实体瘤中的临床前数据，1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶(I)已经成为许多研究的焦点，在于其口服生物利用度及其超过吉西他滨(领先市场的核苷类似物)和5-FU(广泛使用的抗代谢药物)的改善的活性。最近，研究人员报导(I)在结肠癌模型中表现出强效的抗癌活性。在相同的模型中，已经发现(I)优于吉西他滨或5-FU，因为其增加了存活率且也预防结肠癌向肝的转移(Wu M，等人，cancer Research，2003：63：2477-2482)。至今，来自患有多种癌症的患者的I期数据表明(I)在人类中有良好的耐受性，其具有骨髓抑制作为剂量限定的毒性。
在一个优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂为胞嘧啶类似物。更优选地，DNA甲基转移酶抑制剂选自阿扎胞苷(azacitidine)、地西他滨(decitabine)和折布拉林(zebularine)。
阿扎胞苷(vidaza；5-阿扎胞苷)和地西他滨(dacogen；5-氮杂-2’-脱氧胞苷酸)为第一种将要描述的DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂。在细胞中，阿扎胞苷可通过酶核糖核苷酸还原酶转化为地西他滨。这些胞苷的嘧啶类似物分别掺入RNA和DNA中，并与DNMT形成共价复合物，导致活性酶的缺乏(Fenaux P，(2005)Nature Clinical Practice，2，S36-44)。阿扎胞苷还掺入RNA中，产生信使和转移RNA的缺乏，最终导致蛋白质合成的抑制。除了甲基转移酶抑制外，这些药物在较高剂量具有毒性，因为它们直接干扰DNA合成。
在一个高度优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂为地西他滨。
地西他滨或5-氮杂-2′-脱氧胞苷酸(商品名Dacogen)为化合物4-氨基-1-(2-脱氧-b-D-赤-呋喃戊糖基)-1，3，5-三嗪-2(1H)-酮，其结构如下所示。
地西他滨指定用于治疗骨髓增生异常综合征(MDS)，包括所有法国-美国-英国亚型的先前治疗过的和未治疗的、新的和继发的MDS(顽固性贫血、环形铁粒幼红细胞性顽固性贫血、原始细胞过多性顽固性贫血、转变中的原始细胞过多性顽固性贫血、和慢性骨髓单核细胞性白血病)和中间-1、中间-2、以及高风险国际预后评分系统(International Prognostic Scoring System)组。
认为地西他滨在磷酸化后发挥其抗肿瘤效果，且直接掺入DNA中。地西他滨抑制DNA甲基转移酶，致使DNA的低甲基化和细胞分化或凋亡。在肿瘤细胞中地西他滨-诱导的低甲基化可恢复基因的正常功能，其对细胞分化和增殖的控制至关重要。在快速分裂的细胞中，地西他滨的毒性还可归因于形成DNA甲基转移酶和已经掺入DNA的化合物之间的共价加成物。非-增殖细胞对地西他滨相对不敏感。
在另一个高度优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂为阿扎胞苷(商品名Vidaza)，其为化合物4-氨基-1-β-D-呋喃核糖基-s-三嗪-2(1H)-酮，其结构如下所示。
Figure BPA00001290778500051
阿扎胞苷是抗肿瘤的嘧啶核苷类似物，用于治疗多种亚型的骨髓增生异常综合征，其为骨髓的血液-形成细胞的异常导致的疾病，导致健康血细胞的产生减少。该药物对快速分裂的细胞包括癌症细胞发挥细胞毒性作用，并可帮助恢复控制正常细胞分化和增殖的基因的正常功能。
阿扎胞苷特别指定用于治疗以下骨髓增生异常综合征亚型：顽固性贫血、环形铁粒幼红细胞性顽固性贫血伴(如果伴随中性粒细胞减少症或血小板减少症或需要输血)、原始细胞过多性顽固性贫血、转变中的原始细胞过多性顽固性贫血和慢性骨髓单核细胞性白血病。
认为阿扎胞苷通过致使DNA的低甲基化和对骨髓中的异常造血细胞的直接细胞毒性发挥其抗肿瘤效果。在体外最大抑制DNA甲基化需要的阿扎胞苷的浓度不产生主要的DNA合成的抑制。低甲基化可恢复对分化和增殖关键的基因的功能。阿扎胞苷的细胞毒效果导致快速分裂细胞，包括不再对正常生长控制机理响应的癌症细胞的死亡。非-增殖细胞对阿扎胞苷相对不敏感。
在另一个高度优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂为折布拉林，也已知为1-(β-D-呋喃核糖基)-1，2-二氢嘧啶-2-酮或2-嘧啶酮-1-β-D-核苷，其结构如下所示。
在另一个优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂为非-核苷类似物。更优选地，DNA甲基转移酶抑制剂选自普鲁卡因胺(procainamide)、普鲁卡因(procaine)、肼屈嗪(hydralazine)和((-)-表没食子儿茶精-3-没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate，EGCG)。
普鲁卡因胺(商品名Pronestyl、Procan、Procanbid)为化合物4-氨基-N-(2-二乙基氨基乙基)苯甲酰胺，其结构如下所示。
Figure BPA00001290778500062
普鲁卡因胺已经显示抑制DNA甲基转移酶活性，并通过逆转CpG岛高甲基化再次活化癌症细胞中沉默的基因表达。普鲁卡因胺特异地抑制DNA甲基转移酶1(DNMT1)的半甲基化酶活性，该哺乳动物酶负责在复制中维持DNA甲基化模式。
普鲁卡因为化合物2-(二乙基氨基)乙基-4-氨基苯甲酸酯，其结构如下所示。
普鲁卡因为DNA-去甲基化试剂，认为其通过干扰酶活性抑制DNA甲基转移酶。
肼屈嗪(Apresoline)为化合物1-肼基酞嗪单盐酸盐，其结构如下所示。
Figure BPA00001290778500071
((-)-表没食子儿茶精-3-没食子酸酯(EGCG)为儿茶精类似物，其具有如下所示的结构。
Figure BPA00001290778500072
认为EGCG抑制DNMT活性并再次激活癌症细胞中甲基化-沉默的基因(methylation-silenced genes)。
在另一个优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂为RG108，也已知为N-邻苯二甲酰-1-色氨酸，其结构如下所示。
Figure BPA00001290778500073
RG108为DNA甲基转移酶抑制剂，认为其通过干扰酶活性抑制DNA甲基转移酶。具体地，认为RG108通过DNA去甲基化再次激活肿瘤细胞中肿瘤抑制基因表达(p16、SFRP1、分泌型卷曲相关蛋白质-1和TIMP-3)。RG108还抑制人肿瘤细胞系(HCT116、NALM-6)增殖和增加培养中的倍增时间。
此处所用的术语“增生性疾病”广义上包括任何需要控制细胞周期的病症，例如心血管病症如再狭窄和心肌病、自身免疫性疾病如肾小球肾炎和类风湿性关节炎、皮肤病如牛皮癣、抗炎、抗真菌、抗寄生虫病症如疟疾、肺气肿和脱发。在这些病症中，需要时本发明化合物还诱导在所需细胞内的凋亡或维持停滞。
优选地，增生性疾病为癌症或白血病，最优选选自肺癌、前列腺癌、膀胱癌、头颈癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、胃癌、肝癌、肉瘤、淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤(multiple myeloma)。
在一个特别优选的实施方案中，所述增生性疾病为血液学恶性肿瘤(haematological malignancy)，例如，晚期白血球过多症(advanced leukemia)或骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome，MDS)。其它实例包括急性骨髓性白血病(acute myelogenous leukaemia，AML)、急性淋巴细胞性白血病(acute lymphocytic leukaemia，ALL)或慢性淋巴细胞性白血病(chronic lymphocytic leukaemia，CLL)。
在一个特别优选的实施方案中，所述增生性疾病选自肺癌、淋巴细胞白血病(lymphoblastic leukaemia)和急性骨髓性白血病。
此处所用的用语“制备药物”包括使用本发明的成分直接作为药物，以及其在制备该药物的任何阶段的用途。
此处所用的术语“组合治疗(combination therapy)”是指如下治疗：其中沙帕他滨或其代谢产物和DNA甲基转移酶抑制剂，如果不同时给药，则在一个时间范围内依次给药，使得二者在同一时间范围内均可在治疗上起作用。
沙帕他滨或其代谢产物和DNA甲基转移酶抑制剂可同时、以组合、依次或分别给药(作为给药方案的部分)。
此处所用的“同时(simultaneously)”用于指两种药物同步给药，而术语“以组合(in combination)”用于指，如果不同时给药，则在一个时间范围内“依次(sequentially)”给药，使得二者在同一时间范围内可在治疗上起作用。因此，“依次”给药可允许在提供一种药物后5分钟、10分钟或几小时内给药另一种药物，前提是第一种给药的药物的循环半衰期使得二者同时存在治疗有效量。各成分间给药的时间延迟将根据成分的准确性质、其间的相互作用、及其各自的半衰期而改变。
与“以组合”或“依次”不同，此处所用的“分别(separately)”是指给药一种药物和另一种药物之间的间隔显著，即当给药第二种药物时，第一种给药的药物不再以治疗有效量存在于血流中。
在本发明的一个优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂在1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶之前依次或分别给药。优选地，DNA甲基转移酶抑制剂在1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶之前至少4小时给药，且更优选在1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶之前至少72小时给药。
在一个特别优选的实施方案中，1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶在DNA甲基转移酶抑制剂之前依次或分别给药。优选地，1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶在DNA甲基转移酶抑制剂之前至少1小时给药，且更优选在DNA甲基转移酶抑制剂之前至少24小时给药。
在一个优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶各以各自成分的治疗有效量给药；换言之，DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶以即使成分未以组合给药时的治疗有效量给药。
在另一个优选的实施方案中，DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶各以各自成分的亚治疗剂量给药；换言之，DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶以成分未以组合给药时的治疗无效的量给药。
优选地，1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶和DNA甲基转移酶抑制剂以协同方式相互作用。此处所用的术语“协同(synergistic)“是指1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶和DNA甲基转移酶抑制剂以组合使用时，产生比两种成分各自作用相加期望的更大的效果。有利地，协同相互作用可允许降低给予患者的各成分的剂量，因此降低化疗的毒性，同时产生和/或维持相同的治疗效果。因此，在一个特别优选的实施方案中，各成分可以亚治疗量给药。
代谢产物
此处所用的术语“代谢产物”包括化学修饰的实体，其通过1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶的代谢产生。
在本发明的一个特别优选的实施方案中，1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶的代谢产物为2′-C′-氰基-2′-二氧基-1-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基胞嘧啶(CNDAC)。
在一个高度优选的实施方案中，沙帕他滨的代谢产物为CNDAC且DNA甲基转移酶抑制剂为地西他滨。对于该实施方案，组合的成分可同时、依次或分别给药。优选地，成分依次或分别给药(例如预先用CNDAC或地西他滨治疗)。
在另一个高度优选的实施方案中，沙帕他滨的代谢产物为CNDAC且DNA甲基转移酶抑制剂为阿扎胞苷。优选地，对于该具体实施方案，组合的成分依次或分别给药。特别优选预先使用阿扎胞苷治疗。
在本发明另一个特别优选的实施方案中，1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶在细胞内代谢为活性代谢产物CNDAC-三磷酸盐(CNDACTP)，该过程包括脱除棕榈酰基部分并通过核苷激酶的作用激活为CNDACTP。
盐/酯
本发明的药物可以盐或酯尤其是药学可接受的盐或酯的形式提供。
本发明药物的药学可接受盐包括它们合适的酸加成盐或碱加成盐。合适药物盐的综述可见Berge等人的J.Pharm Sci，66，1-19(1977)。盐为与例如以下酸形成的盐：强无机酸，如矿物酸，例如硫酸、磷酸或氢卤酸；强有机羧酸，如未取代或取代(如被卤代)的1至4个碳原子的链烷羧酸，例如乙酸；饱和或不饱和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或四邻苯二甲酸(tetraphthalic)；羟基羧酸，例如抗坏血酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或与有机磺酸，如未取代或取代(如被卤代)的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或对甲苯磺酸。
取决于被酯化的官能团，使用有机酸或醇/氢氧化物形成酯。有机酸包括羧酸，如未取代或取代(如被卤代)的1至12个碳原子的链烷羧酸，例如乙酸；饱和或不饱和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或四邻苯二甲酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或与有机磺酸，如未取代或取代(如被卤代)的(C1-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如甲磺酸或对甲苯磺酸。合适的氢氧化物包括无机氢氧化物，如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝。醇包括未取代或取代(如被卤代)的1至12个碳原子的链烷醇。
对映异构体/互变异构体
本发明还包括(如果存在)药物的全部对映异构体和互变异构体。本领域的技术人员能认识到具有光学性质(一个或多个手性碳原子)或互变异构特征的化合物。可通过本领域中已知的方法分离/制备相应的对映异构体和/或互变异构体。
立体异构体和几何异构体
本发明的一些药物可以立体异构体和/或几何异构体的形式存在，例如它们可具有一个或多个不对称和/或几何中心，并因此可以二种或多种立体异构和/或几何形式存在。本发明包括这些抑制剂药物所有的单独立体异构体和几何异构体及它们的混合物的使用。权利要求中使用的术语包括这些形式，只要所述形式保留适当的功能活性(但不必到相同程度)。
本发明还包括药物或其药学可接受盐的所有合适的同位素变体。本发明药物或其药学可接受盐的同位素变体定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量与自然界中通常发现的原子质量不同的原子取代的物质。可被掺入到药物和其药学可接受盐的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。药物和其药学可接受盐的一些同位素变体，例如结合放射性同位素如3H或14C的那些化合物，在药物和/或底物组织分布研究中是有用的。含氚的即3H和碳-14即14C同位素因其容易制备和可检测性而特别优选。此外，用同位素如氘即2H的取代可因较大的代谢稳定性而提供特定的治疗益处，例如体内半衰期增加或剂量要求降低，并因此可在一些情况下被优选。通常可使用合适试剂的适当同位素变体通过常规过程制备本发明药物和其药学可接受盐的同位素变体。
溶剂合物
本发明还包括本发明药物的溶剂合物形式。权利要求中使用的术语包括这些形式。
多晶型物
本发明还涉及各种结晶形式、多晶型形式和无水/水合形式的本发明的药物。众所周知，在药物工业中可通过稍微改变这种化合物合成制备中所用溶剂的纯化方法和或分离形式来分离得到化合物的任意这类形式。
前体药物
本发明还包括前体药物形式的本发明的药物。这种前体药物通常为一个或多个适当基团已被修饰以使在对人或哺乳动物对象给药后所述的修饰可被逆转的化合物。虽然为了实现体内逆转可与这种前体药物一起给药第二种药物，但通常通过在这类对象中天然存在的酶实现这种逆转。这类修饰的例子包括酯(例如上述那些中的任一种)，其中可通过酯酶等进行逆转。其它这类系统为本领域中那些技术人员所熟知。
给药
可使本发明的药物组合物适于口服、直肠、阴道、肠胃外、肌内、腹膜内、动脉内、鞘内、支气管内、皮下、皮内、静脉内、鼻、口腔或舌下给药途径。
对于口服给药，特别利用压缩片剂、丸剂、片剂、凝胶(gellules)、滴剂和胶囊。优选地，这些组合物每剂包含1-2000mg和更优选50-1000mg的有效成分。
其它给药形式包括溶液或乳液，它们可经静脉内、动脉内、鞘内、皮下、皮内、腹膜内或肌内给药，并由无菌或可灭菌溶液制备。本发明的药物组合物还可为栓剂、阴道栓剂、混悬剂、乳液、洗液、软膏、乳膏剂、凝胶、喷雾剂、溶液或扑粉的形式。
经皮给药的替代方式是利用皮肤贴剂(skin patch)。例如，可将有效成分掺入到由聚乙二醇含水乳液或液体石蜡组成的乳膏剂内。还可以1-10wt％的浓度将有效成分掺入到由白蜡或白色软石蜡基质与所需要的稳定剂和防腐剂共同组成的软膏内。
可注射形式每剂可包含10-1000mg、优选10-500mg的有效成分。
组合物可被配制成单元剂型，即包含单元剂量或单元剂量的多重单位或亚单位的形式的离散部分。
在一个特别优选的实施方案中，静脉内给药本发明的组合或药物组合物。
剂量
本领域的普通技术人员不用额外试验就可容易地确定对患者给药的本发明的组合物的适宜剂量。典型地，医师会确定对个体患者最适合的实际剂量，并且根据各种因素进行调整，包括使用的具体化合物的活性、化合物的代谢稳定性和作用长短、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速度、药物组合、具体病症的严重程度和个体正接受的治疗。本文公开的剂量为一般情况的示例。当然也可有有益的较高或较低剂量范围个别情况，这都在本发明的范围内。
根据需要，可以0.1-30mg/kg体重，如2-20mg/kg体重，更优选0.1-1mg/kg体重的剂量给药所述药物。
指导性地，按照医师指导，1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶典型地以1和120mg/m2体表面积之间的剂量给药。优选地，口服给药该剂量。该剂量可给予每周5天共4周，或每周3天共4周。剂量和使用频率典型地适于患者的基本医疗条件和导致的不良反应的严重性，尤其是导致造血、肝脏和肾脏系统的不良反应。每日总剂量可以单次剂量给予，或分为分别剂量每日分2、3或4次给予。
按照医师指导，DNA甲基转移酶抑制剂典型通过皮下或静脉注射给药。指导性地，地西他滨的推荐剂量为15mg/m2，通过持续的静脉输注在3小时内给予，每8小时重复，给予3天(decitabine clinical label；Fenaux P.(2005)Nature Clinical Practice，2，S36-44)。该循环优选每6周重复一次。具有恶化的实体瘤的患者典型接受72小时的地西他滨输注，20-30mg/m2/天。指导性地，阿扎胞苷的推荐开始剂量为75mg/m2，皮下或静脉注射给药，每天给予共7天(azacitidine clinical label；Fenaux P.(2005)Nature Clinical Practice，2，S36-44)。
本发明还通过实例的方式进一步描述，并参考下图，其中：
图1显示在HL60细胞中，72小时后，阿扎胞苷与CNDAC组合对细胞周期性质的作用以及对凋亡的诱导。(A)HL60细胞使用128nM阿扎胞苷处理24小时，然后使用128nM阿扎胞苷和133nM CNDAC再处理48小时。固定细胞并使用碘化丙啶(propidium iodide)对DNA染色。还包括单个药物的对照。(B)HL60细胞使用128nM阿扎胞苷处理24小时，然后使用128nM阿扎胞苷和133nM CNDAC再处理48小时。细胞使用膜联蛋白V染色检测凋亡的细胞，并使用碘化丙啶染色以检测存活细胞。还包括单个药物的对照。数据为两份样品的平均值，且代表至少两次独立的实验。
图2显示在HL60细胞中，在96小时后，阿扎胞苷与CNDAC的组合对细胞周期性质的作用以及对诱导的凋亡。(A)HL60细胞使用128nM阿扎胞苷处理24小时，然后使用128nM阿扎胞苷和133nM CNDAC再处理72小时。固定细胞，并使用碘化丙啶对DNA染色。还包括单个药物的对照。(B)HL60细胞使用128nM阿扎胞苷处理24小时，然后使用128nM阿扎胞苷和133nM CNDAC再处理72小时。细胞使用膜联蛋白V对染色检测凋亡的细胞，并使用碘化丙啶染色以检测存活细胞。还包括单个药物的对照。数据为两份样品的平均值，且代表至少两次独立的实验。
图3显示出：在一段时间中，CNDAC和阿扎胞苷单独或组合对HL60细胞中的分子事件的影响。对HL60细胞进行如下处理：使用DMSO处理的模拟实验(D)；仅使用阿扎胞苷(0.5x IC50：128nM)处理(A)；使用介质处理24小时后使用CNDAC(1x IC50：133nM)处理(C)；或使用阿扎胞苷(128nM)处理24小时后使用CNDAC(133nM)处理(AC)。加入CNDAC后在各时间(指示的)点取样。溶解细胞，通过SDS-PAGE分离，转移至硝基纤维素中，并用探针测定PARP的裂解(凋亡的标记子)。数据代表两次独立的实验。
实施例
材料和方法
细胞系和试剂
从ECACC(Salisbury，UK)ATCC购买MV4-11、HL60和CEM细胞。在37℃于5％CO2，将细胞在含10％胎牛血清(FCS)的RPMI 1640介质中培养。将细胞以0.2x106和1x106细胞/ml之间的密度保持。
根据EP 535231B(Sankyo Company Limited)中描述的方法学制备CNDAC。根据EP 536936B(Sankyo Company Limited)中描述的方法学制备CYC682(沙帕他滨)。地西他滨和阿扎胞苷购自Sigma-Aldrich。所有化合物的储备溶液在二甲基亚砜(DMSO)中以10mM配制。除非另外说明，所有试剂均购自Sigma(Poole，UK)。
细胞培养/细胞毒性测试
为了完成组合研究，测定了单个化合物的细胞毒性效应。为了确定各个化合物72小时IC50值，在96-孔板进行实验和以如下密度接种细胞系：MV4-11和HL60细胞为5,000/孔，CCRF-CEM细胞为6,000/孔。在各个细胞系中，使用阿尔玛蓝(alamar blue)测定各个化合物72h处理的IC50值。
在介质中配制各个药物的稀释系列。接种2小时后，以所需浓度的2倍加入等体积的各个化合物，并培养72小时。所有处理均以一式三份进行。培养结束后，在介质中配制阿尔玛蓝(Roche，Lewes，UK)的20％储备液，并向各孔加入等量的所述溶液，并培养3小时。在544-595nm读取吸光度并分析数据(Excel Fit v4.0)，以测定各个化合物的IC50(抑制50％细胞生长的化合物浓度)。
CNDAC然后使用以下三种不同的处理方案与地西他滨或阿扎胞苷组合测试：同步(concomitant)、CNDAC预处理然后使用甲基转移酶抑制剂，和甲基转移酶抑制剂预处理然后使用CNDAC。
Calcusyn药物组合方案
如下评估组合处理：细胞毒性测试利用两种药物在浓度范围处理细胞并使用中值效应模型分析(Chou和Talalay，1984)进行。对于细胞毒性测试，使用同步处理(例如核苷类似物+DMTi)或核苷类似物预处理24小时后使用两种药物(核苷类似物-DMTi)同步处理72小时，反之亦然(DMTi-核苷类似物)。对悬浮液细胞系进行纯粹的连续处理是不可能的。使用的剂量基于约IC50(72小时)。
由于MV4-11、HL60和CCRF-CEM细胞不附着在96-孔板上，因此从孔中吸出介质是不实际的，因此在组合实验中未除去预处理化合物。对于组合分析，使用了各个化合物的2-倍系列稀释液，其中选择单一药物的浓度范围使之覆盖化合物的IC50值。将化合物加入介质前，在DMSO中溶解CNDAC、地西他滨和阿扎胞苷。
对于同步处理，平板接种24小时后，将CNDAC、甲基转移酶抑制剂、或两种药物同时的系列稀释液加至细胞中，并在37℃放置72小时。
在预处理方案中，平板接种细胞后立即加入第一种药物并放置24小时。然后加入含有第二种药物的新鲜介质并培养72小时。对于各个依次处理的两份对照，其用介质取代其中的一个药物处理。所有处理以一式三份进行。
药物处理后，通过在含10％阿尔玛蓝(Roche，Lewes，East Sussex，U.K.)的介质中培养细胞大约6小时并在544-595nm读取吸光度评估各孔中的细胞数。使用市售软件包Calcusyn分析药物相互作用，其根据Chou和Talalay的中值效应模型(Chou，T.C.&Talalay，P.(1984)Adv.Enzyme Regul.22，27-55.Quantatative analysis of dose-effect relationships：the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors)。数值为1的组合指数(C.I.)指示加和的药物相互作用，而C.I.大于1为拮抗性和数值小于1为协同性。CI值定义如下：1.45-1.2为中等拮抗性，1.2-1.1为轻度拮抗性，1.1-0.9为加和性，0.9-0.85为轻度协同性，0.85-0.7为中等协同性，和0.7-0.3为协同性。
细胞周期分析
如下处理细胞：对于单一药物评估，以一式三份在介质中以0.3x106细胞/ml接种HL60细胞，并使用128nM(0.5x IC50)阿扎胞苷或133nM(1x IC50)CNDAC或DMSO单独处理48或72小时，然后采集用于流式细胞仪。对于组合分析，使用阿扎胞苷处理细胞24小时，然后使用阿扎胞苷和CNDAC再处理48或72小时。对于对照，对各个药物也进行单一药物处理。在培养结束后，细胞通过在PBS中洗涤两次、固定在70％乙醇中并保存在-20℃进行采集。分析前，将细胞用含1％BSA的PBS洗涤两次，然后使用碘化丙啶(50μg/ml)和含0.1％Triton X-100的核糖核酸酶A(50μg/ml)的PBS溶液染色，通过流式细胞仪测定细胞周期性质。
膜联蛋白V染色
HL60细胞使用128nM阿扎胞苷(等价于0.5x IC50)预处理24小时，然后通过使用128nM阿扎胞苷和133nM CNDAC(等价于1x IC50)同步处理48或72小时。还进行了单一药物处理作为对照。培养后，将细胞在500g离心5min，在PBS中洗涤两次和在膜联蛋白缓冲液(10mM Hepes pH 7.4，2.5mM CaCl2和140mM NaCl)中洗涤一次。细胞以1x106/ml再悬浮，转移100μl至5ml试管，然后在暗处于室温与5μl膜联蛋白V-FITC染色剂(Beckton Dickinson)和10μl碘化丙啶[50mg/ml]培养10分钟。加入膜联蛋白缓冲液(1ml)，并通过流式细胞仪分析细胞。根据绿色荧光指认膜联蛋白V阳性细胞(凋亡的)，根据红色荧光指认碘化丙啶阳性细胞(死亡的)。
通过免疫印迹制备和分析细胞溶胞产物
细胞在T25烧瓶中以0.3x106细胞/ml接种，并使用DMSO、或阿扎胞苷以128nM(等价于0.5x IC50)处理24小时，然后使用128nM阿扎胞苷和133nM CNDAC(等价于1x IC50)同步处理另外24、36、40、48和72小时。
细胞通过在500g离心5分钟采集，使用冰冷的PBS洗涤一次，再悬浮在100μl溶胞缓冲液(50mM HEPES，pH 7.0，20mM NaCl，1mM DTT，1x蛋白酶抑制剂，10mM焦磷酸钠，10mM NaF和1mM Na3VO4)中。通过声裂法(2x 3s爆裂，使用Sanyo超声波匀浆器150，在5amp设定)溶解所有样品。使用BCA测试(Perbio Science，Northumberland，U.K.)测定各溶胞产物的蛋白质浓度。
将溶胞产物(30μg)与含有还原剂的凝胶加样缓冲液(gel loading buffer)混合，并在10％或12％聚丙烯酰胺凝胶上，利用变性电泳条件分离，按照厂商说明书(Invitrogen，Glasgow，UK)。利用湿电泳转移将蛋白质转移至硝基纤维素膜(Hybond ECL，Amersham，Chalfont St.Giles，UK)。使用丽春红S(ponceau S)对膜染色，以确定等量负载，然后在含0.1％吐温20的5％脱脂奶的PBS溶液(PBSTM)中阻断1小时。将膜与一抗在4℃培养过夜，在PBSTM中稀释。用于本研究的抗体为：裂解的PARP(Becton Dickinson)。在PBS和0.1％吐温20(PBST)中洗涤膜，并在含辣根过氧化物酶结合的二抗的PBSTM中培养1小时。洗涤膜，并用ECL溶液(Amersham)培养，暴露在X-射线薄膜(Amersham)中。
结果
在血液细胞系中CNDAC和地西他滨组合
在AML细胞系HL60和MV4-11，和ALL细胞系CCRF-CEM中，使用三种不同的处理方案，对CNDAC与地西他滨组合进行了测试。对于ED50、ED75和ED90值(50％、75％和90％的细胞被杀死时曲线上的点)，在表1中给出了各个药物处理的组合指数值。数据为三次独立实验的平均值。
表1：
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在所有三种测试的细胞系中，CNDAC和地西他滨产生中等至强烈的协同作用。对于该组合，CNDAC预处理和地西他滨预处理均为特别有效的治疗方案。这些结果支持在血液细胞系中组合CNDAC和地西他滨的观点。
在血液细胞系中CNDAC和阿扎胞苷组合
在AML细胞系HL60和MV4-11，和ALL细胞系CCRF-CEM中，使用三种不同的处理方案，对CNDAC与阿扎胞苷组合进行了测试。对于ED50、ED75和ED90值(50％、75％和90％的细胞被杀死时曲线上的点)，在表2中给出了各个药物处理的组合指数值。数据为三次独立实验的平均值。
表2：
在所有三种测试的细胞系中，CNDAC和阿扎胞苷产生中等至强烈的协同作用。阿扎胞苷预处理在HL60和CEM细胞中产生强烈的协同作用，而CNDAC预处理在MV4-11和CEM细胞中产生中等的协同作用。这些结果支持在血液细胞系中组合CNDAC和阿扎胞苷的观点。
细胞周期分析
HL-60或MV4-11细胞使用DMSO、CNDAC或阿扎胞苷进行处理，如图1A和2A所示。评估的化合物浓度为：HL-60细胞阿扎胞苷0.5x IC50＝0.13μM；CNDAC IC50＝0.13μM：MV4-11细胞CNDAC IC50＝0.46μM。在所示条件下，处理后，对细胞周期性质进行分析。
暴露后72和96小时，可见使用阿扎胞苷单独处理导致细胞蓄积在亚-G1、G2/M，和＞G2/M期(图1A和2A)。截止48小时，CNDAC单独处理导致细胞蓄积在G2/M期，且少量诱导细胞至亚-G1期。药物的组合显示在48小时在亚-G1期中的细胞少量额外增加，并在其它细胞周期阶段变化很小。截止72小时，亚-G1期更加显著地增加，有45％的细胞，相比于阿扎胞苷和CNDAC单一药物处理时的9％和7％。总之，这些数据表明组合处理导致时间依赖性细胞死亡的增加大于任何一种药物单独使用的效果。
膜联蛋白V分析
为了更详细地评估细胞死亡，在HL60中，通过膜联蛋白V(凋亡的标记子)测定了单一药物以及阿扎胞苷和CNDAC的组合处理。将细胞暴露至阿扎胞苷(128nM)达总计96小时。对于组合处理，在24小时后，在阿扎胞苷的存在下加入CNDAC(133nM)达另外72小时。使用阿扎胞苷的单一药物处理导致截止72和96小时凋亡细胞的比例少量增加(图1B和2B)。与对照相比，CNDAC单独显示在48或72小时的效果很小(图1B和2B)，在96小时总处理的最长时间点，单一药物和组合之间最大的区别在于药物的组合显示比任一单独药物更大的作用(66％)(阿扎胞苷：30.5％和CNDAC：16.5％)(图2B)。
蛋白质印迹实验
为了补充细胞周期分析，在时间点的范围内，评估了使用单一药物或组合处理的HL60细胞的诱导裂解PARP(凋亡的标记子)(图3)。
HL-60细胞使用DMSO、0.13μM阿扎胞苷、0.13μM CNDAC或两种药物(AC)处理。时间表包括24小时阿扎胞苷或DMSO预处理，然后加入CNDAC或DMSO达所示时间。48小时-96小时的总处理时间后采集细胞。将所得的溶胞产物(20μg)在12％丙烯酰胺Bis-Tris凝胶上解析，转移至硝基纤维素膜，并用探针测定抗体，如图3所示。结果显示使用阿扎胞苷单独处理导致在早期时间点少量诱导裂解PARP。裂解的PARP还见于组合治疗中。在之后的时间点，CNDAC还在较晚时间点诱导裂解PARP。使用组合处理显示比任一单独药物更强的裂解PARP的作用。结果表明CNDAC和阿扎胞苷组合诱导凋亡但不调节Bcl-2家族蛋白。
在不违背本发明的范围和精神下，对本发明的各种改进和变化对本领域熟练技术人员是明显的。尽管已经结合特定的优选实施方案描述了本发明，然而应当理解，要求保护的本发明不应当过分地限制于所述特定的实施方案。事实上，对相关领域技术人员明显的，为进行本发明的所述方式的各种变化也意欲包括在本发明内。

Claims (43)

1.组合，其包含DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物。
2.权利要求1的组合，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为胞嘧啶类似物。
3.权利要求2的组合，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂选自阿扎胞苷、地西他滨和折布拉林。
4.权利要求3的组合，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为地西他滨。
5.权利要求1的组合，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为非-核苷类似物。
6.权利要求5的组合，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂选自普鲁卡因胺、普鲁卡因、肼屈嗪和((-)-表没食子儿茶精-3-没食子酸酯(EGCG)。
7.权利要求1的组合，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为RG108。
8.前述权利要求中任一项的组合，其中1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶的代谢产物为1-(2-C-氰基-2-脱氧-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧啶。
9.药物组合物，其包含前述权利要求中任一项的组合和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
10.权利要求1至8中任一项的组合在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途。
11.权利要求1至8中任一项的组合，其用于治疗增生性疾病。
12.药物产品，其包含DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物，作为组合制剂用于同时、依次或分别在治疗中使用。
13.权利要求12的药物产品，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为胞嘧啶类似物。
14.权利要求13的药物产品，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂选自阿扎胞苷、地西他滨和折布拉林。
15.权利要求14的药物产品，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为地西他滨。
16.权利要求12的药物产品，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为非-核苷类似物。
17.权利要求16的药物产品，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂选自普鲁卡因胺、普鲁卡因、肼屈嗪和((-)-表没食子儿茶精-3-没食子酸酯(EGCG)。
18.权利要求12的药物产品，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为RG108。
19.权利要求12至18中任一项的药物产品，其中1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶的代谢产物为1-(2-C-氰基-2-脱氧-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧啶。
20.权利要求12至19中任一项的药物产品，其为包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物的形式。
21.权利要求12至20中任一项的药物产品，其用于治疗增生性疾病。
22.权利要求10的用途，或权利要求11的组合，或权利要求21的药物产品，其中所述增生性疾病为癌症。
23.权利要求10的用途，或权利要求11的组合，或权利要求21的药物产品，其中所述增生性疾病选自肺癌、前列腺癌、膀胱癌、头颈癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、胃癌、肝癌、肉瘤、淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
24.权利要求10的用途，或权利要求11的组合，或权利要求21的药物产品，其中所述增生性疾病选自肺癌、淋巴细胞性白血病和急性骨髓性白血病。
25.一种治疗增生性疾病的方法，所述方法包括向患者同时、依次或分别给药1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物，和DNA甲基转移酶抑制剂。
26.权利要求25的方法，其包括向患者给药所述DNA甲基转移酶抑制剂，然后依次或分别向所述患者给药1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物。
27.权利要求26的方法，其包括向患者给药1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物，然后依次或分别向所述患者给药DNA甲基转移酶抑制剂。
28.权利要求25至27中任一项的方法，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为胞嘧啶类似物。
29.权利要求28的方法，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂选自阿扎胞苷、地西他滨和折布拉林。
30.权利要求29的方法，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为地西他滨。
31.权利要求25至27中任一项的组合，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为非-核苷类似物。
32.权利要求31的方法，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂选自普鲁卡因胺、普鲁卡因、肼屈嗪和((-)-表没食子儿茶精-3-没食子酸酯(EGCG)。
33.权利要求25至27中任一项的方法，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂为RG108。
34.权利要求25至33中任一项的方法，其中1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶的代谢产物为1-(2-C-氰基-2-脱氧-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧啶。
35.权利要求25至34中任一项的的方法，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物各以各自成分的治疗有效量给药。
36.权利要求25至34中任一项的方法，其中所述DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物各以各自成分的亚治疗量给药。
37.权利要求25至36中任一项的方法，其中所述增生性疾病为癌症。
38.权利要求37的方法，其中所述增生性疾病选自肺癌、前列腺癌、膀胱癌、头颈癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、胃癌、肝癌、肉瘤、淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
39.权利要求38的方法，其中所述增生性疾病选自肺癌、淋巴细胞性白血病和急性骨髓性白血病。
40.DNA甲基转移酶抑制剂在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途，其中所述治疗包括向患者同时、依次或分别给药1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物，和DNA甲基转移酶抑制剂。
41.DNA甲基转移酶抑制剂和1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途。
42.DNA甲基转移酶抑制剂在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途，其中所述药物用于与1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物的组合治疗。
43.1-(2-C-氰基-2-二氧基-β-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N4-棕榈酰基胞嘧啶或其代谢产物在制备用于治疗增生性疾病的药物中的用途，其中所述药物用于与DNA甲基转移酶抑制剂的组合治疗。
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