CN102081102A - 化学发光底物液 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种化学发光底物液，该化学发光底物液组份为：0.2～1.2g/L鲁米诺(Luminol)，0.1～5g/L肉桂酸，0.05～0.6g/L4-碘苯硼酸，0.05～0.6g/L对碘苯酚，5～50ml/L二甲基甲酰胺(DMF)，2.5～7.5g/L聚乙烯醇(PVA)，5～15g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，1.5～5g/L聚乙二醇600(PEG-600)，1～10g/L乙二胺四乙酸(EDTA)，40～400万单位/L硫酸庆大霉素，0.1～1.0g/L过氧化脲，pH9.0的0.1mol/L的Tris缓冲液。借助于本发明提供的化学发光底物液，为一种溶液，可以直接使用，并且仍能保持线性检测范围宽、稳定性好和灵敏度高的优点，从而能够解决了传统的化学发光底物液是由A和B液二部分组成，要分开保存，并且A和B液等体积混合10分钟后，信号值就急剧下降、检测范围明显变窄，稳定性变差的问题。此外，本发明提供的化学发光底物液容易配制、成本低、操作简单、无坏境污染、对人体无毒无害等。
Description
技术领域
本发明涉及一种化学发光底物液，尤其涉及一种单组分化学发光底物液。
背景技术
目前，临床领域应用最为广泛的定量免疫检测方法主要是化学发光免疫分析(CLIA)，是一种敏感微量免疫测定法，兼有(RIA)和EIA的所有优点，同时又克服了放射免疫和酶联免疫各自的缺点，是临床免疫检测最理想的方法。CLIA涉及一项关键的技术，即配制高灵敏度、宽检测范围以及稳定性好的化学发光底物液。
传统的化学发光底物液是由A液(氧化剂)和B液(发光剂)二部分组成，A液和B液分开保存，使用时将A液和B液等体积混合，在10分钟之内用完，否则其稳定性就会变差，使其测试信号值急剧下降、检测范围明显变窄，稳定性变差，不便于临床应用。
发明内容
有鉴于此，本发明提出了一种单组分化学发光底物液，用以解决相关技术中存在的化学发光底物液必需由A液和B液二部分组成，并且要分开保存才能保持高灵敏度、宽检测范围以及稳定性的问题。从而改变了传统的化学发光底物液的局限性，并使操作变的更简单，为产品的大规模生产和临床应用带来更大的方便性和灵活性。
本发明的化学发光底物液的组分为：其组成为：0.2～1.2g/L鲁米诺(Luminol)，0.1～5g/L肉桂酸，0.05～0.6g/L4-碘苯硼酸，0.05～0.6g/L对碘苯酚，5～50ml/L二甲基甲酰胺(DMF)，2.5～7.5g/L聚乙烯醇(PVA)，5～15g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，1.5～5g/L聚乙二醇600(PEG-600)，1～10g/L乙二胺四乙酸(EDTA)，40～400万单位/L硫酸庆大霉素，0.1～1.0g/L过氧化脲，pH9.0的0.1mol/L的Tris缓冲液。
本发明的优选化学发光底物液的组分为：0.7g/L鲁米诺(Luminol)，0.9g/L肉桂酸，0.2g/L4-碘苯硼酸，0.25g/L对碘苯酚，25ml/L二甲基甲酰胺(DMF)，5g/L聚乙烯醇(PVA)，8g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，3g/L聚乙二醇600(PEG-600)，4g/L乙二胺四乙酸(EDTA)，160万单位/L硫酸庆大霉素，0.4g/L过氧化脲，pH9.0的0.1mol/L的Tris缓冲液。
借助于本发明提供的技术方案，使用本发明的化学发光底物液，可使化学发光底物液配制成一种溶液，不必配制成化学发光底物液A液和B液二种溶液的组合溶液，并且液A和B液混合10分钟后，信号值就急剧下降、检测范围明显变窄，稳定性变差的问题。此外，本发明提供的化学发光底物液容易配制、成本低、操作简单、无坏境污染、对人体无毒无害等。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。
具体实施方式
以下本发明的实施例进行说明，应当理解，此处所描述的实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
在对本发明的实施例进行说明之前，首先对本发明实施例的配制方法和使用方法进行说明。
本发明实施例的配置方法包括：首先，取一洁净烧杯，先加入600ml的去离子水；然后，准确称量下述实施例中的各成分(例如鲁米诺、肉桂酸、4-碘苯硼酸、对碘苯酚、二甲基甲酰胺、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇600、乙二胺四乙酸、硫酸庆大霉素、过氧化脲、Tris、)；最后，在磁力搅拌器上搅拌至各类物质完全溶解，定容到1000ml，如有沉渣过滤去除。
本发明实施例的使用方法：把化学发光底物液按100μl/孔加入反应杯中即可。
下面对本发明的实施例进行说明。
实施例1
以本发明实施例配制的单组份化学发光底物液建立的抗促甲状腺激素(TSH)化学发光免疫分析方法包括以下步聚：
步骤1、配制化学发光底物液，其组分和浓度为：
0.1mol/L的Tris缓冲体系 pH 9.0
鲁米诺 0.2g/L
肉桂酸 0.1g/L
4-碘苯硼酸 0.05g/L
对碘苯酚 0.05g/L
过氧化脲 0.1g/L
二甲基甲酰胺(DMF) 5ml/L
聚乙烯醇(PVA) 2.5g/L
聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 5g/L
聚乙二醇600(PEG-600) 1.5g/L
乙二胺四乙酸(EDTA) 1g/L
硫酸庆大霉素 40万单位/L
步骤2、以抗TSH单抗包被白色发光板，包被浓度为5ug/ml，100ul/孔，37℃包被2小时，洗板后，以封闭液按200ul/孔4℃包被18小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的37℃干燥箱中烘干4小时；
步骤3、以改良过碘酸钠法制备抗TSH单抗-HRP酶结合物，并以1％BSA/0.01M PBS pH 7.4作为酶稀释液把酶结合物配成1ug/ml；
步骤4、配制0μIU/ml、0.1μIU/ml、0.5μIU/ml、2.5μIU/ml、15μIU/ml、100μIU/ml系列TSH定标品；
步骤5、设定好加样孔，加50μl系列TSH定标品于包被好的TSH板子上，再加50μl稀释抗TSH单抗-HRP酶结合物，37℃反应1小时后，以PBS-T洗板5次，拍干；
步骤6、标准品曲线按复孔加样，每孔加入上述配制化学发光底物液100μl，第5分钟以光子计数仪检测发光信号值，其结果如下表一所示。
表一
实施例2
以本发明实施例配制的单组份化学发光底物液建立的抗促甲状腺激素(TSH)化学发光免疫分析方法包括以下步聚：
步骤1、配制化学发光底物液，其组分和浓度为：
0.1mol/L的Tris缓冲体系 pH 9.0
鲁米诺 0.7g/L
肉桂酸 0.9g/L
4-碘苯硼酸 0.2g/L
对碘苯酚 0.25g/L
过氧化脲 0.4g/L
二甲基甲酰胺(DMF) 25ml/L
聚乙烯醇(PVA) 5g/L
聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 8g/L
聚乙二醇600(PEG-600) 3g/L
乙二胺四乙酸(EDTA) 4g/L
硫酸庆大霉素 160万单位/L
步骤2、以抗TSH单抗包被白色发光板，包被浓度为5ug/ml，100ul/孔，37℃包被2小时，洗板后，以封闭液按200ul/孔4℃包被18小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的37℃干燥箱中烘干4小时；
步骤3、以改良过碘酸钠法制备抗TSH单抗-HRP酶结合物，并以1％BSA/0.01M PBS pH 7.4作为酶稀释液把酶结合物配成1ug/ml；
步骤4、配制0μIU/ml、0.1μIU/ml、0.5μIU/ml、2.5μIU/ml、15μIU/ml、100μIU/ml系列TSH定标品；
步骤5、设定好加样孔，加50μl系列TSH定标品于包被好的TSH板子上，再加50μl稀释抗TSH单抗-HRP酶结合物，37℃反应1小时后，以PBS-T洗板5次，拍干；
步骤6、标准品曲线按复孔加样，每孔加入上述配制化学发光底物液100μl，第5分钟以光子计数仪检测发光信号值，其结果如下表二所示。
表二
为了体现本发明所述单组份化学发光底物液优越性，现以实施例2中所述单组份化学发光底物液与美国PIERCE公司West Pico化学发光检测底物的发光强度、灵敏度、线性进行比较。
操作方法：
实施例2中所述单组份化学发光底物液按100μl/孔直接加入发光板中，而美国PIERCE公司
West Pico化学发光检测底物在临用前，先将West Pico化学发光检测底物A液与
West Pico化学发光检测底物B液等体积混合后，再按100μl/孔加入发光板中，检测数据如下表：
从上表可知，实施例2中所述单组份化学发光底物液与美国PIERCE公司
West Pico化学发光检测底物相比较，整体发光强度值更高、线性更好和灵敏度较高，且本发明的化学发光底物液为单组份，操作更为简便。
实施例3
以本发明实施例配制的单组份化学发光底物液建立的抗促甲状腺激素(TSH)化学发光免疫分析方法包括以下步聚：
步骤1、配制化学发光底物液，其组分和浓度为：
0.1mol/L的Tris缓冲体系 pH 9.0
鲁米诺 1.2g/L
肉桂酸 5g/L
4-碘苯硼酸 0.6g/L
对碘苯酚 0.6g/L
过氧化脲 1g/L
二甲基甲酰胺(DMF) 50ml/L
聚乙烯醇(PVA) 7.5g/L
聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 15g/L
聚乙二醇600(PEG-600) 5g/L
乙二胺四乙酸(EDTA) 10g/L
硫酸庆大霉素 400万单位/L
步骤2、以抗TSH单抗包被白色发光板，包被浓度为5ug/ml，100ul/孔，37℃包被2小时，洗板后，以封闭液按200ul/孔4℃包被18小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的37℃干燥箱中烘干4小时；
步骤3、以改良过碘酸钠法制备抗TSH单抗-HRP酶结合物，并以1％BSA/0.01M PBS pH 7.4作为酶稀释液把酶结合物配成1ug/ml；
步骤4、配制0μIU/ml、0.1μIU/ml、0.5μIU/ml、2.5μIU/ml、15μIU/ml、100μIU/ml系列TSH定标品；
步骤5、设定好加样孔，加50μl系列TSH定标品于包被好的TSH板子上，再加50μl稀释抗TSH单抗-HRP酶结合物，37℃反应1小时后，以PBS-T洗板5次，拍干；
步骤6、标准品曲线按复孔加样，每孔加入上述配制化学发光底物液100μl，第5分钟以光子计数仪检测发光信号值，其结果如下表三所示。
表三
综上所述，使用本发明的化学发光底物液，为单一溶液，使用时不需要另行混合配置，并且仍能保持线性检测范围宽、稳定性好和灵敏度高的优点，从而能够解决了传统的化学发光底物液不必配制成A和B液二部分，分开保存，并且A和B液等体积混合10分钟后，信号值急剧下降、检测范围明显变窄，稳定性变差的问题。此外，本发明提供的化学发光底物液容易配制、成本低、操作简单、无坏境污染、对人体无毒无害等。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种化学发光底物液，其特征在于，其组分为：0.2～1.2g/L鲁米诺(Luminol)，0.1～5g/L肉桂酸，0.05～0.6g/L4-碘苯硼酸，0.05～0.6g/L对碘苯酚，5～50ml/L二甲基甲酰胺(DMF)，2.5～7.5g/L聚乙烯醇(PVA)，5～15g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，1.5～5g/L聚乙二醇600(PEG-600)，1～10g/L乙二胺四乙酸(EDTA)，40～400万单位/L硫酸庆大霉素，0.1～1.0g/L过氧化脲，pH9.0的0.1mol/L的Tris缓冲液。
2.根据权利要求1所述的化学发光底物液，其特征在于，其组分为：0.7g/L鲁米诺(Luminol)，0.9g/L肉桂酸，0.2g/L4-碘苯硼酸，0.25g/L对碘苯酚，25ml/L二甲基甲酰胺(DMF)，5g/L聚乙烯醇(PVA)，8g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，3g/L聚乙二醇600(PEG-600)，4g/L乙二胺四乙酸(EDTA)，160万单位/L硫酸庆大霉素，0.4g/L过氧化脲，pH9.0的0.1mol/L的Tris缓冲液。
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