CN102048720A - 丹参素、三七皂苷r1,及其配伍对微循环障碍引发的疾病的预防和治疗 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药产品丹参素、三七皂苷R1，及其配伍的新用途，特别涉及丹参素、三七皂苷R1，及其配伍对微循环障碍引发的疾病的预防和治疗作用。

Description

丹参素、三七皂苷R1，及其配伍对微循环障碍引发的疾病的预防和治疗

技术领域：

本发明涉及中药产品丹参素、三七皂苷R1，及其配伍的新用途，特别涉及丹参素、三七皂苷R1，及其配伍对微循环障碍引发的疾病的预防和治疗作用。

背景技术：

缺血再灌注损伤是介入疗法、外科手术、溶栓后出现损伤的主要病理基础。缺血再灌注后白细胞与血管内皮细胞黏附、肥大细胞脱颗粒是血管损伤的主要病理环节。

微循环是包括细动脉、毛细血管、细静脉在内的血管床，占体内血管的90％，是维持新陈代谢的重要部分。高脂血症、高血压、感染、精神刺激、跌打损伤、手术、介入治疗等都可以引起微循环障碍。微循环障碍包括血管径变化、过氧化物产生、血管内皮粘附因子ICAM-1、白细胞粘附因子CD11b/CD18表达、白细胞与血管内皮细胞粘附、血浆白蛋白外漏、血管外肥大细胞脱颗粒释放TNF-α、组织胺、5羟色胺、炎性因子等血管活性物质、以及形成血拴、出血等多环节变化的复杂过程。

肥大细胞脱颗粒是一型变态反应的主要病理环节，是花粉病，皮肤病，哮喘，腹泻的主要病理基础。

丹参素：DLA(3.4-dihydroxyphenyl lactic acid，DLA)、三七皂苷R1(notoginsenoside R1)是复方丹参滴丸(Cardiotonic

CP)中丹参和三七的主要活性成分之一。我们的研究已经证明了复方丹参滴丸对I/R(ischemia and reperfusion，I/R)引起的大鼠心脏、肝脏、肠系膜微循环障碍有改善作用，证明了丹参和三七的主要组分丹参总酚酸和三七总皂苷对I/R大鼠肠系膜微循环障碍有改善作用。但是，尚不清楚作为CP中丹参和三七的主要活性成分之一的DLA和R1改善了微循环障碍的哪些环节，两者的不同比例配伍是否有协同作用，为此，本研究用动态、可视化方法解析DLA和R1，及其配伍对I/R引起的大鼠微循环肠系膜微循环障碍的改善作用环节。

本发明经过实验发现丹参素、三七皂苷R1，及其配伍可以改善缺血再灌注引起的肠系膜微循环障碍，从而达到治疗和/或预防微循环障碍引发的疾病的作用，并提供一种中药药物制剂。

发明内容：

本发明发现中药产品丹参素、三七皂苷R1，及其配伍的新用途，特别涉及丹参素、三七皂苷R1，及其配伍对缺血再灌注引起的肠系膜微循环障碍的预防和治疗改善作用。从而将其应用于治疗和/或预防微循环障碍引发的疾病，如：、高脂血症、高血压、感染、精神刺激、跌打损伤、花粉病，皮肤病，哮喘，腹泻、手术或介入治疗等引发的微循环障碍。

本发明发现，丹参素、三七皂苷R1，及其配伍预给药和后给药可以抑制再灌注后肠系膜细静脉内白细胞的滚动和粘附，抑制肥大细胞脱颗粒。

本发明所述丹参素是中药丹参中的一种成分，可以从市场上买到，也可以根据现有技术制备，三七皂苷R1是中药三七中的一种成分，可以从市场上买到，也可以根据现有技术制备，均属于现有技术。本发明使用的丹参素、三七皂苷R1，是符合药用标准的产品，优选纯度＞50％，更优选纯度＞90％，最优选纯度＞98％。

本发明所述的药物，是用上述丹参素、三七皂苷R1，及其配伍作为药物活性成分制备成的药物组合物。

本发明的药物组合物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中丹参素、三七皂苷R1，及其配伍作为药物活性成分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。本发明的药物组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋，注射剂的每支等。

以上所述配伍是丹参素，三七皂苷R1两者的组合，其重量比例为1-4∶4-1，优选1-2∶2-1，最优选1∶1。

本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。

本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的药物制剂组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量。

本发明所述的治疗用途是通过以下实验证明的：

材料和方法

1试药

DLA(丹参素)、R1(三七皂苷R1)由昆明风山渐医药研究有限公司提供。甲苯胺蓝、二氢罗达明以及FITC标记的白蛋白均购于Sigma公司。

2实验动物

200-250g的雄性wistar大鼠由日本琦玉实验动物中心提供。动物被置于常规饲养环境(温度24±1℃，湿度50±5％，交替照明12小时)。动物的处理按照庆应义塾大学医学部规定的动物处理和伦理方针进行。实验前禁食给水12小时。

3.I/R模型的建立及给药

I/R组：按30mg/kg体重的用量，用sodium pentobarbital施腹腔注射进行麻醉。在大鼠的右侧颈静脉插入3号聚乙烯静脉注射管，并留置。沿腹正中线切开20-30mm，轻柔地将近回盲部的回肠取出腹外，展开至有载玻片的观察台上。用37℃的Krebs-Ringer缓冲液连续地在展开的肠系膜上滴加。肠系膜微循环动态用置于37℃恒温箱的倒立生物显微镜(Diaphot TMD-2S，Nikon，东京)，在12V，100W的白光条件下观察。在20倍物镜头下选择观察部位，用有时间显示的录像系统，将观察内容用S-VHS录像带纪录保存。选择的观察部位为直径在25-35um之间的细静脉非分枝部(长度在200μm以上)的微循环血管床。在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量连续静滴入生理盐水至观察结束。用聚乙烯管结扎观察部环流的前肠系膜动静脉10分钟，再解除结扎，将时间调至0处，连续观察同一视野的微循环动态60分钟。

假手术(Sham)组：同I/R大鼠麻醉开腹，取肠系膜观察，不作I/R处理，经颈静脉按5mg/kg/h的给药量连续静滴入生理盐水至观察结束。

DLA预给药(DLA+I/R)组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量连续静滴入DLA至观察结束。

R1预给药(R1+I/R)组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量连续静滴入R1至观察结束。

DR(4∶1)预给药(DR(4∶1)+I/R)组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量，将DLA和R1按4∶1的比例配伍，连续静滴注至观察结束。

DR(1∶1)预给药(DR(1∶1)+I/R)组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量，将DLA和R1按1∶1的比例配伍，连续静滴注至观察结束。

DR(1∶4)预给药(DR(1∶4)+I/R)组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量，将DLA和R1按1∶4的比例配伍，连续静滴注至观察结束。

DLA后给药(I/R+DLA)组：在I/R10分钟后经颈静脉按5mg/kg/h的给药量连续静滴入DLA至观察结束。

R1后给药(I/R+R1)组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量连续静滴入R1至观察结束。

DR(4∶1)后给药(I/R+DR(4∶1))组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量，将DLA和R1按4∶1的比例配伍，连续静滴注至观察结束。

DR(1∶1)后给药(I/R+DR(1∶1))组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量，将DLA和R1按1∶1的比例配伍，连续静滴注至观察结束。

DR(1∶4)后给药(I/R+DR(1∶4))组：在缺血20分钟前经颈静脉按5mg/kg/h的给药量，将DLA和R1按1∶4的比例配伍，连续静滴注至观察结束。

其中，每组取6只大鼠，用于观察细静脉血管径、白细胞滚动、黏附、游出、细静脉血管壁DHR荧光强度。另取6只大鼠观察血浆白蛋白漏出和肥大细胞脱颗粒。

3.微循环动态的观察

微循环动态用连接于倒立生物显微镜的CCD摄像系统(CC-090，Flovel，东京)和SIT萤光摄影机(C-2400-08、滨松フオトニクス、滨松)连续纪录。

血管经的测定：在回放的CD录像上，用Image-Pro Plus 5.0软件在缺血前，再灌注开始时1分、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟时，取大鼠肠系膜细静脉血管径3个部位测定，取其平均值[]。

沿细静脉滚动白细胞的计数：在回放的图像上，在缺血前，再灌注开始时1分、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟时，计数10秒种内，在200微米细静脉内滚动的白细胞个数。

粘附于细静脉管壁的白细胞数计数：在回放的图像上，在缺血前，再灌注开始时1分、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟时，计数在细静脉管壁的同一部位停留30秒以上的白细胞(粘附白细胞)，计算100μm长细静脉上粘附的白细胞数。

细静脉管壁DHR荧光强度测定：在所观察的大鼠肠系膜表面连续滴加感受过氧化氢的荧光探针DHR(10uM)。用倒置荧光显微镜观察(DM-IRB，Leica，Germany)，455nm激发光，汞灯作为发射光源(100W)。用CD录像机记录各组缺血前，再灌注开始时1分、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟时的图像，用Image-Pro Plus 5.0软件测定细静脉管壁及血管外间质的荧光强度。用缺血前细静脉管壁与血管外间质的差为基础值，计算各时间点数值与基础值的比值，用以表示大鼠肠系膜细静脉管壁DHR荧光强度的变化率[]。

细静脉白蛋白渗出的测定：每组另取6只大鼠，沿颈静脉缓慢推注FITC-标记的牛血清白蛋白(50mg/kg)，基础观察10分钟后，用倒置荧光显微镜观察(DM-IRB，Leica，Germany)，455nm激发光，汞灯作为发射光源(100W)。用CD录像机连续记录各组在缺血前，再灌注开始时1分、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟时细静脉血管内和相邻的血管外间质的FITC荧光图像。用Image-Pro Plus 5.0软件测定细静脉血管内和相邻的血管外间质的FITC荧光强度，用缺血前的细静脉管壁与血管外间质的FITC荧光的比为基础值。计算各时间点数值与基础值的比值，用以表示大鼠肠系膜细静脉白蛋白渗出的变化率。可以用公式表示：Rt＝Pt/Po其中，Rt表示在某时间点的FITC荧光强度比值；Pt表示在该时间点血管壁与血管外荧光强度比值；Po表示0分钟时血管壁与血管外荧光强度比值。

肥大细胞脱颗粒率：在再灌注60分后，将0.1％toluidine blue滴加在观察部位，用CCD摄像机纪录。用20倍的对物镜计数5个视野的脱颗粒和未脱颗粒的肥大细胞数，计算脱颗粒的肥大细胞占计数的整个肥大细胞数的百分比，为肥大细胞脱颗粒率。

4.统计处理

各测定值用one-way analysis of variance(ANOVA)处理，各组经时变化用T检验，各组间比较用F检验。各测定值用均值±标准误表示，P＜0.05为有显著意义。

附图说明：

图1表示DLA、R1及其配伍对I/R后大鼠肠系膜细静脉血管经的影响：本观察时间内，I/R组大鼠细静脉血管径没有发生显著的变化.DLA、R1及其配伍对的预给药和后给药都没有引起再灌注后大鼠肠系膜细静脉血管径的显著变化。

图1表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉管径的影响。Sham：假手术组；I/R∶I/R组；DLA+I/R∶DLA前给药组；R1+I/R∶R1前给药组；DR(4∶1)+I/R∶DLA与R1 4∶1配伍前给药组；DR(1∶1)+I/R∶DLA与R1 1∶1配伍前给药组；DR(1∶4)+I/R∶DLA与R1 1∶4配伍前给药组；I/R+DLA∶DLA后给药组；I/R+R1∶R1后给药组；I/R+DR(4∶1)∶DLA与R14∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶1)∶DLA与R1 1∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶4)∶DLA与R1 1∶4配伍后给药组。结果以平均值±标准误表示。*p＜0..05vs Sham；#p＜0.05vs I/R。

图2表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉白细胞滚动的影响。I/R以后沿大鼠肠系膜细静脉壁滚动白细胞显著增多。丹参素的预投入可以显著地抑制I/R引起的白细胞沿细静脉壁的滚动。R1、DLA与R1各种配伍的预投入和后投入都没有显著地抑制I/R引起的白细胞沿细静脉壁的滚动。

图2表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉白细胞滚动的影响。Sham：假手术组；I/R∶I/R组；DLA+I/R∶DLA前给药组；R1+I/R∶R1前给药组；DR(4∶1)+I/R∶DLA与R14∶1配伍前给药组；DR(1∶1)+I/R∶DLA与R1 1∶1配伍前给药组；DR(1∶4)+I/R∶DLA与R1 1∶4配伍前给药组；I/R+DLA∶DLA后给药组；I/R+R1∶R1后给药组；I/R+DR(4∶1)∶DLA与R1 4∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶1)∶DLA与R1 1∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶4)∶DLA与R1 1∶4配伍后给药组。结果以平均值±标准误表示。*p＜0..05vs Sham；#p＜0.05vsI/R。

图3表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉白细胞粘附的影响。Sham组在本观察结束时仅有少量的白细胞粘附于细静脉。I/R组大鼠在再灌注早期就有大量的白细胞粘附于细静脉管壁，随着再灌注的进行，黏附白细胞逐渐增多。DLA、R1以及二者配伍的预投入和后投入都显著地抑制了I/R引发的大鼠肠系膜细静脉内粘附白细胞的增加。

图3表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉白细胞粘附的影响。Sham：假手术组；I/R∶I/R组；DLA+I/R∶DLA前给药组；R1+I/R∶R1前给药组；DR(4∶1)+I/R∶DLA与R1 4∶1配伍前给药组；DR(1∶1)+I/R∶DLA与R1 1∶1配伍前给药组；DR(1∶4)+I/R∶DLA与R1 1∶4配伍前给药组；I/R+DLA∶DLA后给药组；I/R+R1∶R1后给药组；I/R+DR(4∶1)∶DLA与R1 4∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶1)∶DLA与R1 1∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶4)∶DLA与R1 1∶4配伍后给药组。结果以平均值±标准误表示。*p＜0..05vs Sham；#p＜0.05vs I/R。

图4表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉白细胞游出的影响。Sham组在本观察结束时没有观察到经由细静脉的白细胞游出。在再灌注30时经由细静脉游出的白细胞显著增加，并持续增加到本观察结束时候。DLA、R1以及二者配伍的前给药和后给药都显著地抑制了I/R后经由肠系膜细静脉的白细胞游出。

图4表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉白细胞游出的影响。Sham：假手术组；I/R∶I/R组；DLA+I/R∶DLA前给药组；R1+I/R∶R1前给药组；DR(4∶1)+I/R∶DLA与R14∶1配伍前给药组；DR(1∶1)+I/R∶DLA与R1 1∶1配伍前给药组；DR(1∶4)+I/R∶DLA与R1 1∶4配伍前给药组；I/R+DLA∶DLA后给药组；I/R+R1∶R1后给药组；I/R+DR(4∶1)∶DLA与R1 4∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶1)∶DLA与R1 1∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶4)∶DLA与R1 1∶4配伍后给药组。结果以平均值±标准误表示。*p＜0..05vs Sham；#p＜0.05vs I/R。

图5A表示DLA、R1及其配伍预投入对I/R后大鼠肠系膜细静脉管壁过氧化物产生动态的影响。Sham组在本观察期间内，细静脉管壁DHR的荧光强度没有显著的变化。I/R组在再灌注开始后细静脉管壁DHR荧光强度开始增加，并持续增加。R1没有显著地抑制I/R后大鼠肠系膜细静脉管壁过氧化物的产生。DLA、及各配伍组的预投入显著地抑制了I/R后大鼠肠系膜细静脉管壁过氧化物的产生。其中，DLA和TP(4∶1)的作用最强。

图5B表示DLA、R1及其配伍后投入对I/R后大鼠肠系膜细静脉管壁过氧化物产生动态的影响。R1没有显著地抑制I/R后大鼠肠系膜细静脉管壁过氧化物的产生，而DLA、及各配伍组的预投入显著地抑制了I/R后大鼠肠系膜细静脉管壁过氧化物的产生。

图5表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉过氧化物产生(DHR)的影响。Sham：假手术组；I/R∶I/R组；DLA+I/R∶DLA前给药组；R1+I/R∶R1前给药组；DR(4∶1)+I/R∶DLA与R1 4∶1配伍前给药组；DR(1∶1)+I/R∶DLA与R1 1∶1配伍前给药组；DR(1∶4)+I/R∶DLA与R1 1∶4配伍前给药组；I/R+DLA∶DLA后给药组；I/R+R1∶R1后给药组；I/R+DR(4∶1)∶DLA与R1 4∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶1)∶DLA与R1 1∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶4)∶DLA与R1 1∶4配伍后给药组。结果以平均值±标准误表示。*p＜0..05vs Sham；#p＜0.05vsI/R。

图6表示DLA、R1及其配伍对I/R后大鼠肠系膜静脉内血浆白蛋白外漏的影响。Sham组在60分钟观察过程结束时，仅有少量的血浆白蛋白经由大鼠肠系膜细静脉漏出，而I/R组大鼠在再灌注开始后，经由大鼠肠系膜细静脉漏出的血浆白蛋白就显著地增加，并随着再灌注的持续进一步增强。DR(1∶4)的预投入没有显著地抑制I/R引起的大鼠肠系膜细静脉血浆白蛋白的漏出。而，DLA、R1及DR(4∶1)、DR(1∶1)的预投入都可显著地抑制I/R引起的大鼠肠系膜细静脉血浆白蛋白的漏出。在再灌注后给药时，DR(1∶1)、DR(1∶4)的后给药都没有显著地抑制I/R引起的大鼠肠系膜细静脉血浆白蛋白的漏出，而DLA、R1及DR(4∶1)可以显著地I/R引起的大鼠肠系膜细静脉血浆白蛋白的漏出，其中以DR(4∶1)的改善作用最强。

图6表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉中白蛋白漏出的影响。Sham：假手术组；I/R∶I/R组；DLA+I/R∶DLA前给药组；R1+I/R∶R1前给药组；DR(4∶1)+I/R∶DLA与R1 4∶1配伍前给药组；DR(1∶1)+I/R∶DLA与R1 1∶1配伍前给药组；DR(1∶4)+I/R∶DLA与R1 1∶4配伍前给药组；I/R+DLA∶DLA后给药组；I/R+R1∶R1后给药组；I/R+DR(4∶1)∶DLA与R1 4∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶1)∶DLA与R1 1∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶4)∶DLA与R1 1∶4配伍后给药组。结果以平均值±标准误表示。*p＜0..05vs Sham；#p＜0.05vsI/R。

图7表示DLA、R1及其配伍对对I/R后大鼠肠系膜大鼠肠系膜间质肥大细胞脱颗粒的影响。再灌注60分钟时，与Sham组相比，I/R组肥大细胞脱颗粒率显著增加，DLA、R1及其配伍的与投入都可显著地抑制I/R引起的大鼠肠系膜间质内肥大细胞脱颗粒率的增加。在再灌注发生后投予DLA没有显著地抑制肥大细胞脱颗粒，而R1、DR配伍对对I/R的各配伍的后投入都可显著地抑制I/R引起的大鼠肠系膜间质内肥大细胞脱颗粒率。

图7表示DLA、R1以及二者配伍对I/R引发的大鼠肠系膜细静脉周围肥大细胞脱颗粒率的影响。Sham：假手术组；I/R∶I/R组；DLA+I/R∶DLA前给药组；R1+I/R∶R1前给药组；DR(4∶1)+I/R∶DLA与R1 4∶1配伍前给药组；DR(1∶1)+I/R∶DLA与R1 1∶1配伍前给药组；DR(1∶4)+I/R∶DLA与R1 1∶4配伍前给药组；I/R+DLA∶DLA后给药组；I/R+R1∶R1后给药组；I/R+DR(4∶1)∶DLA与R1 4∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶1)∶DLA与R1 1∶1配伍后给药组；I/R+DR(1∶4)∶DLA与R1 1∶4配伍后给药组。结果以平均值±标准误表示。*p＜0..05vs Sham；#p＜0.05vsI/R。

结论：

1.I/R后大鼠肠系膜血管径没有显著变化，而滚动、粘附和游出的白细胞数、细静脉血管壁DHR萤光强度、FITC标记的血浆白蛋白漏出率、血管外间质组织中的肥大细胞脱颗粒率显著增加。

2.DLA的前给药对I/R后大鼠肠系膜血管径没有显著影响，在再灌注20分以后抑制了沿细静脉滚动的白细胞，在再灌注30分以后显著地抑制粘附和游出白细胞数的增加，抑制细静脉管壁DHR荧光强度的增加，抑制血浆白蛋白的血管外漏出，抑制肥大细胞脱颗粒。而DLA后给药，除不能显著地抑制肥大细胞脱颗粒之外，其他作用与前给药相同。

3.R1前给药和后给药对I/R后大鼠肠系膜血管径和细静脉滚动的白细胞没有显著的抑制作用，但是，可以显著地抑制粘附和游出白细胞数的增加，抑制肥大细胞脱颗粒。R1对I/R引起的大鼠肠系膜细静脉管壁DHR荧光强度的增加没有抑制作用。

4.DR(4∶1)、DR(1∶1)、DR(1∶4))前给药对I/R后大鼠肠系膜微循环障碍的改善作用与DLA、R1的作用相同，但是，DR(4∶1)配伍改善微循环障碍的作用显著增强。

总之，本发明证明，丹参素、三七皂苷R1，及其配伍可以预防和治疗缺血再灌注引起的微循环障碍。从而将其应用于治疗和/或预防微循环障碍引发的疾病，如：过敏性疾病、高脂血症、高血压、感染等以及因精神刺激、跌打损伤、花粉病，皮肤病，哮喘，腹泻、手术或介入治疗等引发的微循环障碍。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

片剂

【处方】丹参素∶三七皂苷R1＝1∶1，105g    微晶纤维素55g    微粉硅胶3g    硬脂酸镁1.5g

【制法】取原、辅料分别过100目筛；取丹参总酚酸、三七总皂苷1∶1、微晶纤维素，混匀，用60％乙醇适量作为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成1000片，即得。

实施例2

【处方】丹参素∶三七皂苷R1＝1∶485g    硫酸钙118g    微晶纤维素37g微粉硅胶2.4g    硬脂酸镁1.2g

【制法】取原、辅料分别过100目筛；取丹参总酚酸、三七总皂苷1∶4、微晶纤维素，混匀，用60％乙醇适量作为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成1000片，即得。

实施例3

【处方】丹参素∶三七皂苷R1＝4∶1133g    硫酸钙208g    微晶纤维素68g微粉硅胶5g    硬脂酸镁2.5g

【制法】取原、辅料分别过100目筛；取丹参总酚酸、三七总皂苷4∶1、微晶纤维素，混匀，用60％乙醇适量作为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成1000片，即得。

实施例4

胶囊

取丹参素60g，加入适量淀粉，硬脂酸镁等辅料，制粒，整粒，装入1号胶囊，即得。

实施例5

口服液

取丹参素8g，加入适量蔗糖，防腐剂，加水到1000ml，分装成10ml一支，即得口服液。

实施例6

颗粒剂

取三七皂苷R180g，加入适量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分装，即得。

实施例7

注射剂

三七皂苷R17g加水溶解，另氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯加热水溶解，混匀，调pH值。注射用水稀释至1000ml，用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，即得。

实施例8，注射剂

丹参素∶三七皂苷R1＝4∶12g加水溶解，另氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯加热水溶解，混匀，调pH值。注射用水稀释至1000ml，用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，即得。

Claims (9)

1.丹参素、三七皂苷R1，及其配伍在制备预防和治疗微循环障碍引发的疾病的药物中的应用。

2.权利要求1的应用，其特征在于，其中丹参素的应用表现在前给药对在再灌注20分以后抑制了沿细静脉滚动的白细胞，在再灌注30分以后显著地抑制粘附和游出白细胞数的增加，抑制细静脉管壁DHR荧光强度的增加，抑制血浆白蛋白的血管外漏出，抑制肥大细胞脱颗粒。

3.权利要求1的应用，其特征在于，其中丹参素的应用表现在后给药对在再灌注20分以后抑制了沿细静脉滚动的白细胞，在再灌注30分以后显著地抑制粘附和游出白细胞数的增加，抑制细静脉管壁DHR荧光强度的增加，抑制血浆白蛋白的血管外漏出。

4.权利要求1的应用，其特征在于，其中三七皂苷R1的应用表现在前给药和后给药可以显著地抑制粘附和游出白细胞数的增加，抑制肥大细胞脱颗粒。

5.权利要求1的应用，其特征在于，其中所述配伍是丹参素和三七皂苷R1两者的组合，其重量比例为1-4∶4-1，优选1-2∶2-1，最优选1∶1。

6.权利要求1的应用，其特征在于，其中所述丹参总酚酸和三七总皂苷配伍的应用表现在DR(4∶1)、DR(1∶1)、DR(1∶4))前给药对在再灌注20分以后抑制了沿细静脉滚动的白细胞，在再灌注30分以后显著地抑制粘附和游出白细胞数的增加，抑制细静脉管壁DHR荧光强度的增加，抑制血浆白蛋白的血管外漏出。但是，DR(4∶1)配伍改善微循环障碍的作用显著增强。

7.权利要求1的应用，其特征在于，其中所述应用包括以下疾病，如：过敏性疾病、高脂血症、高血压、感染等以及因精神刺激、跌打损伤、花粉病，皮肤病，哮喘，腹泻、手术或介入治疗等引发的微循环障碍。

8.权利要求1的应用，其特征在于，其中所述的药物，是用上述丹参素、三七皂苷R1，及其配伍作为药物活性成分制备成的药物组合物。

9.权利要求1的应用，其特征在于，其中所述丹参素是中药丹参中的一种成分，可以从市场上买到，也可以根据现有技术制备，三七皂苷R1是中药三七中的一种成分，可以从市场上买到，也可以根据现有技术制备，均属于现有技术，本发明使用的丹参素、三七皂苷R1，是符合药用标准的产品，优选纯度＞50％，更优选纯度＞90％，最优选纯度＞98％。

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