WO2009135433A1

WO2009135433A1 - 丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍治疗败血症的应用

Info

Publication number: WO2009135433A1
Application number: PCT/CN2009/071632
Authority: WO
Inventors: 韩晶岩; 杨继英; 郭俊
Original assignee: 天津天士力制药股份有限公司
Priority date: 2008-05-05
Filing date: 2009-05-04
Publication date: 2009-11-12
Also published as: CN101574391B; CN101574391A

Description

丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍治疗败血症的应用

技术领域

本发明涉及中药产品的新用途，特别涉及丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍在治疗和 /或预防败血症的应用。

背景技术

丹酚总酸为丹参的干燥根提取物，其功能主治为：活血通经、祛淤止痛、清心除烦、凉血消痈等作用，适用于血淤、血热、血淤兼热或血热兼淤所致的各种病证，尤为妇科、内科及外伤科证属血淤兼热者所常用。

三七总皂苷已经列入国家药典，有相应制剂产品上市，如：注射用血塞通。中国专利 CN200410058111. 4描述了一种三七总皂苷的制备方法：三七用水提取，提取液浓縮，乙醇沉淀，上清液除尽乙醇，水溶解后，行大孔树脂 HPD400柱色谱，水洗脱除去杂质后，再用 90% 乙醇洗脱，至有效成分洗脱完全为止，回收醇洗脱液，干燥即得。具体可以采用以下方法获得：取三七药材粉碎成粗粉，加 10倍药材重量的 70%乙醇，回流提取 2次，每次 25小时，滤过，合并二次提取液， 70°C左右减压回收溶剂，至比重为 1. 10-1. 12的流浸膏。用水稀释，进行大孔树脂 HPD400吸附柱吸附，用水洗脱，继以 90%乙醇洗脱， 90%乙醇洗脱部分 70°C左右减压回收溶剂。向上述三七总皂苷溶液中，加入 Mg0_{2 :} AL₂0₃脱色，过滤，滤液于 80°C减压真空干燥，粉碎，即得淡黄色三七总皂苷成品。

败血症是致病菌或条件致病菌侵入血循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的急性全身性感染，临床上以寒战、高热、皮疹、关节痛及肝脾肿大为特征，部分可有感染性休克和迁徙性病灶。引起败血症的原因有：

一、人体因素：

①皮肤粘膜有破损或发生化脓性炎症时，细菌则容易侵入体内。

②人体的免疫反应可分为非特异性免疫反应及特异性免疫反应两种，后者又可分为细胞免疫与体液免疫两方面。当机体免疫功能下降时，不能充分发挥其吞噬杀灭细菌的作用，即使入侵的细菌量较少，致病力不强也能引起败血症。

③条件致病菌所引起的医源性感染也逐渐增多。

二、细菌因素：

主要与病原菌的毒力和数量有关。毒力强或数量多的致病菌进入机体，引起败血症的可能性较大。

败血症的主要症状是：

1. 原发炎症：各种病原菌所引起的原发炎症与其在人体的分布部位有关。原发炎症的特点是局部的红、肿、热、痛和功能障碍。

2. 毒血症症状：起病多急骤。常有寒战、高热、发热多为弛张热及或间歇热，亦可呈稽留热、不规则热及双峰热，后者多系革兰阴性杆菌败血症所致。发热同时伴有不同程度的毒血症症状，如头痛、恶心、呕吐、腹胀、腹痛、周身不适、肌肉及关节疼痛等。

3. 皮疹：见于部分患者，以瘀点最为多见，多分布于躯干、四肢、眼结膜、口腔粘膜等处，为数不多。

4. 关节症状：可出现大关节红、肿、热、痛和活动受限，甚至并发关节腔积液、积脓，多见于革兰阳性球菌、脑膜炎球菌、产碱杆菌等败血症的病程中。

5. 感染性休克：约见于 1/5〜1/3败血症患者，表现为烦燥不安，脉搏细速，四肢厥冷，皮肤花斑，尿量减少及血压下降等，且可发生 DIC, 系严重毒血症所致。

6. 肝脾肿大：一般仅轻度肿大。根据研究，脂多糖（LPS ) 是革兰氏阳性细菌细胞壁的组成成分之一，造成了革兰氏阳性细菌导致的人败血症和感染性休克的多种表现。败血症时发生的微循环障是由 LPS的过度释放造成的系统性炎症反应，由许多激活的因子所介导，这些因子如粘附分子，活性氧成份 (ROS) , 以及炎症前体介质如肿瘤坏死因子一 a(TNF-ct)、白介素一 6(IL-6)以及干扰素一 Y(INF-_Y)o LPS诱导产生的微循环障碍对败血症时发生的器官功能障碍起着关键作用，在这个过程中白细胞沿着内皮旋转并粘附于血管内皮，血管壁产生过氧化氢和肥大细胞脱颗粒都是文献报道的关键步骤。

当前败血症的主要临床治疗方法包括容量复苏，儿茶酚胺的运用和抗生素补偿治疗。这些方法可以增加败血症病人的存活率，但是在临床上会导致血糖升高以及血压和血钙的下降，并发生出血。临床研究建议采用抗 TNF-ct治疗对败血症的治疗有所帮助。然而，最近的研究表明这种方法不能治愈败血症且会增加严重败血症病人的死亡率。因而，在 LPS导致的败血症中寻找防止出现严重微循环障的方法仍然是个挑战。

本发明人在对丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍进行研究过程中，发现丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍能够抑制白细胞粘附于血管壁、肥大细胞脱颗粒和细胞因子的释放，改善 LPS 诱导的微循环障碍。对败血症有明显的治疗作用。

发明内容

本发明提供一种丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍新的治疗用途。所述新的治疗用途，是用丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍治疗因微循环障碍引发的败血症。

为此，本发明提供一种药物新用途，即用丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍制备一种治疗和 /或预防败血症的药物。

本发明所述丹酚总酸，主要成份是丹酚酸 A， Bo 三七总皂苷，主要成份是人参皂甙 Rb、 Rg, 三七皂甙 Rl、 R2、 R3。

本发明所述丹酚总酸，三七总皂苷可以从市场上买到，也可以根据现有技术制备，符合药用标准即可。

本发明所述制备的药物，是用上述丹酚总酸和三七总皂苷作为药物活性成分制备成的药物组合物。

本发明的药物组合物包括丹酚总酸作为活性成分的药物组合物，三七总皂苷作为活性成分的药物组合物，以及丹酚总酸和三七总皂苷以 1-9: 1-9的重量配比组合作为活性成分的药物组合物。优选的是丹酚总酸和三七总皂苷以 7 : 3的重量配比组合作为活性成分的药物组合物。

本发明的药物组合物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中丹酚总酸和三七总皂苷作为药物活性成分，其在组合物中所占重量百分比可以是 0. 1-99. 9%，其余为药物可接受的载体。本发明的药物组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋，注射剂的每支等。

本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。

本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶; 非水性载体（它们可以包括食用油），例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素（：、 EDTA二钠、 EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温 80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、 β—环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次 1-20 剂，如： 1-20袋或粒或片，每剂 lmg-1000mg。

本发明所述的治疗用途是通过以下实验证明的：

1 材料和方法

1.1 试药

丹酚总酸和三七总皂苷均由天津天士力制药股份有限公司提供。 LPS、甲苯胺蓝、二氢罗达明以及 FITC标记的白蛋白均购于 Sigma公司。

1.2 实验动物

200〜250g的 SD雄性大鼠由北京大学医学部动物中心提供，动物合格证号： SCXK (京) 2002-

0001。动物被置于常规伺养环境，动物的处理按照北京大学医学部规定的动物处理和伦理方针进行。

1.3 外周血粒细胞 LPS体外诱导的粘附分子 CDllb、 CD18表达的测定

粒细胞粘附分子 CDllb和 CD18表达的测定在体外进行（n=6)。 SD大鼠禁食给水伺养 12小时后，乌拉坦（1.25mg/kg) 肌肉麻醉，腹主动脉取血，以肝素抗凝（20 unit/ml全血）。将大鼠随机分为五组。正常组、 LPS组、 LPS十丹酚总酸组（0.5 mg/ml)、 LPS十三七总皂苷组（0.5 mg/ml) 和 LPS十丹酚总酸 1 : 三七总皂苷 9 (0.5 mg/ml), LPS十丹酚总酸 2: 三七总皂苷 8 ( 0.5 mg/ml), LPS十丹酚总酸 3 : 三七总皂苷 7 ( 0.5 mg/ml), LPS十丹酚总酸 4: 三七总皂苷 6 ( 0.5 mg/ml), LPS十丹酚总酸 5 : 三七总皂苷 5 ( 0.5 mg/ml)， LPS十丹酚总酸 6：三七总皂苷 4 ( 0.5 mg/ml), LPS十丹酚总酸 7: 三七总皂苷 3 ( 0.5 mg/ml), LPS +丹酚总酸 8: 三七总皂苷 2 ( 0.5 mg/ml), LPS十丹酚总酸 9: 三七总皂苷 1 ( 0.5 mg/ml)，每组 200 ul 抗凝全血。正常组加入 8 ul胜利盐水， LPS组加入 4 ul胜利盐水和 4 ul LPS, 使 LPS的终浓度为 2ug/ml，其他各组加入 LPS 4 ul和相应的药物 4 ul，使 LPS的终浓度为 2ug/ml，相应药物的终浓度为 0.5 mg/ml。 37°C水浴孵育 2小时后加入 lug FITC-标记的抗 CD18抗体和抗 -CDl lb 的抗体 (BD Biosciences Pharmingen, USA), 室温避光孵育 20 分钟。以溶血素 (BD Biosciences Immunocytometer Systems, USA)破碎红细胞，用 PBS洗涤细胞两次。用流式细胞仪 (FACS Calibur, B.D.Co, USA)检测平均荧光强度。分选 5000个外周血粒细胞细胞，计算各组 CDl lb和 CD18的平均荧光强度。

1.4 体内微循环观察方法

取 SD雄性大鼠，实验前禁食给水 12小时。以 20%乌拉坦（1.25mg/kg) 肌肉麻醉。左侧颈静脉和股静脉插管用于推注药物或 LPS。剪去腹部毛发沿腹部正中作 2〜3 cm的切口，暴露小肠。将大鼠仰位在观察板上，轻轻提出小肠（近尾部 10〜15 cm), 并将小肠展开放在有观察孔观察板上，滴上 37°C生理盐水保持温度和湿度，用配有 37°C恒温装置的倒置生物显微镜（DM-IRB，Leica， Germany)进行观察。选直径在 30〜50um之间， 200um长无分支，无明显弯曲的肠系膜细静脉，通过连接在显微镜上的 CCD彩色摄像机（Jk-TU53H TOSHIBA, Japan)在显示屏上（J2118A, TCL， China)观察，用 CD录像机（DVR-R25 , Malata, China) 连续记录微循环的变化。

1.5 给药

正常组：在基础观察 10分钟后，左股静脉各连续滴注生理盐水（5 ml/kg/hr) 至观察结束。在 20分后，经由左颈静脉连续滴加生理盐水（5 ml/kg/hr) 至观察结束。

LPS组：在基础观察 10分钟后，经由左股静脉，按 2 mg/kg/hr的给药量连续滴注 LPS 水溶液至观察结束。在 LPS滴入 20分后，经由左颈静脉连续滴注生理盐水（5 ml/kg/hr)。

LPS组 +丹酚总酸组：在基础观察 10分钟后，经由左股静脉，按 2 mg/kg/hr的给药量连续滴注 LPS水溶液至观察结束。在 LPS滴入 20分后，经由左颈静脉，按 5 mg/kg/hr的给药量连续滴注丹酚总酸水溶液。

LPS组 +三七总皂苷组：在基础观察 10分钟后，经由左股静脉，按 2 mg/kg/hr的给药量连续滴注 LPS水溶液至观察结束。在 LPS滴入 20分后，经由左颈静脉，按 5 mg/kg/hr的给药量连续滴注三七总皂苷水溶液。

LPS组 +丹酚总酸 7:三七总皂苷 3组：在基础观察 10分钟后，经由左股静脉，按 2 mg/kg/hr 的给药量连续滴注 LPS水溶液至观察结束。在 LPS滴入 20分后，经由左颈静脉，按 5 mg/kg/hr 的给药量连续滴注丹酚总酸 7:三七总皂苷 3水溶液。

1.6细静脉血管径的测定

在回放的 CD录像上，用 Image-Pro Plus 5.0软件测定 LPS滴注前（0分钟）、和滴注后 10分钟、 20分钟、 30分钟、 40分钟、 50分钟、 60分钟时细静脉血管经。

1.7 细静脉红细胞流速的测定

分别在 LPS滴注开始前 (0分钟)及滴注 10分钟、 20分钟、 30分钟、 40分钟、 50分钟、 60分钟时从 CCD切换至 2000幅 /秒的超速摄影机（FASTCAM-ultima APX， photron, Japan), 高速摄影 10秒钟，用 25幅 /秒的速度重放，并录象。用 Image-Pro Plus 5.0软件在回放的 CCD 录像上，选细静脉血管中央红细胞测定细静脉红细胞流速。

1.8细静脉剪切力的测定

按照公式 SR=2.12x8xV/D进行计算各时间点的血流剪切力（sheer stress, SR)，公式中 V代表红细胞的流速， D代表血管直径， 2.12为经验校正常数。

1.9细静脉白细胞黏附的测定

在回放的 CD录像上，在开始前 (0分钟)及滴注 10分钟、 20分钟、 30分钟、 40分钟、 50 分钟、 60分钟时，计数停留在同一位置超过 10秒钟以上的白细胞数（黏附白细胞），用粘附白细胞数（个） /200 μηι细静脉表示。

1.10肠系膜细静脉过氧化物产生的测定

在所观察的肠系膜细静脉表面连续滴加 DHR ( 10 uM)，用连接于倒置生物显微镜的荧光摄影机观察和记录滴注前（0分钟）及滴注 10分钟、 20分钟、 30分钟、 40分钟、 50分钟、 60分钟时的图象，用 Image-Pro Plus 5.0软件测定细静脉管壁及管外的荧光强度。用各用观察时间点的细静脉壁与细静脉外间质荧光强度的差与基础观察时的细静脉壁与细静脉外间质荧光强度的差的比表示。

1.11 肥大细胞脱颗粒的测定

60分钟观察结束后，将 0.1%甲苯胺蓝滴加于所观察的肠系膜表面。 1分钟后，用生理盐水冲洗。在 20x目镜下，沿所观察的细静脉，计数 5个视野内，沿细静脉左右不超过 100微米的范围内的肥大细胞，用脱颗粒的肥大细胞 /计数的肥大细胞表示肥大细胞脱颗粒率。 1.12 血浆血炎性因子的测定各组大鼠连续微循环观察结束后，腹主动脉取血，肝素抗凝（20 unit/ml全血），全血离心取血浆，炎性因子 TNF— ct， IL-6 和 INF— γ 用流式细胞仪蛋白分析检测试剂盒（BD Biosciences Pharmingen, USA) 进行测定。在 50ul血浆样本或标准品中加入 50ul捕获微球，室温避光孵育 1小时后加入 50ul PE标记的检测抗体，室温避光孵育 2小时，形成"三明治" 夹心复合物。孵育完毕后，每管加 lml洗涤缓冲液（BD Biosciences Pharmingen, USA) 进行洗涤。洗涤后上流式细胞仪 (FACS Calibur, B.D.Co, USA)检测平均荧光强度，用 BD Cytometric Bead Array分析软件进行结果处理。

1.13 统计分析

数据均以;^ ± SE表示， N=6，用 SPSS 11.0数理统计软件进行 F检验，设定 P < 0.05的差异有显著意义。

2.结果

丹酚总酸、三七总皂苷、丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍对 LPS诱导的大鼠肠系膜细静脉管径的影响

表 1表示正常对照组、 LPS组、 LPS+丹酚总酸组、 LPS+三七总皂苷组、 LPS组 +丹酚总酸 7:三七总皂苷 3组大鼠肠系膜血管经的连续变化。在观察开始和观察的 60分钟内，各组大鼠的肠系膜细静脉管径没有显著的变化。

丹酚总酸、三七总皂苷、丹酚总酸 7:三七总皂苷 3对 LPS引起的细静脉血流速的影响表 2表示正常对照组、 LPS组、 LPS+丹酚总酸组、 LPS+三七总皂苷组、 LPS+丹酚总酸 7:三七总皂苷 3组大鼠肠系膜血流速的连续变化。正常组在观察的 60分钟之内红细胞流速没有显著变化。模型组 LPS滴注 30分钟后红细胞流速开始显著降低。丹酚总酸、三七总皂苷以及丹酚总酸 7:三七总皂苷 3在观察 60分钟内细静脉红细胞流速没有显著变化。

丹酚总酸、三七总皂苷、丹酚总酸 7:三七总皂苷 3对 LPS引起的细静脉剪切力的影响。表 3表示正常对照组、 LPS组、 LPS+丹酚总酸组、 LPS+三七总皂苷组、 LPS+丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍组大鼠肠系膜微静脉剪切力的连续变化。正常组大鼠肠系膜微静脉剪切力在本观察期间内切变率没有显著变化。而 LPS滴注 30分钟后，大鼠肠系膜微静脉切变率开始显著降低（P < 0.05 )，并限持续到 60分钟。丹酚总酸、三七总皂苷以及丹酚总酸 7:三七总皂苷 3在观察 60分钟内的剪切力没有显著变化。表 1

Time after LPS infusion (min)

Groups

10 20 30 40 50 00 ►

Control 3328 220 39.55 2.77 39.70 2.75 39.61 2.65 39.23 2.49 33.77 2.51 39.92 2.34

LPS 39.83 2.82 2S0 40.09 2.39 3999 242 39?7 3.05 40.10 ±2E6 39. 4 3.1S

LP& TSA 1.53 3S .95 1.36 37.42 1.52 37.% 1.23 38.83 1.52 38.70 1.44 39.31 1.52

LP& PNS 37.21 39.51 3.08 40.01 40.46 40.01 3.46 42.4S

LP& TP

43.71 2.04 44.22 2.43 Φ .94 4541 244 4586 2.42 47.30 1.79 47.66 2.39

(7:3)

2

Time after LPS infusion Cmin)

0 10 20 30 40 50

Control 1.92t0.43 1S7±0:34 2.01 ±0.27 2.22±0.30 1.93t0.17 2.01±0.21 2£i2±027

LPS l.S¾0.14 1^2±0.17 1.52±0.12 1.41 ±0.09 Ψ 1.41 ±009 Ψ 1.35t0.11 Φ 130±0.11 Ψ

LPS+TSA 2.35±0.70 1_56±031 1.44±0.27 1.33±032 1.4Qt0.41 124±032

LP^PNS 2.Q5±0.33 2.01±0.37 1 ±0.44 1.9St0.3S 1.71±031 1.6ftt0.40

LPS+TP 2.12t0.7S 1.45t0.21

(7:3)

p<0.05 vs Control group 表 3

Time after LPS infusion C min )

Groups

0 10 20 30 40 50 00

Control 0.78 0.15 0.79 0.11 0J80 0.78 0.8¾0.93 0.79 0)62 0.85 0.12 0S0 0S8

LPS IIS0 0.59 0.66 0.72 0 64 0.42 0.6Qt0.46 O.ffl 0. ψ 0. 0.49 Ψ 0.55 0.54 ψ

LPS+ΤΞΑ 1.4S±0.37 1.1&0.24 0.9Qt0.14 0.7fit0.12 i.76t0.13 0.80±0.21 0 67±015

LPS+P S 1.35 0.22 1.20 0.24 1 J09 022 1.03t0.15 0.17 1.11 0.26 099 021

LPS+ΊΡ 1.40±0.59 1.31±0.60 1.11±0.57 1.05t0.57 0.98±0.55 0.99±0.43 0S9±O37

* p<0.05 vs Control group

附图说明

丹酚总酸、三七总皂苷、丹酚总酸与三七总皂苷各种配伍对 LPS体外诱导的粒细胞粘附分子 CDllb和 CD18表达的影响。

图 1表示丹酚总酸、三七总皂苷、丹酚总酸和三七总皂苷各种配伍对 LPS体外诱导血粒细胞粘附分子 CDllb表达的影响。各实验组 CDllb的阳性细胞率没有明显的差异（数据未显示）。对照组的 CDllb平均荧光强度为 94.1±2.8 LPS刺激后， CDllb平均荧光强度较显著升高至 190.8±4.9。丹酚总酸 (0.5 mg/ml)可以显著地抑制 LPS诱导的粒细胞粘附分子 CDllb 的表达，而三七总皂苷在浓度为 0.5 mg/ml时，对 LPS诱导 CDllb的表达没有明显的抑制作用。丹酚总酸和三七总皂苷在 1 ; 9-6 4的比例范围内， 0.5 mg/ml终浓度时，对 LPS诱导的粒细胞粘附分子 CDllb的表达没有抑制作用，但是，从丹酚总酸和三七总皂苷从 7: 3开始到 9: 1的范围内，都可以显著地抑制 LPS诱导的粒细胞粘附分子 CDllb的表达（P < 0.05 )。既在 0.5 mg/ml终浓度时，丹酚总酸 7:三七总皂苷 3是抑制 LPS诱导的粒细胞粘附分子 CDllb 的表达的起效比例。

图 2表示丹酚总酸、三七总皂苷、丹酚总酸和三七总皂苷各种配伍对 LPS体外诱导血粒细胞粘附分子 CD18表达的影响。各实验组 CD18的阳性细胞率没有明显的差异（数据没显示）。正常对照组 CD18平均荧光强度为 91.5±5.0 LPS刺激后， CD18平均荧光强度显著地升高至 160.6±3.4。丹酚总酸的 0.5 mg/ml浓度时可以显著地抑制 LPS诱导的粒细胞粘附分子 CD18的表达，而三七总皂苷对 LPS诱导 CD18的表达没有明显的抑制作用。丹酚总酸和三七总皂苷在 1 ; 9-6： 4的比例范围内， 0.5 mg/ml终浓度时，对 LPS诱导的粒细胞粘附分子 CD18的表达没有抑制作用，但是，从丹酚总酸和三七总皂苷从 7: 3开始到 9: 1的范围内，都可以显著地抑制 LPS诱导的粒细胞粘附分子 CD18的表达（P < 0.05 )。既在 0.5 mg/ml终浓度时，丹酚总酸 7: 三七总皂苷 3是抑制 LPS诱导的粒细胞粘附分子 CD18的表达的起效比例。

丹酚总酸、三七总皂苷、丹酚总酸 7:三七总皂苷 3对 LPS引起的白细胞与血管壁粘附的影响。

图 3表示正常对照组、 LPS组、 LPS+丹酚总酸组、 LPS+三七总皂苷组、 LPS+丹酚总酸

7:三七总皂苷 3配伍组大鼠白细胞与血管壁粘附的连续变化。正常组在观察 60分钟时白细胞粘附数仅有轻微的上升。 LPS组在观察 20分钟时白细胞粘附数显著升高至 5.0±0.8/200 μηι, 60分钟时达到 12.7 ± 1.4 /200 μηι。丹酚总酸组，三七总皂苷组、丹酚总酸 7:三七总皂苷 3在 LPS组滴注 20分时的白细胞黏附数量与 LPS组相比没有显著地差异，但是，在 LPS滴注 20 分时开始给予丹酚总酸 20分（既 LPS连续滴加 40分）时，开始显著地抑制白细胞与血管壁的粘附。三七总皂苷在 LPS滴注 20分时开始滴入的 40分（既 LPS连续滴加 60分）时，开始显著地抑制白细胞与血管壁的粘附，而丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍在在 LPS滴注 20分时开始给予丹酚总酸 20分（既 LPS连续滴加 40分时）开始显著地抑制白细胞与血管壁的粘附。

丹酚总酸，三七总皂苷、丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍对 LPS诱导大鼠细静脉管壁 DHR 荧光强度的影响。

图 4表示正常对照组、 LPS组、 LPS+丹酚总酸组、 LPS+三七总皂苷组、 LPS+丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍组大鼠细静脉管壁 DHR荧光强度的动态变化的图象。正常对照组在本观察期间内大鼠细静脉管壁 DHR荧光强度没有显著的变化。 LPS连续递滴注 20分和 60分时，可以观察大鼠细静脉管壁 DHR荧光强度增加。 LPS滴注 20分时开始滴入丹酚总酸组大鼠，在 60分时，大鼠肠系膜细静脉血管壁 DHR的荧光强度明显减弱。 LPS滴注 20分时开始滴入三七总皂苷组大鼠，在 60分时，细静脉血管壁 DHR的荧光强度没有减弱。 LPS滴注 20分时开始滴入丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍，在 60分时，细静脉血管壁 DHR的荧光强度明显减弱。

图 5表示正常对照组、 LPS组、 LPS+丹酚总酸组、 LPS+三七总皂苷组、 LPS+丹酚总酸

7:三七总皂苷 3配伍组大鼠细静脉管壁 DHR荧光强度的动态变化。 LPS连续递滴注 20分开始滴入丹酚总酸或丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍 40分（既 LPS连续滴加 60分）时，显著地抑制了细静脉血管壁 DHR的荧光强度。而，在 LPS滴注 20分时开始滴入三七总皂苷 40分 (既 LPS连续滴加 60分时）后，仍没显著地细静脉血管壁 DHR的荧光强度。

丹酚总酸，三七总皂苷及丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍对 LPS诱导肥大细胞脱颗粒的影响。

图 6表示正常对照组、 LPS组、 LPS+丹酚总酸组、 LPS+三七总皂苷组、 LPS+丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍组大鼠细静脉周围肥大细胞脱颗粒的变化。在 60分钟观察结束时，正常对照组的肥大细胞脱颗粒率仅为 23.91%， LPS组显著增加到 52.05%。丹酚总酸对肥大细胞脱颗粒没有显著的抑制作用。三七总皂苷和丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍均能明显地抑制 LPS 引发的肥大细胞脱颗粒。

丹酚总酸，三七总皂苷及丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍对 LPS诱导的血清炎性因子表达的影响。

图 7， 8， 9表示正常对照组、 LPS组、 LPS+丹酚总酸组、 LPS+三七总皂苷组、 LPS+丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍组大鼠血清炎性因子 TNF c IL— 6和 INF γ的变化。正常对照组大鼠血浆 TNF-a， IL-6禾卩 INF— γ的浓度分别为 17.68±2.64， 22.01±4.60禾卩 1.91±0.10 ( ng/L ) o LPS 刺激 60 分钟后， TNF-a， IL 6 和 INF— γ 的浓度分别显著增加上升至 254.22±64.1 , 647.83±182.80和 2.63±0.11 (ng/L)。丹酚总酸、三七总皂苷、丹酚总酸 7:三七总皂苷 3配伍在 LPS刺激 20分后给药可以显著地抑制 IL-6和 INF-γ的升高，而对 LPS诱导的 TNF-α的释放没有显著的抑制作用。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例 1

片剂

【处方】三七总皂苷 100g 硫酸钙 150g 微晶纤维素 50g

微粉硅胶 3g 硬脂酸镁 1. 5g

【制法】取原、辅料分别过 100 目筛；取三七总皂苷、硫酸钙、微晶纤维素，混匀，用 60 %乙醇适量作为粘合剂制软材，过 20 目筛制颗粒， 60 °C干燥，取出，过 30 目筛整粒，加入微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成 1000片，即得。

实施例 2

【处方】丹酚总酸 75g 硫酸钙 1 12_g 微晶纤维素 37g

微粉硅胶 2. 3g 硬脂酸镁 1. l g 【制法】取原、辅料分别过 100 目筛；取丹酚总酸、硫酸钙、微晶纤维素，混匀，用 60 %乙醇适量作为粘合剂制软材，过 20 目筛制颗粒， 60 °C干燥，取出，过 30 目筛整粒，加入适量微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成 1000片，即得。

实施例 3

【处方】丹酚总酸 70g 三七总皂苷 30g 硫酸钙 200g 微晶纤维素 66g 微粉硅胶 4g 硬脂酸镁 2g

【制法】取原、辅料分别过 100 目筛；取丹酚总酸，三七总皂苷、硫酸钙、微晶纤维素，混匀，用 60 %乙醇适量作为粘合剂制软材，过 20 目筛制颗粒， 60 °C干燥，取出，过 30 目筛整粒，加入适量微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成 1000片，即得。实施例 4

胶囊

取丹酚总酸 80g 三七总皂苷 20g，加入适量淀粉，硬脂酸镁等辅料，制粒，整粒，装入 1 号胶囊，即得。

实施例 5

口服液

取丹酚总酸 90g 三七总皂苷 10g，加入适量蔗糖，防腐剂，加水到 1000ml , 分装成 10ml 一支，即得口服液。

实施例 6

颗粒剂

取丹酚总酸 50g，加入适量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分装，即得。

实施例 7

注射剂

丹酚总酸 50g加水溶解，另氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯加热水溶解，混匀，调

pH值。注射用水稀释至 1000ml, 用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，即得。

Claims

权利要求

1、丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍在制备一种治疗败血症的药物中的应用。

2、权利要求 1的应用，其特征在于，所述丹酚总酸和三七总皂苷的配伍是丹酚总酸和三七总皂苷以重量比 1-9: 1-9的比例混合。

3、权利要求 1的应用，其特征在于，所述丹酚总酸和三七总皂苷的配伍是丹酚总酸和三七总皂苷以重量比 7: 3的比例混合。

4、权利要求 1的应用，其特征在于，所述丹酚总酸和三七总皂苷的配伍是丹酚总酸和三七总皂苷以重量比 8: 2的比例混合。

5、权利要求 1的应用，其特征在于，所述丹酚总酸和三七总皂苷的配伍是丹酚总酸和三七总皂苷以重量比 9: 1的比例混合。

6、权利要求 1的应用，其特征在于，所述败血症是致病菌或条件致病菌侵入血循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的急性全身性感染。

7、权利要求 1的应用，其特征在于，所述败血症引发微循环障碍，该微循环障碍是由脂多糖的过度释放造成的系统性炎症反应。

8、权利要求 1的应用，其特征在于，所述丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍制备的药物是药物组合物。

9、权利要求 8的应用，其特征在于，所述药物组合物，以丹酚总酸和三七总皂苷及其配伍作为药物活性成分，同时含有药物可接受的载体，其中丹酚总酸和三七总皂苷及其