CN102028828A - 一种治疗前列腺增生、尿闭的药物组合物及检测方法 - Google Patents

Abstract

一种治疗前列腺增生、尿闭的药物组合物及检测方法。组成为：丹参、泽兰、桃仁、红花、赤芍、白芷、香橼、泽泻、王不留行、败酱草、川楝子、乌药、黄柏组成，制备方法为：取上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成临床接受的制剂。本发明采用高效液相色谱法对盐酸小檗碱进行含量测定。本发明药物组合物用于治疗前列腺增生、尿闭具备很好的疗效。

Description

一种治疗前列腺增生、尿闭的药物组合物及检测方法

本发明为分案申请，原案申请号为200710064063.3，原案申请日为2007年2月26日，原案名称为：一种治疗前列腺增生、尿闭的药物组合物及制备方法。

发明领域

本发明涉及一种药物组合物及检测方法，特别涉及一种治疗前列腺增生、尿闭的药物组合物及检测方法。

背景技术

前列腺增生又名前列腺肥大，多发生于50岁以上的老年人。据欧美等国统计，在老年男性中其发病率高达80％以上；国内报道较低，但也达50％以上。由于前列腺恰好位于膀胱出口处，围绕着尿道的特殊位置，一旦发生增生，便会从四面八方压迫尿道，使膀胱内的尿液排出受阻，引起泌尿系统的一系列病变，主要引起尿道的机械性梗阻。病变发展至晚期由于膀胱代偿功能衰竭，膀胱残余尿越来越多，使膀胱内压增高引起输尿管扩张和肾积水，使肾功能受损，并发肾积水或尿毒症，后果极其严重。

前列腺增生的治疗主要依靠药物和手术，手术虽然是最彻底的治疗手段，但对于轻度增生以及年龄较大而不能耐受手术者，药物仍是理想的治疗手段。目前治疗前列腺增生症的药物大致可分为以下几类：α-受体阻滞剂，如酚苄明、盐酸坦索罗辛等；5-α还原酶抑制剂，如保列治、爱普列特等；中草药复方制剂。α-受体阻滞剂可缓解梗阻，改善症状，但副作用较多，使用患者约30％出现体位性低血压、心动过速、鼻塞等副作用，且长期使用会出现耐受现象，费用也较昂贵；5-α还原酶抑制剂作用较为持久，但费用较高，长期疗效有待进一步观察。

中药复方制剂则根据中医理论，针对其疾病机理从根本上治疗前列腺增生，具有疗效确切、使用方便、无明显毒副作用等优势，更适宜在临床上推广应用。

发明内容

本发明目的在于提供一种药物组合物；本发明另一目的在于提供一种治疗前列腺增生的药物组合物；本发明的第三个目的在于提供该药物组合物的制备方法；本发明的第四个目的在于提供该药物组合物的质量控制方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现：

本发明药物组合物的原料药组成为：丹参100-200重量份、泽兰20-80重量份、桃仁20-80重量份、红花100-200重量份、赤芍20-80重量份、白芷50-150重量份、香橼50-150重量份、泽泻100-200重量份、王不留行100-200重量份、败酱草200-300重量份、川楝子50-150重量份、乌药50-150重量份、黄柏(盐制)100-200重量份。

本发明药物组合物的原料药组成还可以为：丹参100-200重量份、泽兰20-80重量份、桃仁20-80重量份、红花100-200重量份、赤芍20-80重量份、白芷50-150重量份、陈皮50-150重量份、泽泻100-200重量份、王不留行100-200重量份、败酱草200-300重量份、川楝子50-150重量份、小茴香(盐制)50-150重量份、黄柏(盐制)100-200重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：丹参100-130重量份、泽兰60-80重量份、桃仁20-40重量份、红花160-200重量份、赤芍20-40重量份、白芷120-150重量份、陈皮50-80重量份、泽泻160-200重量份、王不留行100-130重量份、败酱草260-300重量份、川楝子50-80重量份、小茴香(盐制)120-150重量份、黄柏(盐制)100-130重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：丹参115重量份、泽兰70重量份、桃仁30重量份、红花180重量份、赤芍30重量份、白芷135重量份、陈皮75重量份、泽泻180重量份、王不留行115重量份、败酱草280重量份、川楝子75重量份、小茴香(盐制)135重量份、黄柏(盐制)115重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：丹参125重量份、泽兰65重量份、桃仁35重量份、红花165重量份、赤芍35重量份、白芷125重量份、陈皮75重量份、泽泻165重量份、王不留行125重量份、败酱草265重量份、川楝子75重量份、小茴香(盐制)125重量份、黄柏(盐制)125重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：丹参160-200重量份、泽兰20-40重量份、桃仁60-80重量份、红花100-130重量份、赤芍60-80重量份、白芷50-80重量份、陈皮120-150重量份、泽泻100-130重量份、王不留行160-200重量份、败酱草200-230重量份、川楝子120-150重量份、小茴香(盐制)50-80重量份、黄柏(盐制)160-200重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：丹参180重量份、泽兰30重量份、桃仁70重量份、红花115重量份、赤芍70重量份、白芷75重量份、陈皮135重量份、泽泻115重量份、王不留行180重量份、败酱草215重量份、川楝子135重量份、小茴香(盐制)75重量份、黄柏(盐制)180重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：丹参165重量份、泽兰35重量份、桃仁65重量份、红花125重量份、赤芍65重量份、白芷75重量份、陈皮125重量份、泽泻125重量份、王不留行165重量份、败酱草225重量份、川楝子125重量份、小茴香(盐制)75重量份、黄柏(盐制)165重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：丹参140-150重量份、泽兰45-55重量份、桃仁45-55重量份、红花140-150重量份、赤芍45-55重量份、白芷90-110重量份、陈皮90-110重量份、泽泻140-150重量份、王不留行140-150重量份、败酱草235-255重量份、川楝子90-110重量份、小茴香(盐制)90-110重量份、黄柏(盐制)140-150重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：丹参144重量份、泽兰48重量份、桃仁48重量份、红花144重量份、赤芍48重量份、白芷96重量份、陈皮96重量份、泽泻144重量份、王不留行144重量份、败酱草240重量份、川楝子96重量份、小茴香(盐制)96重量份、黄柏(盐制)144重量份。

本发明药物组合物制备方法为：以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉Ⅰ；丹参、川楝子加4-8倍量50-70％乙醇回流提取1-3次，每次1-3小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加8-12倍量水提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液，即药液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮1-3次，每次加4-10倍量水煎煮1-4小时，合并煎液，滤过，滤液与药液合并，浓缩成50℃相对密度为1.20～1.40的浸膏，干燥，粉碎成细粉Ⅱ，细粉Ⅱ加入细粉Ⅰ混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的制剂。

本发明药物组合物制备方法优选为：以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉Ⅰ；丹参、川楝子加6倍量60％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加10倍量水提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液，即药液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮2次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与药液合并，浓缩成50℃相对密度为1.28～1.30的浸膏，干燥，粉碎成细粉Ⅱ，细粉Ⅱ加入细粉Ⅰ混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的口服固体制剂。

本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，50-90∶10-50比例的0.05mol/L NaH2PO4缓冲溶液(H₃PO₄调pH为3.0±0.5)-乙腈为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备：精密称取相当于生药含量1/600-1/800的制剂内容物精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物每单位制剂含黄柏以盐酸小檗碱C₂₀H₁₈ClNO₄计，不得少于0.10mg；

鉴别方法：A、取相当于生药含量1/100-1/300的制剂内容物，除去糖衣，研细，加乙醚15ml，振摇提取5分钟，滤过；取滤液5ml，挥干，残渣加1％香草醛硫酸溶液1滴，液滴边缘呈紫色；另取滤液5ml，挥干，残渣加冰醋酸少许，使溶解，再加硫酸1滴，微热，溶液显紫棕色；

B、取相当于生药含量1/100-1/300的制剂内容物，除去糖衣，研细，加乙醇10ml，振摇提取10分钟，滤过，滤液加镁粉少许及盐酸数滴，置水浴上加热，溶液显红色；

C、取本发明药物组合物制剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取相当于生药含量1/70的粉末，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于100-120目，5g，内径10-15mm的中性氧化铝柱上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品4μl、供试品8μl，分别点样于同一硅胶G板上，以5-25∶5-15∶1-3比例的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

D、另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品，鉴别方法C中供试品各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以20-60∶1-10∶5-15∶0.1-0.3比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

E、取本发明药物组合物制剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取相当于生药含量1/3500-1/700的粉末，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点样于同一硅胶G板上，以4-8∶1-5∶0.5-2.5∶0.5-2.5∶0.1-1.0比例的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，73∶27比例的0.05mol/L NaH₂PO₄缓冲溶液(H₃PO₄调pH为3.0±0.5)-乙腈为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备：精密称取相当于生药含量1/700的制剂内容物，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物每单位制剂含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计，不得少于0.10mg；

鉴别方法：A、取相当于生药含量1/200的制剂内容物，除去糖衣，研细，加乙醚15ml，振摇提取5分钟，滤过；取滤液5ml，挥干，残渣加1％香草醛硫酸溶液1滴，液滴边缘呈紫色；另取滤液5ml，挥干，残渣加冰醋酸少许，使溶解，再加硫酸1滴，微热，溶液显紫棕色；

B、取相当于生药含量1/200的制剂内容物，除去糖衣，研细，加乙醇10ml，振摇提取10分钟，滤过，滤液加镁粉少许及盐酸数滴，置水浴上加热，溶液显红色；

C、取本发明药物组合物制剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取相当于生药含量1/70的粉末，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于100-120目，5g，内径10-15mm的中性氧化铝柱上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品4μl、供试品8μl，分别点样于同一硅胶G板上，以13∶7∶2比例的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

D、另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品，鉴别方法C中供试品各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以40∶5∶10∶0.2比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

E、取本发明药物组合物制剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取相当于生药含量3/3500的粉末，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点样于同一硅胶G板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5比例的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明药物组合物组方将古方与现代中医药理论有机结合，方中丹参、红花、桃仁、赤芍，清热凉血、活血通经、祛瘀止痛；白芷、黄柏、泽泻，清热燥湿、利水通淋；香橼、乌药，行气止痛；三组药相配，理气活血，通经散结，用于治疗前列腺增生症，及其引起的夜尿次数骤增、尿急、尿痛、血尿及发热等症状具有很好的效果。本发明药物组合物经实验研究证实：可对尿道平滑肌、前列腺平滑肌具有收缩作用，促使前列腺肥大的病理模型恢复正常；可阻断双氢睾酮受体的作用，以及抑制5a-还原酶和3-羟基脱氢酶的活性，从而阻止体内睾酮转化为双氢睾酮，抑制前列腺体增长；可清热凉血、活血通经、祛瘀止痛，改善前列腺局部的血液循环，有利于病变组织炎性分泌物的引流，消除症状反应；可抗炎，抗感染，促进机体代谢及造血，增强机体免疫功能。

本发明组合物相比现有制剂前列舒丸具备很好的药效，并且本发明所述的范围在可以实现本发明药效的同时，经过筛选，意外的发现，在组合物的某些范围内，具备更为突出的药效。

本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品相比其他方法测定的产品在药效上表现的更为稳定。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1  药物对前列腺增生的临床疗效

药物组Ⅰ(丹参115g、泽兰70g、桃仁30g、红花180g、赤芍30g、白芷135g、陈皮75g、泽泻180g、王不留行115g、败酱草280g、川楝子75g、小茴香(盐制)135g、黄柏(盐制)115g)

药物组Ⅱ(丹参125g、泽兰65g、桃仁35g、红花165g、赤芍35g、白芷125g、陈皮75g、泽泻165g、王不留行125g、败酱草265g、川楝子75g、小茴香(盐制)125g、黄柏(盐制)125g)

药物组Ⅲ(丹参144g、泽兰48g、桃仁48g、红花144g、赤芍48g、白芷96g、陈皮96g、泽泻144g、王不留行144g、败酱草240g、川楝子96g、小茴香(盐制)96g、黄柏(盐制)144g)。

按照药物组Ⅰ、药物组Ⅱ及药物组Ⅲ处方比例，按照优选工艺制备本发明药物制剂，比较各组药物治疗前列前列腺增生的临床疗效，选取经患前列腺增生的患者120例，随机分为3组，经比较各组间病情分布无显著性差异，分别服用以上各组本发明药物一个疗程，比较病情改善情况，结果见表1。

表1  本发明药物对前列腺增生症状的临床疗效

注：^*与药物组Ⅲ相比P＜0.05

结果表明：本发明药物组Ⅲ与其它组相比较有着显著差异(P＜0.05)，本发明药物组Ⅰ、Ⅱ治疗前列腺增生效果优于Ⅲ组。

实验例2  本发明组Ⅳ药物制剂与前列舒丸临床比较试验

药物组Ⅳ(丹参144g、泽兰48g、桃仁48g、红花144g、赤芍48g、白芷96g、香橼96g、泽泻144g、王不留行144g、败酱草240g、川楝子96g、乌药96g、黄柏(盐制)144g)，按照实施例的方法制成

对照组：前列舒丸，

本组病人共计204例，其中慢性前列腺炎试验组61人，对照组60例，前裂腺增生试验组43例，对照组40例，所有病例均为门诊病人，一经确诊即随机服药观察。

(一)年龄分布

1、慢性前列腺炎两组年龄分布(见表2)

表2  慢性前列腺炎两组患者年龄分布

经统计学处理p＜0.05，两组年龄差异无显著意义。

2、前列腺增生患者，年龄分布(见表3)

见表3  前列腺增生症两组患者年龄分布

经统计学处理p＜0.05，两组年龄差异无显著意义。

(二)病程分布(见表2)

表4  两组患者病程分布

经统计学处理p＜0.05，两组年龄差异无显著意义。

(三)两组主要临床资料分析

表5  前列腺炎两组患者主要临床资料分析

经统计学处理P＞0.05，两组资料分布差异无显著意义。

表6  前列腺增生 两组患者主要临床资料分析

经统计学处理，除试验组前列腺增生症尿痛症状病情程度重于对照组外(P《0.01》，其余症状轻重分布差异无显著性意义(P＞0.05)。

(四)两组病情轻重比较(见表4)

表7  两组病情轻重比较

统计学处理P＞0.05，两组病情轻重分布差异无显著意义。

综合上述临床资料，慢性前列腺炎和前列腺增生症两组一般情况相比，均分布均衡[除实验组前列腺增生症尿痛症状病情程度重于对照组外(P＜0.01)]，经统计学处理P＞0.05，差异无显著意义，具有可比性。

三、试验方法  采用随机表分组

(一)用药方法

(1)试验组：口服本发明药物；

(2)对照组：口服前列舒丸。

试验期间停用其他治疗前列腺炎或前列腺增生症的药物与疗法

(二)疗程：慢性前列腺炎服药3周为一疗程，即结束观察，前列腺增生症患者服用两个疗程后判定疗效。

(三)观测指标

1、安全性观测

(1)一般体格检查项目；

(2)血尿常规化验；

(3)肝、肾功能检查。

2、疗效性观测

(1)中医症状、舌、脉变化观察；

(2)前列腺直肠指诊；

(3)前列腺液常规检测或B超观测前列腺大小与残余尿量情况。

四、试验结果

(一)临床疗效评定标准

1、慢性前列腺炎临床效果评定标准

(1)临床痊愈：自觉症状消失，前列腺指诊质地恢复正常或改善，压痛消失，前列腺液镜检，连续2次恢复正常。

(2)显效：症状消失，前列腺指诊质地改善，压痛明显减轻，前列腺液镜检白细胞正常。

(3)有效：症状和前列腺质地改善，压痛减轻，但前列腺液镜检白细胞未恢复正常。

(4)无效：症状、体征、前列腺指诊无改善，前列腺镜检无改善。

2、前列腺增生症临床效果评定标准

(1)临床痊愈：主症消失、症状总积分≤2分；膀胱残余尿量小于20ml，停药后无复发，前列腺体大小、质地、形态均恢复正常。

(2)显效：主证明显减轻，症状总积分下降≥2/3；残余尿量仍在20～30ml；前列腺大小、质地、形态接近正常。

(3)有效：主症改善，症状总积分下降≥1/3；但残余尿量在40～60ml；前列腺体大小、质地、形态未恢复正常。

(4)无效：症状及体征无改善或反加重者。

(二)结果

1、总疗效见表5

表5  两组疗效

经统计学处理慢性前列腺炎组P＜0.001，差异有极显著意义。前列腺增生症组P＜0.01，差异有显著意义。说明本发明药物与对照药物比较，其临床效果有极显著性差异。

2、试验组的两组不同病情疗效比较  见表6

表6  试验组的两组不同病情疗效比较

试验组的两组不同病情疗效相比，经统计学处理，P＞0.05差异无显著意义。

3、两组主要临床资料改善分析(表7)

表7-1  前列腺炎主要临床资料改善分析

两组主要症状改善情况分析，经统计学处理，试验组改善情况明显优于对照组，P＜0.05，差异有显著性意义。

表7-2  前列腺增生症两组主要临床资料改善分析

两组主要症状改善分析，经统计学处理，除尿痛、B超改善情况两组差异无显著意义P＞0.05，其余症状差异均有显著意义(P＜0.05，P＜0.01)。说明本发明药物在临床症状改善方面优于对照药物组。

实验例3  质量标准

本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，现将部分试验披露如下：

1、陈皮的薄层鉴别方法

①本发明鉴别方法C中样品溶液提取方法的优选：

取相当于原药材7.5g的本发明药物制剂6份，分别加入50ml甲醇，分为2组，采用超声提取和回流提取方法提取30min，测定两组所提取橙皮苷含量，结果见下表：

提取方法	超声提取	回流提取
			橙皮苷含量(mg/g)	0.856	0.513

从上表可以看出，超声提取后样品溶液中橙皮苷含量显著高于回流提取。

②本发明鉴别方法C中样品溶液超声提取时间的优选：

取相当于原料药7.5g的本发明药物制剂5份，用甲醇超声提取不同时间，测定提取液中橙皮苷含量，结果见下表：

提取时间(min)	10	20	30	40	60
						橙皮苷含量(mg/g)	0.462	0.702	0.859	0.861	0.860

由上表可以看出，超声提取30min就可以将其中的橙皮苷提取完全，所以本实验优选提取时间为30min。

优选的供试品溶液的配制方法为：称取本发明药物制剂5g，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml。弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液

③本发明鉴别方法C中展开剂配比的优选：

取供试品8μl共5份，以氯仿-甲醇-水配比为(7∶5∶2)、(13∶7∶2)、(15∶8∶2)、(20∶10∶3)、(25∶12∶2)的下层溶液为展开剂，分别点样于硅胶G板上，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检视。观察各薄层版上供试品溶液展开的效果，结果见下表：

展开剂配比	7∶5∶2	13∶7∶2	15∶8∶2	20∶10∶3	25∶12∶2
						展开效果	差	好	较差	差	很差

从上表可以看出展开剂配比为13∶7∶2时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好、显色不清晰等现象。

④本发明鉴别方法C中样品溶液点样量的优选：

取供试品溶液2μl、4μl、6μl、8μl，对照品溶液4μl，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检视，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

从上表可以看出供试品点样量在8μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

⑤阴性对照试验

取缺陈皮的阴性样品，照上述鉴别方法C中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

2、赤芍的薄层鉴别方法

赤芍薄层鉴别中供试品溶液的制备方法与鉴别C相同.对本发明药品中赤芍的鉴别做了以下的研究：

①本发明鉴别方法D中展开剂配比的优选：

取鉴别C中供试品各5μl共4份，分别点样于硅胶G板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸配比为(20∶1∶5∶0.1)、(30∶5∶10∶0.1)、(40∶5∶10∶0.2)、(60∶10∶15∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。观察各薄层版上供试品溶液展开的效果，结果见下表：

展开剂配比	20∶1∶5∶0.1	30∶5∶10∶0.1	40∶5∶10∶0.2	60∶10∶15∶0.3
					展开效果	差	较差	好	差

从上表可以看出展开剂配比为40∶5∶10∶0.2时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好、显色不清晰等现象。

②本发明鉴别方法D中样品溶液点样量的优选：

取供试品溶液1μl、2μl、3μl、5μl，分别点样于硅胶G板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸配比为(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

从上表可以看出供试品点样量在5μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

③阴性对照试验

取缺赤芍的阴性样品，照上述鉴别方法D中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

3、黄柏的薄层鉴别方法

①本发明鉴别方法E中样品溶液超声提取时间的优选：

取相当于原料药7.5g的本发明药物制剂5份，用甲醇超声提取不同时间，测定提取液中橙皮苷含量，结果见下表：

提取时间(min)	1	3	5	7	10
						盐酸小檗碱含量(mg/g)	0.03	0.12	0.43	0.48	0.47

由上表可以看出，超声提取5min就可以将其中的盐酸小檗碱基本提取完全，所以本实验优选提取时间为5min。

优选的供试品溶液的配制方法为：称取本法发明药物制剂内容物0.3g，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。

②本发明鉴别方法E中展开剂配比的优选：

取供试品溶液1μl共4份，分别点样于硅胶G板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液配比为(4∶1∶0.5∶0.5∶0.1)、(6∶3∶1.0∶1.0∶0.5)、(6∶5∶1.0∶1.5∶0.5)、(6∶3∶2.0∶2.0∶1.0)为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。观察各薄层版上供试品溶液展开的效果，结果见下表：

从上表可以看出展开剂配比为13∶7∶2时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好、显色不清晰等现象。

③本发明鉴别方法E中样品溶液点样量的优选：

取供试品溶液0.2μl、0.5μl、0.7μl、1μl共4份，分别点样于硅胶G板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6∶3∶1.0∶1.0∶0.5)为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

点样量	0.2μl	0.5μl	0.7μl	1μl
					效果	供试品在相	供试品在相应	供试品在相应	供试品在相应对

从上表可以看出供试品点样量在1μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

④阴性对照试验

取缺黄柏的阴性样品，照上述鉴别方法E中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

4、盐酸小檗碱的含量测定

采用高效液相法测定本发明药物中的盐酸小檗碱的含量，以完善本发明的质量检测方法：

①流动相配比的优选：

分别以0.05mol/L NaH₂PO₄缓冲溶液(H₃PO₄调pH＝3.0±0.5)-乙腈配比为(60∶25)、(73∶27)、(80∶35)、(73∶27)为流动相，进行含量测定，通过比较高效液相色普图中，各峰的分离效果，来确定优选的流动相配比，结果如下：

流动相配比	60∶19	73∶27	80∶35	85∶43
					色谱图中各峰分离效果	很差	好	差	很差

从上表可以看出，流动相配比为73∶27时，供试品色谱图中各峰分离效果良好。

②含量测定方法的方法学考察

对本发明药物所采用的含量检测方法，从线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率等方面进行了相关方法学考察，具体结果如下：

(1)线性关系考察  取对照品溶液(10μg/ml)摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10、12μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线，表明盐酸小檗碱在20ng-120ng间呈线性关系，其回归方程为：

Area＝1.21984034*Amt-0.9256061(r＝0.99903)

(2)稳定性试验  对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表

(3)精密度试验  精密吸取供试品溶液10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表

(4)重现性试验  对同一批本发明药物的制剂进行5次测定，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表

(5)回收率试验  精密称取已知含量的本发明药物制剂0.25g再分别精密称取盐酸小檗碱对照品0.25mg，按供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：

从以上试验结果可以看出，本发明药物所采用的含量测定方法其线性关系、稳定性、精密度、重现性等均良好，能够有效控制本发明药物质量。

下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果

具体实施方式

实施例1

丹参115g、泽兰70g、桃仁30g、红花180g、赤芍30g、白芷135g、陈皮75g、泽泻180g、王不留行115g、败酱草280g、川楝子75g、小茴香(盐制)135g、黄柏(盐制)115g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成口服液。

实施例2

丹参125g、泽兰65g、桃仁35g、红花165g、赤芍35g、白芷125g、陈皮75g、泽泻165g、王不留行125g、败酱草265g、川楝子75g、小茴香(盐制)125g、黄柏(盐制)125g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成颗粒剂。

实施例3

丹参180g、泽兰30g、桃仁70g、红花115g、赤芍70g、白芷75g、陈皮135g、泽泻115g、王不留行180g、败酱草215g、川楝子135g、小茴香(盐制)75g、黄柏(盐制)180g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成颗粒剂。

实施例4

丹参165g、泽兰35g、桃仁65g、红花125g、赤芍65g、白芷75g、陈皮125g、泽泻125g、王不留行165g、败酱草225g、川楝子125g、小茴香(盐制)75g、黄柏(盐制)165g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成注射液。

实施例5

丹参144g、泽兰48g、桃仁48g、红花144g、赤芍48g、白芷96g、陈皮96g、泽泻144g、王不留行144g、败酱草240g、川楝子96g、小茴香(盐制)96g、黄柏(盐制)144g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成片剂。

实施例6

丹参144g、泽兰48g、桃仁48g、红花144g、赤芍48g、白芷96g、陈皮96g、泽泻144g、王不留行144g、败酱草240g、川楝子96g、小茴香(盐制)96g、黄柏(盐制)144g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成胶囊剂。

实施例7

丹参115g、泽兰70g、桃仁30g、红花180g、赤芍30g、白芷135g、陈皮75g、泽泻180g、王不留行115g、败酱草280g、川楝子75g、小茴香(盐制)135g、黄柏(盐制)115g

以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉Ⅰ；丹参、川楝子加6倍量60％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加10倍量水提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液，即药液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮2次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与药液合并，浓缩成50℃相对密度为1.29的浸膏，干燥，粉碎成细粉Ⅱ，细粉Ⅱ加入细粉Ⅰ混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的口服液。

实施例8

丹参125g、泽兰65g、桃仁35g、红花165g、赤芍35g、白芷125g、陈皮75g、泽泻165g、王不留行125g、败酱草265g、川楝子75g、小茴香(盐制)125g、黄柏(盐制)125g

以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉Ⅰ；丹参、川楝子加6倍量60％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加10倍量水提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液，即药液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮2次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与药液合并，浓缩成50℃相对密度为1.29的浸膏，干燥，粉碎成细粉Ⅱ，细粉Ⅱ加入细粉Ⅰ混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的颗粒剂。

实施例9

丹参180g、泽兰30g、桃仁70g、红花115g、赤芍70g、白芷75g、陈皮135g、泽泻115g、王不留行180g、败酱草215g、川楝子135g、小茴香(盐制)75g、黄柏(盐制)180g

以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉Ⅰ；丹参、川楝子加6倍量60％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加10倍量水提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液，即药液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮2次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与药液合并，浓缩成50℃相对密度为1.29的浸膏，干燥，粉碎成细粉Ⅱ，细粉Ⅱ加入细粉Ⅰ混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的丸剂。

实施例10

丹参165g、泽兰35g、桃仁65g、红花125g、赤芍65g、白芷75g、陈皮125g、泽泻125g、王不留行165g、败酱草225g、川楝子125g、小茴香(盐制)75g、黄柏(盐制)165g

以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉Ⅰ；丹参、川楝子加8倍量50％乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加10倍量水提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液，即药液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮3次，第一次加4倍量水煎煮4小时，第二次加4倍量水煎煮4小时，合并煎液，滤过，滤液与药液合并，浓缩成50℃相对密度为1.29的浸膏，干燥，粉碎成细粉Ⅱ，细粉Ⅱ加入细粉Ⅰ混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的片剂。

实施例11

丹参144g、泽兰48g、桃仁48g、红花144g、赤芍48g、白芷96g、陈皮96g、泽泻144g、王不留行144g、败酱草240g、川楝子96g、小茴香(盐制)96g、黄柏(盐制)144g

以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉Ⅰ；丹参、川楝子加4倍量70％乙醇回流提取1次，每次3小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加8倍量水提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液，即药液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮3次，每次加4倍量水煎煮4小时，合并煎液，滤过，滤液与药液合并，浓缩成50℃相对密度为1.25的浸膏，干燥，粉碎成细粉Ⅱ，细粉Ⅱ加入细粉Ⅰ混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的片剂。

实施例12

丹参144g、泽兰48g、桃仁48g、红花144g、赤芍48g、白芷96g、陈皮96g、泽泻144g、王不留行144g、败酱草240g、川楝子96g、小茴香(盐制)96g、黄柏(盐制)144g

以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉Ⅰ；丹参、川楝子加8倍量50％乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加12倍量水提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液，即药液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮1次，每次加10倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液与药液合并，浓缩成50℃相对密度为1.35，粉碎成细粉Ⅱ，细粉Ⅱ加入细粉Ⅰ混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的颗粒剂。

实施例13  本发明制剂的质量控制方法

取实施例2内容物进行含量测定：

含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，73∶27比例的0.05mol/L NaH2PO4缓冲溶液(H3PO4调pH为3.0±0.5)-乙腈为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备：精密称取本发明药物组合物颗粒剂.5g，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物每单位颗粒剂含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计，不得少于0.10mg。

实施例14  本发明制剂的质量控制方法

取实施例10进行鉴别：

鉴别方法：A、取本发明药物组合物片剂5片，除去糖衣，研细，加乙醚15ml，振摇提取5分钟，滤过；取滤液5ml，挥干，残渣加1％香草醛硫酸溶液1滴，液滴边缘呈紫色；另取滤液5ml，挥干，残渣加冰醋酸少许，使溶解，再加硫酸1滴，微热，溶液显紫棕色；

B、取本发明药物组合物片剂5片，除去糖衣，研细，加乙醇10ml，振摇提取10分钟，滤过，滤液加镁粉少许及盐酸数滴，置水浴上加热，溶液显红色；

C、取本发明药物组合物片剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于100-120目，5g，内径10-15mm的中性氧化铝柱上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品4μl、供试品8μl，分别点样于同一硅胶G板上，以13∶7∶2比例的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

D、另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品，鉴别方法C中供试品各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以40∶5∶10∶0.2比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

E、取本发明药物组合物片剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取粉末0.3g，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点样于同一硅胶G板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5比例的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例15  本发明制剂的质量控制方法

取实施例11内容物进行鉴别和含量测定：

含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，73∶27比例的0.05mol/L NaH2PO4缓冲溶液(H3PO4调pH为3.0±0.5)-乙腈为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备：精密称取本发明药物组合物片剂0.5g，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物每单位制剂含黄柏以盐酸小檗碱C20H18ClNO4计，不得少于0.10mg；

鉴别方法：A、取本发明药物组合物片剂5片，除去糖衣，研细，加乙醚15ml，振摇提取5分钟，滤过；取滤液5ml，挥干，残渣加1％香草醛硫酸溶液1滴，液滴边缘呈紫色；另取滤液5ml，挥干，残渣加冰醋酸少许，使溶解，再加硫酸1滴，微热，溶液显紫棕色；

B、取本发明药物组合物片剂5片，除去糖衣，研细，加乙醇10ml，振摇提取10分钟，滤过，滤液加镁粉少许及盐酸数滴，置水浴上加热，溶液显红色；

C、取本发明药物组合物片剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于100-120目，5g，内径10-15mm的中性氧化铝柱上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品4μl、供试品8μl，分别点样于同一硅胶G板上，以13∶7∶2比例的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

D、另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品，鉴别方法C中供试品各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以40∶5∶10∶0.2比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

E、取本发明药物组合物片剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取粉末0.3g，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点样于同一硅胶G板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5比例的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例16

丹参144g  泽兰48g  桃仁48g  红花144g  赤芍48g 白芷96g  陈皮96g  泽泻144g  王不留行144g  败酱240g  川楝子96g  小茴香(盐制)96g  黄柏(盐制)144g

以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子加6倍量60％乙醇回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加10倍量水提取挥发油至尽(约4小时)，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成相对密度为1.28～1.30(50℃)的浸膏，干燥，粉碎成细粉，加入泽泻、白芷细粉混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，压制成1000片，包糖衣，即得。

【鉴别】(1)取本品5片，除去糖衣，研细，加乙醚15ml，振摇提取5分钟，滤过；取滤液5ml，挥干，残渣加1％香草醛硫酸溶液1滴，液滴边缘呈紫色；另取滤液5ml，挥干，残渣加冰醋酸少许，使溶解，再加硫酸1滴，微热，溶液显紫棕色。

(2)取本品5片，除去糖衣，研细，加乙醇10ml，振摇提取10分钟，滤过，滤液加镁粉少许及盐酸数滴，置水浴上加热，溶液显红色。

(3)取本品适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml。弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品4μl、供试品8μl，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(4)另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取对照品，鉴别(3)中供试品各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(5)取本品适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取粉末0.3g，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点样于同一硅胶G板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.05mol/L NaH₂PO₄缓冲溶液(H₃PO₄调pH＝3.0±0.5)-乙腈(73∶27)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于1500。

对照品溶液的制备  精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液。

供试品溶液的制备  精密称取本品0.5g，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含黄柏以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₈ClNO₄)计，不得少于0.10mg。

实施例17

丹参115g、泽兰70g、桃仁30g、红花180g、赤芍30g、白芷135g、香橼75g、泽泻180g、王不留行115g、败酱草280g、川楝子75g、乌药135g、黄柏(盐制)115g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成口服液。

实施例18

丹参125g、泽兰65g、桃仁35g、红花165g、赤芍35g、白芷125g、香橼75g、泽泻165g、王不留行125g、败酱草265g、川楝子75g、乌药125g、黄柏(盐制)125g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成颗粒剂。

实施例19

丹参144g、泽兰48g、桃仁48g、红花144g、赤芍48g、白芷96g、香橼96g、泽泻144g、王不留行144g、败酱草240g、川楝子96g、乌药96g、黄柏(盐制)144g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成片剂。

Claims (6)

1.一种治疗前列腺增生、尿闭的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：丹参100-200重量份、泽兰20-80重量份、桃仁20-80重量份、红花100-200重量份、赤芍20-80重量份、白芷50-150重量份、香橼50-150重量份、泽泻100-200重量份、王不留行100-200重量份、败酱草200-300重量份、川楝子50-150重量份、乌药50-150重量份、黄柏(盐制)100-200重量份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

丹参115重量份、泽兰70重量份、桃仁30重量份、红花180重量份、赤芍30重量份、白芷135重量份、香橼75重量份、泽泻180重量份、王不留行115重量份、败酱草280重量份、川楝子75重量份、乌药135重量份、黄柏(盐制)115重量份。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

丹参144重量份、泽兰48重量份、桃仁48重量份、红花144重量份、赤芍48重量份、白芷96重量份、香橼96重量份、泽泻144重量份、王不留行144重量份、败酱草240重量份、川楝子96重量份、乌药96重量份、黄柏(盐制)144重量份。

4.如权利要求1所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，50-90∶10-50比例的0.05mol/L NaH2PO4缓冲溶液(H₃PO₄调pH为3.0±0.5)-乙腈为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备：精密称取相当于生药含量1/600-1/800的制剂内容物精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物每单位制剂含黄柏以盐酸小檗碱C₂₀H₁₈ClNO₄计，不得少于0.10mg；

鉴别方法：A、取相当于生药含量1/100-1/300的制剂内容物，除去糖衣，研细，加乙醚15ml，振摇提取5分钟，滤过；取滤液5ml，挥干，残渣加1％香草醛硫酸溶液1滴，液滴边缘呈紫色；另取滤液5ml，挥干，残渣加冰醋酸少许，使溶解，再加硫酸1滴，微热，溶液显紫棕色；

B、取相当于生药含量1/100-1/300的制剂内容物，除去糖衣，研细，加乙醇10ml，振摇提取10分钟，滤过，滤液加镁粉少许及盐酸数滴，置水浴上加热，溶液显红色；

C、取本发明药物组合物制剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取相当于生药含量1/50-1/80的粉末，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于100-120目，5g，内径10-15mm的中性氧化铝柱上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品4μl、供试品8μl，分别点样于同一硅胶G板上，以5-25∶5-15∶1-3比例的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

D、另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品，鉴别方法C中供试品各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以20-60∶1-10∶5-15∶0.1-0.3比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

E、取本发明药物组合物制剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取相当于生药含量1/3500-1/700的粉末，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点样于同一硅胶G板上，以4-8∶1-5∶0.5-2.5∶0.5-2.5∶0.1-1.0比例的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，73∶27比例的0.05mol/L NaH₂PO₄缓冲溶液(H₃PO₄调pH为3.0±0.5)-乙腈为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备：精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备：精密称取相当于生药含量1/700的制剂内容物，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物组合物每单位制剂含黄柏以盐酸小檗碱C₂₀H₁₈ClNO₄计，不得少于0.10mg；

鉴别方法：A、取相当于生药含量1/200的制剂内容物，除去糖衣，研细，加乙醚15ml，振摇提取5分钟，滤过；取滤液5ml，挥干，残渣加1％香草醛硫酸溶液1滴，液滴边缘呈紫色；另取滤液5ml，挥干，残渣加冰醋酸少许，使溶解，再加硫酸1滴，微热，溶液显紫棕色；

B、取相当于生药含量1/200的制剂内容物，除去糖衣，研细，加乙醇10ml，振摇提取10分钟，滤过，滤液加镁粉少许及盐酸数滴，置水浴上加热，溶液显红色；

C、取本发明药物组合物制剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取相当于生药含量1/70的粉末，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于100-120目，5g，内径10-15mm的中性氧化铝柱上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；照薄层色谱法试验，吸取上述对照品4μl、供试品8μl，分别点样于同一硅胶G板上，以13∶7∶2比例的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

D、另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品，鉴别方法C中供试品各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以40∶5∶10∶0.2比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

E、取本发明药物组合物制剂适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取相当于生药含量3/3500的粉末，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点样于同一硅胶G板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.5比例的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

6.一种治疗前列腺增生、尿闭的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和含量测定方法：

所述药物组合物的制备方法为：丹参144g  泽兰48g  桃仁48g 红花144g  赤芍48g  白芷96g  陈皮96g  泽泻144g  王不留行144g  败酱240g  川楝子96g  小茴香(盐制)96g  黄柏(盐制)144g；以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子加6倍量60％乙醇回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮加10倍量水提取挥发油至尽(约4小时)，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成相对密度为1.28-1.30(50℃)的浸膏，干燥，粉碎成细粉，加入泽泻、白芷细粉混匀，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，压制成1000片，包糖衣，即得；

鉴别方法为：

(1)取本品5片，除去糖衣，研细，加乙醚15ml，振摇提取5分钟，滤过；取滤液5ml，挥干，残渣加1％香草醛硫酸溶液1滴，液滴边缘呈紫色；另取滤液5ml，挥干，残渣加冰醋酸少许，使溶解，再加硫酸1滴，微热，溶液显紫棕色；

(2)取本品5片，除去糖衣，研细，加乙醇10ml，振摇提取10分钟，滤过，滤液加镁粉少许及盐酸数滴，置水浴上加热，溶液显红色；

(3)取本品适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40％甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗两次，每次10ml；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品4μl、供试品8μl，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取对照品，鉴别(3)中供试品各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(5)取本品适量，除去糖衣，粉碎成粉末，称取粉末0.3g，加甲醇10ml超声5分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点样于同一硅胶G板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

含量测定方法为：

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.05mol/L NaH₂PO₄缓冲溶液(H₃PO₄调pH＝3.0±0.5)-乙腈(73∶27)为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于1500；

对照品溶液的制备精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液；

供试品溶液的制备  精密称取本品0.5g，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含黄柏以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₈ClNO₄)计，不得少于0.10mg。