CN101991633B - 雷公藤多甙提取方法及所得产品及其包合物和药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种雷公藤多甙提取方法及所得产品及其包合物和药物组合物。该雷公藤多甙提取方法包括如下步骤:将雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物上硅胶柱,加氯仿浸渍,之后再用氯仿洗脱至洗脱液至无色,然后用质量比为4.5∶95.5~10∶90的乙醇氯仿混合液洗脱,收集乙醇氯仿洗脱液即可。该提取方法步骤简单,有机溶剂使用量少,几乎没有废水排放,有机溶剂基本可以回收利用,减少污染,极大地降低能源消耗,降低生产成本。制得的雷公藤多甙有效成分含量,尤其是雷公藤内酯甲含量高,符合国家标准,不需要另行分离提纯即可直接进行药物制剂制备,本发明的雷公藤多甙片溶出度好,生物利用度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种雷公藤多甙提取方法及所得产品及其包合物和药物组合物。
背景技术
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook f.)据《中国药植志》载,系卫矛科雷公藤属植物雷公藤的全株,我国主要有三种,包括雷公藤(Tripterygiumwilfordii Hook f.),昆明山海棠(Tripterygium hypoglaucumHutch)和东北雷公藤(Tripterygium regelii Spraque et Tak.),主产地为福建、浙江、江苏、安徽、湖南等地;性味苦、辛、寒,有大毒,归肝、肾经;其药用部分为去二层皮的根木质部,具祛风除湿,活血通络,消肿止痛,杀虫解毒功效,临床上广泛用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎、肾小球肾炎、红斑狼疮及各种自身免疫性疾病和皮肤病等。现代药理研究表明其具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗生育、免疫抑制等多种生物活性,至今已分离出70多种化学成分,包括生物碱、倍半萜类、二萜、三萜等多种。目前应用于临床的雷公藤制剂有粗制片、浸膏片、甲素片、多甙片等。
雷公藤多甙片是国家卫生部部颁标准收载的药物制剂,具有祛风解毒、除湿消肿、舒筋通络的功能,有抗炎及抑制细胞免疫和体液免疫等作用,是一种非甾体免疫抑制剂。用于风湿热瘀、毒邪阻滞所致的类风湿性关节炎、肾病综合征、白塞氏三联征、麻风反应、自身免疫性肝炎等。国家药品质量标准(WS3-B-3350-98)规定:雷公藤多甙片为雷公藤多甙经加工制成的片;照薄层色谱法试验,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;含量以有效成份雷公藤内酯甲计,经薄层色谱法扫描测定不得少于0.1mg/g。雷公藤多甙片与其它雷公藤制剂相比有用量小、不良反应少的优点。
雷公藤多甙又称雷公藤总苷、雷公藤甙、雷公藤多苷、雷公藤总甙,是由雷公藤的全根去皮木质部份中提取精制得到的一组混合甙,成分较为复杂,主要为环氧二萜内脂类化合物,包括雷公藤内酯甲即雷公藤酯甲(Wilforlide A)、雷公藤内酯醇即雷公藤甲素(Triptolide)、雷公藤红素(Tripterine)及雷公藤生物碱等。
现有的工业化获取雷公藤多甙的方法主要有以下几种:
1、用水和氯仿或乙醇和氯仿提取,然后用柱层析分离(参见《药学通报》1988年第23卷第1期第3页,以及《“雷公藤多甙”制剂的评价》,中国医药工业杂志,1994,25(3),夏志林,邓福孝)。
其中,使用水和氯仿提取的工艺为:
其中,使用乙醇和氯仿提取的工艺为:
上述方法操作繁杂,需使用大量溶剂,费工费时且得率不易控制。
2、超临界CO2提取法(中国专利申请200610015592.X),此法是近年来植物有效成分提取的先进方法,比起传统工艺具有工艺简单、提取率较高的特点,但由于雷公藤本身有大毒,提取物成分复杂,至今药理、毒理研究尚不透彻,因此,在没有充分临床试验的基础上,其全部提取物入药是不合适的,也是不符合相关规定的;若要入药,还需另行精制分离。
3、有机溶媒动态逆流低温套提法(中国专利申请02155133.2),此法仅能得到雷公藤提取物粗品,许多无效杂质和毒性成分随有效成分一同提取出来,没有选择性,有效成分的浓度相对较低,毒性成分含量较高,用于制剂生产尚需进一步分离提纯。
4、水煮醇提有机溶剂萃取法(专利申请200710043857.1),此法将雷公藤粉末用水煮和醇提之后,再用有机溶剂(氯仿或乙酸乙酯)萃取,加入吸附剂进行吸附,用梯度有机溶剂进行洗脱,回收有机溶剂后抽真空成干品。此法有机溶媒的用量大,提取率低,提取时间长,同时提取过程中,会由于温度高、与空气接触时间长等,使药物中热敏性成分、易氧化成分受到破坏。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有雷公藤多甙的提取方法选择性不好,获得的提取物成分复杂,毒性较大,有效成分的含量低,用于制剂生产尚需进一步分离提纯的缺陷;或者在提取时,水和有机溶剂用量大,废弃物多,环境污染严重,能源消耗大的缺陷;再或者是提取时工序步骤多,操作繁杂,费时费工,劳动强度大等缺陷,提供了一种雷公藤多甙提取方法及所得产品及其包合物和药物组合物。该雷公藤多甙提取方法步骤简单,有机溶剂使用量少,几乎没有废水排放,能极大降低环境污染和劳动强度,提取所得的产品雷公藤多甙有效成分含量高,不需要另行分离提纯即可直接进行药物制剂制备。
本发明人研究了众多现有的雷公藤多甙的提取方法。尽管这些方法的提取步骤不尽相同,但其原理一般都是按照常规中药有效成分的提取方法,即先使用溶剂将原料中的相应成分尽量全部提取出来,然后再精制提纯获得实际所需的药物活性成分。上述方法的缺点在于,一些不需要的杂质成分或毒性成分随同所需的药物活性成分的提取,也被悉数提取出来,而这些杂质或毒性成分又必须采用适当方法通过提纯步骤分离丢弃,这不仅增加了提取时溶剂的使用量和操作步骤,同时费工费时;而且一般来说,通过后续分离提纯获得实际所需药物活性成分,其操作难度都很大。本发明人试图找到一种步骤简单、溶剂使用量小、且不需要另行分离精制的提取方法,来获取符合国家药品标准的雷公藤多甙。经过大量实验研究,终于惊喜地发现,将雷公藤原料与吸附剂的均匀混合物直接上硅胶柱,经过一步溶出二次洗脱,即可获得雷公藤多甙。
因此,本发明通过下述技术方案解决上述技术问题:
本发明的雷公藤多甙提取方法包括如下步骤:将雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物上硅胶柱,加氯仿浸渍,之后再用氯仿洗脱至洗脱液至无色,然后用质量比为4.5∶95.5~10∶90的乙醇氯仿混合液洗脱,收集乙醇氯仿洗脱液即可。
本发明中,所述的雷公藤的原料为本领域常规使用的雷公藤去皮根部,一般取干燥、无霉变且去皮的雷公藤根研碎后的粉末,该粉末一般长为10~25mm,宽为1~7mm,水分含量一般为质量百分比8.0~15.0%。所述的吸附剂较佳的为硅胶、中性氧化铝、纤维素或硅藻土,更佳的为层析用硅胶;所述的吸附剂的粒径大小较佳的为100~200目,更佳的为200目。所述的雷公藤与吸附剂的质量比较佳的为0.8∶1.5~1∶1,更佳的为1∶1.2~1∶1,最佳的为1∶1.5。所述的雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物可由下述任一方式制得:先将雷公藤原料粉碎后再与吸附剂均匀混合,也可以将雷公藤原料与吸附剂均匀混合后再粉碎。考虑到工业生产中因原料用量大,直接投料时物料恐因各种原因而结块,因此,较佳的选择将雷公藤原料与吸附剂均匀混合后再粉碎。所述的粉碎为本领域常规操作,粉碎后的粒径大小较佳的为100~200目,更佳的为200目。经过先混合后粉碎,不仅有效增加雷公藤原料的表面积,便于有效成分的释出,同时还促使雷公藤原料与吸附剂充分混合,便于雷公藤有效成分释出后被吸附剂迅速、有效地吸附。
本发明中,所述的雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物与硅胶柱中的硅胶的质量比较佳的为1∶1.5~1∶0.8,更佳的为1∶1.2~1∶1,最佳的为1∶1.5。所述的雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物装入硅胶柱中为常规物料装柱操作,一般压实、无断层即可。所述的硅胶柱为本领域常用规格,其内径×长度的规格按毫米计较佳的为400mm×2000mm。
本发明中,所述的加氯仿浸渍步骤中,所述的氯仿为本领域常规使用溶剂,较佳的为药用氯仿;所述的氯仿的用量以浸没硅胶柱中的全部固体物料为准,一般为氯仿体积略超过硅胶柱中的固体物料的体积,较佳的为氯仿与硅胶柱中的固体物料的体积比值为1.05。所述的浸渍的时间较佳的为12~48小时,更佳的为24小时。通过浸渍这一步骤,雷公藤原料得以充分浸润,雷公藤中可溶于氯仿的成分充分释出,同时所需的药物活性成分被吸附剂有效吸附。
本发明中,所述的之后再用氯仿洗脱至洗脱液至无色,较佳的用硅胶G薄板层进行检测。更佳地,按下述方法检测:取少量氯仿脱液,浓缩至浸膏状,按照中国药典2005年版一部附录31页的薄层色谱法,点样于硅胶G薄层板上(该硅胶板事先经80℃活化30分钟,放干燥器内备用),以环己烷与丙酮体积比为5∶3的混合液为展开剂,展开后晾干,紫外灯下观察前延处蓝色荧光斑点消失,亦无其它杂质斑点,即可。
本发明中,较佳的,可收集氯仿洗脱液,经减压加热浓缩、重蒸之后,将溶剂回收利用。
本发明中,所述的乙醇氯仿混合液中,乙醇与氯仿的质量比较佳的为4.5∶95.5~5∶95,更佳的为5∶95。所述的洗脱较佳的为洗脱至乙醇氯仿洗脱液为无色即可。
本发明中,将收集的乙醇氯仿洗脱液除去溶剂,即可获得雷公藤多甙固体。所述的除去溶剂的方式为本领域常规操作,较佳的为加热浓缩,更佳的为减压加热浓缩。较佳地,在除去溶剂时,将溶剂回收利用。
本发明还涉及由上述方法制得的雷公藤多甙。该雷公藤多甙性状为黄色或棕黄色粉末,味苦,在含5%乙醇的氯仿中易溶,在水中几乎不溶,同时也符合1993年上海市雷公藤多甙药品标准鉴别项鉴别规定。
本发明的雷公藤多甙中各主要成分含量一般如下:雷公藤内酯甲的含量为6.5~8.5μg/mg;雷公藤内酯醇(雷公藤甲素)的含量1.0~4.0μg/mg;雷公藤红素的含量为10.0~14.5μg/mg;雷公藤总生物碱的含量为0.35~0.55mg/mg。
上述各成分含量测定方法为:雷公藤内酯甲含量测定依照雷公藤多甙片国家药品质量标准(WS3-B-3350-98)进行检测;雷公藤内酯醇(雷公藤甲素)含量测定依照国家药品质量标准[WS-10001-(HD-0292)-2002]进行检测;雷公藤红素含量采用HPLC方法测定(参阅《雷公藤类制剂中雷公藤红素的含量测定》,第五届全国雷公藤学术会议论文汇编,2008年9月);雷公藤总生物碱含量采用柱色谱-紫外分光光度法测定(参阅《雷公藤制剂中雷公藤甲素和总生物碱含量的比较研究》,第五届全国雷公藤学术会议论文汇编,2008年9月)。
本发明还涉及上述方法制得的雷公藤多甙与β-环糊精的包合物。其可由下述方法制得:将上述方法制得的雷公藤多甙与β-环糊精进行包合,除去溶剂即可。
其中,所述的雷公藤多甙与β-环糊精进行包合的方法可为本领域常规操作,较佳的为将如前述含有雷公藤多甙的乙醇氯仿洗脱液加入质量百分比为3%~8%,更佳的为5%的β-环糊精水溶液中,搅拌至雷公藤多甙与β-环糊精充分包合,冷却,取其中固体沉淀即可。其中,所述的环糊精的用量较佳的为雷公藤原料重量的1/50~1/25,更佳的为1/40。
其中,所述的搅拌时的条件较佳的为:温度10~60℃,搅拌时间为0.5~2.5小时;更佳的为40℃搅拌2小时。所述的冷却条件较佳的为0~5℃冷却8~24小时,更佳的为0℃冷却12小时。所述的取其中固体沉淀较佳的可通过抽滤获得固体,之后60℃干燥即可。
本发明通过将雷公藤多甙与β-环糊精进行包合反应制成包合物可以使得在水中几乎不溶的雷公藤多甙能以其β-环糊精包合物的形式在水中溶解,解决了雷公藤多甙在水中或人工胃液中无法溶出的问题,提高了生物利用度。
本发明还涉及一种雷公藤多甙的药物组合物,其含有治疗有效量的本发明的雷公藤多甙,和/或本发明雷公藤多甙与β-环糊精的包合物,以及药学上可接受的辅料。
其中,所述的药学上可接受的辅料是指药学领域常规的药用辅料,是为解决制剂的成型性、有效性、稳定性、安全性加入处方中除本发明的雷公藤多甙,和/或本发明雷公藤多甙与β-环糊精的包合物以外的一切常规药用物料,如稀释剂(淀粉及其衍生物类、糖类、无机钙盐等),粘合剂(如糊精、明胶、纤维素及其衍生物类等),崩解剂(微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素等),润滑剂(如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等),以及其它辅助剂。
根据需要,可选择上述辅料,按本领域常规方法,将本发明的药物组合物制成本领域各种常规剂型,尤其是固体制剂,如片剂、颗粒剂或胶囊等。较佳的,本发明的药物组合物为片剂。
更佳的,本发明的药物组合物片剂含有本发明的雷公藤多甙和/或其与β-环糊精的包合物、以及选自淀粉、糊精、磷酸氢钙、低取代羟丙纤维素和硬酯酸镁的药用辅料。
其中,当本发明的药物组合物片剂含有雷公藤多甙时,以雷公藤多甙的重量为1份,所述的淀粉的含量较佳的为1~4份,更佳的为2份;所述的糊精的含量较佳的为0.1~0.5份,更佳的为0.1份;所述的磷酸氢钙的含量较佳的为2~6份,更佳的为5份;所述的低取代羟丙纤维素的含量较佳的为1~2份,更佳的为0.8份。所述的硬酯酸镁的用量较佳的为药物组合物总重的0.5~1.5%,更佳的为1.0%。
其中,当本发明的药物组合物片剂含有雷公藤多甙与β-环糊精的包合物时,以雷公藤多甙与β-环糊精的包合物的重量为1份,所述的淀粉的含量较佳的为0.05~0.1份,更佳的为0.05份;所述的磷酸氢钙的含量较佳的为0.5~2份,更佳的为0.5份;所述的低取代羟丙纤维素的含量较佳的为0.1~0.5份,更佳的为0.15份。所述的硬酯酸镁的用量较佳的为药物组合物总重的0.5~1.5%,更佳的为1.0%。
本发明中,本发明的药物组合物片剂的制备方法按本领域常规方法操作,较佳的按下述方法操作:取淀粉总量的1/10,加纯化水,制成含淀粉重量为8%的淀粉浆,将剩余的淀粉及其他组分混合后,制粒,按每片含雷公藤多甙10mg计算片重,用5.5mm圆形浅冲压片,制得的雷公藤多甙片。其中,所述的制粒为本领域常规操作,可以采用沸腾制粒,或者摇摆制粒,更佳的为沸腾制粒。该雷公藤多甙片为浅黄色圆片,味微苦、涩,以水为溶媒,溶出度达85%上。
本发明的药物组合物中,雷公藤内酯甲的含量不少于质量百分比0.01%。上述药物组合物施加于需要治疗的患者的一般剂量可为1~1.5mg雷公藤多甙成分/公斤体重/天,具体可根据患者的年龄和病情等变化。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于:本发明提供了一种雷公藤多甙提取方法及所得产品及其包合物和药物组合物。该提取方法步骤简单,一步溶出二次洗脱就可获得雷公藤多甙,对雷公藤多甙选择性明确,有机溶剂使用量少,几乎没有废水排放,有机溶剂基本可以回收利用,减少污染,极大地降低能源消耗,降低生产成本。同时制得的该雷公藤多甙有效成分含量,尤其是雷公藤内酯甲含量高,符合国家标准,不需要另行分离提纯即可直接进行药物制剂制备,较佳的采用β-环糊精包合使雷公藤多甙溶出度更好,进一步提高生物利用度。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
实施例1
取干燥、无霉变、去皮的雷公藤根粗粉(10kg),与1.5倍重量的200目层析硅胶(15kg)均匀混合,粉碎,使之全部过200目筛。将雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物装入已填充等重量层析硅胶(25kg)的层析柱(内径×长度为300mm×1500mm的不锈钢柱)中,压实,加入75kg的药用氯仿(约超过固体物料20cm)浸渍24小时,然后用药用氯仿洗脱至洗脱液基本无色,用硅胶G薄板层析检查,以环己烷与丙酮体积比为5∶3的混合液为展开剂,展开后晾干,确认前延处蓝色荧光斑点消失后,用含乙醇质量百分比为5%的氯仿溶液洗脱,至洗脱液无色,收集合并乙醇氯仿洗脱液,回收溶剂,即得雷公藤多甙55g,得率为0.55%(以雷公藤多甙与雷公藤根粗粉质量比计算);其中,雷公藤内酯甲含量为7.04μg/mg;雷公藤内酯醇的含量为1.52μg/mg;雷公藤红素的含量为10.97μg/mg;雷公藤总生物碱的含量为358.82μg/mg。
实施例2
取干燥、无霉变、去皮的雷公藤根粗粉(10kg),与1.5倍重量的层析硅胶(15kg)均匀混合,粉碎,使之全部过200目筛。将雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物装入已填充等重量层析硅胶(25kg)的层析柱(300×1500mm不锈钢柱)中,压实,加入75kg的药用氯仿(约超过固体物料20cm)浸渍24小时,然后用氯仿洗脱至洗脱液基本无色,用硅胶G薄板层析检查,以环己烷与丙酮体积比为5∶3的混合液为展开剂,展开后晾干,确认前延处蓝色荧光斑点消失后,用含乙醇质量百分比为5%的氯仿溶液洗脱,至洗脱液无色,收集合并乙醇氯仿洗脱液。
取雷公藤粗粉重量1/40的(250g)β-环糊精,加水,加热搅拌制成含β-环糊精质量百分比为5%的水溶液(共5kg)。在搅拌下冷却至50℃,将前述乙醇氯仿洗脱液缓缓加入其中,搅拌2小时,得浅黄色混悬液,置冷库(温度为-5℃~5℃)中冷藏12小时,抽滤,沉淀物于60℃干燥,即得雷公藤多甙与β-环糊精的包合物246.5g。经检测,平均得率为98.5%(以雷公藤多甙与β-环糊精的包合物与β-环糊精质量比计算);经检测,包合物中含雷公藤多甙质量百分数为21.6%,共53.24g。
实施例3
称取实施例1所得的雷公藤多甙50g,以及辅料淀粉98.2g,糊精5g,磷酸氢钙250g,低取代羟丙纤维素40g,取13.2g的淀粉制成8%淀粉浆共165g,与其他物质一起混合,18目摇摆制粒,放入烘箱,60℃干燥,经18目整粒,然后加硬酯酸镁4.4g,总混10分钟,按每片含10mg雷公藤多甙计算片重,用5.5mm圆形浅冲压片。平均片重0.088~0.089g/片,其中,雷公藤内酯甲含量为0.82mg/g。
实施例4
将实施例1所得的雷公藤多甙50g,加淀粉85g,糊精5g,磷酸氢钙250g,低取代羟丙纤维素40g,混合,置于沸腾制粒机中。设定进风温度为60℃,温控范围为60±5℃,开启风机,使沸腾制粒机中物料沸腾,当出风温度达到40℃时,开始喷入由13.2g淀粉制成的8%淀粉浆165g。喷枪位于上位,喷浆压力0.3~0.4Mpa,喷浆流量25~35V,风门20~30%,抖袋:5次/90秒。喷浆结束,取出物料,加硬酯酸镁4.4g,经18目整粒,总混10分钟,按每片含10mg雷公藤多甙计算片重,用5.5mm圆形浅冲压片。平均片重0.088~0.089g/片,其中,雷公藤内酯甲含量为0.82mg/g。
实施例5
将实施例2所得的雷公藤多甙与β-环糊精的包合物250g,加磷酸氢钙125g,低取代羟丙纤维素40g,加入由13.2g淀粉制成的8%淀粉浆165g,混合,18目摇摆制粒,放入烘箱,60℃干燥,经18目整粒,加硬酯酸镁4.5g,总混10分钟,按每片含10mg雷公藤多甙计算片重,用5.5mm圆形浅冲压片。平均片重0.080~0.081g/片,其中,雷公藤内酯甲含量为0.80mg/g,平均溶出度为85%以上。
实施例6
取干燥、无霉变、去皮的雷公藤根粗粉(8kg)粉碎,过100目筛,与100目中性氧化铝(15kg)均匀混合。将雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物装入已填充层析硅胶(18.4kg)的层析柱(400×2000mm不锈钢柱)中,压实,加入药用氯仿(体积为固体物料1.05倍)浸渍12小时,然后用药用氯仿洗脱至洗脱液基本无色,用硅胶G薄板层析检查,以环己烷与丙酮体积比为5∶3的混合液为展开剂,展开后晾干,确认前延处蓝色荧光斑点消失后,用含乙醇质量百分比为4.5%的氯仿溶液洗脱,至洗脱液无色,收集合并乙醇氯仿洗脱液,回收溶剂,即得雷公藤多甙40g,得率为0.5%(以雷公藤多甙与雷公藤根粗粉质量比计算)。
实施例7
取干燥、无霉变、去皮的雷公藤根粗粉(10kg)与150目纤维素(10kg)均匀混合,粉碎,全部过150目筛。将雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物装入已填充层析硅胶(30kg)的层析柱(400×2000mm不锈钢柱)中,压实,加入药用氯仿(体积为固体物料1.05倍)浸渍48小时,然后用药用氯仿洗脱至洗脱液基本无色,用硅胶G薄板层析检查,以环己烷与丙酮体积比为5∶3的混合液为展开剂,展开后晾干,确认前延处蓝色荧光斑点消失后,用含乙醇质量百分比为10%的氯仿溶液洗脱,至洗脱液无色,收集合并乙醇氯仿洗脱液,回收溶剂,即得雷公藤多甙52g,得率为0.52%(以雷公藤多甙与雷公藤根粗粉质量比计算)。
实施例8
取干燥、无霉变、去皮的雷公藤根粗粉(10kg)与200目硅藻土(12kg)均匀混合,粉碎,全部过200目筛。将雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物装入已填充等重量层析硅胶(22kg)的层析柱(400×2000mm不锈钢柱)中,压实,加入药用氯仿(体积为固体物料1.05倍)浸渍24小时,然后用药用氯仿洗脱至洗脱液基本无色,用硅胶G薄板层析检查,以环己烷与丙酮体积比为5∶3的混合液为展开剂,展开后晾干,确认前延处蓝色荧光斑点消失后,用含乙醇质量百分比为5%的氯仿溶液洗脱,至洗脱液无色,收集合并乙醇氯仿洗脱液,回收溶剂,即得雷公藤多甙54g,得率为0.54%(以雷公藤多甙与雷公藤根粗粉质量比计算)。
实施例9
取雷公藤粗粉重量1/25的(400g)β-环糊精,加水,加热搅拌制成含β-环糊精质量百分比为8%的水溶液。在搅拌下冷却至40℃,将按实施例2操作获得的乙醇氯仿洗脱液缓缓加入其中,搅拌2.5小时,得浅黄色混悬液,置冷库(温度为0℃)中冷藏12小时,抽滤,沉淀物于60℃干燥,即得雷公藤多甙与β-环糊精的包合物380g。经检测,平均得率为95%(以雷公藤多甙与β-环糊精的包合物与β-环糊精质量比计算)。
实施例10
取雷公藤粗粉重量1/50的(200g)β-环糊精,加水,加热搅拌制成含β-环糊精质量百分比为3%的水溶液。在搅拌下冷却至25℃,将按实施例2操作获得的乙醇氯仿洗脱液缓缓加入其中,搅拌0.5小时,得浅黄色混悬液,置冷库(温度为0℃)中冷藏24小时,抽滤,沉淀物于60℃干燥,即得雷公藤多甙与β-环糊精的包合物192g。经检测,平均得率为96%(以雷公藤多甙与β-环糊精的包合物与β-环糊精质量比计算)。
实施例11~16
按表1的配方及实施例3的操作方法制备实施例11~16的药物组合物。
表1实施例11~16的药物组合物配方
1雷公藤多甙为实施例1制得的雷公藤多甙;2包合物为实施例2雷公藤多甙与β-环糊精的包合物。
效果实施例
1、雷公藤多甙提取物中雷公藤多甙含量测定方法
分别取实施例1、6~8制得的雷公藤多甙研细,精密称出适量,置100ml锥形瓶中,用含5%乙醇的三氯甲烷提取5次(分别使用15ml、15ml、10ml、5ml、5ml),提取液经用三氯甲烷洗涤过的4号垂熔漏斗过滤,合并滤液置105℃干燥至恒重的100ml锥形瓶中,用少量5%乙醇的三氯甲烷洗涤容器及滤器,合并洗液与滤液,用蒸汽浴缓缓加热至三氯甲烷挥尽,残渣加无水乙醇3ml使湿润,继续加热使蒸干,置105℃干燥至恒重,即得。
计算公式:
经检测,本发明实施例1、6~8制得的雷公藤多甙提取物中雷公藤多甙的含量为100%,即本发明的方法提取得到的为雷公藤多甙纯品。
2、雷公藤多甙片中雷公藤内酯甲测定
2.1、样品定性测定:取含量测定项下的供试品溶液和对照品溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(80∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以质量百分比为5%磷钼酸乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.2、含量测定:
取本发明实施例5制备的药片25片按不同批次,分别研成细粉,精密称取1.5g,置碘量瓶中,加入氯仿50ml,称定重量,超声提取45分钟,再称重,加氯仿补足损失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液25ml,置蒸发皿中,水浴蒸干,残渣加氯仿2ml溶解,作为供试品溶液。另取雷公藤内酯甲对照品,加氯仿制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取对照品溶液2μl和6μl、供试品溶液6μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(85∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%磷钼酸乙醇液,热风吹至斑点显色清晰,盖以同样大小的玻璃板,四周用胶布固定,照薄层色谱法进行扫描,λS=640nm,λR=370nm,测定供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值,计算,即得,测定结果记录于下表2中。
计算公式:
其中:As——供试品溶液的峰面积
Ar——对照品溶液的峰面积
Vr——对照品溶液点样容积(μl)
Cr——对照品溶液的浓度(mg/ml)
Ws——样品称量(g)
3、雷公藤多甙片中雷公藤多甙溶出度试验
按《中国药典》(2005版第二部)附录XC溶出度测定法第一法:取经脱气处理的人工胃液900ml,置各溶出杯中,加温,待溶出介质温度恒定在37±0.5℃。取本发明实施例5制备的药片作为供试品,分成6份,每份10片,分别投入6个溶出杯内,立即计时,45分钟后,用4号垂熔漏斗过滤,滤液减压浓缩干燥,用含5%乙醇的三氯甲烷提取5次(分别使用15ml、15ml、10ml、5ml、5ml),提取液经用三氯甲烷洗涤过的4号垂熔漏斗过滤,合并滤液置105℃干燥至恒重的100ml锥形瓶中,用少量5%乙醇的三氯甲烷洗涤容器及滤器,合并洗液与滤液,用蒸汽浴缓缓加热至三氯甲烷挥尽,残渣加无水乙醇3ml使湿润,继续加热使蒸干,置105℃干燥至恒重。
4、按照上述方法将实施例5制得的雷公藤多甙片,不同批次进行雷公藤多甙片中雷公藤内酯甲以及雷公藤多甙溶出度的测定,其结果如下表所示:
表2不同批次雷公藤多甙片中雷公藤内酯甲以及溶出度的测定
批次 | 性状 | 崩解时限(min) | 片量差异(%) | 脆碎度(%) | 平均片重(g/片) | 雷公藤内酯甲含量(mg/g) | 溶出度(%) |
1 | 浅黄色片 | 15 | 5.0 | 0.43 | 0.0815 | 0.82 | 86.8 |
2 | 浅黄色片 | 15 | 6.5 | 0.35 | 0.0817 | 0.83 | 87.1 |
3 | 浅黄色片 | 13 | 5.2 | 0.33 | 0.0813 | 0.81 | 88.9 |
4 | 浅黄色片 | 13 | 5.3 | 0.29 | 0.0814 | 0.83 | 88.5 |
5 | 浅黄色片 | 12 | 6.1 | 0.34 | 0.0817 | 0.83 | 89.2 |
6 | 浅黄色片 | 12 | 6.2 | 0.43 | 0.0816 | 0.84 | 88.9 |
7 | 浅黄色片 | 13 | 5.8 | 0.34 | 0.0814 | 0.83 | 89.4 |
8 | 浅黄色片 | 13 | 5.3 | 0.33 | 0.0816 | 0.82 | 89.6 |
结论:由上述测定结果可见,本发明制得的上述产品指标均符合国家标准,其中特别是关于雷公藤多甙片的溶出度,现行国家标准没有规定具体要求,但考察目前市售雷公藤多甙片,水中溶出情况都不太好,有些甚至没有溶出,极大地影响了药物的吸收利用,但本发明制备的雷公藤多甙片却大大改善了溶出,为药物的有效利用提供了先决条件。
Claims (16)
1.一种雷公藤多甙提取方法,其特征在于:其包括如下步骤:将雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物上硅胶柱,加氯仿浸渍,之后再用氯仿洗脱至洗脱液至无色,然后用质量比为4.5∶95.5~10∶90的乙醇氯仿混合液洗脱,收集乙醇氯仿洗脱液即可;所述的吸附剂为硅胶、中性氧化铝、纤维素或硅藻土;所述的吸附剂的粒径大小为100~200目;所述的雷公藤与吸附剂的质量比为0.8∶1.5~1∶1。
2.如权利要求1所述的雷公藤多甙提取方法,其特征在于:所述的吸附剂为层析用硅胶;所述的吸附剂的粒径大小为200目;所述的雷公藤与吸附剂的质量比为1∶1.2~1∶1。
3.如权利要求1所述的雷公藤多甙提取方法,其特征在于:所述的雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物由下述任一方式制得:将雷公藤原料粉碎后再与吸附剂均匀混合,或者将雷公藤原料与吸附剂均匀混合后再粉碎;其中,所述的粉碎后的粒径大小为100~200目。
4.如权利要求1所述的雷公藤多甙提取方法,其特征在于:所述的雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物与硅胶柱中的硅胶的质量比为1∶1.5~1∶0.8。
5.如权利要求1所述的雷公藤多甙提取方法,其特征在于:所述的加氯仿浸渍步骤中,所述的氯仿为药用氯仿;所述的氯仿的用量为氯仿与硅胶柱中的固体物料的体积比值为1.05;所述的浸渍的时间为12~48小时。
6.如权利要求1所述的雷公藤多甙提取方法,其特征在于:所述的乙醇氯仿混合液中,乙醇与氯仿的质量比为4.5∶95.5~5∶95;所述的洗脱为洗脱至乙醇氯仿洗脱液为无色。
7.如权利要求1所述的雷公藤多甙提取方法,其特征在于:所述的雷公藤和吸附剂的粉碎的均匀混合物与硅胶柱中的硅胶的质量比为1∶1.5;所述的浸渍的时间为24小时;所述的乙醇氯仿混合液中,乙醇与氯仿的质量比为5∶95。
8.如权利要求1所述的雷公藤多甙提取方法,其特征在于:所述的收集乙醇氯仿洗脱液之后,除去溶剂,获得雷公藤多甙固体。
9.一种如权利要求1~8任一项所述的雷公藤多甙提取方法制得的雷公藤多甙。
10.如权利要求9所述的雷公藤多甙,其特征在于:所述的雷公藤多甙主要成分含量为:雷公藤内酯甲的含量为6.5~8.5μg/mg;雷公藤内酯醇的含量为1.0~4.0μg/mg;雷公藤红素的含量为10.0~14.5μg/mg;雷公藤总生物碱的含量为0.35~0.55mg/mg。
11.一种如权利要求1~8任一项所述的雷公藤多甙提取方法制得的雷公藤多甙与β-环糊精的包合物。
12.如权利要求11所述的包合物,其特征在于:其由下述方法制得:将含有雷公藤多甙的乙醇氯仿洗脱液加入质量百分比为3%~8%的β-环糊精水溶液中,搅拌至雷公藤多甙与β-环糊精充分包合,冷却,取其中固体沉淀即可。
13.如权利要求12所述的包合物,其特征在于:所述的环糊精的用量为雷公藤原料重量的1/50~1/25;所述的搅拌时的条件为:温度10~60℃,搅拌时间为0.5~2.5小时。
14.一种雷公藤多甙的药物组合物,其含有治疗有效量的如权利要求9所述的雷公藤多甙和/或如权利要求11所述的雷公藤多甙与β-环糊精的包合物,以及药学上可接受的辅料。
15.如权利要求14所述的药物组合物,其特征在于:所述的药学上可接受的辅料选自淀粉、糊精、磷酸氢钙、低取代羟丙纤维素和硬酯酸镁。
16.如权利要求14所述的药物组合物,其特征在于:所述的药物组合物含有下述重量份的各成分:1份如权利要求9所述的雷公藤多甙,1~4份的淀粉,0.1~0.5份的糊精,2~6份的磷酸氢钙,1~2份的低取代羟丙纤维素,以及质量百分比0.5~1.5%的硬酯酸镁;或者1份如权利要求11所述的雷公藤多甙与β-环糊精的包合物,0.05~0.1份的淀粉,0.5~2份的磷酸氢钙,0.1~0.5份的低取代羟丙纤维素,以及质量百分比0.5~1.5%的硬酯酸镁。
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