CN101973975B

CN101973975B - 一种从灰毡毛忍冬中快速提取木犀草素的方法

Info

Publication number: CN101973975B
Application number: CN 201010509619
Authority: CN
Inventors: 饶力群
Original assignee: Hunan Agricultural University
Current assignee: Hunan Agricultural University
Priority date: 2010-10-18
Filing date: 2010-10-18
Publication date: 2013-05-15
Anticipated expiration: 2030-10-18
Also published as: CN101973975A

Abstract

本发明提供了一种从灰毡毛忍冬中快速提取木犀草素的方法，大大地提高木犀草素得率和纯度。提出了一整套从灰毡毛忍冬分离提取得到高纯度的木犀草素，采用乙醇回流提取，离心，浓缩，萃取，活性碳脱色，乙醇结晶和重结晶，得到木犀草素纯品。整个分离过程中对环境条件要求不高，分离时间最短，纯度最高。分离材料易得便宜，分离操作过程简单，易控制，采用结晶和重结晶，纯化效率高。

Description

一种从灰毡毛忍冬中快速提取木犀草素的方法

所属技术领域：

本发明涉及一种从灰毡毛忍冬中快速提取木犀草素的工艺技术，属于天然产物化学的技术领域。

背景技术

木犀草素(又称木犀黄定，Luteolin)，化学名称为3’，4’，5，7-四羟基黄酮(3’，4’，5，7-Tetralydroxyflanone)。木犀草素在自然界中分布广泛，因最初是从木犀草科木犀草属草本植物木犀草(ResedaodorataL.)的叶、茎、枝中分离出而得名，可从多种天然药材、蔬菜果实中分离得到。

目前发现木犀草素主要存在于金银花(金银花和灰毡毛忍冬)、菊花、荆芥、白毛夏枯草、洋蓟、紫苏属、黄芩属等天然药材中，以及芽甘蓝、菜花、甜菜、胡萝卜、芹菜、甜椒、辣椒、落花生等蔬菜果实中，其它如橄榄油和红酒等植物产品以及野凤仙花、百里香草、唇形科植物筋骨草等也含有木犀草素。灰毡毛忍冬中的木犀草素的含量被认为是最高的，均超过0.24％。

木犀草素具有丰富的生物活性，主要有：

1、抗炎木犀草素的抗炎活性与抑制一氧化氮和其他炎性细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的产生，抑制蛋白质络氨酸的磷酸化以及核转录因子KB(NF-KB)介导的基因表达有关。

2、抗肿瘤木犀草素可以选择性抑制前列腺癌和乳腺癌细胞的脂肪酸合成酶活性，与其抗肿瘤细胞增长和调亡作用相关；木犀草素可以显著降低结肠癌的发生率。

3、抗过敏木犀草素可以抑制免疫球蛋白E(IgE)介导的人肥大细胞产生的变态反应递质。

4、抗炎症性脱髓鞘疾病木犀草素体外可以剂量依赖地保护少突胶质细胞抵抗过氧化氢诱导的氧化损害，强烈抑制巨噬细胞对髓鞘的吞噬作用。

5、抗纤维化木犀草素可以降低肝纤维化程度，降低肝组织中羟脯氨酸、丙二醛的含量以及I型前胶原mRNA的表达。

6、抗生育与激素作用木犀草素具有显著的剂量依赖的抗着床活性。

7、对血管的作用木犀草素体内可以抑制血管内皮生长因子(VEGF)诱导的兔角膜血管的生成；可以抑制鼠异种移植肿瘤模型的肿瘤生长和血管形成。

8、其他木犀草素可以抑制多种细菌和病毒，如金葡球菌、大肠杆菌、单纯疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇B3病毒等。能抑制艾滋病病毒HIV-1整合酶的活性，具有潜在的抗HIV的作用。木犀草素可以与严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒的S2蛋白结合，从而抑制病毒进入宿主细胞。此外，木犀草素还具有免疫调节的作用等。

我国金银花栽培面积、产量均位居世界首位。2009版药典规定，金银花分为北方金银花和南方金银花，北方金银花以山东产金银花为代表；南方金银花以湖南产金银花为代表，又叫山银花或灰毡毛忍冬。迄今为止的文献均着重于金银花中中新化合物的发现及结构的确定，而对灰毡毛忍冬中木犀草素的快速提取工艺没有研究。而且木犀草素在灰毡毛忍冬中含量较高，取材方便，价格便宜，产品安全性高。因而，对灰毡毛忍冬进行深加工意义非凡。探索从灰毡毛忍冬中提取木犀草素，其意义相当远大，不但可以解决合成木犀草素安全性问题，还可以增加农民收入，服务地方经济。

发明内容

本发明采用的技术方案包括：干燥过后的灰毡毛忍冬经用乙醇溶液提取、离心、减压浓缩，然后用树脂吸附、乙醇洗脱、将洗脱液浓缩，萃取、减压浓缩，脱色制得木犀草素纯品。

因此，本发明提供一种从灰毡毛忍冬提取木犀草素的方法，步骤包括：

1、粉碎干燥灰毡毛忍冬，并将灰毡毛忍冬、60％乙醇按重量(kg)/体积比(V)＝1∶1-3进行混合，加热回流提取；

2、过滤，离心取上清液，减压浓缩至无乙醇味；

3、将浓缩液用1.5-3倍体积的乙酸乙酯萃取三次，分离乙酸乙酯层并进行浓缩，直至获得干燥物；

4、加入60％乙醇进行加热溶解，然后加入活性碳进行脱色，再进行浓缩直至获得干燥物；

5、加入90％乙醇进行加热溶解，然后加入热水调节乙醇终浓度为30-40％，室温过夜结晶，得木犀草素纯品。

在一个实施方案中，步骤5的乙醇终浓度为35％。

在另一个实施方案中，步骤2的过滤过程是纱布过滤、然后离心取上清液。其中，优选是三层纱布过滤2次、离心取上清液1次。

在一个实施方案中，步骤4中所加入的60％乙醇、活性碳，其体积(V)/重量(kg)比＝30-20∶1。

在另一个实施方案中，步骤4中不加入70％乙醇，只加入活性碳脱色，再进行浓缩直至获得干燥物。

技术效果：

1、本发明方法中所用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，大大地降低了生产成本；

2、灰毡毛忍冬种植容易，扦插、组培均可，产量高、价格适中，来源方便，后续资源有保障。使用灰毡毛忍冬作为原料，既大大提高了灰毡毛忍冬的利用效率，提高灰毡毛忍冬的附加值，又摆脱了对于其它材料如木犀草、落花生壳等原料的依赖，可以缓解市场对其它原材料的大量需求，同时又能对废弃灰毡毛忍冬充分利用，保护了木犀草等植物资源。

3、本发明方法操作简单，不必使用树脂层析过滤技术，也不需要精密仪器或自动化设备，可在灰毡毛忍冬资源丰富的乡镇企业进行生产，这极大的降低了木犀草素的生产成本，简化了生产过程。

4、本发明所用的试剂均为无毒、廉价、量产的化学试剂，整个过程中可利用成熟的试剂回收的常规技术，这极大地降低了向环境排放废弃物。

5、经过长期摸索，本发明确定了采用30-40％(优选45％)乙醇终浓度在室温条件下进行结晶，木犀草素的纯度是最高，可达到93.86-94.43％。

附图说明

图1：木犀草素标准品的液相色谱曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。

图2：从灰毡毛忍冬中提取木犀草素的液相色谱曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。

具体实施方式

下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。

实施例1：

粉碎干燥灰毡毛忍冬100kg，加入60％乙醇300L，80℃加热回流提取2h，三层纱布过滤两次、然后离心取上清液，减压浓缩至80L(无乙醇味)，然后浓缩液用150L乙酸乙酯分三次萃取，取乙酸乙酯层进行浓缩至干，再用60％乙醇80L加热溶解，加5kg颗粒活性碳进行脱色30min，再浓缩至干，90％乙醇2L加热溶解后，再加热水混匀，直至乙醇终浓度40％，然后室温结晶24h，得到木犀草素样品。

经检测，Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱为Hypersil ODS(150mm×4.6mm，5μ)，流动相为60％甲醇的水溶液；检测波长为298nm；流速为1ml/min；进样量为20μL。木犀草素样品的纯度为94.43％，结果如表1和图1所示。

实施例2：

粉碎干燥灰毡毛忍冬500kg，加入60％乙醇600L，80℃加热回流提取2h，三层纱布过滤两次、然后离心取上清液，减压浓缩至100L(无乙醇味)，然后浓缩液用300L乙酸乙酯分三次萃取，取乙酸乙酯层进行浓缩至干，再用60％乙醇150L加热溶解，加15kg活性碳进行脱色30min，再浓缩至干，90％乙醇6L加热溶解后，再加热水直至乙醇终浓度37％，室温结晶24h，得到木犀草素样品。按照实施例1的方法进行纯度检测，纯度为94.27％，结果如表1所示。

实施例3：

粉碎干燥灰毡毛忍冬200kg，加入60％乙醇200L，80℃加热回流提取2h，三层纱布过滤两次、然后离心取上清液，减压浓缩至50L(无乙醇味)，然后浓缩液用150L乙酸乙酯分三次萃取，取乙酸乙酯层，再用60％乙醇100L加热溶解，加8kg活性碳进行脱色30min，再浓缩至干，90％乙醇3L加热溶解后，再加热水直至乙醇终浓度30％，室温结晶24h，得到木犀草素样品。按照实施例1的方法进行纯度检测，纯度为93.86％，结果如表1所示。

实施例4：

粉碎干燥灰毡毛忍冬300kg，加入60％乙醇300L，80℃加热回流提取2h，三层纱布过滤两次、然后离心取上清液，减压浓缩至80L(无乙醇味)，然后浓缩液用240L乙酸乙酯分三次萃取，取乙酸乙酯层，再用60％乙醇120L加热溶解，加10kg活性碳进行脱色30min，再浓缩至干，90％乙醇4L加热溶解后，再加热水4L混匀，室温结晶24h，得到木犀草素固体，90％乙醇2L加热溶解后，再加热水混匀直至乙醇终浓度35％，室温结晶24h，得到木犀草素纯品。按照实施例1的方法进行纯度检测，纯度为94.06％，结果如表1所示。

表1

结合以上实例，本发明与现行技术相比具有以下优点：

1.采用常规方法进行制备，所需设备简单，操作方便、安全。

2.未采用超声波操作或酶法提取、层析等精提技术，因此有机溶剂损失小，对环境没有污染。

Claims

1.一种从灰毡毛忍冬提取木犀草素的方法，步骤包括：

（1）粉碎干燥灰毡毛忍冬，并将灰毡毛忍冬、60%乙醇按重量(kg)/体积比(V)=1:1-3进行混合，加热回流提取；

（2）提取液先纱布粗滤，然后离心取上清液，减压浓缩至无乙醇味；

（3）将浓缩液用1.5-3倍体积的乙酸乙酯萃取三次，分离乙酸乙酯层并进行浓缩，直至获得干燥物；

（4）加入60%乙醇进行加热溶解，然后加入活性碳进行脱色，再进行浓缩直至获得干燥物；

（5）加入90%乙醇进行加热溶解，然后加入热水调节乙醇终浓度为30-40%，室温过夜结晶，得木犀草素纯品。

2.权利要求1的方法，其中步骤5的乙醇终浓度为35%。

3.权利要求1的方法，其中过滤是三层纱布过滤2次、离心取上清液1次。

4.权利要求1或2的方法，其中步骤4中所加入的60%乙醇、活性碳，其体积(V)/重量(kg)比=30-20:1。