CN101648852A - 一种从桑叶中快速提取白藜芦醇的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种从桑叶中快速提取白藜芦醇的方法，大大地提高白藜芦醇得率和纯度。提出了一整套从桑叶分离提取得到高纯度的白藜芦醇，采用醇回流提取，膜过滤，浓缩，萃取，活性碳脱色，乙醇结晶和重结晶，得到白藜芦醇纯品。整个分离过程中对环境条件要求不高，分离时间最短，纯度最高。分离材料易得便宜，分离操作过程简单，易控制，采用结晶和重结晶，纯化效率高，使用试剂无毒。
Description
所属技术领域：
本发明涉及一种从桑叶中快速提取白藜芦醇的工艺技术，属于天然产物化学的技术领域。
背景技术
白黎芦醇是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，有顺、反两种构型，其中反式是稳定结构，而且生物活性更加广泛。近些年来，国内外很多学者对白藜芦醇的生物学功能进行了深层研究，结果表明白藜芦醇具有抗肿瘤、抗心血管疾病、抗氧化等多方面有益于人类健康的生物活性，因此受到生物医学界的重视。
到目前为止，已在多种植物中发现了白藜芦醇，如葡萄科的葡萄属、蛇葡萄属，豆科的落花生属，百合科的藜芦属，蓼科的蓼属等。含有白藜芦醇的植物许多是常见的药用植物，如虎杖、何首乌等，有的甚至是食物，如葡萄、花生等。目前白藜芦醇的来源主要是从葡萄皮和某些豆类中提取，含量极为有限。葡萄皮中的白藜芦醇的含量被认为是最高的，也仅达0.5～1/万。中国四川出产的中药虎杖中以甙的形式存在的白藜芦醇含量，理论值为葡萄皮的200倍。因此，公开号为CN99115156.9、CN01126769.0、CN03147908.1的中国专利介绍了一种从中药虎杖中提取白藜芦醇的工艺的方法，是将虎杖根粉碎，用乙醇提取；过大孔树脂柱，减压浓缩，萃取得白藜芦醇精品。这些专利都是以虎杖根为原材料进行提取白藜芦醇，现在资源面临溃乏，价格从原来的1元/kg涨到了3.5元/kg。原材料的成本急剧上涨，98％白藜芦醇的价格从18000元/kg降低到了6000元左右/kg。
公开号为CN200510040625.1的中国专利介绍了一种从花生根提取白藜芦醇的生产方法，是将花生根粉碎，用乙醇提取；过大孔树脂柱，减压浓缩，萃取得白藜芦醇精品。虽然能缓解虎杖资源溃乏，但是白藜芦醇在花生中含量很低，成本比用虎杖根提取白藜芦醇的价格还要高，不利于工业化生产。
我国桑树种类、品种以及桑椹产量均位居世界首位，除青藏高原外，全国各地均有栽培。目前大部分地区将桑作为饲用栽培，每年除了饲养桑蚕外，桑树的很多部位都没得到利用。尽管许多研究已经报道桑有多种药理作用，抗过敏作用的研究也鲜有报道。迄今为止的文献均着重于桑中新化合物的发现及结构的确定，而对桑叶中白藜芦醇的快速提取工艺没有研究。而且白藜芦醇在桑叶中含量较高，取材方便，分布广泛，价格便宜，更有利于替代虎杖。因而，对桑进行深加工意义非凡。探索从桑中提取白藜芦醇，其意义相当远大，不但可以解决白藜芦醇生产原料问题，还可以增加农民收入，服务地方经济。
发明内容
本发明采用的技术方案包括：干燥过后的桑叶经用乙醇溶液提取、过滤、减压浓缩，然后用树脂吸附、乙醇洗脱、将洗脱液浓缩，萃取、减压浓缩，脱色制得白藜芦醇纯品。
因此，本发明提供一种从桑叶提取白藜芦醇的方法，步骤包括：
1、粉碎干燥桑叶，并将桑叶、70％乙醇按重量(kg)/体积比(V)＝1∶1-3进行混合，加热回流提取；过滤除渣后，减压浓缩至无乙醇味；
2、将浓缩液用2-3倍体积的乙酸乙酯萃取三次，分离乙酸乙酯层并进行浓缩，直至获得干燥物；
3、加入70％乙醇进行加热溶解，然后加入活性碳进行脱色，再进行浓缩直至获得干燥物；
4、加入90％乙醇进行加热溶解，然后加入热水调节乙醇终浓度为40-50％，室温过夜结晶，得白藜芦醇纯品。
在一个实施方案中，步骤5的乙醇终浓度为45％。
在另一个实施方案中，步骤2的过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤。其中，优选是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次。
在一个实施方案中，步骤4中所加入的70％乙醇、活性碳，其体积(V)/重量(kg)比＝20-10∶1。
在另一个实施方案中，步骤4中不加入70％乙醇，只加入活性碳脱色，再进行浓缩直至获得干燥物。
技术效果：
1、本发明方法中所用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，大大地降低了生产成本；
2、桑树种植容易，扦插、籽播均可，产量高、价格低，来源方便，后续资源有保障。使用桑叶作为虎杖等药材的替代，既大大提高了桑叶的利用效率，提高桑叶的附加值，又摆脱了对于虎杖等药材的依赖，完全缓解了市场对虎杖等药材的大量需求，同时又能对废弃桑叶充分利用，保护了虎杖等药用资源。
3、本发明方法操作简单，不必使用树脂层析过滤技术，也不需要精密仪器或自动化设备，可在桑叶资源丰富的乡镇企业进行生产，这极大的降低了白藜芦醇的生产成本，简化了生产过程。
4、本发明所用的试剂均为无毒、廉价、量产的化学试剂，整个过程中可利用成熟的试剂回收的常规技术，这极大地降低了向环境排放废弃物。
5、经过长期摸索，本发明确定了采用40-50％(优选45％)乙醇终浓度在室温条件下进行结晶，白藜芦醇的纯度是最高，可达到98.57-99.53％。
具体实施方式
下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。
实施例1：
粉碎干燥桑叶100kg，加入70％乙醇300L，80℃加热回流提取2h，三层纱布过滤两次、陶瓷膜过滤，减压浓缩至50L(无乙醇味)，然后浓缩液用50L乙酸乙酯进行萃取，取上层(乙酸乙酯层)，下层溶液再用50L乙酸乙酯进行萃取，取上层，下层溶液再用50L乙酸乙酯进行萃取，合并三次乙酸乙酯萃取液共150L左右，用旋转蒸发仪进行浓缩至干，再用70％乙醇80L加热溶解，加5kg颗粒活性碳进行脱色30min，再浓缩至干，90％乙醇2L加热溶解后，再加热水混匀，直至乙醇终浓度50％，然后室温结晶24h，得到白藜芦醇样品。
经检测，Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱为Hypersil ODS(150mm×4.6mm，5μ)，流动相为60％甲醇的水溶液；检测波长为298nm；流速为1ml/min；进样量为20μL。白藜芦醇样品的纯度为95.57％，结果如表1所示。
实施例2：
粉碎干燥桑叶500kg，加入70％乙醇600L，80℃加热回流提取2h，三层纱布过滤两次、陶瓷膜过滤，减压浓缩至100L(无乙醇味)，然后浓缩液用100L乙酸乙酯进行萃取，取上层(乙酸乙酯层)，下层溶液再用100L乙酸乙酯进行萃取，取上层，下层溶液再用100L乙酸乙酯进行萃取，合并三次乙酸乙酯萃取液共300L左右，用旋转蒸发仪进行浓缩至干，再用70％乙醇150L加热溶解，加15kg活性碳进行脱色30min，再浓缩至干，90％乙醇6L加热溶解后，再加热水直至乙醇终浓度47％，室温结晶24h，得到白藜芦醇样品。按照实施例1的方法进行纯度检测，纯度为96.32％，结果如表1所示。
实施例3：
粉碎干燥桑叶200kg，加入70％乙醇200L，80℃加热回流提取2h，三层纱布过滤两次、陶瓷膜过滤，减压浓缩至50L(无乙醇味)，然后浓缩液用50L乙酸乙酯进行萃取，取上层(乙酸乙酯层)，下层溶液再用50L乙酸乙酯进行萃取，取上层，下层溶液再用50L乙酸乙酯进行萃取，合并三次乙酸乙酯萃取液共150L左右，用旋转蒸发仪进行浓缩至干，再用70％乙醇100L加热溶解，加8kg活性碳进行脱色30min，再浓缩至干，90％乙醇3L加热溶解后，再加热水直至乙醇终浓度40％，室温结晶24h，得到白藜芦醇样品。按照实施例1的方法进行纯度检测，纯度为93.55％，结果如表1所示。
实施例4：
粉碎干燥桑叶300kg，加入70％乙醇300L，80℃加热回流提取2h，三层纱布过滤两次、陶瓷膜过滤，减压浓缩至80L(无乙醇味)，然后浓缩液80L乙酸乙酯进行萃取，取上层(乙酸乙酯层)，下层溶液再用80L乙酸乙酯进行萃取，取上层，下层溶液再用80L乙酸乙酯进行萃取，合并三次乙酸乙酯萃取液共150L左右，用旋转蒸发仪进行浓缩至干，再用70％乙醇120L加热溶解，加10kg活性碳进行脱色30min，再浓缩至干，90％乙醇4L加热溶解后，再加热水4L混匀，室温结晶24h，得到白藜芦醇固体，90％乙醇2L加热溶解后，再加热水混匀直至乙醇终浓度45％，室温结晶24h，得到白藜芦醇纯品。按照实施例1的方法进行纯度检测，纯度为99.53％，结果如表1所示。
表1
| 实施例 | 桑叶原料(kg) | 70％乙醇和活性碳的体积(V)/重量(kg)比 | 乙醇终浓度 | 纯度(％) |
| 1 | 100 | 80∶5 | 50 | 95.57 |
| 2 | 500 | 150∶15 | 47 | 96.32 |
| 3 | 200 | 100∶8 | 40 | 93.55 |
| 4 | 300 | 120∶10 | 45 | 99.53 |
结合以上实例，本发明与现行技术相比具有以下优点：
1.采用常规方法进行制备，所需设备简单，操作方便、安全。
2.未采用超声波操作或酶法提取、层析等精提技术，因此有机溶剂损失小，对环境没有污染。
Claims (5)
1、一种从桑叶提取白藜芦醇的方法，步骤包括：
(1)粉碎干燥桑叶，并将桑叶、70％乙醇按重量(kg)/体积比(V)＝1∶1-3进行混合，加热回流提取；
(2)过滤除渣后，减压浓缩至无乙醇味；
(3)将浓缩液用2-3倍体积的乙酸乙酯萃取三次，分离乙酸乙酯层并进行浓缩，直至获得干燥物；
(4)加入70％乙醇进行加热溶解，然后加入活性碳进行脱色，再进行浓缩直至获得干燥物；
(5)加入90％乙醇进行加热溶解，然后加入热水调节乙醇终浓度为40-50％，室温过夜结晶，得白藜芦醇纯品。
2、权利要求1的方法，其中步骤5的乙醇终浓度为45％。
3、权利要求1或2的方法，其中步骤2的过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤。
4、权利要求3的方法，其中过滤实是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次。
5、权利要求1或2的方法，其中步骤4中所加入的70％乙醇、活性碳，其体积(V)/重量(kg)比＝20-10∶1。
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