CN101947260A - 一种治疗痔疮的胶囊剂质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗痔疮的胶囊剂质量控制方法。其特征在于：采用显微鉴别对制剂中的大黄、珍珠、石决明进行了显微特征观察。采用薄层鉴别对制剂中的大黄、地龙、人工牛黄进行了成分斑点检测，做到全部药材都有检测手段。用HPLC法，以乙腈-甲醇-0.1％磷酸为流动相，大黄酚、大黄素为测定指标，对制剂中的总蒽醌和游离蒽醌进行了定量测定，规定了总蒽醌的含量限度与游离蒽醌的百分游离率，率先实现了测定指标与功效和副作用挂钩，保证了制剂的安全有效。该质控方法与常规法相比，无浓缩、无萃取、无蒸发，简便、快捷、效率高、成本低、无污染，有效提高了结果的准确性与重现性，构成了一部高水准的质控标准，可全方位控制胶囊质量。

Description

一种治疗痔疮的胶囊剂质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种治疗痔疮的胶囊剂质量控制方法。

背景技术

在防病治病方面，中药及其提取制剂占据着重要的位置，其质量控制方法主要是显微鉴别、薄层鉴别与含量测定。目前在各类国家质量标准中，鉴别的收载率都比较低，约为处方中药味数的30～40％，无法全方位控制产品质量。而且多是单一药材的鉴别和单一成分的定量。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。一个含5～6项鉴别和一项含量测定的质量标准检测完成，一般要花费4～5天的时间，如遇复试花费时间更长，检测速度严重制约着中药现代化生产速度。所以寻找简便、快捷、全方位控制质量的检测方法，成为中药质量控制必须突破的难关。

本发明就是针对上述情况，依据国家确保制剂安全有效的政策，利用显微鉴别和薄层鉴别互补技术，制定了一种治疗痔疮的胶囊剂(由大黄(酒制)1～2份、地龙(米炒)0.5～0.8份、石决明(煅)0.04～0.07份、珍珠粉0.02～0.05份与人工牛黄0.006～0.012份组成)质量控制方法。做到处方中的药材味味有检测，君药大黄不但有效成分有定量测定，而且对产生副作用的成分也有指标限制，既保证了制剂的安全性，又保证了制剂的有效性。

该质控方法与常规法相比，无浓缩、无萃取、无蒸发，简便、快捷、效率高、成本低、无污染，有效提高了结果的准确性与重现性，构成了一部高水准的质控标准，可全方位控制胶囊质量。

发明内容

采用显微鉴别对制剂中的大黄、珍珠、石决明进行了显微特征观察。采用薄层鉴别对制剂中的大黄、地龙、人工牛黄进行了成分斑点检测，三味药材的薄层鉴别采用同一供试品溶液，在2块薄层板上完成，而且对照药材也均是甲醇超声的上清溶液，3项薄层鉴别只需甲醇10～16ml，展开剂20ml，时间1小时。简便、快捷、成本低、无污染。

用高效液相法，以乙腈-甲醇-0.1％磷酸为流动相，大黄酚、大黄素为测定指标，对制剂中的总蒽醌和游离蒽醌进行了定量测定，规定了总蒽醌的含量限度与游离蒽醌的百分游离率，率先实现了测定指标与功效和副作用挂钩，保证了制剂的安全有效。

方法学研究说明：大黄酚进样量在0.0468～0.819μg，与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为：Y＝5422861X-31263，γ＝0.99998(见表1、图1)；大黄素的进样量在0.01992～0.996μg，与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为：Y＝3998385X-29652.5，γ＝0.99998(表2、图2)。采用加样回收实验，大黄酚的平均回收率为99.77％(n＝9)，RSD为1.92％(见表3)；大黄素的平均回收率为99.57％(n＝9)，RSD为1.53％(见表4)。每注入一针，20分钟即可将二成分测定完毕，波峰分离良好。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

[鉴别](1)取本胶囊剂的内容物，挑取少许置载玻片上，滴加水合氯醛试液，在酒精灯上稍加透化，盖上盖玻片，置10×40倍显微镜观察：草酸钙簇晶大，直径60～140μm(大黄、见图3)。肌纤维无色至淡棕色，微波状弯曲，有时呈垂直交错排列(地龙、见图4)。不规则碎块无色或淡绿色，半透明，具光泽，有时可见细密波状纹理(珍珠、见图5)。不规则团块暗灰色，不透明，加酸产生气泡(石决明、见图6)。

(2)取本胶囊剂内容物，研细，取1～2g，加甲醇3～5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取大黄和地龙对照药材各0.2～0.3g，，分别加甲醇2～3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8～10∶2～2.5∶0.1～0.12)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点(见图7)。

(3)取人工牛黄对照药材0.01～0.015g，加甲醇3～5ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液和鉴别(2)项下供试品溶液各4～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10～12∶2～2.4∶1～1.2∶0.5～0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与人工牛黄对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色荧光主斑点(见图8)。

3.含量测定

A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.1％磷酸(21～42∶11.5～23∶17.5～35)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。

B.对照品溶液制备精密称取大黄酚和大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含大黄酚20～25μg、大黄素5～10μg的溶液，即得。

C.供试品溶液制备取本胶囊剂装量差异项下的内容物，研细，取0.24～0.4g，精密称定，精密加入甲醇-盐酸(10∶1)的混合溶液15～25ml，称定重量，置80℃的水浴中加热回流30分钟，放凉，若瓶壁有黏附，超声去除，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2～3ml，置5～10ml量瓶中，加2％的氢氧化钠溶液1～1.5ml，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

再取本胶囊剂约0.13～0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～15ml，称定重量，超声处理30分钟(功率160W，频率50kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为测定游离大黄酚、大黄素的供试品溶液。

D.测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算总大黄酚、大黄素与游离大黄酚、大黄素的量。

本品每粒含大黄总蒽醌以大黄酚(C₁₅H₁₀O₄)和大黄素(C₁₅H₁₀O₅)的总量计，不得少于1.5mg；含游离蒽醌以大黄酚(C₁₅H₁₀O₄)和大黄素(C₁₅H₁₀O₅)的总量计，不得低于总蒽醌的78％。本发明的原理如下：

1.利用制剂中药材粉末的组织、细胞或内含物等在显微镜下呈现不同的显微特征，而进行鉴别。

2.根据中药各有效成分的化学结构和极性不同，随着展开剂的移动，在薄层板上的吸附、解吸附的能力而不一样，使各有效成分的斑点得以分离。又借助各有效成分在不同的检视条件下，呈现不同的斑点颜色，使同一块薄层板上可同时互不干扰地检测数种有效成分。

3.依据相似相溶原理，利用游离蒽醌及其蒽醌甙类都易溶于甲醇，用甲醇替代水作为水解溶剂，形成了在均一相系的边提取，边水解，反应完全。不但缩短了提取，水解时间，而且降低了水解温度，最大限度地保存了酚类成分。水解后，取一定量水解液，中和、稀释，即可。整个处理程序无理论上的任何损失，提高了测定结果的重现性和准确性。

本发明的创新点及有益效果如下：

(1)突破了一个样品溶液，一块薄层板，检测一种中药的传统鉴别方式，创新了同一供试品溶液，在2块薄层板上，完成3味中药的快速薄层鉴别新方法，大黄、地龙在一块薄层板上，人工牛黄在一块薄层板上。

(2)在制备供试品溶液和对照药材溶液时，避开了提取、蒸干、萃取等严重污染环境和危害实验人员健康的操作步骤，样品和对照药材都是简单的甲醇超声，即可得到实验溶液。三项薄层鉴别只需样品1～2g，甲醇10～16ml，展开剂20ml，时间1小时；简便、快捷、成本低、无污染。

(3)以大黄酚、大黄素为测定指标，采用同一流动相，同时测定制剂中的总蒽醌和游离蒽醌。规定了总蒽醌的含量限度与游离蒽醌的百分游离率，率先实现了测定指标与功效和副作用挂钩，既保证了制剂的有效性又保证了其安全性，使质量控制更具有现实意义。

(4)本发明与一般的质量控制限度不同之处是：游离蒽醌不是以含量的某数值为限度，而是以含量的百分比为限度，这样就避免了高含量的情况下，数值达到而百分比达不到的弊端，不论含量高低，其游离蒽醌与总蒽醌的比值，永远是一定值。

(5)该质控方法与常规法相比，无浓缩、无萃取、无蒸发，简便、快捷、效率高、成本低、无污染，有效提高了结果的准确性与重现性，构成了一部高水准的质控标准，可全方位控制胶囊质量。

附图说明

图1为大黄酚线性关系图

图2为大黄素线性关系图

图3为大黄的草酸钙簇晶

图4为地龙的肌纤维

图5为珍珠的半透明具光泽的不规则碎块

图6为石决明的不规则暗灰色团块

图7为大黄和地龙的薄层鉴别

图8为人工牛黄的薄层鉴别

图9大黄酚和大黄素对照品的HPLC色谱图

图10治疗痔疮的胶囊剂的HPLC色谱图

图11空白样品(不含大黄样品)的HPLC色谱图

图1和图2中，纵轴表示峰面积，横轴表示进样量(μg)。

图7中，1为大黄空白(不含大黄的样品)，2为大黄对照药材，3.4.5为样品，6为地龙对照药材，7为地龙空白(不含地龙的样品)。

图8中，1为人工牛黄对照药材，2.3.4为样品5为空白样品(不含人工牛黄)

图9、图10中，1为大黄酚色谱峰，2为大黄素色谱峰。

本发明具体实施方式如下：

[鉴别](1)取本胶囊剂内容物，挑取少许置载玻片上，滴加水合氯醛试液，在酒精灯上稍加透化，盖上盖玻片，置10×40倍显微镜观察：草酸钙簇晶大，直径60～140μm(大黄)。肌纤维无色至淡棕色，微波状弯曲，有时呈垂直交错排列(地龙)。不规则碎块无色或淡绿色，半透明，具光泽，有时可见细密波状纹理(珍珠)。不规则团块暗灰色，不透明，加酸产生气泡(石决明)。

(2)取本胶囊剂内容物，研细，取1～2g，加甲醇3～5ml，超声处理10分钟，滤过，作为供试品溶液。另取大黄和地龙对照药材各0.2～0.3g，，分别加甲醇2～3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8～10∶2～2.5∶0.1～0.12)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。

(3)取人工牛黄对照药材0.01～0.015g，加甲醇3～5ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液和鉴别(2)项下供试品溶液各4～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10～12∶2～2.4∶1～1.2∶0.5～0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与人工牛黄对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色荧光主斑点。

3.含量测定

A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.1％磷酸(21～42∶11.5～23∶17.5～35)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。

B.对照品溶液制备精密称取大黄酚和大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含大黄酚20～25μg、大黄素5～10μg的溶液，即得。

C.供试品溶液制备取本胶囊剂装量差异项下的内容物，研细，取0.24～0.4g，精密称定，精密加入甲醇-盐酸(10∶1)的混合溶液15～25ml，称定重量，置80℃的水浴中加热回流30分钟，放凉，若瓶壁有黏附，超声去除，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2～3ml，置5～10ml量瓶中，加2％的氢氧化钠溶液1～1.5ml，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

再取本胶囊剂约0.13～0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～15ml，称定重量，超声处理30分钟(功率160W，频率50kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为测定游离大黄酚、大黄素的供试品溶液。

D.测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算总大黄酚、大黄素与游离大黄酚、大黄素的量。

本品每粒含大黄总蒽醌以大黄酚(C₁₅H₁₀O₄)和大黄素(C₁₅H₁₀O₅)的总量计，不得少于1.5mg；含游离蒽醌以大黄酚(C₁₅H₁₀O₄)和大黄素(C₁₅H₁₀O₅)的总量计，不得低于总蒽醌的78％。

采用上述方法测定了4批样品含量，结果见附表5。

表1大黄酚进样量与峰面积

表2大黄素进样量与峰面积

附表3样品中大黄酚的回收率试验结果

附表4样品中大黄素的回收率试验结果

附表5样品中总、游离大黄酚、大黄素含量及二者百分比数值

Claims (2)

1.本发明涉及一种治疗痔疮的胶囊剂质量控制方法，其特征在于：

(1)鉴别

1).取供试品内容物，挑取少许置载玻片上，滴加水合氯醛试液，在酒精灯上稍加透化，盖上盖玻片，置10×40倍显微镜下观察：草酸钙簇晶大，直径60～140μm(大黄)。肌纤维无色至淡棕色，微波状弯曲，有时呈垂直交错排列(地龙)。不规则碎块无色或淡绿色，半透明，具光泽，有时可见细密波状纹理(珍珠)。不规则团块暗灰色，不透明，加酸产生气泡(石决明)；

2).取本品内容物，研细，取1～2g，加甲醇3～5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取大黄和地龙对照药材各0.2～0.3g，，分别加甲醇2～3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8～10∶2～2.5∶0.1～0.12)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点；

3).取人工牛黄对照药材0.01～0.015g，加甲醇3～5ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液和鉴别(2)项下供试品溶液各4～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10～12∶2～2.4∶1～1.2∶0.5～0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与人工牛黄对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色荧光主斑点；

(2)含量测定

A.色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.1％磷酸(21～42∶11.5～23∶17.5～35)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000；

B.对照品溶液制备 精密称取大黄酚和大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含大黄酚20～25μg、大黄素5～10μg的溶液，即得；

C.供试品溶液制备 取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.24～0.4g，精密称定，精密加入甲醇-盐酸(10∶1)的混合溶液15～25ml，称定重量，置80℃的水浴中加热回流30分钟，放凉，若瓶壁有黏附，超声去除，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2～3ml，置5～10ml量瓶中，加2％的氢氧化钠溶液1～1.5ml，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 

再取本品约0.13～0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～15ml，称定重量，超声处理30分钟(功率160W，频率50kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为测定游离大黄酚、大黄素的供试品溶液；

D.测定法 分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算总大黄酚、大黄素与游离大黄酚、大黄素的量；

本品每粒含大黄总蒽醌以大黄酚(C₁₅H₁₀O₄)和大黄素(C₁₅H₁₀O₅)的总量计，不得少于1.5mg；含游离蒽醌以大黄酚(C₁₅H₁₀O₄)和大黄素(C₁₅H₁₀O₅)的总量计，不得低于总蒽醌的78％。

2.根据权利要求1所述的一种治疗痔疮的胶囊剂由大黄(酒制)、地龙(米炒)、石决明(煅)、珍珠粉与人工牛黄组成，其中各中药材的重量份数比为：大黄1～2份，地龙0.5～0.8份，石决明0.04～0.07份，珍珠粉0.02～0.05份，人工牛黄0.006～0.012份。 

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