CN101946705A

CN101946705A - 一种简单高效的天门冬快繁方法

Info

Publication number: CN101946705A
Application number: CN2010102603274A
Authority: CN
Inventors: 欧立军; 许栋; 杨加强
Original assignee: Huaihua University
Current assignee: Huaihua University
Priority date: 2010-08-18
Filing date: 2010-08-18
Publication date: 2011-01-19
Anticipated expiration: 2030-08-18
Also published as: CN101946705B

Abstract

本发明公开了一种简单高效的天门冬快繁方法，就是采用组织培养方法，它包括如下步骤：1)外植体的准备和消毒；2)接种及愈伤组织的诱导；3)愈伤组织的分化；4)生根；5)炼苗；6)栽培。本发明解决了天门冬依靠种子繁殖难的问题。本方法采用组织培养法，在离体培养下进行植物的无性繁殖，是快速繁殖优良植株的捷径；本申请提出的天门冬外植体在组织的诱导、分化、生根过程中的各种培养基配方，更有利于其繁殖及存活；本申请还发明了一种炼苗的方法，解决一般炼苗方法中幼苗成活率低的问题。本方法可以达到快速繁殖，节约了大量时间，可以投入生产实践中。

Description

一种简单高效的天门冬快繁方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种简单高效的药用植物天门冬快繁方法。

背景技术

天门冬(Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.)，又名天冬，为百合科天门冬属植物，原产非洲，我国主产于贵州、云南、四川、湖南、湖北等省，是传统的中草药，在我国已有几千年的使用历史，在《神农本草经》和《千金方》等中均有记载，是多个民族的常用药，其块根有养阴润燥、清肺生津的功效，常用于治疗肺燥干咳，咽干口渴，肠燥便秘等症，并具有抗菌、抗肿瘤、杀灭蚊蝇幼虫等生理活性，也常用作滋补品、收敛药使用。天门冬作为我国一种传统的中药，毒副作用较少，极具开发价值，近年来由于天门冬出口量大增，野生天门冬资源逐年减少，货源紧缺，价格逐年攀升。2004年至2008年每公斤价格上涨了近30元。自2001年以来，天门冬的种植开始发展，但由于天门冬的种植周期较长，从种植到收获要3-4年，且天门冬种子常规条件下很难萌发，发芽率极低。而组织培养是解决依靠种子繁殖难的植物繁殖的有效途径，且组织培养周期短，见效快。1902年，德国著名植物学家G.Haberlandt根据细胞学理论，提出了“高等植物的器官和组织可以不断分割，直到单个细胞，即植物体细胞，在适当的条件下，具有不断分裂和繁殖、发育成完整植株的潜力”的观点-即植物细胞具有全能性。1958年，Steward和Reinert在胡萝卜愈伤组织和细胞培养实验中获得了植株，证实了“植物细胞的全能性”，为植物组织培养技术奠定了理论基础。经过30多年的实验研究，目前已有600多种植物能用组织培养方法形成芽、胚状体及完整的植株。在离体培养下植物细胞所具有的这种能重新形成新个体的“全能性”，使组织培养技术在保持优良种质，加速植物的无性繁殖等应用中，取得了越来越多的成功，是快速繁殖优良植株的捷径。目前尚未见有用组织培养方法繁殖天门冬的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种简单高效的天门冬快繁方法，采用组织培养方法，解决天门冬依靠种子繁殖难的问题，同时解决繁殖培养过程中的营养及成活率等问题。

本发明解决问题所采用的技术方案是：一种简单高效的天门冬快繁方法，采用组织培养方法，包括如下步骤：

1)外植体的准备和消毒；

2)接种及愈伤组织的诱导；

3)愈伤组织的分化；

4)生根；

5)炼苗；

6)栽培

所述的外植体的准备和消毒：操作人员消毒，将外植体、接种工具进行消毒。

所述的接种及愈伤组织的诱导：进行接种，接种后放置于光照培养箱中。

所述的愈伤组织的分化：愈伤组织诱导3-7天后，待出现较大团状的淡黄色愈伤组织时，将愈伤组织转入分化培养基，继续放置于光照培养箱中。

所述的生根：愈伤组织分化7-10天后，待出现1-3个枝芽时，转入到生根培养基中，继续放置于光照培养箱中。

所述的炼苗：在生根培养基中10-25天后，待出现一定数量的白根，形成幼苗，这时把带幼苗的培养瓶取出进行炼苗，首先揭盖，加入少量双蒸水并盖上盖，以防组培苗失水及培养基被污染，搁置培养箱中2-3天，然后取出培养箱，加入少量自来水，放在室内自然光照20-28℃下培养2-3天，接着揭盖培养。

所述的栽培：待瓶内长出新鲜的嫩叶后，从瓶内取出苗并洗净培养基，放在营养土里栽培成株，待幼苗出现3-5个新枝后入土栽培。

所述的诱导愈伤组织的培养基配方为：：1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+琼脂0.7％+蔗糖3％，PH＝5.8。

所述的分化培养基配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA+琼脂0.7％+蔗糖3％，PH＝5.8。

所述的生根培养基中配方为：1/2MS+0.5mg/L IBA+0.5mg/L

IAA+琼脂0.7％+蔗糖2％，其中MS培养基中的Fe盐的浓度降低到0.25mg/L，PH＝5.8。

天门冬种子常规条件下很难萌发，发芽率极低，为此，湖南省高校创新平台开放基金项目(09K106)资助对此进行研究，根据研究结果提出了本发明。根据本发明的方法繁殖天门冬，解决了依靠种子繁殖难的问题。本方法采用组织培养法，在离体培养下进行植物的无性繁殖，是快速繁殖优良植株的捷径；本申请提出的天门冬外植体在组织的诱导、分化、生根过程中的各种培养基配方，更有利于其繁殖及存活；本申请还发明了一种炼苗的方法，解决一般炼苗方法中幼苗成活率低的问题。本方法可以达到快速繁殖，节约了大量时间，能够投入生产实践中。

附图说明

图1-2是外植体；

图3-4是愈伤组织的诱导；

图5-6是愈伤组织的分化；

图7-8是生根；

图9-10是炼苗；

图11-12是栽培。

具体实施方式

一种简单高效的天门冬快繁方法，主要包括如下步骤：

1)外植体的准备和消毒：

采用常规消毒法，用酒精棉球擦拭手掌，将外植体移入工作台面，用升汞(1％)浸泡8分钟，再用75％酒精浸泡5分钟；无菌水漂洗3-4次。点燃酒精灯，用具入酒精瓶(酒精浓度为75％)浸泡数分钟，取出在酒精灯上灼烧。把接种刀和镊子放在酒精灯火焰上灼烧，初次2-3分钟，以后30-60秒左右即可。

2)接种及愈伤组织的诱导：

接种工具和外植体消毒后，进行接种。每接种完一瓶，均应把接种刀和镊子放入酒精瓶中浸泡，灼烧后再接下一瓶，以免引起交叉感染。接种时瓶口进行火焰灭菌，然后用镊子夹外植体在培养基，培养基为诱导愈伤组织的培养基，配方为：1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L

NAA+琼脂0.7％+蔗糖3％，PH＝5.8。接种后放置于光照培养箱中，光照强度设置为4000LX，温度为26℃±1℃。

3)愈伤组织的分化：

愈伤组织诱导3-7天时，会出现较大团状的淡黄色愈伤组织时，这时将愈伤组织转入新的培养基，培养基为分化培养基，配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA+琼脂0.7％+蔗糖3％，PH＝5.8。继续放置于光照培养箱中，条件同上。

4)生根：

愈伤组织分化7-10天时，会出现1-3个枝芽时，这时转入到新的培养基中，该培养基为生根培养基中，1/2MS+0.5mg/L IBA+0.5mg/L IAA+琼脂0.7％+蔗糖2％，其中MS培养基中的Fe盐的浓度降低到0.25mg/L，PH＝5.8。继续放置于光照培养箱中，条件同上。

5)炼苗：

在生根培养基中10-25天后，待出现一定数量的白根，形成幼苗，这时把带幼苗的培养瓶取出进行炼苗，首先揭盖，加入少量双蒸水并盖上盖，以防组培苗失水及培养基被污染，搁置培养箱中2-3天，然后取出培养箱，加入少量自来水，放在室内自然光照20-28℃下培养2-3天，接着揭盖培养。

6)栽培：

待瓶内长出新鲜的嫩叶后，从瓶内取出苗并洗净培养基，用一定浓度，100-200mg·L^-1浓度的生根剂浸根20～30min后晾干，最后放在营养土里栽培成株，待幼苗出现3-5个新枝后入土栽培。

Claims

1.一种简单高效的天门冬快繁方法，采用组织培养方法，包括如下步骤：

1)外植体的准备和消毒；

2)接种及愈伤组织的诱导；

3)愈伤组织的分化；

4)生根；

5)炼苗；

6)栽培

2.一种简单高效的天门冬快繁方法，其特征在于：所述的诱导愈伤组织的培养基配方为：1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+琼脂0.7％+蔗糖3％，PH＝5.8。

3.一种简单高效的天门冬快繁方法，其特征在于：所述的分化培养基配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA+琼脂0.7％+蔗糖3％，PH＝5.8。

4.一种简单高效的天门冬快繁方法，其特征在于：所述的生根培养基中配方为：1/2MS+0.5mg/L IBA+0.5mg/L IAA+琼脂0.7％+蔗糖2％，其中MS培养基中的Fe盐的浓度降低到0.25mg/L，PH＝5.8。