CN101934068B - 胸腺肽注射液的制备方法 - Google Patents
胸腺肽注射液的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101934068B CN101934068B CN2010102917252A CN201010291725A CN101934068B CN 101934068 B CN101934068 B CN 101934068B CN 2010102917252 A CN2010102917252 A CN 2010102917252A CN 201010291725 A CN201010291725 A CN 201010291725A CN 101934068 B CN101934068 B CN 101934068B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- supernatant
- thymopetidum
- injection
- solution
- homogenate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种胸腺肽注射液的制备方法。它是小牛或猪的胸腺组织与氯化钠水溶液混合后研磨后，调节pH值3.5-4.5，在-15～-22℃温度下冷冻冷；将冷冻后的绞磨液化冻升温至33-37℃匀浆得匀浆液，然后加温到80℃，保温30分钟，分离得上清液与乙醇混合，静置，再分离，浓缩；调节浓缩液pH值7.5-8.5，然后加温至80℃，保温30分钟，再降温离心分离得第三上清液；超滤膜逐级超滤澄清后，得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水调节至每毫升溶液中含胸腺肽2.5mg或5mg或10mg；加入稳定剂，灭菌后即得胸腺肽注射液。制得产品高分子物质少于0.5％，远远低于国家标准规定。
Description
技术领域
本发明属于生物制药领域，具体涉及一种胸腺肽注射液的制备方法。
背景技术
胸腺肽注射液，曾用名：胸腺素注射液、胸腺因子注射液、胸腺因子D注射液，系由健康猪或小牛胸腺组织中提取的分子量小于10000道尔顿的多肽水溶液。本品具有调节和增强人体免疫功能的作用，能促使T-淋巴细胞成熟。用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、各种细胞免疫功能低下的疾病及肿瘤的辅助治疗。
目前，已公开了一些有关胸腺肽的制备工艺，是经冻融破细胞、离心分离、超滤、浓缩等过程。通常包括以下方法：(1)用绞肉机或匀浆器将新鲜的的胸腺匀浆，冻融，以破碎细胞；(2)用水在酸性或中性环境中提取破碎细胞；(3)将提取液加热到80℃左右维持10分钟，离心除蛋白沉淀；(4)离心液经10000分子量左右的超滤膜超滤得胸腺肽：(5)根据胸腺肽含量加注射用水配制各种浓度注射液制剂。
上述的工艺方法仅经过热变性去除杂蛋白，不能充分有效的去除各类杂蛋白，杂蛋白未有效去除易引起过敏反应；其次热变性时间短，不能有效去除各类动物源性病毒，使制剂存在病毒污染风险；再者注射液中氨基酸、小肽类物质易发生聚合为大分子物质而析出致使制剂不稳定，也易引起过敏反应。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胸腺肽注射液的制备方法，以克服上述技术的缺陷。
本发明的胸腺肽注射液的制备方法的技术方案为：它是将小牛或猪的胸腺组织去除脂肪，洗净后，与0.9克/毫升的氯化钠水溶液按1∶1的重量比例混合后利用胶体磨研磨得到绞磨液，将绞磨液用体积浓度为20％的冰醋酸调节pH值3.5-4.5，在-15～-22℃温度下冷冻冷；将冷冻后的绞磨液化冻升温至33-37℃匀浆得匀浆液，然后加温到80℃，保温30分钟，再离心分离得第一上清液；将第一上清液按1∶1的体积比加入无水乙醇，0-5℃静置1 2小时以上，再离心分离得第二上清液；浓缩第二上清液至原匀浆液体积的1/4～1/6得浓缩液；浓缩液调节pH值7.5-8.5，然后加温至80℃，保温30分钟，再降温至10℃～0℃以下后，离心分离得第三上清液；第三上清液先后用50KD、10KD超滤膜逐级超滤澄清后再利用5KD至8KD的超滤膜超滤得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水调节至每毫升溶液中含胸腺肽2.5mg或5mg或10mg；加入稳定剂，灭菌后即得胸腺肽注射液。
本发明先后通过50KD、10KD，5KD超滤膜多级超滤，既能保证杂蛋白的彻底去除，又能有效地去除高分子量物质；采用乙醇和酸碱沉淀去除杂蛋白，以及多级超滤，制得产品高分子物质少于0.5％，远远低于国家标准规定的少于5.0％，能更有效地保证产品质量，制剂配料过程中加入吐温-80作稳定剂，能有效得避免制剂在储存过程中氨基酸、小肽类物质等聚合为大分子物质析出，影响制剂的澄明度，保证产品长时间储存过程的稳定，同时降低过敏反应发生率。
具体实施方式
取新鲜的小牛(或猪)胸腺组织，剥离其附着的脂肪，用饮用水和纯化水先后分别清洗三次。
将小牛(或猪)胸腺组织与0.9克/毫升的氯化钠水溶液即生理盐水(温度不高于30℃)按1∶1的重量比例混合后加入胶体磨反复绞磨两次，收集绞磨液。
将绞磨液用用20％的冰醋酸调节pH值3.5-4.5，置于冷库冷冻7天以上。
取出冷冻7天以上的绞磨液化冻后置反应罐在33-37℃匀浆4-5小时，然后加温到80℃，保温30分钟，再离心(3000转/分钟，时间为30分钟)，弃沉渣取上清。
在不断搅拌下将上清液按1∶1的体积比加入无水乙醇，0-5℃静置12小时以上，离心(3000转/分钟，时间为30分钟)，弃沉渣取上清。
减压真空浓缩(温度：35-45℃真空度-0.03～-0.08MPa)至原匀浆液体积的1/5。浓缩的同时回收乙醇。
将上清液用10％氢氧化钠溶液调节pH值7.5-8.5，然后将罐内温度加温至80℃，保温30分钟，用冰水降温至10℃以下后，离心(3000转/分钟，时间为30分钟)，弃沉渣取上清。
上清液用50KD、10KD超滤膜逐级超滤澄清后得澄清液。
澄清液再用5KD-8KD超滤膜超滤得胸腺肽溶液。
制剂：将胸腺肽按质量标准方法测定多肽含量，加注射用水调节至每毫升含胸腺肽2.5mg(或5mg、10mg)，同时加入稳定剂吐温-80至每毫升含量为1-2‰，然后灌装、灭菌后即得胸腺肽注射液。
产品检测：对上述制备的产品的检测结果如下表1
检测结果表1：
病毒灭活效果检测：
按本发明的制备工艺，在匀浆液中加入伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)为指示病毒，经过80℃×30分钟的热处理后，以IBRS-2细胞作为培养用细胞，采用96孔细胞病变法检测病毒的滴度，以细胞病变(CPE)作为判别病毒存在的指标，对未出现细胞病变的样品用细胞进行盲传三代。通过病毒对照培养结果显示，采用上述热处理方法，可以使伪狂犬病毒滴度下降PRV7.4个LogTCID50/0.1ml，样本经盲传一代、二代、三代，均未见特异致细胞病变作用(CPE)。
Claims (2)
1.一种胸腺肽注射液的制备方法，是将小牛或猪的胸腺组织去除脂肪，洗净后，与0.9克/毫升的氯化钠水溶液按1∶1的重量比例混合后利用胶体磨研磨得到绞磨液，将绞磨液用体积浓度为20％的冰醋酸调节pH值3.5-4.5，在-15～-22℃温度下冷冻；将冷冻后的绞磨液化冻升温至33-37℃匀浆得匀浆液，然后加温到80℃，保温30分钟，再离心分离得第一上清液；将第一上清液按1∶1的体积比加入无水乙醇，0-5℃静置12小时以上，再离心分离得第二上清液；浓缩第二上清液至原匀浆液体积的1/4～1/6得浓缩液；浓缩液调节pH值7.5-8.5，然后加温至80℃，保温30分钟，再降温至10℃～0℃后，离心分离得第三上清液；第三上清液先后用50KD、10KD超滤膜逐级超滤澄清后再利用5KD至8KD的超滤膜超滤得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水调节至每毫升溶液中含胸腺肽2.5mg或5mg或10mg；加入稳定剂，灭菌后即得胸腺肽注射液。
2.如权利要求1所述胸腺肽注射液的制备方法，其特征是加入稳定剂吐温-80至每毫升溶液中的稳定剂重量含量为1-2‰。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010102917252A CN101934068B (zh) | 2010-09-26 | 2010-09-26 | 胸腺肽注射液的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010102917252A CN101934068B (zh) | 2010-09-26 | 2010-09-26 | 胸腺肽注射液的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101934068A CN101934068A (zh) | 2011-01-05 |
| CN101934068B true CN101934068B (zh) | 2012-07-25 |
Family
ID=43387789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010102917252A Active CN101934068B (zh) | 2010-09-26 | 2010-09-26 | 胸腺肽注射液的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101934068B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102233130B (zh) * | 2010-04-28 | 2013-05-01 | 江苏豪森药业股份有限公司 | 稳定的含有胸腺肽1衍生物的药物制剂 |
| CN102579347B (zh) * | 2012-03-02 | 2013-03-06 | 海南灵康制药有限公司 | 一种注射用胸腺法新脂质体制剂 |
| CN103172725A (zh) * | 2013-04-02 | 2013-06-26 | 黑龙江迪龙制药有限公司 | 一种富含胸腺肽α1的胸腺肽的制备方法 |
| CN103450356A (zh) * | 2013-09-23 | 2013-12-18 | 河南牧翔动物药业有限公司 | 一种高纯度胸腺肽的制备方法 |
| CN104856965B (zh) * | 2015-05-29 | 2018-07-20 | 湖南科伦制药有限公司 | 一种注射用胸腺肽的冻干方法 |
| CN107118257A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-01 | 兰州名德农牧科技有限公司 | 一种工业化的羊胎盘肽提取方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1255182C (zh) * | 2004-03-25 | 2006-05-10 | 江卫世 | 胸腺肽输液及其制备工艺 |
| CN1840177A (zh) * | 2006-01-11 | 2006-10-04 | 成都圣诺科技发展有限公司 | 胸腺肽α1注射液及其制备方法 |
| AU2007207618B2 (en) * | 2006-01-18 | 2011-03-24 | Foresee Pharmaceuticals Co., Ltd. | Pharmaceutical compositions with enhanced stability |
-
2010
- 2010-09-26 CN CN2010102917252A patent/CN101934068B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1255182C (zh) * | 2004-03-25 | 2006-05-10 | 江卫世 | 胸腺肽输液及其制备工艺 |
| CN1840177A (zh) * | 2006-01-11 | 2006-10-04 | 成都圣诺科技发展有限公司 | 胸腺肽α1注射液及其制备方法 |
| AU2007207618B2 (en) * | 2006-01-18 | 2011-03-24 | Foresee Pharmaceuticals Co., Ltd. | Pharmaceutical compositions with enhanced stability |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ALLLAN L，et al..《Purification and Biological Activity of Thymosin,a Hormone of the Thymus Gland》.《Proc.Nat.Acad.Ssi.》.1972,第69卷(第7期),1800-03. * |
| 蒋遐芝,等.《胸腺肽注射液生产工艺的改进》.《海峡药学》.2008,第20卷(第9期),23-24. * |
| 陈建华，等.《胸腺激素提取工艺研究》.《中国生化药物杂志》.1988,(第3期),33-34. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101934068A (zh) | 2011-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101934068B (zh) | 胸腺肽注射液的制备方法 | |
| CN108796017A (zh) | 牛骨肽及其酶解提取方法 | |
| CN106359839A (zh) | 一种牡蛎肽的提取方法 | |
| CN101537169A (zh) | 一种在畜禽上应用的转移因子溶液及其制备方法 | |
| CN101524167A (zh) | 一种小分子海参粉及小分子海参粉胶囊 | |
| CN104644673B (zh) | 一种转移因子的制备方法及其注射剂的制备方法 | |
| CN106350560A (zh) | 一种鱼蛋白肽的制备方法及其得到的鱼蛋白肽和应用 | |
| CN106011091A (zh) | 一种从三角帆蚌的蚌肉中提取纯化sod冻干粉的方法 | |
| CN112791103A (zh) | 一种鹿血制品及其制备方法 | |
| CN101947242B (zh) | 小牛血去蛋白提取物的制备方法 | |
| CN103041366B (zh) | 一种骨肽组合物及其制备方法 | |
| CN101933944B (zh) | 骨肽注射液的制备方法 | |
| CN105646656B (zh) | 灰星鲨软骨蛋白抗氧化肽及其用途 | |
| CN107184609A (zh) | 一种人胎盘无损无菌原液制备方法 | |
| CN1864742A (zh) | 在畜禽上应用的转移因子溶液及其制备方法及在畜禽上的应用 | |
| CN105753971A (zh) | 一种胶原蛋白的提取方法 | |
| CN107595924B (zh) | 一种骨瓜提取物注射液制备方法及相应的药物组合物 | |
| CN103495180A (zh) | 一种猪繁殖与呼吸综合征复合活疫苗用冻干保护剂 | |
| CN114652663A (zh) | 头发生长液及其制备方法 | |
| CN112042752A (zh) | 一种蜂花粉羊奶粉及其制备方法 | |
| CN111467371A (zh) | 一种脾源转移因子可溶性粉的制备方法 | |
| CN110754667A (zh) | 一种用于免疫调节的大鲵多肽粉组合物 | |
| CN110089616A (zh) | 一种富硒水解大米蛋白乳和粉的加工方法 | |
| CN116253791B (zh) | 一种具有改善骨关节健康作用的非变性ii型胶原蛋白的制备方法与应用 | |
| CN111184171A (zh) | 一种蛤蜊多糖护肝固体饮料的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |