CN101918312A - 二氧化硅颗粒及其制备方法和使用方法 - Google Patents

二氧化硅颗粒及其制备方法和使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了二氧化硅颗粒和含有二氧化硅颗粒的组合物。同样也公开了二氧化硅颗粒的制备和使用方法。

Description

二氧化硅颗粒及其制备方法和使用方法
技术领域
本发明涉及二氧化硅颗粒，包含二氧化硅颗粒的组合物，二氧化硅颗粒的制备方法，以及二氧化硅颗粒的使用方法。
背景技术
在高效液相色谱(HPLC)柱中，对填充介质施加相对高的填充压力以形成致密的分离介质。例如，达到或大于1500psi的填充压力是标准的填充压力。暴露在这样高填充压力的期间，一部分的填充介质，例如二氧化硅颗粒，可能会破碎形成微粒材料的细屑。在填充过程中产生的细屑量的增加会导致一系列的操作问题包括但不限于，流体流过柱子时的额外阻力、不均匀流体流过柱子和降低的柱效。
在本领域中，一直努力开发具有最佳杨氏模量的颗粒，例如二氧化硅颗粒，以使得颗粒在柱填充过程中仅适度地弹性屈服。如果颗粒的模量太低，颗粒过度的弹性颗粒变形会导致如上所述的操作问题(例如，流体流动时的高阻力)。然而，如果颗粒的模量太高，颗粒柱可能缺乏足够的稳定性。在使用中及系统受到机械冲击时，非常高模量的颗粒可能会移动位置，导致流体流动均一性降低和柱效降低。
本领域中需要具有最佳弹性模量的二氧化硅颗粒，所述颗粒当用于填充柱时，在柱子内部产生一种“内在弹簧效应”，即，当受到填充压力时，二氧化硅颗粒有一定程度的压缩但不破碎。
发明简述
本发明通过发现新型二氧化硅颗粒解决了上述的一些困难和问题。在用具有最佳杨氏模量的二氧化硅颗粒填充的柱子内，所述颗粒提供“内在弹簧效应”。认为二氧化硅颗粒具有高度抗塑性变形的内部，以及低抗弹性变形的表面(即，低弹性模量)。新型二氧化硅颗粒特别适用于作为高效液相色谱(HPLC)柱的色谱介质。新型二氧化硅颗粒通常是高度球形多孔、基本上无大孔隙、无定形的二氧化硅颗粒，并且未经表面修饰(即，未键合或正相)或经表面修饰(即，键合或反相，HIC等)的二氧化硅颗粒均可作为色谱介质。
在一个示例性实施方式中，本发明的二氧化硅颗粒包含多孔二氧化硅颗粒，其包含(i)具有第一弹性模量的内部以及(ii)具有第二弹性模量的颗粒外表面部分，其中第一弹性模量大于第二弹性模量。指定二氧化硅颗粒内弹性模量的差别可能会导致二氧化硅颗粒区域间不同的孔密度。例如，二氧化硅颗粒内部区域的孔密度要低于同一颗粒外表面区域的孔密度。
在另一个示例性实施方式中，本发明的二氧化硅颗粒包含多孔二氧化硅颗粒，其中所述颗粒具有至少约100MPa的塑性变形和小于约4GPa的弹性变形。当作为色谱介质使用时，高塑性变形和低弹性变形使得上述二氧化硅颗粒能被有效的填充到色谱柱中，且不会破坏颗粒。
本发明也涉及到制备二氧化硅颗粒的方法。在一个示例性方法中，制备二氧化硅颗粒的方法包含：部分水解有机硅酸盐以形成部分水解物质；蒸馏部分水解物质以除去任何乙醇并形成经蒸馏的部分水解物质；在极性连续相中乳化经蒸馏的部分水解物质，以在极性连续相中形成部分水解硅酸盐的微滴；通过使用氢氧化铵的缩合反应使得微滴凝胶化以形成球形多孔颗粒；洗涤球形多孔颗粒；湿热老化球形多孔颗粒；并干燥球形多孔颗粒以形成干燥多孔颗粒。
本发明还涉及到使用二氧化硅颗粒的方法。在使用二氧化硅颗粒的示例性方法中，包含制备色谱柱的方法，其包括将至少一种多孔二氧化硅颗粒掺入到色谱柱中，所述多孔二氧化硅颗粒包含(i)具有第一弹性模量的内部以及(ii)具有第二弹性模量的颗粒外表面部分，其中第一弹性模量大于第二弹性模量。更多使用二氧化硅颗粒的示例性方法可能包括使用上述色谱柱将流过色谱柱的一种或多种物质彼此分离。
本发明还涉及色谱柱、制备色谱柱的方法以及使用色谱柱的方法，其中色谱柱包含至少一种多孔二氧化硅颗粒，所述至少一种二氧化硅颗粒包含(i)具有第一弹性模量的内部以及(ii)具有第二弹性模量的颗粒外表面部分，其中第一弹性模量大于第二弹性模量。
通过研究本申请已公开的实施例和提交的权利要求的详细描述，本发明的上述特征和优点以及其它特征和优点显而易见。
附图说明
图1描述了本发明的示例性二氧化硅颗粒的放大视图；
图2A描述了具有阶梯状性质梯度(property gradient)的本发明的示例性二氧化硅颗粒的横断面视图；
图2B描述了具有基本连续性质梯度的本发明的示例性二氧化硅颗粒的横断面视图；
图3描述了本发明的示例性二氧化硅颗粒填充于HPLC柱之前和之后的粒度分析；
图4描述了本发明的示例性二氧化硅颗粒填充于HPLC柱之后的扫描电镜(SEM)图像；
图5描述了与常规二氧化硅颗粒相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒的柱填充效率；
图6描述了以下色谱图，其显示与常规二氧化硅颗粒相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒的肽选择性；
图7描述了以下色谱图，其显示与常规二氧化硅颗粒相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒的纯合成肽选择性；
图8描述了以下色谱图，其显示与常规二氧化硅颗粒相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒的粗合成肽选择性；
图9描述了粗20-AA合成肽的色谱图，其使用本发明的示例性二氧化硅颗粒和常规二氧化硅颗粒；
图10描述了以下色谱图，其显示与常规二氧化硅颗粒相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒血管活性肠肽(VIP)选择性；和
图11描述了与常规二氧化硅颗粒相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒的胰岛素负载容量。
发明详述
为了加强对本发明原理的理解，下文是对本发明的特定实施方式的描述，并且使用特定语言来描述所述特定实施方案。然而，应当理解的是，特定语言的使用并无意于限制本发明的范围。认为对本发明内容的变更、进一步修改以及对所讨论的本发明原理的进一步应用对于本领域的普通技术人员是正常的。
本发明涉及到多孔二氧化硅颗粒。本发明还涉及到制备多孔二氧化硅颗粒的方法，以及使用多孔二氧化硅颗粒的方法。下文提供了对示例性多孔二氧化硅颗粒、制备多孔二氧化硅颗粒的方法、以及使用多孔二氧化硅颗粒的方法的描述。
I.二氧化硅颗粒
本发明的二氧化硅颗粒具有使该二氧化硅颗粒与已知二氧化硅颗粒相比能够提供一种或多种优点的物理结构和性质。
A.二氧化硅颗粒的物理结构
本发明的二氧化硅颗粒呈球形，具有平均最大颗粒尺寸(即，最大直径尺寸)。通常，本发明的二氧化硅颗粒具有小于约700μm的平均最大颗粒尺寸，更通常地，小于约100μm。在本发明的一个理想实施方案中，二氧化硅颗粒具有约1.0-约100μm的平均最大颗粒尺寸，更理想地，为约3.0μm-约20μm。
例如应用透射电子显微技术(TEM)进行测量，本发明的多孔二氧化硅颗粒通常的长径比小于约1.4。在此使用的术语“长径比”用于描述(i)二氧化硅颗粒平均最大颗粒尺寸和(ii)二氧化硅颗粒平均最大横断面颗粒尺寸之间的比率，其中横断面颗粒尺寸与二氧化硅颗粒最大颗粒尺寸基本垂直。在本发明的一些实施方式中，二氧化硅颗粒的长径比小于约1.3(或小于约1.2，或小于约1.1，或小于约1.05)。通常，二氧化硅颗粒的长径比在约1.0-约1.2之间。
本发明的多孔二氧化硅颗粒也具有能使该二氧化硅颗粒成为理想色谱介质的孔隙容积。通常，经氮气孔隙率仪测量，二氧化硅颗粒的孔隙容积为至少约0.40cc/g。在本发明的一个示例性实施例中，经氮气孔隙率仪测量，多孔二氧化硅颗粒的孔隙容积为约0.40cc/g-约1.4cc/g。在本发明的另一个示例性实施例中，经氮气孔隙率仪测量，多孔二氧化硅颗粒的孔隙容积为约0.75cc/g-约1.1cc/g。
本发明的二氧化硅颗粒的平均孔径为至少约40埃。在本发明的一个示例性实施方案中，二氧化硅颗粒的平均孔径为约40
Figure GPA00001013742800052
-约700
Figure GPA00001013742800053
。在本发明的另一示例性实施方案中，二氧化硅颗粒的平均孔径为约90
Figure GPA00001013742800054
-约150
Figure GPA00001013742800055
经BET氮气吸附法(即，布鲁诺埃梅特特勒方法)测量，本发明的多孔二氧化硅颗粒还具有至少约150m2/g的表面积。在本发明的一个示例性实施方案中，二氧化硅颗粒具有约200m2/g-约450m2/g的BET表面积。在本发明的另一示例性实施方案中，二氧化硅颗粒具有约260m2/g-约370m2/g的BET表面积。
本发明的示例性二氧化硅颗粒的放大视图见图1，由放大率1000的扫描电子显微镜(SEM)提供。如图1所示，示例性二氧化硅颗粒10呈球形并且具有相对较窄的粒度分布。此外，如图2A和2B所示，认为示例性二氧化硅颗粒10沿颗粒横断面具有颗粒性质梯度。
如图2A所示，在本发明的一个实施方案中，认为示例性二氧化硅颗粒10在示例性二氧化硅颗粒10的内部12和外表面11之间具有阶梯状性质梯度。例如，示例性二氧化硅颗粒10可能在内部区域13具有较高的杨氏模量，而在表面区域14具有较低的杨氏模量。例如，示例性二氧化硅颗粒10可能在内部区域13具有较高的杨氏模量(或者较低的孔密度)，而在表面区域14内具有较低的杨氏模量(或者较高的孔密度)。应注意的是，在这个实施方案中，在示例性二氧化硅颗粒10的内部12和外表面11之间可能会有两个以上的具有不同的颗粒性质的区域。
如图2B所示，在本发明的另一实施方案中，认为示例性二氧化硅颗粒10具有基本连续的性质梯度，从内部12的内部值变化到沿外表面11的表面值。例如，示例性二氧化硅颗粒10在内部12处具有最大杨氏模量(或者最小孔密度，Pmin)，并且沿外表面11具有最小杨氏模量(或者最大孔密度，Pmax)。应注意的是，在这个实施方案中，最大或者最小性质值(例如，最小孔密度，Pmin)可能会位于示例性二氧化硅颗粒10的内部12和外表面11之间的某个点，而不是在如图2B所示的内部12上。
B.二氧化硅颗粒的性质
作为上述本发明二氧化硅颗粒物理性质的结果，所述二氧化硅颗粒很适合作为HPLC应用中色谱介质。基本为球形的形状允许均匀填充，因此使得液体可以更均匀地流过HPLC柱，导致更好的柱效。此外，由于二氧化硅颗粒的塑性变形性质，当暴露于填充压力下时，本发明的二氧化硅颗粒抵抗破碎，因而防止产生对流体流动的过大的阻力并且保持流体流过HPLC柱时的均一性。
如上所述，本发明的二氧化硅颗粒显示出具有最佳杨氏模量，该量使得所述颗粒在柱填充期间能适度的弹性屈服，但又不至于使颗粒破碎。当用于HPLC柱中时，本发明的二氧化硅颗粒提供“内在弹簧效应”，其以与通过动态轴向压缩所达到的方式的类似方式稳定柱子。
此外，如上所述，据认为本发明的二氧化硅颗粒具有弹性模量的放射状延伸的性质梯度。更准确的说，据认为本发明的二氧化硅颗粒具有表面区域，所述区域的模量适当地低于该二氧化硅颗粒内部区域。上述颗粒结构可解释为什么本发明的二氧化硅颗粒能形成稳定的填充柱(即，柱中的粒子运动和孔隙结构小)。认为本发明的二氧化硅颗粒在该颗粒表面具有更大的弹性变形，但是较高的模量指向颗粒内部，使得内部模量能够防止颗粒产生导致颗粒破碎和流体流动的高阻力的整体变形(即，塑性)。
另外，由于本发明二氧化硅颗粒的经认定的多孔性梯度，当应用于填充柱时，二氧化硅颗粒提供了良好的质量传递性质。因为，在色谱分离过程中，大部分的分子并不扩散到颗粒的最中心，前面所述的放射状延伸的多孔性梯度允许颗粒内外的质量传递增加，使得能够获得改善的柱效。
在一个实施方案中，经原子力显微镜(AFM)测量，本发明颗粒具有至少约100MPa的硬度或塑性变形，通常为至少约200MPa，更通常为至少约300MPa，甚至更通常为至少约400MPa。用购自Veeco
Instruments的、具有嵌金刚石探针的Nanoman II SPM系统在30μN压力下实施AFM。硬度由公式“硬度＝压力/面积”测定，其中面积是指由探针造成的压痕面积。AFM是如“应用原子力显微镜测量纳米尺度的理论模型和仪器的弹性模量(Theoretical Modelling And ImplementationOf Elastic Modulus Measurement At The Nanoscale Using Atomic ForceMicroscope)”Journal ofPhysics：Conference Series 61，第1303-07页，2007中所述方法进行实施的。
在另一个实施方案中，经AFM测量，本发明颗粒具有小于约4GPa的杨氏模量或弹性变形，通常小于约3GPa，更通常小于约2GPa，甚至更通常小于约1GPa。用购自Veeco Instruments的、具有嵌金刚石探针的Nanoman II SPM系统在3.297μN压力下实施AFM。杨氏模量由Oliver与Pharr分析测定，如“应用负载和移位传感压痕仪器测定硬度和弹性模量的改良技术(An Improved Technique for DeterminingHardness and Elastic Modulus Using Load and Displacement SensingIndentation Experiments)”J.Mater.Res.，Vol.7，第1564-83页，1992中所述。
在另一个示例性实施方案中，本发明的二氧化硅颗粒包含多孔二氧化硅颗粒，其中所述颗粒具有至少约100MPa的塑性变形和小于约4GPa的弹性变形，优选至少约100MPa的塑性变形和小于约3GPa的弹性变形，更优选至少约100MPa的塑性变形和小于约2GPa的弹性变形。此外，本发明二氧化硅颗粒可能具有本文所列举的塑性变形和弹性变形性质的任何组合，例如至少约100MPa(或200MPa、300MPa或400MPa等)的塑性变形和小于约4GPa(或3GPa、2GPa或1GPa等)的弹性变形。当用作色谱介质时，高塑性变形和低弹性变形使得颗粒能在不被破坏的情况下有效的填充到色谱柱中。
通过参考图3-5，进一步详述所公开的二氧化硅颗粒的上述性质。图3描述了在填充于HPLC柱之前和之后对本发明示例性二氧化硅颗粒的粒度分析。如图3所示，由以下(1)和(2)可知本发明二氧化硅颗粒在动态轴向压缩填充期间显示出更少的颗粒破碎：(1)与市售二氧化硅颗粒(购自Eka Nobel AB的Kromasil
Figure GPA00001013742800081
10微米C18)“前”和“后”的数字(％)曲线相比，本发明二氧化硅颗粒“前”和“后”的数字(％)曲线相似；(2)与市售二氧化硅颗粒细屑量的增加相比，本发明二氧化硅颗粒产生最小量的细屑。在将本发明颗粒填充到柱中后，粒度分布基本不改变，然而市售介质的粒度分布则明显不同。例如，本发明颗粒产生最小量的细屑(例如，基于小于5μm的细屑的总数量，数量小于约50％)，而市售颗粒产生更多的细屑(例如，基于小于5μm的细屑的总数量，数量大于约50％)。优选在本发明颗粒填充期间产生数量小于约40％的细屑、更优选小于约30％、最优选小于约20％(即，小于15％、10％、5％、4％、3％、2％等)。
图4描述了本发明示例性二氧化硅颗粒在经动态轴向压缩填充到HPLC柱后的扫描电镜影像(右图)(放大倍数＝500)与上述市售二氧化硅颗粒在经动态轴向压缩填充到HPLC柱后的扫描电镜影像(左图)的对比。左图显示将上述市售二氧化硅颗粒在经动态轴向压缩填充期间产生的细屑，而右图基本没有将本发明二氧化硅颗粒在经动态轴向压缩填充期间产生的细屑。
图5描述了本发明的示例性二氧化硅颗粒与常规二氧化硅颗粒相比的柱填充效率。如图5所示，与市售二氧化硅颗粒(购自EkaNobel，AB的Kromasil 10微米C18和购自Daiso Co.Ltd的Daiso 10微米C18)相比，本发明的二氧化硅颗粒显示出最高的理论塔板数/米。
II.制备二氧化硅颗粒的方法
本发明也涉及制备二氧化硅颗粒的方法。以下讨论制备本发明二氧化硅颗粒的原料以及制备方法步骤。
A.原料
制备本发明二氧化硅颗粒的方法可由许多含硅原料形成。合适的含硅原料包括但不限于，可通过包括Sigma-Aldrich Co.(St.Louis，MO)的多种渠道购买的原硅酸四乙酯(TEOS)；部分低聚化硅酸盐，诸如购自Silbond公司(Weston，MI)的SilbondTM 40或SilbondTM 50；部分低聚化硅酸盐，诸如购自Dynasil公司(West Berlin，NJ)的DynasilTM 40；和部分低聚化硅酸盐，诸如购自Wacker Chemie AG(Munich，Germany)的TES 40WN。
在本发明的一个理想的实施方案中，SILBONDTM 40被用于制备“小分子”产品。在此使用的术语“小分子”产品是用于描述特别用于小分子色谱应用中的本发明二氧化硅颗粒。本发明的“小分子”二氧化硅颗粒通常具有约0.75cc/g-约1.1cc/g的N2孔隙容积；约260m2/g-约370m2/g的N2表面积范围；和约90埃
Figure GPA00001013742800091
-约150埃
Figure GPA00001013742800092
的平均孔径范围。
B.工艺步骤
本发明二氧化硅颗粒通常通过多步骤工艺制备出来，其中将诸如上文所述的那些的有机硅酸盐部分水解、蒸馏，然后分散到更极性的连续相中，由于部分水解硅酸盐在极性连续相中的不相溶性，结果形成微滴。然后，通过氢氧化铵催化的缩合反应使得这些微滴凝胶化。然后将所得球形多孔颗粒洗涤、湿热老化并干燥。据发现湿热老化和干燥步骤期间的工艺条件对控制所得颗粒上的孔隙结构特别重要。然后通过常规的方法(例如，淘析或空气分级)可将所得多孔二氧化硅颗粒分布于适当窄的粒度分布。对不同工艺步骤进一步的描述见下文。
1.部分水解步骤
水解度是获得具有理想物理性质(例如，最佳杨氏模量、粒度等)的二氧化硅颗粒的重要工艺参数。例如，过度水解可能会导致在颗粒形成步骤的连续相中完全混溶的溶液，然而水解不足可能会导致原料在随后的缩合步骤(即，凝胶化)中过于惰性。
部分水解通常使用0.1M HCl(水溶液)，虽然也可以应用其它酸。在混合物(搅拌中)中加入乙醇(EtOH)以克服有机硅酸盐和水相的不相溶性。反应在室温下自发进行。一份标准的反应物组成包含100.0gSILBONDTM 40、21.5g乙醇和4.6g 0.1M HCl(水溶液)。
2.蒸馏步骤
可进行蒸馏部分水解物质以除去乙醇(即，加入的和作为副产物在水解步骤形成的乙醇)。蒸馏步骤最小化和/或消除无大孔隙的颗粒的形成。在此使用的术语“无大孔隙的颗粒”指的是具有基本连续的微多孔颗粒结构的二氧化硅颗粒。蒸馏通常在真空(即，小于100托)、约90℃条件下进行除去乙醇所必需的一段时间(通常，小于约1小时)。
3.颗粒形成(乳化)步骤
颗粒的形成伴随着PHS在氨水相中的乳化。由于涉及PHS的氨催化的缩合反应，微滴快速胶凝化(即，固化)。
已将两种方法应用于生产粒度范围在1-100μm的二氧化硅颗粒。第一种方法是一种应用Cowles搅拌机的两步批量技术。第一步中，即微滴形成步骤，将经蒸馏的PHS在异丙醇(IPA)/水溶液(例如，30wt％IPA水溶液)中乳化。然后，第二步中，在持续搅拌下加入NH4OH以促进缩合反应，从而固化多孔、球形颗粒。由搅拌叶桨尖速度(例如，较高的速度产生小颗粒)和连续相组成(例如，较多的醇产生小颗粒)控制平均粒度。
第二种生产二氧化硅颗粒的方法应用管路静态混合器来使PHS乳化到30wt％IPA/1wt％NH4OH水溶液中。在此情况下，以较高速度通过管路混合器会导致较小的粒度。
4.过滤/倾析步骤
在颗粒形成步骤之后，通常采用过滤和倾析从二氧化硅产品中除去过量的醇和任何的氨。在标准过滤/倾析步骤中，得自上述颗粒形成步骤中的滤饼被再悬浮于去离子水中(例如，12升去离子水)，然后留置沉降过夜(例如，12小时)。在沉降期后，倾析含颗粒溶液以除去大部分的液体。
5.湿热老化步骤
湿热老化步骤可用于降低多孔二氧化硅颗粒的内表面积。以类似于生产硅胶的方法，越严重的老化(即，更久、更热和/或更碱性)会导致在干燥期间更大的表面积降低以及更大的颗粒孔隙保留(孔隙容积)。在老化步骤结束时，加入足量的去离子水以冷却从而猝灭老化工艺。
在一个示例性实施方式中，湿热老化步骤包括将上述倾析/过滤步骤中制得的沉降二氧化硅饼再悬浮于足量的去离子水中以制成可搅拌的浆料(例如，约1kg的二氧化硅饼干料加入约1升水)。将可搅拌的浆料在约75℃下加热约90分钟。加入约12升室温的去离子水(每升热水)以停止老化过程。然后，或将悬浮液过滤，或将其留置沉降并倾析。
6.干燥步骤
干燥率同样对二氧化硅终产品的表面积和孔隙容积有影响。在一个示例性实施方案中，干燥步骤包括将经倾析的体积的二氧化硅产品或二氧化硅产品的滤饼摊开到一个托盘中，以形成厚约1.25cm的二氧化硅饼；将容纳二氧化硅饼的托盘置于炉温为约140℃的重力对流加热炉中约20小时；从炉中移出托盘和二氧化硅；收集二氧化硅。然后，干燥的二氧化硅物质可进行接下来的任选筛分和键合步骤。
III.使用二氧化硅颗粒的方法
本发明还涉及到使用二氧化硅颗粒的方法。如上所述，二氧化硅颗粒可用作色谱介质。在图6-11中描述多种使用二氧化硅颗粒作为色谱介质的方法。
图6描述了以下色谱图，其显示与常规二氧化硅颗粒(购自Phenomenex Inc的Luna
Figure GPA00001013742800121
5微米C18)相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒；
图7描述了以下色谱图，其显示与常规二氧化硅颗粒(购自AkzoNobel AB的Kromasil 5微米C18)相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒的纯合成肽选择性；
图8描述了以下色谱图，其显示与常规二氧化硅颗粒相比(购自Akzo Nobel AB的Kromasil 5微米C18)的本发明的示例性二氧化硅颗粒的粗合成肽选择性；
图9描述了粗20-AA合成肽的色谱图，其使用本发明的示例性二氧化硅颗粒和常规二氧化硅颗粒(购自Phenomenex Inc的Jupiter
Figure GPA00001013742800122
Proteo 5微米C18)；
图10描述了以下色谱图，其显示与常规二氧化硅颗粒相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒的血管活性肠肽(VIP)选择性；
图11描述了与常规二氧化硅颗粒(购自Akzo Nobel AB的Kromasil 5微米C8和购自YMC Co.，Ltd的Hydrosphere 5微米C8)相比的本发明的示例性二氧化硅颗粒的胰岛素负载容量。
实施例
下面通过实施例更详细的描述本发明，不应该以任何方式将下述实施例解释为对本发明范围的限制。相反，应该清楚地理解可通过手段获得各种其他实施方案、修饰和它的等同物，这些可由本领域技术人员在阅读过本文的描述后联想到，而不脱离本发明精神和/或提交的权利要求的范围。
实施例1
制备部分水解物质(PHS)
在搅拌下，将230g 0.1M HCl(水溶液)溶液加入到5000gSILBONDTM 40中。然后，在搅拌下向该混合物中加入1075g乙醇，以克服SILBONDTM 40和水相之间的不相溶性。反应在室温条件下自发进行。
对所得部分水解物质(PHS)进行蒸馏，以除去加入到混合物中或者是作为副产物在水解步骤中形成的任何乙醇。蒸馏在真空(即，＜100托)、约90℃的条件下进行。
实施例2
应用批量混合方法制备“小分子”二氧化硅颗粒
将3800g实施例1中形成的经蒸馏的PHS倒入14900g 30wt％IPA/水(预先制备好并且静置至少16小时以进行脱气)中。使用Cowles搅拌机，并设定为1160转/分，搅拌5分钟以完成乳化。然后，在继续搅拌的同时一次性加入378g 30wt％NH4OH。将所得溶液于1160转/分额外混合20分钟，在此过程中颗粒完全凝胶化。将二氧化硅悬浮液留置沉降过夜。
第二天，过滤二氧化硅悬浮液并将所得二氧化硅滤饼再悬浮于12升去离子水中，以除去任何过量的醇和/或氨。将二氧化硅溶液留置沉降过夜并在后一天倾析。重复该操作一次。
将从沉降溶液中获得的二氧化硅饼再悬浮于约1升去离子水中，以制得可搅拌的浆料。然后，将经搅拌的浆料在约75℃下加热90分钟。加入12升室温去离子水以停止老化过程。然后，过滤悬浮液以除去过量的液体。
将二氧化硅饼状产品摊开到托盘中，抹平至厚度约1.25cm。将容纳二氧化硅饼的托盘置于炉温约140℃的重力对流加热炉中20小时。然后从炉中移出托盘和二氧化硅，并将二氧化硅装瓶。
实施例3
应用管路静态混合器制备“小分子”二氧化硅颗粒
将实施例1中形成的经蒸馏的PHS(950ml/min)和30％IPA/1％NH4OH水溶液(4090ml/min)通过直径15.2cm(6英寸)的静态混合器混合。然后，将所得二氧化硅颗粒浆料流入摇动的容器中。将二氧化硅悬浮液留置沉降过夜。
第二天，过滤二氧化硅悬浮液并将所得二氧化硅滤饼再悬浮于12升去离子水中，以除去任何过量的醇和/或氨。将二氧化硅溶液留置沉降过夜并在后一天倾析。重复该操作一次。
将从沉降溶液中获得的二氧化硅饼再悬浮于约1升去离子水中，以制得可搅拌的浆料。然后，将经搅拌的浆料在约75℃下加热90分钟。加入12升室温去离子水以停止老化过程。然后，过滤悬浮液以除去过量的液体。
将二氧化硅饼状产品摊开到托盘中，抹平至厚度约1.25cm。将容纳二氧化硅饼的托盘置于炉温约140℃的重力对流加热炉中20小时。然后从炉中移出托盘和二氧化硅，并将二氧化硅装瓶。
实施例4
用AFM法测量二氧化硅颗粒
在该实施例中，用AFM测量包含10μm球形多孔颗粒的本发明二氧化硅颗粒以测定弹性和塑性变形性质。所述二氧化硅包括使得C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面的表面处理，其为颗粒提供了疏水性。在弹性和塑性变形性质方面与例如Daiso SP-120-ODS的市售二氧化硅颗粒比较，Daiso SP-120-ODS为具有含有共价结合至二氧化硅表面的C18甲硅烷层的10μm球形多孔二氧化硅颗粒，购自Daiso Co.，Ltd。每个二氧化硅颗粒的弹性和塑性变形性质按“应用原子力显微镜测量纳米尺度的理论模型和仪器的弹性模量”Journal of Physics：Conference Series 61，第1303-07页，2007中所述方法进行测量。对于塑性变形，用购自威尔仪器公司(Veeco Instruments)的、具有嵌金刚石探针的Nanoman II SPM系统在30μN压力下实施AFM。硬度由公式“硬度＝压力/面积”测定，其中面积是指由探针造成的压痕面积。对于弹性变形，用购自威尔仪器公司(Veeco Instruments)的、具备嵌金刚石探针的Nanoman II SPM系统在3.297μN压力下实施AFM。杨氏模量由Oliver与Pharr分析测定，如“改良应用负载和移位传感压痕仪器测定硬度和弹性模量的技术”J.Mater.Res.，Vol.7，第1564-83页，1992中所述。如表1所示，本发明二氧化硅颗粒的塑性变形远高于常规的或市售二氧化硅的塑性变形，本发明二氧化硅颗粒的弹性变形远低于常规的二氧化硅的弹性变形。
表1
  变形   本发明二氧化硅颗粒  Daiso二氧化硅颗粒
  塑性   420MPa   78MPa
  弹性   0.539GPa   4.7GPa
实施例5
在色谱柱中填充二氧化硅颗粒
在该实施例中，在色谱柱中测量包含10μm球形多孔颗粒的本发明二氧化硅颗粒以测定介质填充效率。所述二氧化硅包括使得C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面的表面处理，其为颗粒提供了疏水性。比较该介质的肽分辨率与其它介质的肽分辨率，所述介质包括：Kromasil
Figure GPA00001013742800151
，其具有10μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面，购自Akzo Nobel AB；和DaisoSP-120-ODS，其具有10μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面，购自Daiso Co.，Ltd。将上述介质填充到25mm x 400mm的、购自Alltech Associates，Inc.的SpringTM柱中。每60g介质使用150ml异丙醇以1500psi将上述介质填充到柱中。最终柱床长度为250mm。如图3所示，填充后产生的小颗粒或细屑的数量远低于常规的二氧化硅。例如，在填充后，本发明产生的细屑(粒度小于5μm)量小于Kromasil产生的细屑量的一半。
利用反相色谱法作为评价各色谱柱柱效的分离技术。在相同条件下，向各色谱柱中注入苯、萘和联苯的混合物，应用由70％体积的乙腈和30％体积的水组成的流动相。流速为10ml/min。色谱柱在25℃的室温下运行。用Super Prep流动池和Rainin检测器(购自Varian，Inc.)在254nm波长下进行检测。在分析中还用到了Varian SD-1制备泵(购自Varian，Inc.)、Valco prep手动进样器(购自Valco InstrumentsCompany Inc.)和EZ ChromTM(购自Scientific Software，Inc.)。
结果见图5，其证实与常规介质相比，应用本发明二氧化硅颗粒获得提高的柱效。
实施例6
应用二氧化硅颗粒作为色谱介质
在该实施例中，在色谱柱中测量包含5μm球形多孔颗粒的本发明二氧化硅颗粒以测定其分离例如肽类的不同生物物质的能力。所述二氧化硅包括使得C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面的表面处理，其为颗粒提供了疏水性。比较该介质的肽分辨率与购自Phenomenex，Inc的另一介质的肽分辨率，所述另一介质用Luna
Figure GPA00001013742800161
作为商品名，其具有5μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面。
利用反相色谱法作为评价各色谱柱的分离技术。在如下条件下：流动相包括A溶剂：含0.1％v/vTFA的水和B溶剂：含0.085％v/v TFA的乙腈，将表1中所列的肽的混合物(GY(238Da)，VYV(379Da)，甲硫氨酸-脑啡肽(YGGFM，573Da)，血管紧张肽II(Anglotensin II)(DRVYIHPF，1045Da)和亮氨酸-脑啡肽(YGGFL，555Da))注入到各色谱柱(4.6mm x 250mm)中。采用梯度方法，其中，先用10％的B溶剂和90％的A溶剂平衡柱30分钟；接下来将B溶剂从10％提高到40％(60％的A溶剂)；维持含40％B溶剂的液流5分钟；接下来将B溶剂从40％提高到90％(10％的A溶剂)；维持含90％B溶剂的液流5分钟。流速为1.0ml/min。色谱柱在25℃的室温下运行。用UVD 170S检测器(购自Dionex Corp.，Sunnyvale，CA)在225nm波长下进行检测。在分析中还用到了Dionex HPLC系统(P580HPG高压梯度，二元泵，购自Dionex Corp.)、Rheodyne手动进样器(购自IDEX Corp.)和CHROMELEON
Figure GPA00001013742800171
数据系统(购自Dionex Corp.)。结果见图6和表2，其证实与常规介质相比，应用本发明二氧化硅颗粒获得提高的各肽峰的分辨率。
表2
肽峰 本发明介质分辨率*  Phenomenex Luna介质分辨率*
  1   42.0   35.7
  2   32.2   28.3
  3   6.0   2.3
  4   7.4   11.3
*分辨率基于下个相邻峰.
实施例7
应用二氧化硅颗粒作为色谱介质
在该实施例中，在色谱柱中测量包含5μm球形多孔颗粒的本发明二氧化硅颗粒以测定其分离例如肽类的不同生物物质的能力。所述二氧化硅包括使得C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面的表面处理，为颗粒提供了疏水性。比较该介质的肽分辨率与购自Akzo Nobel AB的另一介质的肽分辨率，所述另一介质用Kromasil作为商品名，其具有5μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面。
利用反相色谱法作为各色谱柱的分离技术。在下述条件下：流动相包含A溶剂：含0.1％v/v TFA的水和B溶剂：含0.085％v/v TFA的乙腈，将肽的混合物(Ac-RGGGGLGLGK-酰胺(911Da)，RGAGGLGLGK-酰胺(883Da)，Ac-RGAGGLGLGK-酰胺(926Da)，Ac-RGVGGLGLGK-酰胺(954Da)和Ac-RGVVGLGLGK-酰胺(996Da))注入到各色谱柱(4.6mm x 250mm)中。采用梯度方法，其中，先用10％的B溶剂和90％的A溶剂平衡柱30分钟；接下来将B溶剂从10％提高到40％(60％的A溶剂)；维持含40％B溶剂的液流5分钟；接下来将B溶剂从40％提高到90％(10％的A溶剂)；维持含90％B溶剂的液流5分钟。流速为1.0ml/min。色谱柱在25℃的室温下运行。用UVD170S检测器(购自Dionex Corp.，Sunnyvale，CA)在225nm波长下进行检测。在分析中也用到了Dionex HPLC系统(P580HPG高压梯度，二元泵，购自Dionex Corp.)、Rheodyne手动进样器(购自IDEX Corp.)和CHROMELEON
Figure GPA00001013742800181
数据系统(购自Dionex Corp.)。结果见图7，其证实与常规介质相比，应用本发明二氧化硅颗粒提高对各肽峰的分辨率。
实施例8
使用二氧化硅颗粒作为色谱介质
在该实施例中，在色谱柱中测量包含5μm球形多孔颗粒的本发明二氧化硅颗粒以测定其从杂质中分离诸如肽的目标生物物质的能力。所述二氧化硅包括使得C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面的表面处理，其为颗粒提供了疏水性。将该介质的肽分辨率与购自AkzoNobel AB的另一介质的肽分辨率相比，所述另一介质用Kromasil作为商品名，其具有5μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面。
利用反相色谱法作为各色谱柱的分离技术。在下述条件下：流动相包含A溶剂：含0.1％v/v TFA的水和B溶剂：含0.1％v/v TFA的乙腈，将购自Bachem，Inc.的粗肽和两种杂质的混合物注入到各色谱柱(4.6mm x 150mm)中。采用梯度方法，其中，先用15％的B溶剂和85％的A溶剂平衡色谱柱30分钟；接下来将B溶剂从15％提高到50％(50％的A溶剂)；维持含50％B溶剂的液流1分钟；接下来将B溶剂从50％提高到80％(20％的A溶剂)；维持含80％B溶剂的液流5分钟。流速为0.8ml/min。色谱柱在22℃的室温下运行。用UVD 170S检测器(购自Dionex Corp.，Sunnyvale，CA)在220nm波长下进行检测。在分析中也用到了Dionex HPLC系统(P580HPG高压梯度，二元泵，购自Dionex Corp.)、Rheodyne手动进样器(购自IDEX Corp.)和CHROMELEON
Figure GPA00001013742800191
数据系统(购自Dionex Corp.)。结果见图8和表3，其证实与常规介质相比，应用本发明二氧化硅颗粒提高在接近的洗出杂质中的肽峰的分辨率。
表3
肽峰 本发明介质分辨率   Kromasil介质分辨率
  杂质#1   0.84   0.73
  杂质#2   0.50   0.32
实施例9
使用二氧化硅颗粒作为色谱介质
在该实施例中，在色谱柱中测量包含5μm球形多孔颗粒的本发明二氧化硅颗粒以测定其从杂质中分离诸如肽的目标生物物质的能力。所述二氧化硅包括使得C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面的表面处理，其为颗粒提供了疏水性。将该介质的肽分辨率与购自Phenomenex，Inc的另一介质的肽分辨率相比，所述另一介质用Jupiter
Figure GPA00001013742800192
作为商品名，其具有4μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面。
利用反相色谱法作为各色谱柱的分离技术。在下述条件下：流动相包含A溶剂：含0.1％v/v TFA的水和B溶剂：含0.1％v/v TFA的乙腈，将购自Biopeptide Co.，Inc.的粗肽混合物注入到各色谱柱(4.6mm x 250mm)中。采用梯度方法，其中，先用20％的B溶剂和80％的A溶剂平衡柱20分钟；接下来将B溶剂从20％提高到40％(60％的A溶剂)。流速为1.0ml/min。色谱柱在25℃的室温下运行。用UVD170S检测器(购自Dionex Corp.，Sunnyvale，CA)在220nm波长下进行检测。在分析中还用到了Dionex HPLC系统(P580HPG高压梯度，二元泵，购自Dionex Corp.)、Rheodyne手动进样器(购自IDEX Corp.)和CHROMELEON
Figure GPA00001013742800201
数据系统(购自Dionex Corp.)。结果见图9，其证实与常规介质相比，应用本发明二氧化硅颗粒提高在接近的洗出杂质中的肽峰的分辨率。
实施例10
使用二氧化硅颗粒作为色谱介质
在该实施例中，在色谱柱中测量包含5μm球形多孔颗粒的本发明二氧化硅颗粒以测定其从杂质中分离诸如肽的目标生物物质的能力。所述二氧化硅包括使得C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面的表面处理，其为颗粒提供了疏水性。比较该介质的肽分辨率与其它介质的肽分辨率，所述介质包括：Kromasil
Figure GPA00001013742800202
，其具有5μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面，购自Akzo NobelAB；和Luna
Figure GPA00001013742800203
，其具有5μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C18甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面，购自Phenomenex，Inc。
利用反相色谱法作为各色谱柱的分离技术。在下述条件下：流动相包含A溶剂：含0.1％v/v TFA的水和B溶剂：含0.085％v/v TFA的乙腈，将购自Karolinska Institutet(Stockholm，Sweden)的血管活性肠肽(28-氨基酸肽，HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN-酰胺，MW 3325.8)和两种杂质的混合物注入到各色谱柱(4.6mm x 250mm)中。采用梯度方法，其中，先用20％的B溶剂和80％的A溶剂平衡柱30分钟；接下来将B溶剂从20％提高到40％(60％的A溶剂)；维持含B溶剂为40％的液流5分钟；接下来将B溶剂从40％提高到90％(10％的A溶剂)；维持含B溶剂为90％的液流5分钟。流速为1.0ml/min。色谱柱在25℃的室温下运行。用UVD 170S检测器(购自Dionex Corp.，Sunnyvale，CA)在225nm波长下进行检测。在分析中还用到了Dionex HPLC系统(P580HPG高压梯度，二元泵，购自DionexCorp.)、Rheodyne手动进样器(购自IDEX Corp.)和CHROMELEON
Figure GPA00001013742800211
数据系统(购自Dionex Corp.)。结果见图10和表4，其证实与常规介质相比，应用本发明二氧化硅颗粒提高在接近的洗出杂质中的肽峰的分辨率。
表4
肽峰   本发明介质分辨率   Kromasil介质分辨率  Phenomenex Luna介质分辨率
  杂质#1   1.71   1.59   1.48
  杂质#2   2.93   2.66   2.27
实施例11
使用二氧化硅颗粒作为色谱介质
在该实施例中，在色谱柱中测量包含5μm球形多孔颗粒的本发明二氧化硅颗粒以测定其对胰岛素的正面负载容量(frontal loadingcapacity)。所述二氧化硅包括使得C8甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面的表面处理，其为颗粒提供了疏水性。比较该介质的胰岛素负载容量与其它介质的胰岛素负载容量，包括：Kromasil
Figure GPA00001013742800212
，其具有5μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C8甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面，购自Akzo Nobel AB；和Hydrosphere，其具有5μm球形多孔二氧化硅颗粒，并且C8甲硅烷层共价结合至二氧化硅表面，购自YMC Co.，Ltd。
在下述条件下：流动相包含A溶剂：含0.1％v/v TFA的水和B溶剂：包含250mg胰岛素的5ml乙腈溶液、2ml 50％冰醋酸和43ml DI水，利用反相色谱法作为各色谱柱的分离技术。将B溶剂用含0.1％TFA的DI水以1∶5的比例稀释，以制成1mg/ml胰岛素溶液。采用梯度方法，其中，先用100％的A溶剂平衡柱；接下来用1分钟的时间将B溶剂从0％提高到100％；维持含B溶剂为100％的液流200分钟；接下来用1分钟的时间将A溶剂从0％提高到100％(0％B溶剂)。流速为0.2ml/min。色谱柱在25℃的室温下运行。用UVD 170S检测器(购自Dionex Corp.，Sunnyvale，CA)在276nm波长下进行检测。在分析中还用到了Dionex HPLC系统(P580HPG高压梯度，二元泵，购自Dionex Corp.)、Rheodyne手动进样器(购自IDEX Corp.)和CHROMELEON
Figure GPA00001013742800221
数据系统(购自Dionex Corp.)。通过下述公式可以计算出每种物质的容量：
T (50％处) ＝测量于50％峰高的正面通过时间减去1分钟
C胰岛素＝1mg/ml
V柱＝0.173ml
F(流速)＝0.2ml/min
t0尿嘧啶来自采用0.2ml/min的流动相A的尿嘧啶的注入。
结果见图11，其证实与常规介质相比，应用本发明二氧化硅颗粒提高胰岛素的负载容量。例如，应用本发明二氧化硅的色谱柱的胰岛素负载容量为154mg/ml，而Hydrosphere和Kromasil介质分别提供133mg/ml和14mg/ml的胰岛素负载容量，这相当于约10％-约1000％的更高的回收率。
尽管用了有限数量的实施方案对本发明进行叙述，但是这些特殊的实施方案并不意欲限制本文所另行说明和要求保护的本发明范围。本领域的普通技术人员可理解：通过研究本文的示例性实施方案，可能进行进一步的修饰和变更。除非另有说明，实施例以及说明书的其余部分中，所有的份(parts)和百分数都以质量计。此外，意欲通过引用或其他方式使在说明书和权利要求中所列举的任何数值范围，诸如代表特定的一组性质、测量单位、条件、物理状态或百分数的那些，完全包含任何此范围内的数值(包括所列举的任何范围内的任何数值子集)。例如，只要一个以RL为下限、RU为上限的数值范围被公开，任何落入该范围的数值R也被明确的公开。特别地，下列在范围内的数值R被明确的公开：R＝RL+k(RU-RL)，其中k是从1％-100％的伴有1％的增量的变量范围，例如，k是1％、2％、3％、4％、5％....50％、51％、52％....95％、96％、97％、98％、99％或100％。此外，如上文所计算的由任何两数值R所代表的任何数值范围也被明确公开。除本文所显示和描述的之外，通过前文说明和附带的附图，本发明的任何修改对本领域的技术人员都变得显而易见。意欲使这些修改落入本发明的权利要求范围内。

Claims (29)

1.多孔二氧化硅颗粒，其包含(i)具有第一弹性模量的内部以及(ii)具有第二弹性模量的颗粒外表面部分，其中，所述第一弹性模量大于所述第二弹性模量。
2.权利要求1的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述颗粒具有如下弹性模量梯度：在颗粒内部具有最大弹性模量，紧邻颗粒外表面或在颗粒外表面具有最小弹性模量。
3.权利要求1的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述颗粒在颗粒内部具有第一孔密度，紧邻颗粒外表面或在颗粒外表面具有具有第二孔密度，所述第二孔密度大于所述第一孔密度。
4.权利要求1的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述颗粒基本为球形。
5.权利要求1的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述颗粒具有小于约100μm的平均最大粒径、约0.40cc/g-约1.4cc/g的孔隙容积、约
Figure FPA00001013742700011
约
Figure FPA00001013742700012
的平均孔径和约200m2/g-约450m2/g的表面积。
6.权利要求1的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述颗粒具有约3μm-约20μm的平均最大粒径、约0.75cc/g-约1.1cc/g的孔隙容积、约约
Figure FPA00001013742700014
的平均孔径和约260m2/g-约370m2/g的表面积。
7.权利要求6的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述颗粒具有约0.95cc/g的孔隙容积和约320m2/g的表面积。
8.权利要求1的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述颗粒具有约3μm-约20μm的平均最大粒径。
9.多个二氧化硅颗粒，其包含至少一种权利要求1的多孔二氧化硅颗粒。
10.用于色谱柱的介质，其包含至少一种权利要求1的多孔二氧化硅颗粒。
11.色谱柱，其与至少一种权利要求1的二氧化硅颗粒组合。
12.权利要求11的色谱柱，其中，所述至少一种多孔二氧化硅颗粒置于所述柱中。
13.应用色谱柱的方法，所述方法包括以下步骤：
通过权利要求12的色谱柱处理流体。
14.制备二氧化硅颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：
部分水解有机硅酸盐以形成部分水解物质；
蒸馏所述部分水解物质以除去任何乙醇并形成经蒸馏的部分水解物质；
在极性连续相中乳化经蒸馏的部分水解物质，以在所述极性连续相中形成部分水解硅酸盐的微滴；
通过使用氢氧化铵的缩合反应使所述微滴凝胶化以形成球形多孔颗粒；
洗涤所述球形多孔颗粒；
湿热老化所述球形多孔颗粒；和
干燥所述球形多孔颗粒以形成干燥多孔颗粒。
15.权利要求14的方法，其还包括将具有第一粒度的二氧化硅颗粒与不具有该第一粒度的二氧化硅颗粒分离。
16.权利要求15的方法，其中，所述第一粒度为约3μm-约20μm。
17.制备色谱柱的方法，所述方法包括以下步骤：
将至少一种通过权利要求14的方法形成的二氧化硅颗粒掺入色谱柱中。
18.应用色谱柱的方法，所述方法包括以下步骤：
通过包含二氧化硅颗粒的色谱柱处理流体，所述二氧化硅颗粒由至少一种通过权利要求14的方法形成。
19.权利要求18的方法，其中，所述流体包含肽。
20.通过权利要求14的方法形成的二氧化硅颗粒。
21.多孔二氧化硅颗粒，其具有至少约100MPa的塑性变形。
22.权利要求21的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述塑性变形为至少约200MPa。
23.权利要求21的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述塑性变形为至少约300MPa。
24.权利要求21的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述塑性变形为至少约400MPa。
25.多孔二氧化硅颗粒，其具有小于约4GPa的弹性变形。
26.权利要求25的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述弹性变形小于约3GPa 。
27.权利要求25的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述弹性变形小于约2GPa。
28.权利要求25的多孔二氧化硅颗粒，其中，所述弹性变形小于约1GPa。
29.多孔二氧化硅颗粒，其具有至少约100MPa的塑性变形和小于约4GPa的弹性变形。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104010970A (zh) * 2011-12-01 2014-08-27 赛默电子制造有限公司 用于液相色谱的多孔颗粒以及其制备方法
CN107923884A (zh) * 2015-08-25 2018-04-17 昭和电工株式会社 液相色谱用柱以及具备该液相色谱用柱的液相色谱装置
CN110449116A (zh) * 2018-04-13 2019-11-15 安捷伦科技有限公司 支持液体萃取中作为填充材料的合成二氧化硅

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101411007B1 (ko) * 2010-12-31 2014-06-23 제일모직주식회사 방현 필름용 조성물 및 이를 포함하는 방현 필름
CN102380345B (zh) * 2011-08-03 2013-01-16 济南大学 孔呈梯度分布的中空二氧化硅微球及其制备方法和应用
KR102196230B1 (ko) 2012-09-17 2020-12-29 더블유.알. 그레이스 앤드 캄파니-콘. 크로마토그래피 매질 및 장치
PL3137209T3 (pl) 2014-05-02 2023-01-02 W.R. Grace & Co. - Conn. Funkcjonalizowany materiał nośnikowy i sposoby wytwarzania oraz stosowania funkcjonalizowanego materiału nośnikowego
ES2896897T3 (es) 2015-06-05 2022-02-28 Grace W R & Co Agentes de clarificación para el bioprocesamiento de adsorbentes y métodos para producir y usar los mismos
JP7048642B2 (ja) 2017-05-04 2022-04-05 ナノロジカ アクティエボラーグ 肺、鼻、舌下および／または咽頭への送達に適した、少なくとも１つの生物活性化合物をロードした多孔質シリカ粒子の製造方法
KR102427987B1 (ko) * 2018-11-27 2022-08-02 주식회사 엘지화학 전가수분해된 폴리실리케이트의 합성방법
GB201916122D0 (en) 2019-11-06 2019-12-18 Nanologica Ab New compositions
WO2023178210A1 (en) * 2022-03-16 2023-09-21 W.R. Grace & Co.-Conn Process for producing porous spherical silica gel particles

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4160728A (en) * 1976-12-08 1979-07-10 E. I. Du Pont De Nemours And Company Bimodal chromatographic resolving zone
US5023208A (en) * 1989-12-19 1991-06-11 Orion Laboratories, Inc. Sol-gel process for glass and ceramic articles
WO1992003378A1 (en) * 1990-08-23 1992-03-05 United States Department Of Energy A METHOD FOR PRODUCING METAL OXIDE AEROGELS HAVING DENSITIES LESS THAN 0.02 g/cm?3¿
CN1923684A (zh) * 2006-09-15 2007-03-07 南开大学 纳米球形介孔二氧化硅材料和制备方法

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1473239A (zh) * 1966-01-31 1967-05-29
US3591518A (en) * 1968-12-31 1971-07-06 Du Pont Silica aquasols and powders
SE417431B (sv) * 1975-12-12 1981-03-16 Pharmacia Fine Chemicals Ab Dextranderivatgel for elektroforetisk separation
US4301034A (en) * 1980-05-21 1981-11-17 Phillips Petroleum Company Silica from single phase controlled hydrolysis of silicate ester
DE3616133A1 (de) * 1985-09-25 1987-11-19 Merck Patent Gmbh Kugelfoermige sio(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)-partikel
US4943425A (en) * 1988-04-01 1990-07-24 Gte Laboratories Incorporated Method of making high purity dense silica of large particle size
IT1240673B (it) * 1990-04-24 1993-12-17 Tenav Microsfere di aerogels di ossidi inorganici a stretta distribuzione dei diametri dei pori e metodo per la loro preparazione
US5409683A (en) * 1990-08-23 1995-04-25 Regents Of The University Of California Method for producing metal oxide aerogels
US5425930A (en) * 1993-09-17 1995-06-20 Alliedsignal Inc. Process for forming large silica spheres by low temperature nucleation
IT1266660B1 (it) * 1993-11-04 1997-01-09 Eniricerche Spa Procedimento per la preparazione di xerogels di silice porosi in forma sferica
JP2580537B2 (ja) * 1994-06-27 1997-02-12 工業技術院長 シリカ球状粒子からなる三次元網状構造体
US5728457A (en) * 1994-09-30 1998-03-17 Cornell Research Foundation, Inc. Porous polymeric material with gradients
US6290735B1 (en) * 1997-10-31 2001-09-18 Nanogram Corporation Abrasive particles for surface polishing
GB2355711B (en) * 1999-10-27 2003-12-24 Agilent Technologies Inc Porous silica microsphere scavengers
US6569908B2 (en) * 2000-01-19 2003-05-27 Oji Paper Co., Ltd. Dispersion of silica particle agglomerates and process for producing the same
US7250214B2 (en) * 2001-08-09 2007-07-31 Waters Investments Limited Porous inorganic/organic hybrid monolith materials for chromatographic separations and process for their preparation
BR0211703B1 (pt) * 2001-08-13 2012-02-22 processo de preparação de sìlica, sìlica, e, utilização de uma sìlica.
US7101523B2 (en) * 2001-09-25 2006-09-05 Mitsubishi Chemical Corporation Silica
US20040091411A1 (en) * 2002-11-08 2004-05-13 Bijan Modrek-Najafabadi High surface area, high porosity silica packing with narrow particle and pore diameter distribution and methods of making same
JP2005154195A (ja) * 2003-11-25 2005-06-16 Matsushita Electric Works Ltd エアロゲル材、及びこのエアロゲル材にて形成される物品
US20060169640A1 (en) * 2005-02-01 2006-08-03 Hubert Quinn High throughput screening, purification and recovery system for large and small molecules
US7468130B2 (en) * 2005-02-15 2008-12-23 Dionex Corporation Organosilanes and substrates covalently bonded with same and methods for synthesis and use same
PT103257B (pt) * 2005-04-05 2007-05-31 Inst Superior Tecnico Método de produção subcrítica de xerogéis e aerogéis monolíticos híbridos de sílica e látex modificado com grupos alcoxissilano
SG131016A1 (en) * 2005-09-19 2007-04-26 Millipore Corp Asymmetric porous adsorptive bead
EP1991203A2 (en) * 2006-02-13 2008-11-19 Advanced Materials Technology, Inc. Porous microparticles solid cores

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4160728A (en) * 1976-12-08 1979-07-10 E. I. Du Pont De Nemours And Company Bimodal chromatographic resolving zone
US5023208A (en) * 1989-12-19 1991-06-11 Orion Laboratories, Inc. Sol-gel process for glass and ceramic articles
WO1992003378A1 (en) * 1990-08-23 1992-03-05 United States Department Of Energy A METHOD FOR PRODUCING METAL OXIDE AEROGELS HAVING DENSITIES LESS THAN 0.02 g/cm?3¿
CN1923684A (zh) * 2006-09-15 2007-03-07 南开大学 纳米球形介孔二氧化硅材料和制备方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104010970A (zh) * 2011-12-01 2014-08-27 赛默电子制造有限公司 用于液相色谱的多孔颗粒以及其制备方法
US10493428B2 (en) 2011-12-01 2019-12-03 Thermo Electron Manufacturing Limited Porous particles for liquid chromatography and processes for the preparation thereof
CN107923884A (zh) * 2015-08-25 2018-04-17 昭和电工株式会社 液相色谱用柱以及具备该液相色谱用柱的液相色谱装置
CN107923884B (zh) * 2015-08-25 2020-10-16 昭和电工株式会社 液相色谱用柱以及具备该液相色谱用柱的液相色谱装置
CN110449116A (zh) * 2018-04-13 2019-11-15 安捷伦科技有限公司 支持液体萃取中作为填充材料的合成二氧化硅
CN110449116B (zh) * 2018-04-13 2023-10-13 安捷伦科技有限公司 支持液体萃取中作为填充材料的合成二氧化硅

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