CN101879293A - 一种治疗慢性疲劳综合症的药物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种由植物复方组成的用于治疗慢性并疲劳综合症的药物。本发明的药物由：黄芪25～35g，当归8～12g，黄精13～18g，川芎10～15g，枸杞8～12g，五味子8～12g，丹参18～24g，香附8～12g，肉苁蓉8～12g，砂仁4～8g组成，其制备方法是将称取的各药物加水煎煮得水提液，在煎煮的同时收集挥发油，再将水提液浓缩干燥处理得颗粒物，用乙醇溶解所得挥发油并喷洒于颗粒物上，再将颗粒物制粒或装入胶囊。

Description

一种治疗慢性疲劳综合症的药物

技术领域

本发明涉及一种植物药物，特别是一种由植物复方组成的用于治疗慢性并疲劳综合症的药物。

背景技术

慢性疲劳综合症(chronic fatigue syndrome，CFS)是由美国疾病预防与控制中心(Centers for Disease Control and Prevention，CDC)于1988年正式命名的，以持续或反复发作6个月以上的慢性疲劳为主要表现，且伴有记忆力下降、新发头痛、咽喉炎、肌痛、睡眠障碍和神经精神症状等非特异性症状的一组症候群。随着生活节奏的加快，其发病率正呈现逐年的增加趋势。

祖国医学治疗慢性疲劳综合症多采用以下的方法：

1从肝论治，如：陈世宏在“慢性疲劳综合症从肝论治体会”([J].中国中医药信息杂志，2005，12(11)：84)一文中以黄芪、仙鹤草、红参、百合、山茱萸、柴胡、枳壳、陈皮、当归、白芍、白术、茯苓构成的补肝消疲汤治疗慢性疲劳综合症。朱广文在“自拟补肝益气汤治疗慢性疲劳综合症46例”一文中([J].浙江中医杂志，2000，35(11)：476)。

2从心论治，俞方亭在“慢性疲劳综合症研究现状与中医治疗进展”[J].(中国中西医结合杂志，1995，15(12)：751-754)一文公开用酸枣仁汤与百合地黄汤、百合知母汤加用人参、沙参、丹参、白茅根等组成百合参汤治疗CFS多例。

3从脾论治，曹艳杰，王福波，曹彦英等人在“人参归脾汤加减治疗慢性疲劳综合症”[J].(中国临床康复，2004，8(9)：1657)中公开了以人参归脾汤加减(其主方为：人参、白术、茯苓、黄芪、当归、远志、酸枣仁、龙眼肉、木香、炙甘草、生姜)治疗CFS症。

4从肺论治，陈华，陈建华在“从肺论治慢性疲劳综合症”[J].(湖北中医杂志，2007，29(2)：20-21)中取参芪桔草汤(北沙参、黄芪、桔梗、甘草、桑叶、枇杷叶、麦芽、香附)治疗慢性疲劳综合症。

5从肾论治，卞景芝，陈慧娲，张丽，王利平在“应用补肾安神胶囊治疗慢性疲劳综合症1630例临床观察”[J].(天津中医药，2005，22(6)：517)中应用药物组成为人参、灵芝、仙灵脾、枸杞子、女贞子、旱莲草、鹿角片、酸枣仁、五味子等的补肾安神胶囊治疗慢性疲劳综合症。

6综合论治，曹继刚，周安方，舒劲松，陈国光.在“论脾虚肾亏肝实是慢性疲劳综合症的基本病机”[J].(中医药学报，2007，35(2)：37-39)中以红参、黄芪、白术、枸杞子、淫羊藿、川芎、郁金、丹参组成的抗疲方治疗CFS46症。

以上各药方对慢性疲劳综合症均有较好的疗效。

发明内容

本发明提供一种以植物药物复方组成的用于治疗慢性疲劳综合症的药物，以及这种药物的制备方法。

本发明的药物由：黄芪25～35g，当归8～12g，黄精13～18g，川芎10～15g，枸杞8～12g，五味子8～12g，丹参18～24g，香附8～12g，肉苁蓉8～12g，砂仁4～8g组成。

本发明治疗慢性疲劳综合症药物的制备方法是将称取的各药物加水煎煮得水提液，在煎煮的同时收集挥发油，再将水提液浓缩干燥处理得颗粒物，用乙醇溶解所得挥发油并喷洒于颗粒物上，再将颗粒物制粒或装入胶囊。

本发明的制备方法中最好是第一次加12倍重量的水提取挥发油3h，蒸馏后收集挥发油，水提液另存；第二次药渣加10倍水煎煮2h；合并2次煎液，过滤，滤液浓缩至比重为1.06，喷雾干燥；用95％乙醇溶解挥发油，喷洒于干燥颗粒，拌匀后，制粒或装入胶囊。

经相关的动物实验表明本发明的药物有极好的临床效果，而且急性毒性和长期毒性试验表明：本发明未见到有明显毒性反应，提示其使用安全无毒，临床使用安全可靠。

附图说明

附图1为急性毒性实验肾的病理切片，附图2为急性毒性实验肝脏病理切片，附图3为长期毒性实验肾的病理切片，附图4长期毒性实验肝脏病理切片.

具体实施方式

以下提供本发明的实验及结果。

一、试验药物

1、按以下组方和比例称取各药物：

黄芪25～35g，当归8～12g，黄精13～18g，川芎10～15g，枸杞8～12g，五味子8～12g，丹参18～24g，香附8～12g，肉苁蓉8～12g，砂仁4～8g。

2、药物的制备：

将前述称取的各药物加水进行煎煮。第一次加12倍重量的水提取挥发油3h，蒸馏后收集挥发油，水提液另存；第二次药渣加10倍水煎煮2h；合并2次煎液，过滤，滤液浓缩至比重为1.06，喷雾干燥；用95％乙醇溶解挥发油，喷洒于经干燥处理后的颗粒，拌匀后，制粒或装入胶囊。

本发明药物的另一制备方法是按传统方法将各药物加水进行煎煮，取水提液进行实验，其实验结果与前述类似，但其效果远低于前述制备方法制备的药物效果。

二、动物实验

1.1试验用药

本发明的药物胶囊采用前述2、药物的制备中第一段的方法制备，经计算，每g药物相当于生药23.08g；所使用的复方阿胶浆由山东东阿阿胶股份有限公司生产，批号080824。

1.2实验动物

昆明种小鼠，体重(20±2)g，♀、♂各半，兰州大学实验动物中心提供，经检疫后合格备用。

1.3仪器

动物天平、秒表、手术剪、眼科镊、灌胃针及注射器、动物笼具。FA2004B电子天平，上海精密科学仪器有限公司。96孔培养板(英国CORNING)，二氧化碳培养箱(德国HEREUS)，倒置显微镜(日本OLYMPUS)，960型酶标仪(台湾ERMAINC)。所有实验数据均用SPSS 11.0统计软件进行分析。

1.4试剂

苦味酸，沈阳瑞丰精细化学品有限公司；无水乙醇，天津市化学试剂六厂三分厂；RPMI-1640培养液(美国GIB CO)，四甲基偶氮唑盐(MTT，美国SIG MA)，二甲亚砜(DMSO，美国SIG MA)，刀豆蛋白A(CONA，美国SIG MA)，α-甲基甘露糖苷(α-mm，美国GIB CO)，灭活新生小牛血清(天津生化制品厂)

(一)本发明对慢性疲劳小鼠免疫调节功能的影响

1.1实验动物饲养

小鼠室温饲养，自由进食饮水，第1周适应性训练，第2周开始除正常组外，各组小鼠于直径65cm、水深70cm的静止水中进行游泳训练，水温保持在15±2℃，每天训练。第1周起开始训练时间为10min，以后每日增加10min，加至50min时维持此训练量至实验结束。同时每日小鼠进食时电刺激。

1.2干预措施

小鼠40只，随机分成5组，每组8只，分别为：正常组、模型对照组、复方阿胶浆阳性对照组[50g/(kg.d)]、本发明药物低剂量[0.69g/(kg.d)]和高剂量[1.38g/(kg.d)]2个给药组。根据以上剂量将复方阿胶浆和本发明药物胶囊分别配制成混悬液。灌胃量每次0.4mL，2次/d；正常组及模型组灌胃生理盐水，连续3w。

1.3脾细胞悬液制备

实验动物停药后摘眼球放血，脱臼处死，无菌取出脾脏，用橡皮塞轻轻挤压过200目不锈钢筛网，制成细胞悬液，收集滤液于试管中，1500r/min离心5min，弃上清。每管加3mLpH 7.2的Tris-NH₄Cl溶液溶解红细胞，离心，Hanks液洗2次。用RPMI-1640完全营养液调整细胞浓度至1×10¹¹/L细胞悬液，以备检测时使用。

1.4自然杀伤细胞活性的测定

将脾细胞悬液分别加入96孔培养板中，每孔100μL，每组设3复孔，以L⁹²⁹作为靶细胞，检测自然杀伤细胞活性，其活性以靶细胞溶解的百分率表示。

1.5IL-2活性测定

将脾细胞悬液分别加入96孔培养板中，每孔100μL，每组设3复孔，再加入10mg/L ConA100μL，37℃，50mL/L CO₂培养24h，收集上清液，即IL-2待测样品。用IL-2依赖株CTLL细胞作为检测细胞，调整细胞浓度至1×10¹⁰/L，接种于96孔培养板，每孔100μL，再加入100μL待测IL-2样品，37℃，50mL/L CO₂培养24h，用MTT比色法在酶标仪上检测A值。

1.6干扰素活性测定

将脾细胞加入96孔培养板中，每孔100μL，再加入10mg/L ConA 100μL，37℃，50mL/L CO₂培养48h，离心，收集上清，用微量细胞病变抑制法测定干扰素活性，用Reed Muench法计算干扰素活性。

1.7实验结果与讨论

本发明的药物对慢性疲劳模型小鼠IL-2-干扰素-自然杀伤细胞免疫调节网的影响见表1。

表1各组小鼠白细胞介素2、干扰素和自然杀伤细胞活性变化

与正常组比较

P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，▲P＜0.01；与阳性对照组比较◆P＜0.05，

P＜0.01；与低剂量组比较

P＜0.05。

中医学认为慢性疲劳综合征是一种涉及多脏腑、多系统功能失调的疾病，与肝肾亏损、心脾两虚关系密切，其发病多与情志不遂、劳逸、外邪有关。实验和临床研究均表明，慢性应激能导致机体行为改变、多种功能失调，甚至会引起组织结构的改变。在各种慢性应激中，不可预期的应激比可预期的应激更易对机体产生不良影响。基于以上认识并参考有关文献，本实验选用强制冷水游泳作为应激源，在每天的不同时间造模，并改变造模持续时间，减少机体对应激的耐受，同时小鼠进食时电刺激，力图制造一个包括温度刺激(寒冷)、体力消耗(游泳)、电刺激以及精神刺激(强制冷水游泳所致情绪刺激)在内的由多种应激因素所致的应激动物模型。它既模拟了中医有关疲劳的发病过程，也符合西医所认为的由慢性应激导致疲劳从而使免疫力低下的理论。IL-2、干扰素、自然杀伤细胞都是机体极为活跃的免疫调节因素，三者组成的IL-2-干扰素-自然杀伤细胞免疫调节网在调节机体免疫应答中起重要作用，实验结果显示，模型对照组与正常组比较差异显著，慢性疲劳模型动物免疫调节网水平比正常动物明显降低，说明造模成功；经本发明药物胶囊治疗后，慢性疲劳模型动物低下的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞活性皆有明显升高，并且高剂量组恢复至接近正常水平，在提高IL-2、自然杀伤细胞活性方面，本发明药物胶囊高剂量组作用均优于小剂量组及复方阿胶浆组，而在提高干扰素活性方面，本发明药物胶囊高、低剂量组的作用都比复方阿胶浆显著；从而说明本发明药物胶囊具有免疫增强和免疫调节作用，提高和调整机体低下的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞免疫调节网水平，可能是本发明药物胶囊发挥补中益气，滋阴养血功效，治疗慢性疲劳综合征机制之一，并与中医虚劳病理论中“虚则补之”的治法相吻合。因此，本发明药物具有抗应激、抗疲劳和提高机体免疫力的作用。

(二)本发明药物对小鼠耐疲劳能力的影响

用游泳法制备小鼠疲劳探讨本发明药物胶囊抗疲劳作用。

2.1试验用药

本发明的药物胶囊采用前述2、药物的制备中第一段的方法制备，经计算，每g药物相当于生药23.08g；人参，购于本市医药公司，用水提取法，制成每mL含原药材0.4g的药液备用。

2.2实验动物

昆明种小鼠，体重(20±2)g，♀、♂各半，兰州大学实验动物中心提供，经检疫后合格备用。

2.3仪器

动物天平、秒表、手术剪、眼科镊、灌胃针及注射器、动物笼具。FA2004B电子天平，上海精密科学仪器有限公司。所有实验数据均用SPSS11.0统计软件进行分析。

2.4试剂

苦味酸，沈阳瑞丰精细化学品有限公司。

2.5试验方法

小鼠32只，随机分成4组，每组8只，第1周适应性饲养，第2周分别为：正常组、人参提取液阳性对照组[相当于原药材16g/(kg.d)]、本发明药物胶囊低剂量[0.69g/(kg.d)]和高剂量[1.38g/(kg.d)]2个给药组。根据以上剂量将本发明药物胶囊分别配制成相应浓度的混悬液。灌胃量每次0.4mL，2次/d；正常组灌胃生理盐水，连续1w。末次给药后，各组动物尾根部负重为体重的8％，投人深30cm、温度为21士2℃的水中，以小鼠入水至沉入水底停止挣扎的时间作为游泳时间，各组与空白组比较，作组间t检验。

2.6结果与讨论

本发明药物胶囊对疲劳模型小鼠的耐力影响见表2。

结果显示，本发明药物胶囊高、低剂量组的游泳时间分别比空白对照组分别延长101％、70％，该差异均有显著性意义。提示本发明药物胶囊能提高小鼠耐疲劳能力。

表2本发明药物胶囊对小鼠游泳时间的影响结果

与正常组比较▲P＜0.05，*P＜0.01。

(三)本发明药物胶囊对小鼠红细胞、肝脏超氧化物歧化酶活性影响

通过测定小鼠红细胞、肝脏超氧化物歧化酶活性探讨本发明药物胶囊的药理作用。

3.1试验用药

本发明的药物胶囊采用前述2、药物的制备中第一段的方法制备，经计算，每g药物相当于生药23.08g。

3.2实验动物

昆明种小鼠，体重(20±2)g，♀、♂各半，兰州大学实验动物中心提供，经检疫后合格备用。

3.3仪器

动物天平、秒表、手术剪、眼科镊、灌胃针及注射器、动物笼具。FA2004B电子天平，上海精密科学仪器有限公司。所有实验数据均用SPSS11.0统计软件进行分析。

3.4试剂

苦味酸，沈阳瑞丰精细化学品有限公司；邻苯三酚，江苏省无锡科技实验二厂产品。

3.5试验方法

小鼠24只，随机分成3组，每组8只，第1周适应性饲养，第2周分别为：正常组、本发明药物胶囊低剂量[0.69g/(kg.d)]和高剂量[1.38g/(kg.d)]2个给药组，根据以上剂量将本发明药物胶囊分别配制成相应浓度的混悬液。灌胃量每次0.4mL，2次/d；正常组灌胃生理盐水，连续10d。末次给药后次日，各鼠均摘眼球采血，剖取肝脏，提取SOD，以改进邻苯三酚自氧化法测其活性，各组与空白组比较，作组间t检验。

3.6结果与讨论

本发明药物胶囊对小鼠红细胞、肝脏超氧化物歧化酶活性影响见表3。

表3本发明药物胶囊对小鼠红细胞、肝脏超氧化物歧化酶活性的影响

与正常组比较▲P＜0.05，*P＜0.01。

结果可见，本发明药物胶囊高低剂量组红细胞及肝脏的超氧化物歧化酶活性均高于空白对照组，差异均有显著性意义，提示本品有提高小鼠及肝脏超氧化物歧化酶活性的作用。

(四)本发明药物胶囊对小鼠脾脏、胸腺重量的影响

通过测定环磷酰胺致小鼠模型的红细胞、肝脏超氧化物歧化酶活性探讨本发明药物胶囊的药理作用。

4.1试验用药

本发明的药物胶囊采用前述2、药物的制备中第一段的方法制备，经计算，每g药物相当于生药23.08g；注射用环磷酰胺(CPA，081003)，上海第十二制药厂产品。

4.2实验动物

昆明种小鼠，体重(20±2)g，♀、♂各半，兰州大学实验动物中心提供，经检疫后合格备用。

4.3仪器

动物天平、秒表、手术剪、眼科镊、灌胃针及注射器、动物笼具。FA2004B电子天平，上海精密科学仪器有限公司。所有实验数据均用SPSS11.0统计软件进行分析。

4.4试剂

苦味酸，沈阳瑞丰精细化学品有限公司。

4.5试验方法

小鼠32只，随机分成4组，每组8只，第1周适应性饲养，第2周分别为：除正常组外余三组均以20m/kg腹腔注射CPA，隔日1次，共3次。给CPA后第2天，模型对照组及正常组给生理盐水，本发明药物胶囊低剂量[0.69g/(kg.d)]和高剂量[1.38g/(kg.d)]2个给药组分别给药。根据以上剂量将本发明药物胶囊分别配制成相应浓度的混悬液。灌胃量每次0.4mL，2次/d，连续10d。末次给药后次日，剖取脾脏及胸腺称重，按体重所含的脏器重量换算成脏器重量系数，各组与空白组比较，作组间t检验。

4.6结果与讨论

本发明药物胶囊对小鼠脾脏、胸腺重量的影响见表4。

表4本发明药物胶囊对小鼠脾脏、胸腺重量的影响

与模型组比较▲P＜0.05。

结果可见，本发明药物胶囊高剂量组对模型小鼠的脾脏及胸腺重量系数与模型对照组比较，差异有显著性意义，低剂量组对脾脏重量系数与空白对照组比较也有显著性差异，提示本品对所致小鼠脾脏及胸腺的萎缩有一定的拮抗作用。

(五)本发明药物胶囊对失血性贫血小鼠血液的Hb、RBC、WBC的影响

通过测定失血性贫血小鼠血液Hb、RBC、WBC探讨本发明药物胶囊的药理作用。

5.1试验用药

本发明的药物胶囊采用前述2、药物的制备中第一段的方法制备，经计算，每g药物相当于生药23.08g。

5.2实验动物

昆明种小鼠，体重(20±2)g，♀、♂各半，兰州大学实验动物中心提供，经检疫后合格备用。

5.3仪器

动物天平、秒表、手术剪、眼科镊、灌胃针及注射器、动物笼具。FA2004B电子天平，上海精密科学仪器有限公司。倒置显微镜(日本OLYMPUS)。所有实验数据均用SPSS11.0统计软件进行分析。

5.4试剂

苦味酸，沈阳瑞丰精细化学品有限公司。

5.5试验方法

小鼠24只，雌雄兼用，随机分成3组，每组8只，第1周适应性饲养，第2周实验动物均从眼球后静脉丛放血(5滴/10g体重)作血虚造模，同时取血作Hb含量(HICN法)、RBC数及WBC数(显微镜计数法)测定，作为造模前正常值。次日同法放血，第3日再同法放血测定上述三项指标，作为造模后值。随即给药，分别为：空白对照组生理盐水灌胃，本发明药物胶囊低剂量[0.69g/(kg.d)]和高剂量[1.38g/(kg.d)]2个给药组，根据剂量将本发明药物胶囊分别配制成相应浓度的混悬液灌胃。灌胃量每次0.4mL，2次/d，连续1w。给药第4天的给药后3h，同法采血测定上述三项指标，作为给药后值。第7日再采血测WBC(表5为第7日测值)，以给药后升高值(给药后值-造模后值)、恢复率(给药后值/造型前正常值×100％)为指标，各组与空白组比较，作组间t检验。

5.6结果与讨论

本发明药物胶囊对失血性贫血小鼠血液Hb、RBC、WBC的影响见表5。

表5本发明药物胶囊对失血性贫血小鼠血液Hb、RBC、WBC的影响

与造模前值比较▲P＜0.05；与空白对照组比较*P＜0.05。

结果可见，本发明药物胶囊高、低剂量组的给药后升高值与空白对照组比较，恢复率均高于空白对照组，其中低剂量组的Hb、RBC差异有显著性意义，提示本品对失血性贫血小鼠Hb、RBC的恢复有一定的促进作用。由于造型方法为放血法，结果显示对WBC的影响不明显，故此造型不足以了解本品对WBC的影响。

(六)本发明药物胶囊对小鼠小肠推进功能和大肠水分含量影响

本试验从正常小鼠小肠推进功能和大肠水分含量的角度探讨本发明药物胶囊滋阴养血，行气润燥的治疗作用。

6.1试验用药

本发明的药物胶囊采用前述2、药物的制备中第一段的方法制备，经计算，每g药物相当于生药23.08g。；墨汁的配制：准确称取阿拉伯树胶100g，加水800mL，煮沸至溶液透明，称取活性碳(粉状)50g，加至上述溶液中煮沸3次，待溶液凉后加水定容到1000mL。苦味酸，沈阳瑞丰精细化学品有限公司；无水乙醇，天津市化学试剂六厂三分厂；阿拉伯明胶、活性炭，重庆东试化工有限公司生产。10％水合氯醛，由兰州市第一人民医院药剂科提供。

6.2实验动物

昆明种小鼠，体重(20±2)g，♀、♂各半，兰州大学实验动物中心提供，经检疫后合格备用。

6.3仪器

动物天平、秒表、手术剪、眼科镊、灌胃针及注射器、动物笼具。FA2004B电子天平，上海精密科学仪器有限公司。所有实验数据均用SPSS11.0统计软件进行分析。

6.4试验方法

小鼠24只，雌雄兼用，随机分成3组，每组8只，第1周适应性饲养，第2周后，空白对照组生理盐水灌胃，本发明药物胶囊低剂量[0.69g/(kg.d)]和高剂量[1.38g/(kg.d)]2个给药组，根据剂量将本发明药物胶囊分别配制成相应浓度的混悬液灌胃。灌胃量每次0.4mL，2次/d，连续1w。第8天实验动物均禁食不禁水12h后，2％墨汁蒸馏水灌胃，15min后颈椎脱臼处死，打开腹腔，分离肠系膜，取出自幽门至回盲部的肠管，在没有牵拉的情况下轻轻将小肠拉成直线，测量幽门至回盲部的距离为小肠总长度，测量自幽门至墨汁推进前沿的距离为墨汁推进距离，以公式：“墨汁推进率＝墨汁推进长度/小肠总长度×100％”计算推进率；在计算墨汁推进率后计算水分含量，在没有牵拉情况下准确剪取小鼠大肠(直肠上部5cm处)5cm，称湿重；然后放入60℃烘箱中干燥5h，再在105℃干燥20h后至恒重，称其干重，以公式“水分含量％＝(湿重-干重)/湿重×100％”。各组与空白组比较，作组间t检验。

6.5结果与讨论

本发明药物胶囊对小鼠小肠推进功能和大肠水分含量影响见表6。

表6本发明药物胶囊对小鼠小肠推进功能和大肠水分含量影响

与造模前值比较▲P＜0.05；与空白对照组比较*P＞0.05。

结果可见，本发明药物胶囊高、低剂量组分别与空白对照组比较，小肠推进率和大肠水分含量均高于空白对照组，其中高剂量组的小肠推进率和大肠水分含量差异有显著性意义，提示本发明药物胶囊具有滋阴养血，行气润燥之功，可显著增加正常小鼠小肠推进率和大肠水分含量。

试验总结

综上实验结果表明，本发明药物胶囊可提高和调整小鼠低下的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞免疫调节网水平、耐疲劳能力、小肠推进率和大肠水分含量和红细胞及肝脏的超氧化物歧化酶活性；对所CPA致小鼠脾脏及胸腺萎缩有一定拮抗作用；对失血性贫血小鼠Hb和RBC的恢复有一定促进作用。

本发明药物胶囊方中黄芪、当归、黄精、川芎益气补血，行气润燥为君。枸杞、肉苁蓉、丹参、香附滋阴养血，行气为臣；黄芪补气升阳，摄血散结，辅以肉苁蓉可载黄芪补气之力达于肾，共举补肾气助肾阳之效；当归，养血润燥，增水行舟，辅以丹参偏于养血；黄精补中益气，辅以枸杞助黄精养阴润肺；川芎行气开郁，入血分理血中之气，辅以香附畅通气血。五味子滋肾敛肺为佐，砂仁醒脾和胃为使。十味合用，补中有通，滋阴不腻，养血活血，恢复营血。以上实验结果表明，与本品临床用于治疗气血两虚，腹胀便结等证基本一致，给本品的临床应用提供了一定的动物实验依据

七、本发明的安全性评价

试验用药

本发明的药物胶囊采用前述2、药物的制备中第一段的方法制备，经计算，每g药物相当于生药23.08g。

7.2实验动物

昆明种小鼠，体重(20±2)g，♀、♂各半，兰州大学实验动物中心提供，经检疫后合格备用。

7.3仪器

动物天平、秒表、手术剪、眼科镊、灌胃针及注射器、动物笼具。FA2004B电子天平，上海精密科学仪器有限公司。OlympusU-PMTVC双目显微镜。RM2135切片机(德国Leica公司)。所有实验数据均用SPSS11.0统计软件进行分析。

7.4试剂

苦味酸，沈阳瑞丰精细化学品有限公司。

7.5试验方法

7.5.1急性毒性实验

取小鼠40只，随机分2组，雌雄各半，实验前禁食不禁水12h，按可灌服的最大体积(0.4mL/10g)，给药组每次给每只小鼠灌服最大浓度的本发明胶囊混悬液1mL，并于1日之内连给5次，每次间隔4.8h，日累积剂量为25.88g/(kg.d)；空白对照组灌服同体积生理盐水。然后实验动物正常饮食，连续观察7天，未见动物发生死亡，灌药后动物活动略有减少，无其它异常生物学特征，一般1h内恢复正常。第7天称重，然后处死小鼠，解剖，未有肉眼可见的肝、心、脾、肺、肾、胃、肠的异常，空白组小鼠第7天体重为24.6±2.3g，给药组第7天体重为23.1±1.8g。

7.5.2长期毒性实验

取小鼠60只，雌雄各半，随机分成3组：对照组、本发明胶囊低剂量[0.69g/(kg.d)]和高剂量[1.38g/(kg.d)]2个给药组。根据以上剂量将复方阿胶浆和本发明胶囊分别配制成混悬液。灌胃量每次0.4mL，2次/d；对照组灌胃生理盐水，连续10w。测定小鼠体重、心肝肾功能、心电图等指标，给药组分别与对照组比较，未见明显异常。

7.5.3组织切片制备方法

取急性毒性和长期毒性实验动物的肝、肾等脏器10％甲醛溶液固定，48h混合酸脱钙，10天流动水冲洗，4h乙醇梯度脱水，石蜡包埋，切片，用HE染色镜下观察组织形态。

7.4结果与讨论

急性毒性实验肾、肝等脏器病理切片观测见附图1和附图2，以上日累积剂量为25.88g/(kg.d)，该剂量换算为人用剂量相当于临床最高用量的19倍以上，可以认为本品临床应用安全性比较高。

病理学检查肝、肾等脏器，给药组分别与对照组比较，均未见中毒性改变。以上结果提示本发明安全无毒，可用于临床。

长期毒性实验肾、肝等脏器病理切片观测见附图3和附图4，急性毒性和长期毒性试验表明：都未见到明显毒性反应，提示本发明安全无毒，临床使用比较安全可靠。

Claims (3)

1.一种治疗慢性疲劳综合症的药物，其特征是：

黄芪25～35g，当归8～12g，黄精13～18g，川芎10～15g，枸杞8～12g，五味子8～12g，丹参18～24g，香附8～12g，肉苁蓉8～12g，砂仁4～8g。

2.权利要求1所述的治疗慢性疲劳综合症的药物的制备方法，其特征是将称取的各药物加水煎煮得水提液，在煎煮的同时收集挥发油，再将水提液浓缩干燥处理得颗粒物，用乙醇溶解所得挥发油并喷洒于颗粒物上，再将颗粒物制粒或装入胶囊。

3.权利要求2所述的制备方法，其特征是称取各药物，第一次加12倍重量的水提取挥发油3h，蒸馏后收集挥发油，水提液另存；第二次药渣加10倍水煎煮2h；合并2次煎液，过滤，滤液浓缩至比重为1.06，喷雾干燥；用95％乙醇溶解挥发油，喷洒于干燥颗粒，拌匀后，制粒或装入胶囊。

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