CN101871015B - 基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法 - Google Patents
基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101871015B CN101871015B CN 200910251056 CN200910251056A CN101871015B CN 101871015 B CN101871015 B CN 101871015B CN 200910251056 CN200910251056 CN 200910251056 CN 200910251056 A CN200910251056 A CN 200910251056A CN 101871015 B CN101871015 B CN 101871015B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid
- loop
- goose parvovirus
- isothermal amplification
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法，该试剂盒根据鹅细小病毒VP3基因保守区的六个特异区域设计了两条特异性内引物和两条特异性外引物，从而保证了环介导等温扩增的高度特异性和检测结果的可靠性；本发明基于环介导等温扩增技术检测鹅细小病毒，可以在等温条件下快速、高效、特异地扩增靶序列，且操作简便，不需要昂贵的仪器和试剂，扩增产物直接用荧光染料显色即可凭肉眼判断结果，检测成本低，特别适合中小型单位和现场检测应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物检测试剂盒及方法，特别涉及一种基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法。
背景技术
鹅细小病毒(Goose Parvovirus，GPV)是细小病毒科(Parvoviridate)、细小病毒属(Parvovirus Genus)、无囊膜的单链DNA病毒，主要感染1月龄以内雏鹅和雏番鸭引起细小病毒病，又称小鹅瘟。该病是一种高发病率和高死亡率的高度接触性传染病，已经在世界范围内流行，给养鹅业造成严重危害和重大经济损失。
目前，鹅细小病毒的检测方法主要有分离培养鉴定法、聚合酶链式反应(PCR)法和荧光定量PCR(FQ-PCR)法，但分离培养鉴定法操作繁琐、费时，PCR法和FQ-PCR法需要昂贵的仪器和试剂，检测成本高，不适合中小型单位和现场检测应用。
环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)技术与其它核酸扩增技术相比，可以在等温条件下快速、高效、特异地扩增靶序列，且操作简便，不需要昂贵的仪器和试剂，成本低，已在病原微生物检测领域显示出广阔的发展前景。但至今尚未见基于环介导等温扩增技术检测鹅细小病毒的报道。
发明内容
有鉴于此，为克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒；目的之二在于提供一种使用所述基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒检测鹅细小病毒的方法；灵敏度高，特异性好，操作简便快速，结果准确可靠，检测成本低，适合中小型单位和现场检测应用。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
1、基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒，含有以下4组特异性引物中的任意1组：
①上游内引物FIP：5’-tcgcaatgccaatttcccgagg-ggagctatgggcgactct-3’；
下游内引物BIP：5’-gaccaccagaacctgggtcc-gcatcttgagaggttccgc-3’；
上游外引物F3：5’-aatggcagagggaggagg-3’；
下游外引物B3：5’-cccagggggtactgtatcc-3’；
②上游内引物FIP：5’-ggccaaatcctccgagattcgg-cagggacctattggggca-3’；
下游内引物BIP：5’-caatccaccaccgcaggtgt-ccacttctggtgcacgtatt-3’；
上游外引物F3：5’-ggtttggcagaacagggata-3’；
下游外引物B3：5’-gcccgtagagtactgggtta-3’；
③上游内引物FIP：5’-ggccaaatcctccgagattcgg-tggggcaaaaataccgaaga-3’；
下游内引物BIP：5’-caatccaccaccgcaggtgt-ccacttctggtgcacgtatt-3’；
上游外引物F3：5’-ggtttggcagaacagggata-3’；
下游外引物B3：5’-gcccgtagagtactgggtta-3’；
④上游内引物FIP：5’-cttgatgaacacctgcggtggt-ccatccttctccgaatctcg-3’；
下游内引物BIP：5’-aatacaccagtgcctgcagacc-gcccgtagagtactgggtta-3’；
上游外引物F3：5’-tggggcaaaaataccgaaga-3’；
下游外引物B3：5’-tcccacaccatctctactgt-3’。
进一步，还含有以下试剂中的一种或多种：嗜热脂肪芽孢杆菌(Bst)DNA聚合酶、10×热聚合反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物(dNTPs)、硫酸镁、甜菜碱和荧光染料赛博绿I(SYBR Green I)；所述10×热聚合反应缓冲液由浓度为250mmol/L、pH为8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)、浓度为100mmol/L的氯化钾、浓度为100mmol/L的硫酸铵、浓度为20mmol/L的硫酸镁和质量分数为1％的曲拉通(Triton)X-100组成；所述dNTPs由三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸(dATP)、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGTP)、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸(dCTP)和三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTTP)组成。上述试剂均为常规试剂，可直接从商业渠道购得，通常在相关实验室中为常备试剂，故本发明试剂盒中可以不放入上述试剂，或仅放入上述试剂中的一种或几种，当然也可全部放入，提供多种选择以方便使用者购买。
2、使用所述基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒检测鹅细小病毒的方法，包括以下步骤：
a、提取待检样品的病毒DNA作为模板DNA，控制模板DNA水溶液的OD260/OD280值为1.6～2.0，浓度为10～100ng/μl；
b、鹅细小病毒的环介导等温扩增：在反应管中配制总体积为25μl的环介导等温扩增反应体系，由以下组分组成：浓度各为0.2μmol/L的上游内引物FIP和下游内引物BIP，浓度各为0.8μmol/L的上游外引物F3和下游外引物B3，8U嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶，1×热聚合反应缓冲液，浓度各为1mmol/L的三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸，浓度为3mmol/L的硫酸镁，浓度为1mol/L的甜菜碱，待检模板DNA水溶液1μl，余量为水；将反应管于60～65℃水浴中保温反应45～90分钟，再于80～95℃水浴中保温3～5分钟终止反应；
c、显色检测：在反应管中加入质量分数为10％的荧光染料赛博绿I水溶液1μl，用肉眼观察颜色变化，如果颜色为黄色，说明待检样品中不含有鹅细小病毒；如果颜色变为绿色，说明待检样品中含有鹅细小病毒。
本发明的有益效果在于：本发明建立了基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法，该试剂盒根据鹅细小病毒VP3基因(Genbank AccessionNo.U25749)保守区的六个特异区域设计了两条特异性内引物和两条特异性外引物，从而保证了环介导等温扩增的高度特异性和检测结果的可靠性；本发明基于环介导等温扩增技术检测鹅细小病毒，由四条引物对靶序列的六个特异区域进行识别，特异性强；在等温条件下扩增，不会因温度改变而造成时间损失，耗时短，在1小时内即可将靶序列扩增至109倍，而且受非靶序列的影响小，与PCR法相比灵敏度更高，检测限仅为几个拷贝；此外，该技术不需要特殊、昂贵的仪器和试剂，扩增产物不需要进行凝胶电泳，直接用荧光染料显色即可凭肉眼判断结果，操作简便快速，检测成本低。本发明的试剂盒及方法特别适合中小型单位和现场检测应用。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1
1、基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒，由以下试剂组成：
a、浓度各为5μmol/L的上游内引物FIP水溶液和下游内引物BIP水溶液，浓度各为20μmol/L的上游外引物F3水溶液和下游外引物B3水溶液：引物序列如下：
上游内引物FIP：5’-tcgcaatgccaatttcccgagg-ggagctatgggcgactct-3’；
下游内引物BIP：5’-gaccaccagaacctgggtcc-gcatcttgagaggttccgc-3’；
上游外引物F3：5’-aatggcagagggaggagg-3’；
下游外引物B3：5’-cccagggggtactgtatcc-3’；
b、浓度为8U/μl的Bst DNA聚合酶水溶液；
c、10×热聚合反应缓冲液：由浓度为250mmol/L、pH为8.8的Tris-HCl、浓度为100mmol/L的氯化钾、浓度为100mmol/L的硫酸铵、浓度为20mmol/L的硫酸镁和质量分数为1％的Triton X-100组成；
d、浓度为10mmol/L的dNTPs水溶液：由浓度各为10mmol/L的dATP、dGTP、dCTP和dTTP组成；
e、浓度为100mmol/L的硫酸镁水溶液；
f、浓度为2mol/L的甜菜碱水溶液；
g、质量分数为10％的荧光染料SYBR Green I水溶液。
2、使用所述基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒检测鹅细小病毒的方法，包括以下步骤：
a、提取待检样品的病毒DNA作为模板DNA：本实施例同时设置实验组和空白对照组，其中实验组为鹅细小病毒，来源于四川农业大学禽病研究中心；采用DNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司)提取各组病毒DNA，按照试剂盒说明书操作，实验组所得病毒DNA水溶液的OD260/OD280值为1.8，浓度为20ng/μl。
b、鹅细小病毒的环介导等温扩增：在反应管中配制总体积为25μl的环介导等温扩增反应体系：加入浓度均为5μmol/L的上游内引物FIP水溶液和下游内引物BIP水溶液各1μl，浓度均为20μmol/L的上游外引物F3水溶液和下游外引物B3水溶液各1μl，浓度为8U/μl的Bst DNA聚合酶水溶液1μl，10×热聚合反应缓冲液2.5μl，浓度为10mmol/L的dNTPs水溶液2.5μl，浓度为100mmol/L的硫酸镁水溶液0.75μl，浓度为2mol/L的甜菜碱水溶液12.5μl，用无DNA酶的水稀释至24μl，再加入模板DNA水溶液1μl，混合均匀，即得；将反应管于60～65℃水浴中保温反应60分钟，再于80℃水浴中保温5分钟终止反应；
c、显色检测：在反应管中加入质量分数为10％的荧光染料赛博绿I水溶液1μl，振摇均匀，用肉眼观察颜色变化。
结果：空白对照组的颜色为黄色，说明不含有鹅细小病毒；实验组的颜色变为绿色，说明含有鹅细小病毒，与预期结果一致。
实施例2
1、基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒，与实施例1所述试剂盒的不同之处在于特异性引物序列不同，本试剂盒的引物序列如下：
上游内引物FIP：5’-ggccaaatcctccgagattcgg-cagggacctattggggca-3’；
下游内引物BIP：5’-caatccaccaccgcaggtgt-ccacttctggtgcacgtatt-3’；
上游外引物F3：5’-ggtttggcagaacagggata-3’；
下游外引物B3：5’-gcccgtagagtactgggtta-3’。
2、使用所述基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒检测鹅细小病毒的方法，与实施例1所述方法相同，结果发现：空白对照组的颜色为黄色，说明不含有鹅细小病毒；实验组的颜色变为绿色，说明含有鹅细小病毒，与预期结果一致。
实施例3
1、基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒，与实施例1所述试剂盒的不同之处在于特异性引物序列不同，本试剂盒的引物序列如下：
上游内引物FIP：5’-ggccaaatcctccgagattcgg-tggggcaaaaataccgaaga-3’；
下游内引物BIP：5’-caatccaccaccgcaggtgt-ccacttctggtgcacgtatt-3’；
上游外引物F3：5’-ggtttggcagaacagggata-3’；
下游外引物B3：5’-gcccgtagagtactgggtta-3’。
2、使用所述基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒检测鹅细小病毒的方法，与实施例1所述方法相同，结果发现：空白对照组的颜色为黄色，说明不含有鹅细小病毒；实验组的颜色变为绿色，说明含有鹅细小病毒，与预期结果一致。
实施例4
1、基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒，与实施例1所述试剂盒的不同之处在于特异性引物序列不同，本试剂盒的引物序列如下：
上游内引物FIP：5’-cttgatgaacacctgcggtggt-ccatccttctccgaatctcg-3’；
下游内引物BIP：5’-aatacaccagtgcctgcagacc-gcccgtagagtactgggtta-3’；
上游外引物F3：5’-tggggcaaaaataccgaaga-3’；
下游外引物B3：5’-tcccacaccatctctactgt-3’。
2、使用所述基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒检测鹅细小病毒的方法，与实施例1所述方法相同，结果发现：空白对照组的颜色为黄色，说明不含有鹅细小病毒；实验组的颜色变为绿色，说明含有鹅细小病毒，与预期结果一致。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
序列表
<110>重庆市畜牧科学院、四川农业大学
<120>基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法
<160>16
<210>1
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第①组上游内引物FIP
<400>1
tcgcaatgcc aatttcccga ggggagctat gggcgactct 40
<210>2
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第①组下游内引物BIP
<400>2
gaccaccaga acctgggtcc gcatcttgag aggttccgc 39
<210>3
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第①组上游外引物F3
<400>3
aatggcagag ggaggagg 18
<210>4
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第①组下游外引物B3
<400>4
cccagggggt actgtatcc 19
<210>5
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第②组上游内引物FIP
<400>5
ggccaaatcc tccgagattc ggcagggacc tattggggca 40
<210>6
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第②组下游内引物BIP
<400>6
caatccacca ccgcaggtgt ccacttctgg tgcacgtatt 40
<210>7
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第②组上游外引物F3
<400>7
ggtttggcag aacagggata 20
<210>8
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第②组下游外引物B3
<400>8
gcccgtagag tactgggtta 20
<210>9
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第③组上游内引物FIP
<400>9
ggccaaatcc tccgagattc ggtggggcaa aaataccgaa ga 42
<210>10
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第③组下游内引物BIP
<400>10
caatccacca ccgcaggtgt ccacttctgg tgcacgtatt 40
<210>11
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第③组上游外引物F3
<400>11
ggtttggcag aacagggata 20
<210>12
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第③组下游外引物B3
<400>12
gcccgtagag tactgggtta 20
<210>13
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第④组上游内引物FIP
<400>13
cttgatgaac acctgcggtg gtccatcctt ctccgaatct cg 42
<210>14
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第④组下游内引物BIP
<400>14
aatacaccag tgcctgcaga ccgcccgtag agtactgggt ta 42
<210>15
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第④组上游外引物F3
<400>15
tggggcaaaa ataccgaaga 20
<210>16
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>第④组下游外引物B3
<400>16
tcccacacca tctctactgt 20
Claims (1)
1.基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒，其特征在于：含有以下特异性引物组：
上游内引物FIP：5’-tcgcaatgccaatttcccgagg-ggagctatgggcgactct-3’；
下游内引物BIP：5’-gaccaccagaacctgggtcc-gcatcttgagaggttccgc-3’；
上游外引物F3：5’-aatggcagagggaggagg-3’；
下游外引物B3：5’-cccagggggtactgtatcc-3’；
还含有以下试剂中的一种或多种：嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶、10×热聚合反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物、硫酸镁、甜菜碱和荧光染料赛博绿I；所述10×热聚合反应缓冲液由浓度为250mmol/L、pH为8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、浓度为100mmol/L的氯化钾、浓度为100mmol/L的硫酸铵、浓度为20mmol/L的硫酸镁和质量分数为1％的曲拉通X-100组成；所述三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物由三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸组成。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200910251056 CN101871015B (zh) | 2009-12-29 | 2009-12-29 | 基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200910251056 CN101871015B (zh) | 2009-12-29 | 2009-12-29 | 基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101871015A CN101871015A (zh) | 2010-10-27 |
| CN101871015B true CN101871015B (zh) | 2013-04-24 |
Family
ID=42996099
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200910251056 Expired - Fee Related CN101871015B (zh) | 2009-12-29 | 2009-12-29 | 基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101871015B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102453771B (zh) * | 2011-09-01 | 2013-08-14 | 中国农业科学院上海兽医研究所 | 一种1型鸭病毒性肝炎rt-lamp检测试剂盒及其检测方法 |
| CN104450965A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 吉林省畜牧兽医科学研究院 | 用于检测鹅细小病毒的lamp引物与试剂盒及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101358246A (zh) * | 2008-08-28 | 2009-02-04 | 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 | 用于检测猪瘟病毒的lamp试剂盒及其制备方法 |
| CN101591713A (zh) * | 2009-05-25 | 2009-12-02 | 扬州大学 | 鹅瘟病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 |
-
2009
- 2009-12-29 CN CN 200910251056 patent/CN101871015B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101358246A (zh) * | 2008-08-28 | 2009-02-04 | 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 | 用于检测猪瘟病毒的lamp试剂盒及其制备方法 |
| CN101591713A (zh) * | 2009-05-25 | 2009-12-02 | 扬州大学 | 鹅瘟病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 周碧君 等.小鹅瘟病原学与检测方法的研究.《中国预防兽医学报》.2005,第127卷(第14期),290-294. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101871015A (zh) | 2010-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101871005B (zh) | 基于环介导等温扩增技术的鸭疫里默氏杆菌检测试剂盒及方法 | |
| CN101880709B (zh) | 基于环介导等温扩增技术的肠炎沙门氏菌检测试剂盒及方法 | |
| CN110791592A (zh) | 一种快速检测非洲猪瘟病毒的引物以及试剂盒 | |
| CN111763768A (zh) | 一种covid-19快速检测显色指示试剂盒 | |
| CN103397105A (zh) | 一种检测gii型诺如病毒的试剂盒及其用途 | |
| CN104694620A (zh) | 一种将针对多种生物的引物组混合使用的环介导等温扩增检测方法 | |
| CN101871016B (zh) | 基于环介导等温扩增技术的鸭肠炎病毒检测试剂盒及方法 | |
| CN101736081A (zh) | 结核分枝杆菌恒温基因扩增快速检测试剂盒及检测方法 | |
| CN101368203B (zh) | 单增李斯特菌环介导等温扩增技术快速检测用引物、试剂盒和检测方法 | |
| CN101871015B (zh) | 基于环介导等温扩增技术的鹅细小病毒检测试剂盒及方法 | |
| CN101348835B (zh) | 一种利用环介导等温扩增技术检测创伤弧菌的试剂盒 | |
| CN103667530B (zh) | 一种番茄褪绿病毒的逆转录环介导等温检测方法 | |
| CN101624635A (zh) | 一种检测犬细小病毒的lamp试剂盒 | |
| CN101586168B (zh) | J亚群禽白血病病毒基因检测用引物组、检测方法和快速检测试剂盒 | |
| CN102399903B (zh) | 一种基孔肯雅病毒等温扩增检测试剂盒及其引物 | |
| CN107937617A (zh) | 检测塞内加谷病毒的rt‑lamp引物组合物及其试剂盒和方法 | |
| CN110878380B (zh) | 一种检测水泡性口炎病毒印第安那型和新泽西型的引物组合物、试剂盒及方法 | |
| CN103571942A (zh) | 一种副溶血弧菌vp核酸恒温扩增方法 | |
| CN1904064B (zh) | 星状诺卡氏菌多重pcr快速检测试剂盒和检测方法 | |
| CN110564822B (zh) | 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒 | |
| CN112852975A (zh) | 一种基于荧光rma法检测日本血吸虫核酸的引物探针组、试剂盒及其检测方法 | |
| CN112795701A (zh) | 一种基于荧光rma法多重检测诺如病毒和轮状病毒的引物探针组、试剂盒及其检测方法 | |
| CN101798593A (zh) | 大豆锈病菌的检测引物、试剂盒以及实时pcr检测方法 | |
| CN106701927B (zh) | 一种环介导等温扩增快速检测金藻的方法及试剂盒 | |
| CN106191314B (zh) | 一种dna病毒的lamp检测试剂盒、检测方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130424 Termination date: 20191229 |