CN110564822B - 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒 - Google Patents

基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN110564822B
CN110564822B CN201910894260.0A CN201910894260A CN110564822B CN 110564822 B CN110564822 B CN 110564822B CN 201910894260 A CN201910894260 A CN 201910894260A CN 110564822 B CN110564822 B CN 110564822B
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
lamp
transgenic
cry1ab
gene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910894260.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110564822A (zh
Inventor
唐卓
董娟
王嘉钰
陈刚毅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chengdu Institute of Biology of CAS
Original Assignee
Chengdu Institute of Biology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chengdu Institute of Biology of CAS filed Critical Chengdu Institute of Biology of CAS
Priority to CN201910894260.0A priority Critical patent/CN110564822B/zh
Publication of CN110564822A publication Critical patent/CN110564822A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110564822B publication Critical patent/CN110564822B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于转基因玉米相关成分真伪鉴定方法，具体地说是利用环介导等温扩增(LAMP)技术检测玉米内源ivr基因和转基因玉米品系Bt176中的外源抗虫cry1Ab基因的方法。该方法根据玉米内源ivr基因和转基因玉米品系Bt176中的外源抗虫cry1Ab基因设计了特异性的LAMP引物，并提供了配套的试剂盒、检测方法和用途。本发明结合可视化报告方式，以中性红pH指示剂进行比色检测可实现一步可视化的比色检测。本发明在等温条件下进行，无需精密的变温设备，便捷、准确、分辨率高，检测过程无需开盖操作，适合于现场快速检测。

Description

基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试 剂盒
技术领域
本发明属于转基因玉米相关成分检测鉴定方法，具体地说是利用LAMP技术分别检测玉米内源ivr基因和转基因玉米品系Bt176中的cry1Ab基因的方法。
背景技术
自1983年首次获得转基因植物以来，转基因技术(genetically modifiedorganisms，GMOs)发展十分迅速，并已应用于农业、医药、工业等多个领域。1996年转基因作物开始商业化种植，全球转基因作物的种植面积逐年增加。然而，转基因作物对于人体健康、生态环境等的风险一直存在争议，为了规范管理转基因作物、保障消费者的知情权，世界各国都在努力制定相应的法律和法规,以加强对转基因作物及其产品的管理。因此，亟需建立一套快速、简便、准确的快速检测方法，建立转基因生物安全检测技术体系，以满足相关检验机构的日常现场快速检测的需求。
随着分子生物学技术的发展，许多以DNA分子为目标的检测方法已被广泛应用。目前检测转基因作物的方法主要有定性PCR法、实时荧光定量PCR法(RT-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)等。定性PCR技术操作繁琐，实时荧光定量PCR法检测成本高，且两者都难以实现现场检测。环介导等温扩增技术(LAMP)技术是一种在等温条件下进行的核酸体外扩增技术，在较短的反应时间内表现出较高的灵敏度和扩增效率，目前LAMP方法已经成为最常用的等温扩增手段之一。但目前常用的LAMP反应产物分析手段为实时荧光报告的方式、终点荧光/浊度报告法，需配备专用检测设备，同样难以适用于现场快速筛查。近年来，可视化分析方法在快速现场检测中展现优势。可视化染料比色分析既提高了肉眼的识别率，操作又更为简单，在保证其准确率的情况下，可直接用于快速的现场检测，有报导利用pH指示剂中性红(neutral red,N-red)作为一步可视化的报告方法，可使LAMP技术在现场快速检测领域具有更大的优势。
Bt176玉米是由瑞士先正达公司研制生产，是利用基因工程技术分别将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)亚种kurstaki的cry1A(b)基因、土壤细菌(Streptomyces hygroscopicus)的bar基因等外源基因导入玉米中而获得的抗玉米螟和耐草铵膦转基因品种。自1995年在美国首次准许无限制种植以来，Bt-176玉米已经在许多国家和地区大面积种植并作为食品和饲料广泛应用。本发明即是针对转基因玉米品系Bt176提供检测相应基因成分的特异性LAMP引物、检测试剂盒、检测方法及其用途。
发明内容
本发明的目的是提供基于LAMP技术检测玉米内源ivr基因和转基因玉米品系Bt176中的cry1Ab基因的LAMP引物、试剂盒、检测方法和用途。
本发明玉米内源ivr基因检测的特异性LAMP引物是根据玉米内源ivr基因DNA序列的保守区域设计的。从GeneBank中查找到玉米内源ivr基因设计了LAMP引物。其核苷酸序列如下所示：
外引物ivrB3：ACCAGACGCCGTTGGC
外引物ivrF3：ACGCAGGTCCGCTGTA
内引物ivrBIP：TCTCGCGCGACCTCCTCCATACGGGTGATCGGGCAC
内引物ivrFIP：TGCCCCATACCGCGGAGTCACAAGGGCTGGTACCACC
环引物ivrLB：GCACCTACCGCTGGCCAT
环引物ivrLF：CGGGTTCCACTGGTAGAAGA。
本发明转基因玉米Bt176品系中的cry1Ab基因设计的特异性LAMP引物是根据转基因玉米Bt176中外源cry1Ab基因的序列设计的。从GeneBank中查找到转基因玉米Bt176中外源cry1Ab基因设计了LAMP引物。其核苷酸序列如下所示：
外引物cryB3：GCCCCAGATGATGTCCACC
外引物cryF3：ATGGACAACAACCCCAACAT
内引物cryBIP：CACCCCCATCGACATCAGCCTAGGCCCAGCACGAAGC
内引物cryFIP：TAGCCGGTCTCGATGCGCTCCAACGAGTGCATCCCCTAC
环引物cryLB：GAGCCTGACCCAGTTCCT
环引物cryLF：GGGGTTGCTCAGGCAGTT。
本发明基于LAMP技术检测玉米相关基因成分的基础检测试剂盒包括上述相应基因的LAMP外引物、内引物、DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、10x LAMP反应缓冲液、去离子水。
本发明基于LAMP技术检测玉米相关基因成分的加速检测试剂盒还包括上述相应基因的LAMP外引物、内引物、环引物、DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、10x LAMP反应缓冲液、去离子水。
本发明基于LAMP技术检测玉米相关成分的基础检测试剂盒或加速检测试剂盒还可以包括信号报告分子用于指示检测结果：以荧光信号指示结果时，信号报告分子可以是荧光分子如SYBR Green I；以肉眼可见的比色信号指示结果时，信号报告分子可以是羟基萘酚蓝或中性红等。
优选的，上述10xLAMP反应缓冲液包括200mmol/L Tris-HCl(pH8.8)，600mmol/LKCl，80mmol/L MgSO4，100mmol/L(NH4)2SO4，1％Triton X-100。
特别的，以中性红为信号报告分子时，优选的上述反应缓冲液包括50mmol/LTris-HCl(pH8.8)，600mmol/L KCl，80mmol/L MgSO4，100mmol/L(NH4)2SO4，1％Triton X-100。
本发明基于LAMP技术的玉米相关基因成分的检测方法，检测步骤包括：
(1)待测样本DNA的提取；
(2)以步骤(1)提取到的DNA为模板，选用上述玉米相关基因成分的LAMP引物或
试剂盒进行LAMP反应；
(3)LAMP扩增产物分析：有扩增信号，则待测样本中含有与所用引物或试剂盒对应的
玉米相关基因成分；无扩增信号，则待测样本中不含相对应玉米相关基因成分。
本发明所述的基于LAMP技术的玉米相关基因成分检测方法的LAMP反应可以采用基础扩增反应体系(包括LAMP外引物、内引物、DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、10x LAMP反应缓冲液、去离子水)或加速扩增反应体系(包括LAMP外引物、内引物、环引物、DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、10x LAMP反应缓冲液、去离子水)。
上述基础扩增反应体系，优选为：
Figure BDA0002209722000000031
当加入利用实时荧光报告系统时，荧光染料SYBR Green I加入的浓度为1/50000；当利用比色分析报告体系时，pH指示剂中性红加入的浓度为100μmol/L；
最后用ddH2O补足至25μL。
上述加速扩增反应体系，优选为：
Figure BDA0002209722000000032
Figure BDA0002209722000000041
当加入利用实时荧光报告系统时，荧光染料SYBR Green I加入的浓度为1/50000；当利用比色分析报告体系时，pH指示剂中性红加入的浓度为100μmol/L；
最后用ddH2O补足至25μL。
本发明基于LAMP技术检测玉米相关成分的检测试剂盒、检测方法以肉眼可见的比色信号指示结果时，信号报告分子是中性红时，黄色为阴性结果，粉红色为阳性结果。
如本文所用，下列词语/术语具有下列含义，除非另外说明。
“DNA”：脱氧核糖核酸。是一类带有遗传信息的生物大分子，由4种主要的脱氧核糖核苷酸通过3′，5′-磷酸二酯键连接而成，是遗传信息的载体。
“LAMP”：环介导的等温扩增。是一种体外等温扩增DNA特异片段的技术，扩增过程分为初始产物形成阶段以及循环扩增阶段，最终产生具有大量反向重复序列的DNA大分子片段，该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。
本发明具有明显优于现有技术的优点，其主要优点包括：
1.特异性。本发明基于LAMP技术检测玉米相关基因成分(玉米内源ivr基因、转基因玉米品系Bt176中的cry1Ab基因)的引物均根据GenBank中公布的DNA序列进行设计，实验结果表明各引物组合的特异性较好，能准确检测目标成分。
2.快速性。采用本发明方法检测十分快速，至多1h即可得知检测结果。
3.实用性。本发明转基因玉米相关成分检测方法仅需要简单的恒温仪，因此，更加适合于现场快速检测。
4.经济性。本发明结合中性红pH指示剂进行比色检测时，便无需对引物及探针序列进行修饰，合成方便，且可实现一步可视化的比色检测，从而大大降低检测成本。
附图说明
图1是具体实施例1中玉米内源ivr基因检测方法特异性试验结果(管1：非转基因玉米DNA模板；管2：转基因玉米Bt176DNA模板；管3：非转基因大米DNA模板)。
图2是具体实施例2对为转基因玉米Bt176中抗除虫外源cry1Ab基因检测方法特异性试验结果(管1：非转基因玉米DNA模板；管2：转基因玉米Bt176DNA模板；管3：转基因玉米Bt11DNA模板；管4：转基因玉米MON810DNA模板)。
具体实施方式
下面结合附图，通过实例进一步说明本发明。本领域的技术人员应理解，这些实例仅用于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。
实施例1、玉米内源ivr基因检测方法特异性试验
(1)按照DNA提取试剂盒说明书提取样品DNA。
以1份非转基因玉米样品、1份转基因玉米Bt176样品和一份非转基因大米样品提取的DNA为模板进行LAMP反应。
(2)玉米内源ivr基因检测方法LAMP引物，引物序列如下：
外引物ivrB3：ACCAGACGCCGTTGGC
外引物ivrF3：ACGCAGGTCCGCTGTA
内引物ivrBIP：TCTCGCGCGACCTCCTCCATACGGGTGATCGGGCAC
内引物ivrFIP：TGCCCCATACCGCGGAGTCACAAGGGCTGGTACCACC
环引物ivrLB：GCACCTACCGCTGGCCAT
环引物ivrLF：CGGGTTCCACTGGTAGAAGA。
(3)LAMP反应体系及反应条件
Figure BDA0002209722000000051
当利用实时荧光报告系统时，荧光染料SYBR Green I加入的浓度为1/50000；当利用比色分析报告体系时，pH指示剂中性红加入的浓度为100μmol/L；
最终将反应体系用超纯水补足至25μL。
LAMP反应条件是：61℃反应1h。
阴性对照(NC)为：加相当于模板体积的超纯水于反应管中。
(4)检测方法
利用中性红进行比色分析时，将整个反应放置在恒温仪或水浴锅中反应1h后直接取出肉眼观察。
(5)检测结果
如附图1所示，用该方法同时扩增非转基因玉米样品、转基因玉米Bt176样品和非转基因大米样品的DNA模板。在中性红可视化体系下，反应进行1个小时后，非转基因玉米DNA模板和转基因玉米Bt176标准品反应管均出现粉红色阳性扩增结果，而非转基因大米仍为黄色阴性结果。表明本研究中建立的玉米内源ivr基因检测方法具有良好的特异性，未出现假阳性结果，是一种特异的，准确的玉米内源ivr基因检测方法。
实施例2、转基因玉米品系Bt176中cry1Ab基因检测方法特异性试验
(1)按照DNA提取试剂盒说明书提取样品DNA。
以1份非转基因玉米样品、1份转基因玉米Bt176样品、1份转基因玉米Bt11样品和1份转基因玉米MON810样品提取的DNA为模板进行LAMP反应。
(2)转基因玉米Bt176中cry1Ab基因检测方法LAMP引物，引物序列如下：
外引物cryB3：GCCCCAGATGATGTCCACC
外引物cryF3：ATGGACAACAACCCCAACAT
内引物cryBIP：CACCCCCATCGACATCAGCCTAGGCCCAGCACGAAGC
内引物cryFIP：TAGCCGGTCTCGATGCGCTCCAACGAGTGCATCCCCTAC
环引物cryLB：GAGCCTGACCCAGTTCCT
环引物cryLF：GGGGTTGCTCAGGCAGTT。
(3)LAMP反应体系及反应条件
Figure BDA0002209722000000061
当加入利用实时荧光报告系统时，荧光染料SYBR Green I加入的浓度为1/50000；当利用比色分析报告体系时，pH指示剂中性红加入的浓度为100μmol/L；
最终将反应体系用超纯水补足至25μL。
LAMP反应条件是：61℃反应1h。
阴性对照(NC)为：加相当于模板体积的超纯水于反应管中。
(4)检测方法
利用中性红进行比色分析时，将整个反应放置在恒温仪或水浴锅中反应1h后直接取出肉眼观察。
(5)检测结果
如附图2所示，用该方法同时扩增非转基因玉米样品、转基因玉米Bt176样品、转基因玉米Bt11样品和转基因玉米MON810样品DNA。在中性红可视化体系下，反应进行1个小时后，转基因玉米Bt176标准品反应管出现粉红色阳性扩增结果，而非转基因玉米、转基因玉米Bt11标准品和转基因玉米MON810标准品仍为黄色阴性结果。本方法对转基因玉米Bt176品系中的cry1Ab基因设计特异性LAMP引物，实现了对Bt176标准品的检测，而不能对转基因玉米MON810和Bt11进行有效检测。表明本方法对Bt176中的cry1Ab基因建立的检测方法能特异性的检测转基因玉米Bt176标准品。

Claims (13)

1.基于LAMP技术的转基因玉米品系Bt176转基因成分cry1Ab基因的特异性LAMP引物，其特征是：根据转基因玉米品系Bt176的cry1Ab基因特异性设计，包括外引物、内引物、环引物：
外引物cryB3：GCCCCAGATGATGTCCACC
外引物cryF3：ATGGACAACAACCCCAACAT
内引物cryBIP：CACCCCCATCGACATCAGCCTAGGCCCAGCACGAAGC
内引物cryFIP：TAGCCGGTCTCGATGCGCTCCAACGAGTGCATCCCCTAC
环引物cryLB：GAGCCTGACCCAGTTCCT
环引物cryLF：GGGGTTGCTCAGGCAGTT。
2.基于LAMP技术检测转基因玉米品系Bt176中转基因成分cry1Ab基因的基础检测试剂盒，其特征是：包括权利要求1所述LAMP外引物、内引物。
3.基于LAMP技术检测转基因玉米品系Bt176中转基因成分cry1Ab基因的加速检测试剂盒，其特征是：包括权利要求1所述LAMP外引物、内引物、环引物。
4.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，其特征是：还包括DNA聚合酶、dNTPs、10×LAMP反应缓冲液、去离子水。
5.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，其特征是：还包括信号报告分子用于指示检测结果，信号报告分子是SYBR Green I、羟基萘酚蓝或中性红。
6.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征是：所述10×LAMP反应缓冲液包括200 mMpH8.8的Tris-HCl，600 mM KCl，80 mM MgSO4，100 mM (NH4)2SO4，1% Triton X-100。
7.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征是：以中性红为信号报告分子时，10×LAMP反应缓冲液包括50 mM pH8.8的Tris-HCl，600 mM KCl，80 mM MgSO4，100 mM (NH4)2SO4，1% Triton X-100。
8.基于LAMP技术的玉米转基因成分cry1Ab基因的检测方法，其特征是：
（1）待测样本DNA的提取；
（2）以步骤（1）提取到的DNA为模板，选用权利要求1所述的玉米转基因成分cry1Ab基因的LAMP引物或权利要求2或3所述的检测试剂盒进行LAMP反应；
（3）LAMP扩增产物分析：有扩增信号，则待测样本中含有玉米转基因成分cry1Ab基因；无扩增信号，则待测样本中不含玉米转基因成分cry1Ab基因。
9.根据权利要求8所述的基于LAMP技术的玉米转基因成分cry1Ab基因的检测方法，其特征是：所述LAMP反应采用基础扩增反应体系或加速扩增反应体系；基础扩增反应体系包括LAMP外引物、内引物、DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、10×LAMP反应缓冲液、去离子水；加速扩增反应体系包括LAMP外引物、内引物、环引物、DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、10×LAMP反应缓冲液、去离子水。
10.根据权利要求9所述的基础扩增反应体系，其特征是：体系为，
外引物 各0.4 μmol/L
内引物 各1.6 μmol/L
dNTP 0.8 mmol/L
betaine 1 mol/L
Bsm DNA聚合酶 4 U
模板DNA 6 pg
10×LAMP缓冲液 2.5 μL；
当利用实时荧光报告系统时，荧光染料SYBR Green I加入的浓度为1/50000；当利用比色分析报告体系时，pH指示剂中性红加入的浓度为100 μmol/L；最后用ddH2O 补足至25 μL。
11.根据权利要求9所述的加速扩增反应体系，其特征是：体系为，
外引物 各0.4 μmol/L
内引物 各1.6 μmol/L
环引物 各0.8 μmol/L
dNTP 0.8 mmol/L
betaine 1 mol/L
Bsm DNA聚合酶 4 U
模板DNA 6 pg
10×LAMP缓冲液 2.5 μL；
当利用实时荧光报告系统时，荧光染料SYBR Green I加入的浓度为1/50000；当利用比色分析报告体系时，pH指示剂中性红加入的浓度为100 μmol/L；最后用ddH2O 补足至25 μL。
12.根据权利要求8所述的基于LAMP技术的玉米转基因成分cry1Ab基因的检测方法，其特征是：反应温度为55-65℃，反应时间至多1 h。
13.根据权利要求8所述的基于LAMP技术的玉米转基因成分cry1Ab基因的检测方法，其特征是：以肉眼可见的比色信号指示结果时，信号报告分子是中性红时，黄色为阴性结果，粉红色为阳性结果。
CN201910894260.0A 2019-09-20 2019-09-20 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒 Active CN110564822B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910894260.0A CN110564822B (zh) 2019-09-20 2019-09-20 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910894260.0A CN110564822B (zh) 2019-09-20 2019-09-20 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110564822A CN110564822A (zh) 2019-12-13
CN110564822B true CN110564822B (zh) 2023-06-20

Family

ID=68781563

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910894260.0A Active CN110564822B (zh) 2019-09-20 2019-09-20 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110564822B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111172325A (zh) * 2020-02-21 2020-05-19 北京天恩泽基因科技有限公司 多靶点双染料等温扩增快速检测方法和试剂盒

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2107126A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-07 Eppendorf Array Technologies SA Detection of unspecified genetically modified organism (GMO) on micro-arrays
CA2783254A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 Dow Agrosciences Llc Endpoint taqman methods for determining zygosity of corn comprising tc1507 events
CN103451291A (zh) * 2013-09-02 2013-12-18 中国农业科学院生物技术研究所 Cry1Ab/Cry1Ac抗虫基因RPA检测方法
CN106399540A (zh) * 2016-10-25 2017-02-15 中国农业大学 基于环介导等温扩增消光技术的玉米检测方法
CN106755545A (zh) * 2017-03-11 2017-05-31 吉林省农业科学院 转基因作物中pat基因的lamp检测引物组、试剂盒及检测方法
CN106801092A (zh) * 2017-01-22 2017-06-06 中国农业科学院生物技术研究所 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定
CN110095614A (zh) * 2019-05-27 2019-08-06 武汉上成生物科技有限公司 一种快速检测转基因植物中转基因蛋白Bt-Cry1AbAc的方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2107126A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-07 Eppendorf Array Technologies SA Detection of unspecified genetically modified organism (GMO) on micro-arrays
CA2783254A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 Dow Agrosciences Llc Endpoint taqman methods for determining zygosity of corn comprising tc1507 events
CN103451291A (zh) * 2013-09-02 2013-12-18 中国农业科学院生物技术研究所 Cry1Ab/Cry1Ac抗虫基因RPA检测方法
CN106399540A (zh) * 2016-10-25 2017-02-15 中国农业大学 基于环介导等温扩增消光技术的玉米检测方法
CN106801092A (zh) * 2017-01-22 2017-06-06 中国农业科学院生物技术研究所 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定
CN106755545A (zh) * 2017-03-11 2017-05-31 吉林省农业科学院 转基因作物中pat基因的lamp检测引物组、试剂盒及检测方法
CN110095614A (zh) * 2019-05-27 2019-08-06 武汉上成生物科技有限公司 一种快速检测转基因植物中转基因蛋白Bt-Cry1AbAc的方法

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Detection of feed-derived maize DNA in goat milk and evaluation of the potential of horizontal transfer to bacteria;Aurora Rizzi等;《Eur Food Res Technol》;20081231;第227卷;第1699-1709页 *
Development and evaluation of rapid screening detection methods for genetically modified crops using loop-mediated isothermal amplification;Reona Takabatake等;《Food Chem》;20180630;第252卷;第390-396页 *
Development of the Visual Loop-Mediated Isothermal Amplification Assays for Seven Genetically Modified Maize Events and Their Application in Practical Samples Analysis;Lili Chen等;《J Agric Food Chem》;20110402;第59卷(第11期);第5915页右栏第2段，表1 *
Lili Chen等.Development of the Visual Loop-Mediated Isothermal Amplification Assays for Seven Genetically Modified Maize Events and Their Application in Practical Samples Analysis.《J Agric Food Chem》.2011,第59卷(第11期),第5914-5918页. *
Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for rapid detection of cry1Ab gene in transgenic rice (Oryza sativa L.);Qingchao Li等;《European Food Research and Technology》;20130201;第236卷;第589-598页 *
克螟稻cry1Ab基因LAMP检测方法研究;李庆超;《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》;20140215(第2期);D047-49 *
基于环介导等温扩增法可视化检测玉米转基因成分;王嘉钰等;《应用与环境生物学报》;20191225;第25卷(第6期);第1497-1502页 *
转cry1Ab13基因玉米新种质的创制;陈沼汀等;《华南农业大学学报》;20161231;第37卷(第5期);第31-37页 *
转基因产品快速、高通量检测方法研究;张苗;《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》;20130815(第8期);附录 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN110564822A (zh) 2019-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Böhm et al. Real‐time quantitative PCR: DNA determination in isolated spores of the mycorrhizal fungus Glomus mosseae and monitoring of Phytophthora infestans and Phytophthora citricola in their respective host plants
CN108060257B (zh) 一种基于环介导等温扩增技术检测强雄腐霉的引物组合物及其检测方法
JP2015530096A (ja) 非干渉性、ノイズキャンセル性のポリヌクレオチド識別タグを用いたマルチプレックスパイロシーケンシング
Takabatake et al. Development and evaluation of rapid screening detection methods for genetically modified crops using loop-mediated isothermal amplification
CN113186313A (zh) 基于RPA-LbCas12a-TTECDS体系的沙门氏菌检测引物组、方法与试剂盒
CN105779611B (zh) 一种高通量的多重富集定量PCR(ME-qPCR)检测转基因作物元件及品系的方法
CN116516058A (zh) 可视化检测大豆疫霉菌的方法及试剂盒
CN110564822B (zh) 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒
CN103451291B (zh) Cry1Ab/Cry1Ac抗虫基因RPA检测方法
CN103525936B (zh) 应用rpa技术对转基因水稻科丰6号品系特异性鉴定
CN103773867A (zh) 转基因作物中cry2Ab基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法
CN101875967B (zh) 一种食源性致病菌的快速鉴定方法
CN103509875B (zh) 应用RPA技术检测CaMV35S启动子和nos终止子
US20160138119A1 (en) Sex-determination method for date palm
CN110804674B (zh) 一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测大豆根腐病的引物探针组合物、试剂盒及其应用
CN104830857B (zh) 转基因玉米mon88017品系特异定量pcr精准检测的引物和探针及方法
CN110592193A (zh) 基于lamp技术的转基因抗除草剂外源基因的检测方法及试剂盒
CN114164296B (zh) 一种用于检测寡雄腐霉菌的引物探针组合物、试剂盒及应用和检测方法
CN111197102B (zh) 检测9种转基因大豆品系的核酸组合物及其应用
CN114164295B (zh) 一种用于检测畸雌腐霉菌的引物探针组合物、试剂盒及应用和检测方法
KR102461752B1 (ko) 양파노균병균 검출용 프라이머 세트, 이를 포함하는 검출키트
CN114317796B (zh) 一种用于检测固执腐霉的lamp引物组合物及其检测方法
CN117511935B (zh) 基于tub2的辣椒炭疽病lamp检测引物、快速检测方法
JP6381771B1 (ja) 萎黄病菌由来の核酸を増幅するためのプライマーセットおよび萎黄病菌の検出方法
Xu et al. Reverse Transcription-loop-mediated Isothermal Amplification for Detection of Maize chlorotic mottle virus

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant