CN106801092A - 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定 - Google Patents

应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定 Download PDF

Info

Publication number
CN106801092A
CN106801092A CN201710047608.3A CN201710047608A CN106801092A CN 106801092 A CN106801092 A CN 106801092A CN 201710047608 A CN201710047608 A CN 201710047608A CN 106801092 A CN106801092 A CN 106801092A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rpa
transgenic corns
primer
probe
dna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710047608.3A
Other languages
English (en)
Inventor
宛煜嵩
李凯
李亮
董美
金芜军
刘卫晓
温洪涛
潘海会
王永
高进
王迪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biotechnology Research Institute of CAAS
Original Assignee
Biotechnology Research Institute of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biotechnology Research Institute of CAAS filed Critical Biotechnology Research Institute of CAAS
Priority to CN201710047608.3A priority Critical patent/CN106801092A/zh
Publication of CN106801092A publication Critical patent/CN106801092A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种应用RPA技术对转基因玉米BT176品系特异性鉴定的方法。该方法首先提取待测样品的DNA作为模板，利用筛选的引物及探针进行RPA快速扩增及实时荧光检测，如果得到扩增曲线，则证明所检样品含有转基因玉米BT176成分。本发明根据外援插入DNA序列与玉米基因组的连接区域设计大量RPA引物，从中筛选出一对可快速有效检测出转基因玉米BT176成分的引物及探针组合，首次提供了转基因玉米BT176品系特异性的RPA检测方法。

Description

应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定
技术领域
本发明涉及一种品系鉴定方法，特别涉及一种应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定。
背景技术
核酸等温扩增技术(isothermal nucleic acid amplification technology)是一种新型的扩增技术，恒定温度条件下即可进行反应，具有简便、快速、灵敏等优点，并可用于进行现场检验。RPA技术模拟了生物体内DNA的复制过程，重组酶蛋白在ATP参与下与单链DNA(引物)结合，形成DNA核蛋白微丝。该微丝牵扯周围的DNA分子，对模板DNA序列进行比对并搜索出与之匹配的序列，在单链结合蛋白的帮助下，双链模板DNA解链，引物和模板配对形成复制起始所需3’羟基末端，在DNA聚合酶的作用下开始复制延伸，并形成新的DNA。RPA的引物长度在35nt左右，在设计引物时应避免前后引物之间形成二级结构及引物间出现重复序等问题。在设计RPA反应的探针时，要在探针的中后部选择两个T碱基，各标记一个荧光集团(FAM和BHQ1)，在两个集团之间有一个脱碱基位点(dSpacer)，该位点在反应过程中被核酸外切酶识别并切割，使两个荧光集团分离产生荧光信号，特异性的探针可以实时监测荧光检测的结果。RPA荧光检测技术在20分钟内就可以完成，极大的缩短了反应时间。
转基因玉米BT176是先正达公司开发的抗虫且耐草铵膦除草剂的转基因玉米品种，是利用基因工程技术将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)亚种kurstaki的Cry1A(b)基因、土壤细菌(soil bacteria)的bar基因等外源基因导入玉米中而获得的抗玉米螟和耐草铵膦转基因品种。自1995年在美国首次准许无限制种植以来，Bt-176玉米已经在许多国家和地区大面积种植并作为食品和饲料广泛应用。随后日本(1996)、加拿大(1996)、阿根廷及欧盟各成员国(1997)也先后准许无限制种植，同时，美国(1995)、加拿大(1995)、日本(1996)、及英国、丹麦、瑞士和阿根廷等国分别批准BT176玉米作为食物或饲料来源并准许上市销售。在已报道的对转基因玉米BT176检测方法中，主要是利用PCR仪在实验室中进行常规检测，也有应用于环介导的等温扩增(LAMP)技术对其进行检测，目前还没有利用RPA技术对其进行基因特异性鉴定。
发明内容
针对上述领域的空白，本发明提供了准确、快速、简便检测转基因玉米BT11品系特异性的检测方法。
一种应用RPA技术对转基因玉米BT176品系特异性鉴定的引物和探针，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
一种鉴定转基因玉米BT176品系的试剂盒，包含上述的引物和探针。
一种应用RPA技术对转基因玉米BT176品系特异性鉴定的方法，提取待测样品的DNA作为模板，利用权利要求1所述的引物及探针进行RPA快速扩增及实时荧光检测，如果得到扩增曲线，则证明所检样品含有转基因玉米BT176成分；如果得不到扩增曲线，则证明所检样品不含有转基因玉米BT176成分。
所述RPA快速扩增的反应体系为50μl，包括10μmol/L的引物各2μl，10μmol/L的探针0.5μl，模板DNA 50ng，缓冲溶液Buffer 29.5μl，其余用去离子水补齐。
所述RPA快速扩增及实时荧光检测的程序为：RPA扩增检测仪或荧光定量PCR仪于39摄氏度反应20分钟；同时进行实时荧光检测。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明是根据外援插入DNA序列与玉米基因组的连接区域设计大量RPA引物，从中筛选出一对可快速有效检测出转基因玉米BT176成分的引物及探针组合。以转基因玉米BT176为模板，利用该对引物和探针进行荧光检测，可以得到明显的扩增曲线，以其他转基因玉米品系MON810等5种玉米材料以及非转基因玉米的基因组DNA为模板均没有产生扩增曲线。将模板DNA用水稀释至1000，500，100，50，10个拷贝，结果只有10拷贝时未能扩增，其它都有扩增曲线，具有较高的灵敏度。本发明首次提供了转基因玉米BT176品系特异性的RPA检测方法。
附图说明
图1为BT176引物筛选Basic电泳图，其中，1：100bp Maker；2：BT176-F1与BT176-R1；3：BT176-F2与BT176-R2；4：BT176-F3与BT176-R3；5：BT176-F4与BT176-R4；6：BT176-F5与BT176-R5；7：BT176-F6与BT176-R6；8：BT176-F7与BT176-R7；9：BT176-F8与BT176-R8。
图2为BT176引物筛选实时荧光检测图，其中，1：BT176-F5与BT176-R5；2：BT176-F1与BT176-R1；3：BT176-F2与BT176-R2；4：BT176-F3与BT176-R3；5：BT176-F4与BT176-R4；6：BT176-F6与BT176-R6；7：BT176-F7与BT176-R7；8：BT176-F8与BT176-R8。
图3为BT176特异性检测图，其中，1：转基因玉米BT176；2：转基因玉米MON810；3：转基因玉米MON863；4：转基因玉米MON89034；5：转基因玉米NK603；6：转基因玉米BT11；7：非转基因玉米；8：水。
图4为灵敏度检测图，从1到6模板拷贝数依次为1000；500；100；50；10；0。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
下面实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等的《分子克隆：实验室手册》(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001)中所述条件，或按照仪器或试剂制造厂商所建议的条件。
实施例1
首先根据转基因玉米BT176转化体特异性区域设计引物及探针。引物长度为35nt左右，RPA实验需要从靶标序列两端设计多对引物进行优化、筛选，个别碱基的增减或替换都会对实验结果产生重要影响。本实验中设计了大量的引物，并从中筛选出来有一对灵敏度高且特异性好的引物用于RPA荧光检测。引物和探针序列见表1。
表1
注:FAM：发光集团；dSpacer：脱碱基位点；BHQ1：淬灭集团；block：封闭集团，本次使用的碳酸化。
1.实验材料
1.1 植物材料
转基因玉米BT176标准物质，转基因玉米MON810标准物质，转基因玉米MON89034标准物质，转基因玉米MON863标准物质，转基因玉米NK603标准物质，转基因玉米BT11标准物质，非转基因玉米等材料。
1.2 酶与试剂
分子生物学试剂，TwistAmp DNA amplification Exo Kits购自TwistDX公司，TwistAmp DNA amplification Basic Kits购自TwistDX公司，其他生化试剂均为进口分装或国产分析纯。引物和探针由北京生工生物技术有限公司合成。
1.3 实验仪器
DNA处理仪器：低温混合球磨仪ΜM400(Retsch)
荧光检测仪：RPA扩增检测仪(Twista)
其它仪器包括：恒温水浴锅、电子天平、离心机、纯水仪等。
2.实验方法和过程
2.1 玉米基因组DNA的提取
以转基因玉米标准品粉末为材料，依照TianGen Plant Genomic DNA Kit试剂盒的操作手册，进行玉米DNA的提取。
1.取充分碾磨新鲜玉米粉末150mg，加入700μl 65摄氏度预热的缓冲液GP1，64℃水浴60min，期间颠倒离心管数次以混合样品。
2.加入1：1的酚/氯仿进行抽提，12000rpm离心5min。
3.取上清加入700μl氯仿充分混匀，12000rpm离心5min。
4.取上清加入700μl缓冲液GP2，充分混匀。
5.将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12000rpm离心30sec，弃废液。
6.向吸附柱中加入500μl缓冲液GD，12000rpm离心30sec,弃废液。
7.向吸附柱中加入600μl漂洗液PW，12000rpm离心30sec,弃废液。
8.重复7。
9.将吸附柱CB3放入收集管，12000rpm空转2min，弃废液，室温放置
10分钟。
10.将吸附柱CB3转入干净收集管，滴加50μl水，室温放置10min，12000rpm收集到离心管中。
2.2 DNA浓度和纯度测定
使用NanoDrop 1000分光光度计(Thermo Scientific)测定DNA的纯度和浓度，并用去离子双蒸水调节DNA浓度至50ng/μl。
2.3 引物的筛选
本实施例中用于RPA方法扩增的靶标序列为玉米基因组与外援插入DNA的5’端部分序列。针对这一转化体特异性序列，设计RPA探针并在探针上游与下游分别设计了8条正向引物、8条反向引物。筛选过程中，首先使用RPA-Basic试剂盒进行扩增并进行电泳，筛选能够扩增正确条带的引物再进行RPA-Exo实验。
2.4 引物的扩增
RPA扩增体系为：总体系50μl，Rehydration Buffer 29.5μl，280μm MagnesiumActate 2.5μl，引物各2.4μl(10uM)，玉米DNA 1μl(50ng/μl)，剩余用水补足。
引物扩增程序：RPA扩增检测仪39摄氏度反应30分钟，酚：氯仿1:1抽提，电泳。
2.5 特异性检测
将筛选出的较好引物对进行特异性检测，检测材料分别为转基因玉米BT176标准物质，转基因玉米MON810标准物质，转基因玉米MON89034标准物质，转基因玉米MON863标准物质，转基因玉米NK603标准物质，转基因玉米BT11标准物质，非转基因玉米。相同50μl体系，进行RPA-EXO实验。
2.6 灵敏度检测
将BT176基因组DNA分别稀释如下的拷贝数：200，100，20，10，2。相同50μ反应体系各加入5μl的DNA进行RPA-EXO实验测试灵敏度，同时进行阴性对照。
3.实验结果
根据转化体特异性序列设计的正向引物和反向引物及探针，运用RPA-Basic试剂盒首先确定能够扩增正确片段的引物(图1)，其中6孔道引物对BT176-F5与BT176-R5扩增条带较好，后改名为BT176-RPA-F(序列如SEQ ID NO.1)与BT176-RPA-R(序列如SEQ ID NO.2)运用RPA-EXO试剂盒进行特异性实时荧光筛选(图2)，其中1号线起飞时间以及扩增效果较好，其引物对与Basic实验6孔道引物对一致。
从上述中筛选出的引物，以转基因玉米BT176为模板可以得到明显的扩增曲线，以其他转基因玉米品系MON810等5种玉米材料以及非转基因玉米的基因组DNA为模板均没有产生扩增曲线(图3)。模板DNA拷贝数分别为1000，500，100，50，10个拷贝，结果在阴性材料没有起飞的前提下，只有10拷贝未扩增其它都有扩增曲线(图4)，说明本发明设计引物和方法鉴定转基因玉米BT176具有较高的灵敏度和准确性。
以上公开的仅为本发明的具体实施例，但是，本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国农业科学院生物技术研究所
<120> 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定
<130> 1111
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BT176-RPA-F
<400> 1
gcggccggct tcaagcacgg gaactggcat gacgt 35
<210> 2
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BT176-RPA-R
<400> 2
gagggagaac tccgtgggcg tggtatcgac tttat 35
<210> 3
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BT176-RPA-P
<400> 3
cgtcaccgag atctgatgtt ctctcccatg atgcacg 37

Claims (5)

1.一种应用RPA技术对转基因玉米BT176品系特异性鉴定的引物和探针，其特征在于，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
2.一种鉴定转基因玉米BT176品系的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物和探针。
3.一种应用RPA技术对转基因玉米BT176品系特异性鉴定的方法，其特征在于，提取待测样品的DNA作为模板，利用权利要求1所述的引物及探针进行RPA快速扩增及实时荧光检测，如果得到扩增曲线，则证明所检样品含有转基因玉米BT176成分；如果得不到扩增曲线，则证明所检样品不含有转基因玉米BT176成分。
4.根据权利要求3所述的应用RPA技术对转基因玉米BT176品系特异性鉴定的方法，其特征在于，所述RPA快速扩增的反应体系为50μl，包括10μmol/L的引物各2μl，10μmol/L的探针0.5μl，模板DNA 50ng，缓冲溶液Buffer 29.5μl，其余用去离子水补齐。
5.根据权利要求4所述的应用RPA技术对转基因玉米BT176品系特异性鉴定的方法，其特征在于，所述RPA快速扩增及实时荧光检测的程序为：RPA扩增检测仪或荧光定量PCR仪于39摄氏度反应20分钟；同时进行实时荧光检测。
CN201710047608.3A 2017-01-22 2017-01-22 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定 Pending CN106801092A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710047608.3A CN106801092A (zh) 2017-01-22 2017-01-22 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710047608.3A CN106801092A (zh) 2017-01-22 2017-01-22 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106801092A true CN106801092A (zh) 2017-06-06

Family

ID=58988112

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710047608.3A Pending CN106801092A (zh) 2017-01-22 2017-01-22 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106801092A (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108034757A (zh) * 2018-01-23 2018-05-15 上海市农业科学院 一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物及检测方法
CN110564822A (zh) * 2019-09-20 2019-12-13 中国科学院成都生物研究所 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒
CN110643734A (zh) * 2019-11-11 2020-01-03 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 一种转基因玉米das-40278-9的rpa引物与探针组合、试剂盒及检测方法
CN112301147A (zh) * 2020-10-15 2021-02-02 中国农业科学院生物技术研究所 用于检测转基因玉米双抗12-6的rpa引物探针组合、试剂盒及检测方法
CN112301144A (zh) * 2020-10-13 2021-02-02 中国农业科学院生物技术研究所 用于检测转基因玉米dbn9958的rpa引物探针组合、试剂盒及检测方法
CN113913501A (zh) * 2021-11-18 2022-01-11 吉林农业科技学院 一种基于重组酶聚合酶恒温扩增法鉴定转Bt基因的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102766624A (zh) * 2012-07-12 2012-11-07 广东产品质量监督检验研究院 用于检测转基因玉米Bt176转化体特异性序列的引物组、试剂盒及方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102766624A (zh) * 2012-07-12 2012-11-07 广东产品质量监督检验研究院 用于检测转基因玉米Bt176转化体特异性序列的引物组、试剂盒及方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHAO XU等: "Recombinase Polymerase Amplification (RPA) of CaMV-35S Promoter and nos Terminator for Rapid Detection of Genetically Modified Crops", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES》 *
孙祖越等: "《药物生殖与发育毒理学》", 31 January 2015, 上海科学技术出版社 *
徐潮: "重组酶介导的等温扩增技术在转基因检测中的应用", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *
陈火英: "《遗传学与社会》", 30 November 2015, 上海交通大学出版社 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108034757A (zh) * 2018-01-23 2018-05-15 上海市农业科学院 一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物及检测方法
CN110564822A (zh) * 2019-09-20 2019-12-13 中国科学院成都生物研究所 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒
CN110564822B (zh) * 2019-09-20 2023-06-20 中国科学院成都生物研究所 基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒
CN110643734A (zh) * 2019-11-11 2020-01-03 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 一种转基因玉米das-40278-9的rpa引物与探针组合、试剂盒及检测方法
CN112301144A (zh) * 2020-10-13 2021-02-02 中国农业科学院生物技术研究所 用于检测转基因玉米dbn9958的rpa引物探针组合、试剂盒及检测方法
CN112301147A (zh) * 2020-10-15 2021-02-02 中国农业科学院生物技术研究所 用于检测转基因玉米双抗12-6的rpa引物探针组合、试剂盒及检测方法
CN113913501A (zh) * 2021-11-18 2022-01-11 吉林农业科技学院 一种基于重组酶聚合酶恒温扩增法鉴定转Bt基因的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106755488A (zh) 应用rpa技术对转基因玉米bt11品系特异性鉴定
CN106801092A (zh) 应用RPA技术对转基因玉米Bt176品系特异性鉴定
Jinxia et al. A multiplex nested PCR assay for the simultaneous detection of genetically modified soybean, maize and rice in highly processed products
CN107338331A (zh) 一种猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型的多重pcr检测引物对及试剂盒
Tan et al. Precision early detection of invasive and toxic cyanobacteria: a case study of Raphidiopsis raciborskii
CN103451292B (zh) 应用rpa技术对转基因水稻华恢1号品系特异性鉴定
RU2405836C2 (ru) Способ выявления микобактерий туберкулеза генотипа beijing
CN104593504B (zh) 一种27个植物转基因位点复合pcr扩增荧光检测试剂盒
CN103993089B (zh) 一种耐万古霉素肠球菌的多重荧光定量pcr检测试剂盒及其检测方法
US20160273038A1 (en) Method of identifying date palm gender using scar primers
CN102154487A (zh) 检测土拉弗朗西斯菌的试剂及复合探针荧光定量pcr检测土拉弗朗西斯菌的方法
Chaouachi et al. A strategy for designing multi-taxa specific reference gene systems. Example of application––ppi Phosphofructokinase (ppi-PPF) used for the detection and quantification of three taxa: maize (Zea mays), cotton (Gossypium hirsutum) and rice (Oryza sativa)
Kim et al. Monitoring of genetically modified soybean events in sausage products in South Korea
CN108251551A (zh) 应用rpa-dna试纸条联检对转基因水稻pa110-15品系特异性检测方法
CN105018486A (zh) 一种检测水稻细菌性条斑病菌的hda试剂盒及检测方法
CN103509875A (zh) 应用RPA技术检测CaMV 35S启动子和nos终止子
KR101765677B1 (ko) 결핵 및 비결핵 항산균 검출용 프라이머 세트 및 이를 이용한 검출 방법
KR101962636B1 (ko) 실린드로카폰 데스트럭탄스균을 선별하기 위한 프라이머 선별방법 및 프라이머 세트
CN106399302A (zh) 一种同时高效检测转基因大豆mon87701和mon87708品系特异性基因的双重荧光pcr方法
CN112301147A (zh) 用于检测转基因玉米双抗12-6的rpa引物探针组合、试剂盒及检测方法
CN106939356B (zh) 一种快速检测蜜蜂丝状病毒的检测引物组、检测试剂盒和检测方法
CN103060459A (zh) 检测转基因水稻品系科丰8号的引物和探针、试剂盒和方法
CN116970735B (zh) 玉米锈病重组聚合酶快速检测方法和试剂盒
CN103060436A (zh) 向日葵茎溃疡病菌实时荧光pcr检测试剂盒
Kaur Pollen identification using sequencing techniques

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170606