CN101861388B - 杂交的α-葡萄糖苷转运蛋白 - Google Patents

杂交的α-葡萄糖苷转运蛋白 Download PDF

Info

Publication number
CN101861388B
CN101861388B CN2008800006496A CN200880000649A CN101861388B CN 101861388 B CN101861388 B CN 101861388B CN 2008800006496 A CN2008800006496 A CN 2008800006496A CN 200880000649 A CN200880000649 A CN 200880000649A CN 101861388 B CN101861388 B CN 101861388B
Authority
CN
China
Prior art keywords
leu
ala
gly
ser
ile
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2008800006496A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101861388A (zh
Inventor
畠中治代
大村文彦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suntory Holdings Ltd
Original Assignee
Suntory Holdings Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suntory Holdings Ltd filed Critical Suntory Holdings Ltd
Publication of CN101861388A publication Critical patent/CN101861388A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101861388B publication Critical patent/CN101861388B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C07K14/39—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts
    • C07K14/395—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts from Saccharomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
    • C12C12/00—Processes specially adapted for making special kinds of beer
    • C12C12/002—Processes specially adapted for making special kinds of beer using special microorganisms
    • C12C12/004—Genetically modified microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
    • C12C12/00—Processes specially adapted for making special kinds of beer
    • C12C12/002—Processes specially adapted for making special kinds of beer using special microorganisms
    • C12C12/006—Yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12G—WINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G1/00—Preparation of wine or sparkling wine
    • C12G1/02—Preparation of must from grapes; Must treatment and fermentation
    • C12G1/0203—Preparation of must from grapes; Must treatment and fermentation by microbiological or enzymatic treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12G—WINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G2200/00—Special features
    • C12G2200/11—Use of genetically modified microorganisms in the preparation of wine

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及可加快麦汁等中所含有的麦芽糖、麦芽三糖分解的α-葡萄糖苷转运蛋白等。特别是本发明涉及因葡萄糖而引起失活/降解的AGT1和MAL21等α-葡萄糖苷转运蛋白，通过AGT1与MAL21的杂交，不易因葡萄糖而引起失活/降解，且可与AGT1同样转运麦芽三糖。例如通过使用本发明的表达α-葡萄糖苷转运蛋白的酵母，可加快含有麦芽糖/麦芽三糖等低聚糖的醪液的发酵速度。

Description

杂交的α-葡萄糖苷转运蛋白
技术领域
本发明涉及可加快麦汁等中所含有的麦芽糖/麦芽三糖分解的α-葡萄糖苷转运蛋白等。 
背景技术
在啤酒、发泡酒、威士忌等麦芽发酵饮料的制造中，对麦芽等进行糖化而得到的麦汁中所含有的糖主要为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖三种。这些来自麦芽的糖的比率可因糖化方法不同而有若干改变，但在不添加酶剂、不添加糖化淀粉等时，则无大的变化，可以说为1∶5∶1左右的比例。其中，葡萄糖为单糖，作为最适合酵母的糖最先被分解。酵母具有许多在葡萄糖存在下转录过程中受到抑制的基因。此抑制控制被称为葡萄糖阻遏。向酵母内转运麦芽糖、麦芽三糖时所需要的多种转运蛋白均受到此抑制。并且已知这些受到葡萄糖阻遏的基因的产物，具有即使在翻译后，也会在葡萄糖存在下失活的物质。还已知麦芽糖转运蛋白也属于此类，在葡萄糖存在下会被迅速降解。因麦芽糖/麦芽三糖分解的第一步骤是通过所述转运蛋白将其转运到酵母细胞内，所以，如果转运蛋白被降解，则这些分解也将停止。这就是转运蛋白的表达被称为分解的限速步骤的缘由。 
非专利文献1：Brondijk，T.H.，van der Rest，M.E.，Pluim，D.，de Vries，Y.de.，Stingl，K.，Poolman，B.，and Konings，W.N.(1998)J Biol Chem 273(25)，15352-15357 
非专利文献2：Medintz，I.，Wang，X.，Hradek，T.，and Michels，C.A.(2000)Biochemistry 39(15)，4518-4526 
非专利文献3：Gadura，N.，and Michels，C.A.(2006)Curr Genet 50(2)，101-114 
非专利文献4：4)Han EK，Cotty F，Sottas C，Jiang H，Michels CA.(1995)MolMicrobiol.17(6)，1093-107. 
因此，例如酵母中的Agt1p，因在葡萄糖存在下降解速度非常快，所以在高 浓度葡萄糖的培养中不能高效地发挥作用，这是问题之一。 
发明内容
发明要解决的课题 
在这种情况下，希望制备出可加快含有麦芽糖、麦芽三糖等低聚糖的发酵醪因酵母引起的发酵速度的低聚糖转运蛋白。 
特别是，若可以控制翻译后的α-葡萄糖苷转运蛋白Agt1p因葡萄糖而引起的降解，则即使培养基中存在高浓度葡萄糖，也可以期待酵母更高效地分解麦芽糖、麦芽三糖，所以，将制备不易因葡萄糖而引起失活或降解的α-葡萄糖苷转运蛋白Agt1p作为课题。 
解决课题的方法 
本发明者根据此设想进行研究的结果是，制备出已知容易因葡萄糖而引起失活/降解的AGT1与从自然界中得到的不易因葡萄糖而引起失活/降解的MAL21的多个杂交基因，并从中成功制备了不易因葡萄糖而引起失活/降解、且在底物特异性上与AGT1同样可转运麦芽三糖的杂交转运蛋白，从而完成了本发明。 
即，本发明涉及编码葡萄糖诱导性失活/降解抗性转运蛋白的基因、由该基因编码的转运蛋白、该基因表达受到调控的转化酵母、使用该基因表达受到调控的酵母来制造酒类的制造方法等。具体地说，本发明提供如下所示的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体、导入了该载体的转化酵母、使用该转化酵母的酒类的制造方法等。 
(1)多核苷酸，其是编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸，是包含由以下(a)～(d)中任一项所述的多核苷酸组成的12次跨膜结构域编码区、且使5′端序列和/或3′端序列与异种多核苷酸重组而成的多核苷酸： 
(a)多核苷酸，其由序列号3的第307～1659位碱基序列或序列号5的第283～1641位碱基序列组成； 
(b)多核苷酸，其是编码序列号4的第103～553位氨基酸序列或序列号6的第95～547位氨基酸序列的多核苷酸； 
(c)多核苷酸，其是编码序列号4的第103～553位氨基酸序列中或序列号6 的第95～547位氨基酸序列中1～10个氨基酸发生缺失、取代、插入和/或添加的氨基酸序列的多核苷酸；及 
(d)多核苷酸，其是编码与序列号4的第103～553位氨基酸序列或序列号6的第95～547位氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列的多核苷酸。 
(2)如(1)所述的多核苷酸，其中，异种多核苷酸序列是序列号1的12次跨膜结构域的5′端序列和/或3′端序列。 
(3)如(1)所述的多核苷酸，其中，与5′端序列重组的位置在12次跨膜结构域的预测TMD1编码区内，与3′端序列重组的位置在从12次跨膜结构域的预测TMD12编码区起始位置到预测TMD12编码区终止位置后的96个碱基以内(向3′端方向的96个碱基)的区域内，且在与序列号2和序列号4的对应氨基酸序列具有80％以上的同一性的区域内。 
(4)如(1)所述的多核苷酸，其中，与5’端序列重组的位置，在从序列号1或序列号5的第175位碱基开始到12次跨膜结构域预测TMD1编码区终止位置的区域内；12次跨膜结构域与3′端序列的重组位置在从预测TMD12编码区起始位置到预测TMD12编码区终止位置后的180个碱基以内(向3′端方向的180个碱基)的区域内。 
(5)如(1)～(4)中任一项所述的多核苷酸，其包含由序列号13、15或17的碱基序列组成的多核苷酸。 
(6)如(1)～(4)中任一项所述的多核苷酸，其包含编码由序列号14、16或18的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。 
(7)如(1)～(6)中任一项所述的多核苷酸，其是DNA。 
(8)蛋白质，其是由(1)～(7)中任一项所述的多核苷酸编码的蛋白质。 
(9)载体，其是包含(1)～(7)中任一项所述多核苷酸的载体。 
(10)转化酵母，其是导入有(9)所述的载体的转化酵母。 
(11)如(10)所述的酿造用酵母，其是通过导入(9)所述的载体，提高了低聚糖分解能力的酿造用酵母。 
(12)如(11)所述的酿造用酵母，其是通过增加(8)所述的蛋白质的表达量，提高了低聚糖分解能力的酿造用酵母。 
(13)酒类的制造方法，其中，使用(10)～(12)中任一项所述的酵母。 
(14)如(13)所述的酒类的制造方法，其中，酿造的酒类是麦芽饮料。 
(15)如(13)所述的酒类的制造方法，其中，酿造的酒类是葡萄酒。 
(16)酒类，其是用(13)～(15)中任一项所述的方法制造的酒类。 
本发明中，通过使用表达改造的杂交转运蛋白基因的酵母，可加快包含麦芽糖、麦芽三糖等低聚糖的醪液的发酵速度。改造后的杂交转运蛋白基因可导入任何酿造用酵母、实验室酵母中。特别是在大量含有葡萄糖、果糖等单糖的发酵原液中含有麦芽糖、麦芽三糖、松二糖、海藻糖等改造后的转运蛋白可转运的低聚糖时，更为有效。 
附图说明
图1表示MAL21基因的碱基序列。 
图2表示Mal21p的氨基酸序列。 
图3表示Mal21p和Agt1p的氨基酸序列的比对。 
图4表示Mal21p和Mtt1p的氨基酸序列的比对。 
图5表示Agt1p和Mal21p的底物特异性的不同。 
图6表示Agt1p、Mal61p及Mal21p在葡萄糖存在下的降解速度。 
图7表示AMMp、AAMp、AMAp、MAAp、MMAp、MAMp的序列模式图。 
图8表示具有AMMp、AAMp、AMAp、MAAp、MMAp、MAMp各杂交转运蛋白的转化酵母的底物特异性。 
图9表示具有AMMp、AAMp、AMAp、MAAp、MMAp、MAMp各杂交转运蛋白的转化酵母的2-DOG抗性。 
图10表示MMAp、MAAp、MAMp降解速度的测定。 
图11表示高表达MAL21基因的下面啤酒酵母株的发泡酒或发泡酒(葡萄糖丰富)麦汁中麦芽糖的发酵速度。 
图12表示pJHXSB。 
图13表示pYCGPY。 
图14表示pUP3GLP。 
具体实施方式
本发明者基于以下设想进行了研究，即，如果可控制翻译后的转运蛋白因 葡萄糖而引起的失活或降解，则即使在葡萄糖存在的情况下，酵母也可更高效地分解麦芽糖及麦芽三糖，结果发现了自然界中不易降解的α-葡萄糖苷转运蛋白Mal21p，并证实了与其它转运蛋白相比，Mal21p的降解速度极为缓慢。 
通过高表达本发明中新制备的、不易因葡萄糖而引起失活或降解的杂交转运蛋白，确实成功地提高了麦芽糖培养基中的增殖速度。且在啤酒酿造中，成功加快了麦芽糖的分解速度。本发明即是基于此种设想和研究成果而完成的。 
本发明中所得到的基因及其核苷酸序列、以及由这些基因编码的转运蛋白的氨基酸序列如下所示。 
[序列号：1]MAL21的核苷酸序列 
[序列号：2] Mal21pα-葡萄糖苷转运蛋白的氨基酸序列 
[序列号：3]AGT1的核苷酸序列 
[序列号：4]Agt1pα-葡萄糖苷转运蛋白的氨基酸序列 
[序列号：5]MTT1的核苷酸序列 
[序列号：6]Mtt1pα-葡萄糖苷转运蛋白的氨基酸序列 
[序列号：7]AAM的核苷酸序列 
[序列号：8]AAMp的氨基酸序列 
[序列号：9]AMA的核苷酸序列 
[序列号：10]AMAp的氨基酸序列 
[序列号：11]AMM的核苷酸序列 
[序列号：12]AMMp的氨基酸序列 
[序列号：13]MAA的核苷酸序列 
[序列号：14]MAAp的氨基酸序列 
[序列号：15]MAM的核苷酸序列 
[序列号：16]MAMp的氨基酸序列 
[序列号：17]MMA的核苷酸序列 
[序列号：18]MMAp的氨基酸序列 
本说明书中使用的“α-葡萄糖苷转运蛋白”，是指与α-葡萄糖苷的膜运输有关的蛋白质，此种α-葡萄糖苷转运蛋白包括麦芽糖转运蛋白、麦芽三糖转运蛋白等。 
1.本发明的多核苷酸
首先，本发明提供了如下多核苷酸，其是编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸，包括：(a)多核苷酸，所述多核苷酸包含由序列号3的第307～1659位碱基序列或序列号5的第283～1641位碱基序列组成的多核苷酸；以及(b)12次跨膜结构域编码区，所述12次跨膜结构域编码区由编码序列号4的第103～553位氨基酸序列或序列号6的第95～547位氨基酸序列的多核苷酸组成，并且使5′端序列和/或3′端序列与异种多核苷酸重组而成。多核苷酸可以是DNA，也可以是RNA。 
12次跨膜结构域，是指12个跨膜结构域TMD1到TMD12的范围，包含各个跨膜结构域TMD1、TMD2、...、TMD12及介于其间的序列。TMD1、TMD12等在TMD上附带的各编号，表示从氨基酸序列的N末端开始计数的跨膜结构域的编号。因此，12次跨膜结构域编码区是指编码从TMD1到TMD12的范围内的氨基酸序列的核苷酸序列，TMD1编码区是指编码TMD1的氨基酸序列的核苷酸序列。 
本发明涉及使具有12次跨膜结构域的α-葡萄糖苷转运蛋白的N末端和/或C末端序列与其它具有12次跨膜结构域的转运蛋白的N末端和/或C末端序列重组而形成的转运蛋白或编码该转运蛋白的多核苷酸。因此，在本说明书中，“异种多核苷酸”，是指编码与重组前转运蛋白不同的转运蛋白的多核苷酸。与异种多核苷酸重组时，可优选在重组对象的多核苷酸和异种多核苷酸之间，进行核苷酸序列和/或氨基酸序列的比对，并在对应的区域间进行重组。 
5′端序列和/或3′端序列，是指某一特定基因或DNA序列的旁侧序列，即5′端和/或3′端存在的序列。例如，12次跨膜结构域编码区的5′端序列，包含用于使中央部分具有所述12次跨膜结构域的蛋白质的编码区域开始翻译的序列；12次跨膜结构域编码区的3′端序列，包含用于使中央部分具有12次跨膜结构域的蛋白质的编码区域终止翻译的序列。本发明中，5′端序列及3′端序列，是指中间夹有12次跨膜结构域的5′端序列和3′端序列。5′端的重组位置，例如可以在TMD1的区域内，也可以在从TMD1起始位置开始的5′端上游。 
本发明的优选多核苷酸，可例举由序列号3的第307～1659位碱基序列或序列号5的第283～1641位碱基序列组成的多核苷酸、或由编码序列号4的第103～553位氨基酸序列或序列号6的第95～547位氨基酸序列的多核苷酸组成的12次跨膜结构域编码区的5′端和/或3′端序列与序列号1的12次跨膜结构域 编码区的5′端和/或3′端序列重组而形成的，编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸。 
本发明中作为对象的多核苷酸，并不限定于编码上述蛋白质序列的多核苷酸，还包括编码与此蛋白质功能同等的蛋白质的其他多核苷酸。功能同等的蛋白质，例如可举出(c)包含在序列号4的第103～553位氨基酸序列或序列号6的第95～547位氨基酸序列中1～10个(优选1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸发生缺失、取代、插入和/或添加的氨基酸序列，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。 
此种蛋白质，可例举包含序列号4的第103～553位氨基酸序列或序列号6的第95～547位氨基酸序列中，例如1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个(1～数个)、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个、1个氨基酸残基发生缺失、取代、插入和/或添加的氨基酸序列，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。通常，上述氨基酸残基的缺失、取代、插入和/或添加的数量，优选越小越好。 
此外，此种蛋白质，可例举(d)包含与序列号4的第103～553位氨基酸序列或序列号6的第95～547位氨基酸序列具有约90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、99.1％以上、99.2％以上、99.3％以上、99.4％以上、99.5％以上、99.6％以上、99.7％以上、99.8％以上、99.9％以上同一性的氨基酸序列，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。通常，上述同源性的数值优选越大越好。 
<葡萄糖诱导性失活/降解抗性的评价> 
本发明中，葡萄糖诱导性失活/降解抗性，例如，可按以下方法进行评价。首先，确认表达各转运蛋白的菌株在含有0～2mM2-脱氧葡萄糖的麦芽糖等的最小必需培养基[无氨基酸酵母氮源(Yeast Nitrogen Base w/o amino acids)6.7g/L、麦芽糖等20g/L，但对于有营养缺陷型的转化株，包含其营养素]、或在含有0～2mM2-脱氧葡萄糖的麦芽糖等的完全合成培养基(SCM)[无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖20g/L、硫酸腺嘌呤20mg/ml、尿嘧啶20mg/ml、L-色氨酸20mg/ml、L-组氨酸盐酸盐20mg/ml、L-精氨酸盐酸盐20mg/ml、L-蛋氨酸20mg/ml、L-酪氨酸30mg/ml、L-亮氨酸30mg/ml、L-异亮氨酸30mg/ml、L- 赖氨酸盐酸盐30mg/ml、L-苯丙氨酸50mg/ml、L-谷氨酸100mg/ml、L-天冬氨酸100mg/ml、L-缬氨酸150mg/ml、L-苏氨酸200mg/ml、L-丝氨酸400mg/ml]中的生长繁殖状况，即使产生了葡萄糖诱导性失活/降解信号的酵母，也要从中筛选其转运蛋白具有麦芽糖转运活性且起作用的菌株。接着，将此菌株接种到YPD(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L)中，在30℃温度下振荡培养过夜。将培养液接种到YPM培养基(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、麦芽糖5g/L)中，使OD660＝1.0，并在30℃温度下振荡培养2.5小时后收集菌。测取60个OD660单位的细胞，悬浮于30ml预先在30℃保温的降解速度测定用培养基[无氨基酸和铵盐酵母氮源(1.6g/L、葡萄糖20g/L、环己酰亚胺25μg/L]中，在30℃温度下进行温育。在适合的时间(0、10、20、30及40分钟、或0、30、60、90及120分钟)抽取细胞悬浮液样品5ml，迅速离心弃上清，并用乙醇干冰冷冻细胞。根据常规方法检测冷冻细胞中的转运蛋白，测定蛋白条带的强度，由其减少速度计算半衰期。本发明中的优选转运蛋白，例如，与Agt1p比较，具有2倍以上、3倍以上、4倍以上、5倍以上、6倍以上或8倍以上的半衰期。 
<蛋白质跨膜结构域的规定> 
本发明中，上述(a)中记载的“序列号3的第307～1659位碱基序列或序列号5的第283～1641位碱基序列”、及(b)中记载的“序列号4的第103～553位氨基酸序列或序列号6的第95～547位氨基酸序列”，是预测的酵母中Agt1p或Mtt1p的12次跨膜结构域部分。这些蛋白质的跨膜结构域，可利用Stockholm大学理论化学蛋白预测服务器上的拓扑预测程序Toppred2(http://bioweb.pasteur.fr/seqanal/interfaces/toppred.html)、或利用EMBnet的跨膜区检测程序TMPRED：Transmembrane regions detection (EMBnethttp://www.ch.embnet.org/index.html)等来预测(访问日：2008年8月29日)。对于Mal61p跨膜结构域的预测，在Cheng，Q.，and Michels，C.A.(1989)Genetics123(3)，477-484中有记载。本说明书中，以下TMD1～TMD12的预测使用Stockholm大学理论化学蛋白预测服务器上的拓扑预测程序Toppred2(http://bioweb.pasteur.fr/seqanal/interfaces/toppred.html)。 
图3及图4分别表示Mal21p和Agt1p的氨基酸序列比对，及Mal21p和Mtt1p 的氨基酸序列比对图。在各个图中，显示了同样氨基酸(淡灰色)及同源性氨基酸(深灰色)、非同源性氨基酸、空位(-)等的信息。 
此外，本发明提供如下多核苷酸，其中，3′端12次跨膜结构域编码区与5′端序列的重组位置在预测TMD1编码区内，12次跨膜结构域编码区与3′端序列的重组位置在从预测TMD12编码区起始位置到预测TMD12编码区终止位置后的96个碱基以内的区域内，且在与序列号2和序列号4的对应氨基酸序列具有80％以上同一性的区域内，编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。 
参照图3，对于上述“预测TMD1”，Mal21p(序列号：2)中第95～115位的氨基酸、Agt1p(序列号：4)中第103～123位区域的氨基酸表示所述预测位置。(图3中预测TMD1的位置表示Agt1p的预测位置。)因此，编码它们的碱基序列，是MAL21(序列号1)中第283～345位的区域、AGT1(序列号3)中第307～369位的区域。同样，参照图3，对于上述“预测TMD12”，Mal21p(序列号2)中第526～546位区域的氨基酸、Agt1p(序列号4)中第533～553位区域的氨基酸表示所述预测位置。(图3中的预测TMD12位置表示Agt1p的预测位置。)所以，各个预测TMD12编码区，在MAL21(序列号1)中是第1576～1638位的区域，在AGT1(序列号3)中是第1597～1659位的区域。因此，“从预测TMD12编码区起始位置到预测TMD12编码区终止位置后的96个碱基以内的区域”，指MAL21(序列号1)时是第1576～1734位内的碱基序列的区域，指AGT1(序列号：3)时是第1597～1755位内的碱基序列的区域。上述“预测TMD12编码区终止位置后的96个碱基以内的区域”，优选为离预测TMD12编码区终止位置的96碱基以内、更优选81碱基以内、进一步优选72碱基以内的区域。各个对应的序列位置的一例如下表1所示。但根据前述预测程序，这些数值的多个都可改变。 
表1 
Figure G2008800006496D00091
且本发明提供如下多核苷酸，其中，12次跨膜结构域编码区和5′端序列的重组位置在从序列号1的第175位碱基到12次跨膜结构域的预测TMD1编码区终止位置的区域内，12次跨膜结构域和3′端序列的重组位置在从预测TMD12编码区起始位置到预测TMD12编码区终止位置后的第180位碱基的区域内，且编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。 
参照图4，对于上述“预测TMD1”，Mal21p(序列号2)及Mtt1p(序列号6)中第95～115位的氨基酸表示所述预测位置(即无空位)。因而，与“预测TMD1编码区”对应的碱基序列是MAL21(序列号：1)及MTT1(序列号：5)中第283～345位的区域。因此，“序列号1或序列号5的从第175位碱基到预测TMD1编码区终止位置的区域”，是指序列号1或序列号5的第175～345位。第175位的碱基开始到预测TMD1编码区终止位置的区域，因在此范围内的两氨基酸序列完全一致，所以此范围内的任何位置都可作为重组位置来被选择(参照图4)。 
同样，对于“预测TMD12”，Mal21p(序列号2)中第526～546位区域的氨基酸、Mtt1p(序列号6)中第527～547位区域的氨基酸表示所述预测位置。因而，“从预测TMD12编码区起始位置到预测TMD12编码区终止位置后的180碱基以内的区域”，是指MAL21(序列号1)中第1576～1818位碱基序列的区域，MTT1(序列号5)中第1579～1821位碱基序列的区域。预测TMD12编码区终止位置后的180个碱基以内的区域，因在此范围内的两氨基酸序列完全一致，所以，在此范围内的任何位置都可作为重组位置被选择(参照图4)。各个对应的序列位置参照以下表2，但根据前述预测程序，这些数值的多个都可变化。 
表2 
Figure G2008800006496D00101
并且，本发明还包含如下多核苷酸，该多核苷酸包含由序列号13、15或17 的碱基序列组成的多核苷酸、或包含编码由序列号14、16或18的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。进一步，本发明还包括如下多核苷酸，该多核苷酸包含在严谨条件下与上述(1)～(4)中所述的多核苷酸或由序列号13、15或17的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸杂交，且编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸。 
本发明的优选多核苷酸，为上述(1)～(4)中规定的多核苷酸、包含编码由序列号14、16或18的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸的多核苷酸、或含有由序列号13、15或17的核苷酸序列组成的多核苷酸的多核苷酸，更优选为由序列号13、15或17特定的多核苷酸。 
在此，“在严谨条件下杂交的多核苷酸(DNA)”，是指例如以由序列号1或3的碱基序列的互补碱基序列组成的DNA或编码序列号2或4的氨基酸序列的DNA的全部或一部分为探针，通过使用菌落杂交法、噬菌斑杂交法或Southern杂交法等所得到的DNA。杂交方法，可使用例如Molecular Cloning 3rd Ed.、Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons 1987-1997等中所记载的方法。 
本说明书中所述的“严谨条件”，可为低严谨条件、中严谨条件及高严谨条件中的任一种。“低严谨条件”，例如，为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、32℃的条件。“中严谨条件”，例如，为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、42℃的条件。“高严谨条件”，例如，为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、50℃的条件。在上述条件中，温度越高，越有可能获得高同源性DNA。但影响杂交严谨性的因素还有温度、探针浓度、探针长度、离子强度、时间、盐浓度等多种因素，本领域技术人员可通过适当选择这些因素，实现同样的严谨性。 
此外，杂交中使用市售试剂盒时，可使用例如Alkphos Direct LabellingReagents(Amersham Pharmacia公司制)。此时，根据试剂盒中附带的说明方案，与标记后的探针温育过夜后，在55℃条件下用含有0.1％(w/v)SDS的1次洗涤缓冲液洗涤膜，随后可检测杂交的DNA。 
除上述以外，作为可杂交的DNA，可例举通过FASTA、BLAST等同源性搜索软件，使用默认参数计算时，与编码序列号2或4的氨基酸序列的DNA具有约90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以 上、97％以上、98％以上、99％以上、99.1％以上、99.2％以上、99.3％以上、99.4％以上、99.5％以上、99.6％以上、99.7％以上、99.8％以上、99.9％以上同一性的DNA。 
另外，氨基酸序列或碱基序列的同一性可使用根据Karlin及Altschul的BLAST算法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，872264-2268，1990；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：5873，1993)测定。已经开发出基于BLAST算法的被称为BLASTN或BLASTX的程序(Altschul SF，et al：J Mol.Biol.215：403，1990)。当使用BLASTN分析碱基序列时，参数例如为分数(score)＝100、字长(wordlength)＝12。另外，当使用BLASTX分析氨基酸序列时，参数例如为分数＝50、字长＝3。当使用BLAST和Gapped BLAST程序时，使用各程序的默认参数。 
2.本发明的蛋白质
本发明提供由上述(1)～(6)中所述的任一个多核苷酸编码的蛋白质。本发明的优选蛋白质为由序列号14、16或18的氨基酸序列中1～10个(优选1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸发生缺失、取代、插入和/或添加的氨基酸序列组成，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。此种蛋白质，可例举由序列号14、16或18的氨基酸序列中如上所述数量的氨基酸残基发生缺失、取代、插入和/或添加的氨基酸序列组成，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。此外，此种蛋白质，还可例举具有与序列号14、16或18的氨基酸序列有如上所述的同源性的氨基酸序列，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。此种蛋白质，可使用《分子克隆》第3版、《Current Protocols in Molecular Biology》、“Nuc.Acids.Res.，10，6487(1982)”、“Proc.Natl.Acad.Sci.USA，79，6409(1982)”、“Gene，34，315(1985)”、“Nuc.Acids.Res.，13，4431(1985)”、“Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，488(1985)”等中所述的定点诱变法获得。 
与本发明多核苷酸相关的蛋白质的氨基酸序列中1～10个(优选1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸残基发生缺失、取代、插入和/或添加，是指同一序列中任意且1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个或1个氨基酸序列的位置中，1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5 个、1～4个、1～3个、1～2个或1个氨基酸残基发生缺失、取代、插入和/或添加，缺失、取代、插入及添加中的两种以上可同时发生。 
以下举例表示可相互取代的氨基酸残基。同一组中包含的氨基酸残基可相互取代。A组：亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、缬氨酸、正缬氨酸、丙氨酸、2-氨基丁酸、蛋氨酸、o-甲基丝氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、环己基丙氨酸；B组：天冬氨酸、谷氨酸、异天冬氨酸、异谷氨酸、2-氨基己二酸、2-氨基辛二酸；C组：天冬酰胺、谷氨酰胺；D组：赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、2，4-二氨基丁酸、2，3-二氨基丙酸；E组：脯氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸；F组：丝氨酸、苏氨酸、高丝氨酸；G组：苯丙氨酸、酪氨酸。 
本发明的蛋白质可通过Fmoc法(芴甲氧羰基法)、tBoc法(叔丁氧羰基法)等的化学合成法制备。也可利用Advanced Chem Tech公司、珀金埃尔默(PerkinElmer)公司、Pharmacia公司、Protein Technology Instruments公司、Synthecell-Vega公司、PerSeptive公司、岛津制作所等所制造的肽合成仪进行化学合成。 
3.本发明的载体及导入该载体的转化酵母
另外，本发明提供含有上述多核苷酸的载体。本发明的载体，优选含有上述(1)～(4)中任一项所述的多核苷酸(DNA)、或由序列号13、15或17的碱基序列组成的多核苷酸、或编码由序列号14、16或18的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。且本发明的载体，通常以包含表达盒的形式构成，该表达盒包含的结构要素为：(x)在酵母细胞内可转录的启动子；(y)以正向或反向与该启动子连接的上述任一项所述的多核苷酸(DNA)；及(z)与RNA分子的转录终止及多聚腺苷化有关的、在酵母内发挥作用的信号。此外，要使上述本发明的蛋白质高表达，优选将上述多核苷酸相对于该启动子正向导入，以促进上述(a)～(i)中任一项所述的多核苷酸(DNA)的表达。 
导入酵母时使用的载体，可利用多拷贝型(YEp型)、单拷贝型(YCp型)、染色体整合型(YIp型)中的任一种。例如，作为YEp型载体已知有YEp24(J.R.Broach et al.，Experimental Manipulation of Gene Expression，Academic Press，New York，83，1983)、作为YCp型载体已知有YCp50(M.D.Rose et al.，gene，60，237，1987)、作为YIp型载体已知有YIp5(K.Struhl et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，76，1035，1979)，且易获得。此外，也可使用染色体整合型的pUP3GLP (Omura，F.et al.，FEMS Microbiol.Lett.，194，207，2001)(图14)、pJHIXSB、pYCGPY(Kodama，Y.et al.，Appl.Environ.Microbiol.，67，3455，2001)(图13)、pJHXSB(图12)等单拷贝复制型质粒。 
用于调控酵母中基因表达的启动子/终止子，只要在酿造用酵母中起作用，同时不受醪液中糖或氨基酸等成分浓度的影响，可任意组合。例如可使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(TDH3)的启动子、3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)的启动子等。这些基因已被克隆，如在M.F.Tuite et al.，EMBO J.，1，603(1982)中有详细记载，通过已知方法可很容易地获得。表达载体中使用的启动子可以根据发酵醪的糖组成、糖浓度、或多个转运蛋白的组合等，可有效地改变成具有适当转录活性的启动子。因酿造用酵母不能利用营养缺陷型标记，所以，转化时使用的选择性标记可利用遗传霉素(Geneticin)抗性基因G418r、铜抗性基因(CUP1)(Marin et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81，337 1984)、浅蓝菌素抗性基因(fas2m，PDR4)(猪腰淳嗣等，生物化学，64，660，1992；Hussain et al.，gene，101，149，1991)等。将如上所述构建的载体导入宿主酵母内。宿主酵母可例举可用于酿造的任意酵母，例如啤酒、葡萄酒、清酒等的酿造用酵母等。具体地说，可列举酵母属(Saccharomyces)等的酵母，在本发明中，可使用啤酒酵母例如巴斯德酵母(Saccharomyces pastorianus)W34/70等，卡氏酵母(Saccharomyces carlsbergensis)NCYC453、NCYC456等，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)NBRC1951、NBRC1952、NBRC1953、NBRC1954等。并且还可使用威士忌酵母，例如酿酒酵母NCYC90等；葡萄酒酵母，例如协会葡萄酒用1号、同3号、同4号等葡萄酒酵母；清酒酵母，例如协会酵母、清酒用7号、同9号等清酒酵母，但不限于此。本发明中，优选使用啤酒酵母例如巴斯德酵母(Saccharomyces pastorianus)。 
用于制备本说明书中所述的各转运蛋白基因的染色体DNA，并不限定于酿酒酵母ATCC20598、ATCC96955等的菌株，只要是属于具有各基因的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的酵母，可以从任何酵母中制备。 
酵母的转化方法，可使用通常使用的公知方法。例如，可使用电穿孔法“Meth.Enzym.，194，p182(1990)”、原生质球法(Spheroplast法)“Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75 p1929(1978)”、醋酸锂法“J.Bacteriology，153，p163(1983)”、Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75 p1929(1978)、Methods in yeast genetics，2000 Edition：A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual等中所述的方法实施，但不限于此。 
此外，转化株，可通过将宿主的营养缺陷型互补基因(例如将URA3)整合到表达质粒中，在不含尿嘧啶的琼脂培养基中筛选。或可通过将抗药性基因(例如对环己酰亚胺的抗药性基因、YAP1或遗传霉素(Geneticin)的抗性基因G418R)整合到表达质粒中，在含有环己酰亚胺(例如0.3μg/ml)或遗传霉素(Geneticin)(例如300μg/ml)的琼脂培养基中筛选。 
更具体地说，将宿主酵母置于标准酵母营养培养基[例如YEPD培养基“Genetic Engineering.Vol.1，Plenum Press，New York，117(1979)”等]中培养至OD600nm值为1～6。将此培养酵母离心分离后收集、洗涤，用浓度约为1～2M的碱金属离子(优选锂离子)进行预处理。将所述细胞在约30℃的条件下静置约60分钟后，与待导入的DNA(约1～20μg)同时在约30℃的条件下静置约60分钟。加入聚乙二醇，优选加入约4000道尔顿的聚乙二醇，使最终浓度约为20％～50％。在约30℃下静置约30分钟后，将所述细胞在约42℃条件下加热处理约5分钟。优选用标准酵母营养培养基洗涤所述细胞悬浮液，并加入到规定量的新鲜标准酵母营养培养基中，约30℃下静置约60分钟。之后，移到含有作为选择性标记使用的抗生素等的标准琼脂培养基中，获得转化体。 
其他有关的常规克隆技术，可参照(《分子克隆》第3版)、“Methods in YeastGenetics、A laboratory manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold SpringHarbor，NY)”等。 
4.本发明的酒类制造方法及通过该方法制得的酒类
将上述本发明的载体导入适合酿造作为制造对象的酒类的酵母中，通过使用该酵母，可制造具有特定氨基酸组成的酒类。作为制造对象的酒类例如可例举啤酒、葡萄酒、威士忌、清酒等，但并不限于此。 
制造这些酒类时，除使用本发明中所获得的酿造酵母来代替亲株以外，可利用公知的方法。因此，原料、制造设备、制造管理等可与以往的方法完全相同，不会因制造发酵时间缩短的酒类而增加成本。也就是说，根据本发明，可在使用已有设备在不增加成本的情况下进行制造。 
5.酵母的评价方法
构建含有本发明中制备的多核苷酸的表达载体，将其根据常规方法导入酵母中，首先在含有2-脱氧葡萄糖的麦芽糖、麦芽三糖培养基中培养，将其生长繁殖水平作为指标，筛选含有不易因葡萄糖而引起失活的转运蛋白的酵母。然后，使所得到酵母在低聚糖培养基(例如，麦芽糖、麦芽三糖培养基)中培养。在进行该培养时，可通过测定所述酵母中含有的转运蛋白的葡萄糖诱导性失活/降解抗性，所述酵母的低聚糖分解能力、增殖速度、在麦汁中的发酵速度等，评价所述酵母的适应性。葡萄糖诱导性失活/降解抗性、低聚糖分解能力、增殖速度、在麦汁中的发酵速度等，可通过后述实施例中使用的方法来评价。 
实施例 
以下通过实施例更详细说明本发明，但本发明不限于以下实施例。 
试验方法： 
本实施例中使用的试验项目及试验方法如下所示。无特殊情况下，本实施例中的试验方法根据以下所示进行。 
<MAL21，AGT1基因的获取> 
已经克隆了酿酒酵母的AGT1基因，并报道了其碱基序列。本说明书中所述的AGT1的核苷酸序列(序列号3)从酵母基因组数据库(SaccharomycesGenome Database)(注册号：YGR289C)获取。以AGT1基因的碱基序列信息为基础，将从具有AGT1基因的酿酒酵母中制备的染色体DNA作为PCR模板，通过PCR进行扩增、分离而获得AGT1基因。 
此外，对于MAL21，已知由III号染色体编码，但其DNA序列还不为人知。但是，基于由II号染色体编码的MAL31与染色体VIII号编码的MAL61基因具有99％以上的同一性的考虑，预测与MAL21也具有相当高的同一性。 
实际上，我们根据从GenBank(注册号：X17391)获取的MAL61的DNA序列设计了引物[5’AGAGCTCAGCATATAAAGAGACA 3’(序列号19)和5’TGGATCCGTATCTACCTACTGG 3’(序列号20)]。并且以具有MAL21基因但不具有其他α-葡萄糖苷转运蛋白基因的酵母染色体DNA为模板，用PCR可得到MAL21(其核苷酸序列用序列号1表示，氨基酸序列用序列号2表示)。AGT1是使用引物[5’TGAGCTCACATAGAAGAACATCAAA 3’(序列号21)和 5’ATGGATCCATATGAAAAATATCATT 3’(序列号22)]获得。具体地说，AGT1由酿酒酵母S288C[ATCC204508(Rose，M.D.，Winston，F.and Hieter，P.(1990)：Methods in YeastGenetics：A Laboratory Course Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY)]通过PCR获得，MAL21由酿酒酵母ATCC20598，通过PCR获得。使用Invitrogen公司的TOPO TA克隆试剂盒将获取的DNA片段插入到载体pCR(注册商标)2.1-TOPO中，通过DNA测序确认插入的基因序列。 
对于AGT1，确认与在数据库中注册的注册号：YGR289C的碱基序列相同。对于MAL21，将10克隆以上独立测序，确定了其碱基序列(序列号1)。 
此外，在所使用的引物中起始密码子的上游有XbaI或SacI位点，终止密码子的下游有BamHI位点，这些位点已整合到表达载体内。通过使用染色体DNA而进行的目的基因的PCR扩增及其后的分离，包扩PCR引物的制备，可使用本领域技术人员公知的方法进行。MAL21的碱基序列如图1所示，氨基酸序列如图2所示。 
<表达质粒> 
本发明中，使用(1)～(3)的3种表达载体。 
(1)pJHXSB(图12) 
(2)pYCGPY(图13) 
(3)pUP3GLP(图14) 
<酵母株> 
本发明中，转运蛋白基因的获取使用菌株(1)～(3)，转运蛋白的表达和菌株间的比较使用菌株(4)及(5)，发酵速度的确认使用菌株(6)。 
(1)酿酒酵母S288C(ATCC204508)(MATalpha SUC2 mal mel gal2 CUP1) 
(2)酿酒酵母ATCC96955(MATa MAL61 MAL62 MAL63 mal64 mal11MAL12 mal13 ura3-52leu2-3leu2-112trp1 his) 
(3)酿酒酵母ATCC20598(MATa suc MAL2 MEL1 his4 leu2) 
(4)酿酒酵母HH1001(MATa SUC2 mal mel gal2 CUP1TPI1::TPI1pr-MAL32-G418R ura3) 
(5)酿酒酵母Δ152(MATa mal61Δ::TRP1 MAL62 MAL63 mal64 mal11MAL12 mal13 ura3-52leu2-3leu2-112 trp1 his) 
(6)下面啤酒酵母Weihenstephan 194 
<限制性内切酶识别位点的引入> 
通过使用具有限制性内切酶识别位点序列的引物进行PCR，引入限制性内切酶识别位点。引物的DNA序列如表3所示。具体地说，通过以插入了AGT1或MAL21基因的质粒pCR(注册商标)2.1-TOPO为模板，用表4所示的引物的组合进行PCR，从而对于AGT1基因，得到了AGT1-SaS、AGT1-SaK、AGT1-SK、AGT1-SB及AGT1-KB的五个DNA片段，对于MAL21基因，得到了MAL21-SaS、MAL21-SaK、MAL21-SK、MAL21-SB及MAL21-KB的五个DNA片段。各片段的模式图如以下表2及3所示。所得到的DNA片段插入质粒pCR(注册商标)2.1-TOPO中进行测序，确认除导入的限制性内切酶位点以外，没有从原来的基因中取代的碱基。各个DNA片段使用限制性内切酶SacI、SalI、KpnI、BamHI等从质粒中切出，用于下述杂交转运蛋白基因的构建中。 
<杂交转运蛋白基因的构建> 
构建了图7所示的6种杂交转运蛋白基因AAM、AMA、AMM、MAA、MAM及MMA。各个杂交转运蛋白，通过将上述项中得到的各种片段用图7所示的组合整合到表达载体pYCGPY的SacI-BamHI位点来获得。详细地说，用SacI和BamHI切割pYCGPY并用细菌碱性磷酸酶(Bacterial alkali phosphatase)进行脱磷酸化处理，将所述线性化载体与上述DNA片段连接后，转化到大肠杆菌(E.coli)DH5α中。由数个氨苄青霉素抗性菌落制备质粒，用只在MAL21或AGT1基因中存在的限制性内切酶的组合切割后，通过琼脂糖凝胶电泳，根据检测片段的大小来确认目的杂交转运蛋白基因已整合到载体pYCGPY中。pYCGPY中，转运蛋白基因从PYK1启动子开始转录。此外，用SacI-BamHI从pYCGPY中切出各个杂交转运蛋白，并整合到表达载体pJHXSB的SacI-BamHI位点中。pJHXSB中，转运蛋白基因从TPI1启动子开始转录。 
另外，本发明中使用的MMA、MAA、MAM等突变体标记，指连续含有以下各个核苷酸序列的核苷酸序列，最初的字母指编码来自12次跨膜结构域的N末端结构域(5′端)的氨基酸序列的核苷酸序列，第2个字母指编码来自12次跨膜结构域的氨基酸序列的核苷酸序列，第3个字母指编码来自12次跨膜结构 域的C末端结构域(3′端)的氨基酸序列的核苷酸序列。字母M指来自MAL21，字母A指来自AGT1。即，野生型AGT1可标记为AAA，将AGT1的12次跨膜结构域的N末端用MAL21的对应结构域取代的杂交突变体标记为MAA。 
<酵母的转化> 
用可表达通过上述方法得到的天然型转运蛋白基因或杂交转运蛋白基因的质粒转化酵母。转化株(以不具有α-葡萄糖苷转运蛋白基因的菌株为宿主)根据所使用的质粒的标记在培养基中进行筛选，对于pYCGPY，则在含有300μg/mlG418的YPD培养基中筛选。另外，对于pJHXSB，当宿主使用HH1001等ura-株时，在不含尿嘧啶的合成培养基(例如最小必需培养基[无氨基酸酵母氮源6.7g/L、葡萄糖20g/L])等中筛选。 
<转运蛋白的麦芽糖或麦芽三糖转运活性的评价> 
天然型转运蛋白或构建的杂交转运蛋白的转化株(以不具有α-葡萄糖苷转运蛋白基因的菌株为宿主)中所导入的转运蛋白基因的表达，可通过在以0.5％的麦芽糖或麦芽三糖作为唯一碳源的最小必需培养基(但对于有营养缺陷型的转化株，需含有其营养素)中观察其生长繁殖的有无来判定。例如用一铂金环从YPD平板(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L)中挑取供试菌株，用1ml的灭菌水洗涤一次后，再次悬浮于灭菌水中，使OD660＝0.2。收集菌并再一次悬浮于1ml的灭菌水中，通过在以麦芽糖或麦芽三糖为唯一碳源的试验培养基中直接划线培养所述细胞悬浮液来确认生长繁殖状况，确认其具有麦芽糖或麦芽三糖转运活性。 
<转运蛋白的2-脱氧葡萄糖抗性的评价> 
由于2-脱氧葡萄糖(2-DOG)不能代谢成2-DOG-6-磷酸以上，所以是不能成为碳源的糖类似物，但可产生与葡萄糖同样水平的葡萄糖阻遏或因葡萄糖而引起失活。因此，在此平板上生长繁殖的菌株具有不易因葡萄糖而引起失活的α-葡萄糖苷转运蛋白的可能性较高。为分析对2-DOG的抗性，制备含有0～2mM的2-脱氧葡萄糖的麦芽糖等的最小必需培养基[无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖等20g/L，但对于具有营养缺陷型的转化株，含有其营养素]、或含有0～2 mM的2-脱氧葡萄糖的麦芽糖完全合成培养基(SCM)[无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖20g/L、硫酸腺嘌呤20mg/ml、尿嘧啶20mg/ml、L-色氨酸20mg/ml、L-组氨酸盐酸盐20mg/ml、L-精氨酸盐酸盐20mg/ml、L-蛋氨酸20mg/ml、L-酪氨酸30mg/ml、L-亮氨酸30mg/ml、L-异亮氨酸30mg/ml、L-赖氨酸盐酸盐30mg/ml、L-苯丙氨酸50mg/ml、L-谷氨酸100mg/ml、L-天冬氨酸100mg/ml、L-缬氨酸150mg/ml、L-苏氨酸200mg/ml、L-丝氨酸400mg/ml]。将各转运蛋白表达株的OD660＝0.2的细胞悬浮液的系列稀释液3μl分别点样在试验培养基中，通过30℃下培养2～3天来分析。 
<转运蛋白在菌体内蓄积量的测定> 
转运蛋白的菌体内蓄积量，可通过例如Western印迹法分析。例如，从10ml培养液中回收处于对数增殖期的供试菌株，在裂解缓冲液[8M尿素、5％(w/v)SDS、40mM Tris-HCl(pH6.8)、0.1mM EDTA、1％β-巯基乙醇]中用玻璃珠搅拌破坏，获得细胞提取液。用SDS-凝胶电泳分离总蛋白为60μg的样品，转印到硝酸纤维素膜上，然后用抗Mal61p的兔多克隆抗体进行Western印迹分析。 
抗Mal61p兔多克隆抗体如下获得。将编码Mal61p的N末端区(Met1-Leu181)的DNA连接在pET表达载体(Novagen公司)的GST标签下游，并转化到大肠菌BL21(DE3)中，将所述转化体的细胞破碎液加入到GST树脂结合柱中，通过洗脱与柱子结合的蛋白来制备所述抗体。详细方法按照Novagen公司的pET表达系统，GST·BindTM亲和树脂(Novagen公司)中附带的说明进行。制备的融合蛋白用SDS-PAGE确认纯度后，以其作为抗原来免疫兔，得到多克隆抗体。对于抗体的有效性，通过使α-葡萄糖苷转运蛋白基因表达的酵母株和不具有该基因的宿主株在YPM培养基(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、麦芽糖5.0g/L)中培养，利用本抗体并通过上述方法，对细胞破碎液进行Western印迹分析来确认。通过所述抗体，仅在表达α-葡萄糖苷转运蛋白基因的酵母株破碎液中，检测出与68kDa的α-葡萄糖苷转运蛋白分子量一致的阳性条带。且对于杂交转运蛋白，用本抗体只能检测出N末端部为Mal21p型的转运蛋白、MMAp、MAMp及MAAp。Agt1p的菌体内蓄积量，构建编码在Agt1p的C末端部串联连接2个红细胞凝集素标签的融合蛋白的基因，用上述方法获取表达该基因的菌株，来测定Agt1p的菌体内蓄积量。抗体使用抗红细胞凝集素的小 鼠单克隆抗体(Covance，Research，Products，Inc.公司)。 
<转运蛋白降解速度的测定> 
将表达各转运蛋白的菌株接种于YPD中，30℃下振荡培养过夜。将培养液接种于YPM培养基中，使OD660＝1.0，30℃下振荡培养2.5小时收集菌。测取60个OD660单位的细胞，使其悬浮于30ml在预先进行30℃保温的降解速度测定用培养基[无氨基酸酵母氮源(不含氨)(Yeast Nitrogen Base w/o amino acidsand ammonia)1.7g/L、葡萄糖20g/L、环己酰亚胺25mg/L)中，在30℃温度下温育。在适当的时间(0、10、20、30及40分钟或0、30、60、90及120分钟)抽取5ml细胞悬浮液，迅速离心后弃上清，将细胞用乙醇干冰冷冻。冷冻后的细胞用上述方法检测转运蛋白，测定蛋白条带的强度，由强度的减少速度计算半衰期。 
<麦芽糖分解能力的评价> 
对于组成型表达转运蛋白的酵母对麦芽糖的分解，通过在适合该酵母的条件下有氧培养酵母或使其发酵，测定培养基中的麦芽糖量来评价。糖的测定，可通过本领域技术人员周知的方法，例如通过使用IR检测器的液相色谱法来测定。 
实施例1：Mal21p和Agt1p在葡萄糖存在下的降解速度
将通过PCR得到的MAL21基因和AGT1基因插入到表达载体pYCGPY中，并转化到酵母Δ152中。在以0.5％的麦芽糖或麦芽三糖为唯一碳源、含有20mg/L尿嘧啶、20mg/L组氨酸、30mg/L亮氨酸、300μg/ml遗传霉素的最小必需培养基(MM)中划线培养转化株(图5)。具有MAL21的菌株只能在麦芽糖培养基中生长繁殖，而具有AGT1的菌株可在麦芽糖、麦芽三糖的任一种培养基中生长繁殖，这说明只有AGT1可转运两种糖。而后，构建编码在Agt1p的C末端部串联连接两个红细胞凝集素标签的融合蛋白的基因、AGT1-2HA，并将其插入到表达载体pJHXSB中。将MAL61和MAL21也插入到pJHXSB中。将这些载体转化到酵母HH1001中。使用两种转化株，利用试验方法项中所示的方法，通过Western印迹法测定葡萄糖存在下的降解速度。其结果如图6所示，与 Mal61p或Mal21p相比，Agt1-2Hap的半衰期较短(参照图6，Agt1-2HAp：14分钟、Mal61p：25分钟、Mal21p：118分钟)。还可获知，同样是α-葡萄糖苷转运蛋白，但与Mal61p相比，Mal21p具有极长的半衰期(Mal61p：25分钟，Mal21p：118分钟)。 
实施例2：杂交转运蛋白的构建和其底物特异性的确认
Agt1p和Mal21p属于MFS(Major facilitated sugar transporter，主要的易化糖载体)，从其氨基酸序列的类似性来说，认为均具有12个跨膜结构域，N末端和C末端为细胞质结构域。与Agt1p和Mal21p的底物特异性或活性有关的位点，还不为人所知。从两者的氨基酸序列比对来看，认为N末端和C末端细胞质结构域部分的类似性低，中央的12个跨膜结构域部分的类似性高(参照图3)。因此，认为中央的12个跨膜结构域部分具有转运活性，或者说有可能是决定底物特异性的部分。分别以如下方式通过PCR获取AGT1和MAL21基因，即，使编码N末端或C末端细胞质结构域部分、和编码中央部的12次跨膜结构域部分的两端均具有限制性内切酶位点。使用的引物如表3所示，得到的片段和使用的引物对的关系如表4所示。通过组合上述物质，构建多种杂交的转运蛋白基因。将使用的重组位置用图3中的十字印表示，各杂交体的名称及模式图为如图7所示。详细内容如试验方法中所述。如图7所示，将插入了各杂交转运蛋白基因的表达载体pYCGPY转化到酵母Δ152中。在以0.5％的麦芽糖或麦芽三糖为唯一碳源，且含有20mg/L尿嘧啶、20mg/L组氨酸、30mg/L亮氨酸、300μg/ml遗传霉素的最小必需培养基(MM)[MM：无氨基酸酵母氮源6.7g/L、5g/L麦芽糖或麦芽三糖、20mg/L组氨酸、30mg/L亮氨酸、20mg/L尿嘧啶、300μg/ml遗传霉素]中划线培养转化株(图8)。由其结果可知，中央部的12次跨膜结构域来自Agt1p的3个杂交转运蛋白、AAMp、MAMp、MAAp具有转运麦芽三糖的活性。 
表3用于限制性内切酶切割位点导入的引物 
Figure G2008800006496D00231
(上述的序列分别在序列号23～32中所记载) 
表4用于获得片段的PCR引物对 
Figure G2008800006496D00232
实施例3：杂交转运蛋白的2-脱氧葡萄糖抗性
将实施例2中记载的杂交转运蛋白基因用SacI-BamHI从pYCGPY中切出，整合到pJHXSB的SacI-BamHI位点内。将构建的各个表达载体转化到HH1001中。HH1001是mal-株X2180-1A的ura3-姊妹株，因整合有TPI1p::MAL32(编码了麦芽糖酶基因)，所以麦芽糖酶以组成型表达。制备在含有2％麦芽糖的完全合成培养基(SCM)中加入0mM～2mM的2-脱氧葡萄糖(2-DOG)的平板，如试验方法中所述，测定各转化株的2-DOG抗性。因2-DOG不能代谢成2-DOG-6-磷酸以上，所以是不能成为碳源的糖类似物，但已知可引起与葡萄糖同一水平的葡萄糖阻遏或因葡萄糖而引起失活。因此，在此平板中生长繁殖的菌株很有可能具有不易因葡萄糖而引起失活的α-葡萄糖苷转运蛋白。其结果如图9所示。具有来自MAL21的N末端细胞质结构域的杂交转运蛋白MMAp、MAAp，在1mM的2-DOG的培养基中也能生长繁殖。此外，MAMp在2mM的2-DOG的培养基中也能生长繁殖，与天然型Mal21p同样具有对2-DOG的抗性，所以，可知其不易受到葡萄糖的降解诱导。 
实施例4：杂交转运蛋白在葡萄糖存在下的降解速度
如实施例3中所示，认为具有来自MAL21的N末端细胞质结构域的杂交转运蛋白MMAp、MAAp及MAMp不易受到葡萄糖的降解诱导。因此，为确认这一点，用试验方法中所示的方法，测定葡萄糖存在下MMAp、MAAp及MAMp的降解速度(图10)。所有的杂交转运蛋白均具有比Agt1-2HAp长的半衰期。特别是MAMp的半衰期是119分钟，具有与Mal21p(118分)基本相同的半衰期，改良了因葡萄糖存在而被迅速降解的α-葡萄糖苷转运蛋白Agt1p，成功构建了不易被降解的转运蛋白。 
参考例1：通过高表达MAL21的下面啤酒酵母的发泡酒麦汁发酵试验
将对葡萄糖诱导性降解具有抗性的转运蛋白MAL21整合到质粒pUP3GLP的XbaI(或SacI)-BamHI位点内。pUP3GLP如图14所示。pUP3GLP是YIp型质粒，转运蛋白基因通过甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(TDH3p)表达。在URA3的EcoRV位点切割各质粒后，将其转化到下面啤酒酵母(Weihenstephan 194)中，并涂布在含有0.3μg/ml环己酰亚胺的YPG平板(酵母浸膏10 g/L、多聚蛋 白胨20g/L、半乳糖20g/L)上。目的表达盒被插入到Weihenstephan 194染色体上的URA3基因中，这一点可通过PCR来确认。 
将Weihenstephan 194(URA3::TDH3p::MAL21)和亲株Weihenstephan 194接种到两种发泡酒麦汁中。发泡酒麦汁是在除水之外的原料中麦芽的使用比率低于25％，且使用了糖化淀粉、啤酒花等的麦汁。发泡酒用麦汁中的一种的初期浸出物浓度为14.0％，含有组成比为葡萄糖1.2％、麦芽糖6.6％、麦芽三糖2.2％的糖。另一种富含葡萄糖的发泡酒麦汁的初期浸出物浓度为15.6％，含有组成比为葡萄糖4.7％、麦芽糖5.4％、麦芽三糖1.7％的糖。各发泡酒麦汁，分别通过在等量麦汁(最终浓度、麦芽比率低于25％)中添加糖组成不同的糖化淀粉来制备。在各发泡酒麦汁中加入湿菌体，使其成为7.5g/L，并15℃下进行发酵，测定发酵中酒醪的麦芽糖浓度。其结果如图11所示。 
在任一发泡酒麦汁中，MAL21高表达株的麦芽糖分解速度均显著快于亲株Weihenstephan 194。特别是富含葡萄糖的发泡酒麦汁，其效果显著。初期浸出物浓度高是指葡萄糖浓度高，这充分体现了转运蛋白对葡萄糖诱导性降解具有的抗性效果。因此，例如从图10及图11的结果中可看出，导入了杂交转运蛋白MAAp或MAMp的酵母，在高浓度单糖(例如葡萄糖等)时促进麦芽三糖分解的效果十分值得期待。 
产业上的可利用性 
如上所述，发现α-葡萄糖苷转运蛋白Agt1p与其他α-葡萄糖苷转运蛋白相比，在葡萄糖存在下的半衰期短。且还发现，同样是α-葡萄糖苷转运蛋白，Mal21p与Mal61p不同，Mal21p不易因葡萄糖存在而发生降解。构建了6种杂交转运蛋白，结果发现中央的12次跨膜结构域是Agt1p型的杂交转运蛋白AAMp、MAAp及MAMp均转运麦芽三糖。且还发现，与Agt1p相比，N末端的细胞质结构域是Mal21p型的杂交转运蛋白MAAp、MMAp及MAMp，均在葡萄糖存在下不易发生降解。其中，具有Mal21p的N末端和C末端细胞质结构域，只有中央的12次跨膜结构域是Agt1p型的杂交转运蛋白MAM，具有与Mal21p同等的长半衰期，且转运麦芽三糖，所以，如使用表达突变型转运蛋白的酵母(不论是实验室株还是酿造用酵母)，可加快醪液中的麦芽三糖等转运蛋白可转运的糖的分解。特别是在葡萄糖等单糖浓度高时更为有效。 
序列表
<110>三得利株式会社(SUNTORY，LTD)
<120>杂交的α-葡萄糖苷转运蛋白
<130>PCT08-0031
<160>32
<170>PatentIn version 3.5
<210>1
<211>1842
<212>DNA
<213>酿酒酵母
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1842)
<223>Mal21p
<400>1
atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac    48
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                    15
tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac    96
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
             20                       25                     30
tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt ggt ctt tcc      144
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser
          35                     40                     45
cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa      192
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu
    50                      55                      60
gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca      240
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                      70                   75                    80
gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat      288
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                     90                     95
cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa      336
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln
              100                     105                      110
gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt      384
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val
         115                     120                     125
ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa      432
Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu
    130                     135                     140
att tca gtt tct tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt      480
Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly
145                       150                    155              160
gaa att gtg ggg cta cag cta acg ggg ccc tcc gtg gat ctt gtt gga      528
Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly Pro Ser Val Asp Leu Val Gly
                    165                   170                    175
aat cgt tac aca ttg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att      576
Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile
              180                    185                     190
ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag      624
Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln
          195                    200                     205
gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct      672
Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser
    210                     215                   220
tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act      720
Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr
225                     230                     235                 240
tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att      768
Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile
                  245                    250                     255
atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag      816
Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys
             260                     265                    270
cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt      864
Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly
        275                      280                     285
att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg      912
Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg
     290                     295                     300
att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga      960
Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly
305                     310                     315                320
ccc gag aaa gaa tta cta gtg act atg gaa ctc gat aaa atc aaa act     1008
Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr
                  325                    330                     335
act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat     1056
Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp
              340                     345                    350
tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta     1104
Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu
         355                     360                     365
tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca     1152
Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser
    370                      375                     380
act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act     1200
Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr
385                     390                     395                  400
ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt gta tcc     1248
Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser
                    405                     410                  415
tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg     1296
Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly
              420                     425                    430
ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt     1344
Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys
         435                     440                      445
tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt     1392
Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val
    450                     455                     460
gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta     1440
Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu
465                     470                     475                480
gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg     1488
Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu
                   485                     490                  495
gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg att     1536
Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile
              500                     505                      510
atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc     1584
Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly
         515                    520                     525
ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc     1632
Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val
    530                     535                    540
gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg     1680
Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu
545                    550                     555                 560
ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac     1728
Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp
                   565                    570                   575
cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat     1776
Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp
              580                     585                     590
ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc     1824
Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr
         595                    600                     605
tca tct gtt gtg aac aaa                                             1842
Ser Ser Val Val Asn Lys
    610
<210>2
<211>614
<212>PRT
<213>酿酒酵母
<400>2
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                     15
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                     25                      30
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser
          35                         40                 45
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu
     50                     55                      60
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                      70                   75                    80
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                     90                     95
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln
              100                     105                     110
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val
         115                     120                     125
Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu
    130                     135                     140
Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly
145                       150                    155                160
Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly Pro Ser Val Asp Leu Val Gly
                    165                    170                  175
Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile
              180                    185                     190
Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln
          195                    200                     205
Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser
    210                    215                   220
Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr
225                     230                     235                  240
Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile
                  245                    250                     255
Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys
             260                     265                    270
Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly
         275                     280                     285
Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg
     290                     295                     300
Ile Asp Gln AlaArg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly
305                     310                   315                320
Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr
              325                    330                   335
Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp
              340                    345                     350
Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu
         355                     360                     365
Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser
    370                      375                     380
Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr
385                     390                     395                 400
Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser
                    405                     410                  415
Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly
              420                    425                     430
Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys
         435                     440                     445
Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val
     450                    455                     460
Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu
465                     470                     475                  480
Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu
                   485                     490                   495
Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile
              500                     505                      510
Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly
         515                    520                     525
Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val
    530                     535                     540
Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu
545                    550                     555                560
Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp
                  565                     570                   575
Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp
              580                     585                     590
Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr
         595                    600                     605
Ser Ser Val Val Asn Lys
    610
<210>3
<211>1848
<212>DNA
<213>酿酒酵母
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1848)
<223>Agt1p
<400>3
atg aaa aat atc att tca ttg gta agc aag aag aag gct gcc tca aaa    48
Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys
1                   5                       10                    15
aat gag gat aaa aac att tct gag tct tca aga gat att gta aac caa    96
Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln
             20                       25                      30
cag gag gtt ttc aat act gaa gat ttt gaa gaa ggg aaa aag gat agt    144
Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser
         35                     40                      45
gcc ttt gag cta gac cac tta gag ttc acc acc aat tca gcc cag tta    192
Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
    50                      55                    60
gga gat tct gac gaa gat aac gag aat gtg att aat gag atg aac gct    240
Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala
65                    70                      75                  80
act gat gat gca aat gaa gct aac agc gag gaa aaa agc atg act ttg    288
Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu
                  85                      90                    95
aag cag gcg ttg cta aaa tat cca aaa gca gcc ctg tgg tcc ata tta    336
Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu
              100                    105                      110
gtg tct act acc ctg gtt atg gaa ggt tat gat acc gca cta ctg agc    384
Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser
          115                    120                    125
gca ctg tat gcc ctg cca gtt ttt cag aga aaa ttc ggt act ttg aac    432
Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn
    130                     135                     140
ggg gag ggt tct tac gaa att act tcc caa tgg cag att ggt tta aac    480
Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn
145                     150                     155                160
atg tgt gtc ctt tgt ggt gag atg att ggt ttg caa atc acg act tat      528
Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr
                  165                    170                    175
atg gtt gaa ttt atg ggg aat cgt tat acg atg att aca gca ctt ggt      576
Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly
              180                    185                     190
ttg tta act gct tat atc ttt atc ctc tac tac tgt aaa agt tta gct      624
Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala
         195                      200                     205
atg att gct gtg gga caa att ctc tca gct ata cca tgg ggt tgt ttc      672
Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe
    210                      215                      220
caa agt ttg gct gtt act tat gct tcg gaa gtt tgc cct tta gca tta      720
Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu
225                     230                     235                240
aga tat tac atg acc agt tac tcc aac att tgt tgg tta ttt ggt caa      768
Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln
                  245                     250                    255
atc ttc gcc tct ggt att atg aaa aac tca caa gag aat tta ggg aac      816
Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn
                260                     265                  270
tcc gac ttg ggc tat aaa ttg cca ttt gct tta caa tgg att tgg cct      864
Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro
         275                    280                     285
gct cct tta atg atc ggt atc ttt ttc gct cct gag tcg ccc tgg tgg      912
Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp
    290                      295                     300
ttg gtg aga aag gat agg gtc gct gag gca aga aaa tct tta agc aga      960
Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg
305                    310                    315                  320
att ttg agt ggt aaa ggc gcc gag aag gac att caa gtt gat ctt act     1008
Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr
                    325                     330                  335
tta aag cag att gaa ttg act att gaa aaa gaa aga ctt tta gca tct     1056
Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser
              340                     345                    350
aaa tca gga tca ttc ttt aat tgt ttc aag gga gtt aat gga aga aga     1104
Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg
         355                     360                    365
acg aga ctt gca tgt tta act tgg gta gct caa aat agt agc ggt gcc     1152
Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala
    370                     375                     380
gtt tta ctt ggt tac tcg aca tat ttt ttt gaa aga gca ggt atg gcc     1200
Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala
385                     390                     395                400
acc gac aag gcg ttt act ttt tct cta att cag tac tgt ctt ggg tta     1248
Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu
                  405                     410                   415
gcg ggt aca ctt tgc tcc tgg gta ata tct ggc cgt gtt ggt aga tgg     1296
Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp
              420                     425                     430
aca ata ctg acc tat ggt ctt gca ttt caa atg gtc tgc tta ttt att     1344
Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile
          435                    440                    445
att ggt gga atg ggt ttt ggt tct gga agc agc gct agt aat ggt gcc     1392
Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala
     450                    455                     460
ggt ggt tta ttg ctg gct tta tca ttc ttt tac aat gct ggt atc ggt     1440
Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly
465                   470                    475                  480
gca gtt gtt tac tgt atc gtt gct gaa att cca tca gcg gag ttg aga     1488
Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg
                    485                      490                 495
act aag act ata gtg ctg gcc cgt att tgc tac aat ctc atg gcc gtt     1536
Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val
              500                       505                   510
att aac gct ata tta acg ccc tat atg cta aac gtg agc gat tgg aac     1584
Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn
          515                     520                     525
tgg ggt gcc aaa act ggt cta tac tgg ggt ggt ttc aca gca gtc act     1632
Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr
    530                     535                     540
tta gct tgg gtc atc atc gat ctg cct gag aca act ggt aga acc ttc     1680
Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe
545                       550                    555                560
agt gaa att aat gaa ctt ttc aac caa ggg gtt cct gcc aga aaa ttt     1728
Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe
                    565                   570                   575
gca tct act gtg gtt gat cca ttc gga aag gga aaa act caa cat gat     1776
Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp
              580                     585                    590
tcg cta gct gat gag agt atc agt cag tcc tca agc ata aaa cag cga     1824
Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg
         595                      600                       605
gaa tta aat gca gct gat aaa tgt                                     1848
Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys
    610                     615
<210>4
<211>616
<212>PRT
<213>酿酒酵母
<400>4
Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys
1                   5                       10                    15
Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln
             20                   25                          30
Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser
         35                     40                      45
Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
    50                      55                     60
Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala
65                    70                      75                  80
Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu
                  85                     90                     95
Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu
              100                     105                     110
Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser
          115                    120                    125
Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn
     130                    135                     140
Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn
145                     150                     155                 160
Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr
                  165                    170                    175
Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly
              180                   185                     190
Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala
         195                      200                     205
Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe
    210                      215                      220
Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu
225                     230                     235                240
Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln
                  245                       250                  255
Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn
                260                     265                  270
Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro
         275                     280                     285
Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp
    290                      295                     300
Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg
305                   310                     315                  320
Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr
                    325                     330                  335
Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser
              340                     345                    350
Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg
         355                    360                     365
Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala
    370                     375                     380
Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala
385                     390                   395                  400
Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu
                  405                     410                   415
Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp
             420                      425                     430
Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile
          435                    440                    445
Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala
      450                   455                     460
Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly
465                   470                     475                  480
Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg
                    485                      490                 495
Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val
                500                     505                   510
Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn
          515                     520                     525
Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr
    530                     535                     540
Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe
545                       550                    555                 560
Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe
                    565                   570                    575
Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp
              580                     585                    590
Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg
         595                      600                      605
Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys
    610                     615
<210>5
<211>1845
<212>DNA
<213>酿酒酵母
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1845)
<223>Mtt1p
<400>5
atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac       48
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                     15
tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac       96
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                     25                      30
tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc      144
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser
          35                     40                     45
cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta aca cca aac gat aat aat gaa      192
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Thr Pro Asn Asp Asn Asn Glu
    50                       55                     60
gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca      240
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                     70                     75                   80
gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat      288
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                    90                     95
cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa      336
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln
              100                     105                     110
gag ggt tat gac aca gcc att cta gga tct ttc tat gcc ctg cct gtt      384
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ser Phe Tyr Ala Leu Pro Val
         115                     120                     125
ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa      432
Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu
    130                     135                     140
att tca gct tcc tgg caa att ggc ttg tcc tta tgc gtt acg gct ggt      480
Ile Ser Ala Ser Trp Gln Ile Gly Leu Ser Leu Cys Val Thr Ala Gly
145                      150                     155                160
gaa att gta ggt ttg caa atg act ggg cct ttt gta gat tat atg ggt      528
Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Phe Val Asp Tyr Met Gly
                    165                   170                   175
aat cgc tat aca ttg att ttg gca ttg att ctt ctt gct gca ttc acc      576
Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Leu Ala Leu Ile Leu Leu Ala Ala Phe Thr
              180                     185                     190
ttt att ctg tat ttt tgc aag ggt ttg ggt atg att gct gtg gga caa      624
Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Gly Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln
          195                    200                     205
gta ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct      672
Val Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser
    210                     215                   220
tat gct tct gaa att tgt cct atg gcc cta aga tac tat ttg acg act      720
Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Met Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr
225                     230                     235                 240
tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att      768
Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile
                  245                    250                     255
atg aaa aac tcc caa aat aag tac cct aac tca gaa cta gga tat aag      816
Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Pro Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys
             260                     265                     270
cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg cct gct cct ctt gca ata ggt      864
Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Ala Ile Gly
         275                     280                      285
att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg      912
Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg
     290                     295                     300
att gat caa gca agg aga tca ctt gaa aga aca ttg agt ggt aaa gga      960
Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly
305                     310                    315                 320
ccc gag aag gaa tta ctg gta agt atg gag cta gat aat atc aaa gta     1008
Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Asn Ile Lys Val
                      325                330                     335
acc att gaa aag gaa aaa aag ctg tca gac tca gaa ggt tcc tat tgg     1056
Thr Ile Glu Lys Glu Lys Lys Leu Ser Asp Ser Glu Gly Ser Tyr Trp
              340                     345                     350
gat tgt ctg aag gac agt gtt aat agg aga aga acg aga ata gct tgt     1104
Asp Cys Leu Lys Asp Ser Val Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys
        355                     360                     365
tta tgt tgg gtc ggt caa acc acc tgt ggt aca tca tta att ggt aat     1152
Leu Cys Trp Val Gly Gln Thr Thr Cys Gly Thr Ser Leu Ile Gly Asn
    370                     375                     380
tca act tac ttt tat gaa aaa gct gga gtt ggt act gat acg gct ttc     1200
Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Gly Thr Asp Thr Ala Phe
385                     390                     395                  400
act ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gcc gca aca ttt ctt     1248
Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Leu
                    405                     410                   415
tct tgg tgg gct tca aaa tat ttt ggt agg ttt gac ctt tac gca ttt     1296
Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Phe Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe
              420                     425                    430
gga ttg gct ata caa aca gtt tca ttg ttt atc ata gga ggt ttg gga     1344
Gly Leu Ala Ile Gln Thr Val Ser Leu Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly
         435                     440                      445
tgc tcc gac tcg cat ggc gct gaa atg gga agt ggt tct ctt tta atg     1392
Cys Ser Asp Ser His Gly Ala Glu Met Gly Ser Gly Ser Leu Leu Met
    450                     455                     460
gtt ctt tcc ttc ttc tac aat ttg ggt att gct ccc gtt gtg ttt tgc     1440
Val Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys
465                     470                     475                 480
tta gtg tcc gaa ata cca tcc tca agg cta aga act aaa tcg att att     1488
Leu Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Ser Ile Ile
                    485                     490                  495
ctg gct cgt aac gca tat aat atg gca tct att gta act act gtt ttg     1536
Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Met Ala Ser Ile Val Thr Thr Val Leu
             500                     505                     510
atc atg tac caa ttg aac tca gaa aaa tgg aac tgg ggt gcc aag tcg     1584
Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser
          515                    520                     525
ggc ttt ttc tgg gga ggg tta tgt ttt gcc act cta gtt tgg gcc gta     1632
Gly Phe Phe Trp Gly Gly Leu Cys Phe Ala Thr Leu Val Trp Ala Val
    530                     535                     540
att gac cta cca gaa act gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa     1680
Ile Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu
545                     550                     555                 560
ttg ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc     1728
Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val
                  565                    570                    575
gac cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa     1776
Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys
              580                     585                     590
gat ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga agc     1824
Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser
         595                    600                     605
acc cca tct gtt gtg aac aaa                                         1845
Thr Pro Ser Val Val Asn Lys
    610                     615
<210>6
<211>615
<212>PRT
<213>酿酒酵母
<400>6
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                     15
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                      25                     30
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser
          35                     40                     45
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Thr Pro Asn Asp Asn Asn Glu
     50                     55                      60
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                      70                   75                   80
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                 85                     90                     95
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln
              100                     105                     110
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ser Phe Tyr Ala Leu Pro Val
         115                     120                     125
Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu
    130                     135                     140
Ile Ser Ala Ser Trp Gln Ile Gly Leu Ser Leu Cys Val Thr Ala Gly
145                       150                    155                160
Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Phe Val Asp Tyr Met Gly
                    165                   170                   175
Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Leu Ala Leu Ile Leu Leu Ala Ala Phe Thr
              180                     185                    190
Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Gly Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln
          195                    200                     205
Val Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser
    210                     215                   220
Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Met Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr
225                     230                     235                 240
Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile
                  245                    250                     255
Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Pro Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys
             260                    265                     270
Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Ala Ile Gly
         275                     280                      285
Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg
     290                     295                     300
Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly
305                     310                    315                 320
Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Asn Ile Lys Val
                  325                    330                    335
Thr Ile Glu Lys Glu Lys Lys Leu Ser Asp Ser Glu Gly Ser Tyr Trp
              340                     345                     350
Asp Cys Leu Lys Asp Ser Val Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys
        355                     360                     365
Leu Cys Trp Val Gly Gln Thr Thr Cys Gly Thr Ser Leu Ile Gly Asn
    370                     375                     380
Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Gly Thr Asp Thr Ala Phe
385                     390                     395                   400
Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Leu
                    405                     410                   415
Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Phe Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe
              420                     425                    430
Gly Leu Ala Ile Gln Thr Val Ser Leu Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly
          435                    440                      445
Cys Ser Asp Ser His Gly Ala Glu Met Gly Ser Gly Ser Leu Leu Met
    450                     455                     460
Val Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys
465                     470                     475                   480
Leu Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Ser Ile Ile
                    485                     490                   495
Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Met Ala Ser Ile Val Thr Thr Val Leu
              500                    505                      510
Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser
          515                    520                     525
Gly Phe Phe Trp Gly Gly Leu Cys Phe Ala Thr Leu Val Trp Ala Val
    530                     535                    540
Ile Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu
545                     550                     555                   560
Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val
                  565                     570                     575
Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys
              580                     585                     590
Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser
         595                    600                     605
Thr Pro Ser Val Val Asn Lys
    610                     615
<210>7
<211>1860
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AAM
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1860)
<223>AAMp
<400>7
atg aaa aat atc att tca ttg gta agc aag aag aag gct gcc tca aaa       48
Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys
1                   5                       10                     15
aat gag gat aaa aac att tct gag tct tca aga gat att gta aac caa       96
Asn Glu Asp Lys Asn Ile Set Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln
             20                      25                       30
cag gag gtt ttc aat act gaa gat ttt gaa gaa ggg aaa aag gat agt      144
Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser
         35                     40                      45
gcc ttt gag cta gac cac tta gag ttc acc acc aat tca gcc cag tta      192
Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
     50                   55                      60
gga gat tct gac gaa gat aac gag aat gtg att aat gag atg aac gct      240
Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala
65                    70                      75                   80
act gat gat gca aat gaa gct aac agc gag gaa aaa agc atg act ttg      288
Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu
                  85                     90                      95
aag cag gcg ttg cta aaa tat cca aaa gca gcc ctg tgg tcc ata tta      336
Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu
              100                    105                     110
gtg tct act acc ctg gtt atg gaa ggt tat gat acc gca cta ctg agc      384
Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser
          115                    120                    125
gca ctg tat gcc ctg cca gtt ttt cag aga aaa ttc ggt act ttg aac      432
Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn
    130                         135                         140
ggg gag ggt tct tac gaa att act tcc caa tgg cag att ggt tta aac      480
Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn
145                     150                     155                  160
atg tgt gtc ctt tgt ggt gag atg att ggt ttg caa atc acg act tat      528
Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr
                 165                     170                     175
atg gtt gaa ttt atg ggg aat cgt tat acg atg att aca gca ctt ggt      576
Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly
              180                   185                      190
ttg tta act gct tat atc ttt atc ctc tac tac tgt aaa agt tta gct      624
Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala
         195                      200                     205
atg att gct gtg gga caa att ctc tca gct ata cca tgg ggt tgt ttc      672
Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe
    210                      215                      220
caa agt ttg gct gtt act tat gct tcg gaa gtt tgc cct tta gca tta      720
Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu
225                     230                     235                 240
aga tat tac atg acc agt tac tcc aac att tgt tgg tta ttt ggt caa      768
Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln
                  245                     250                     255
atc ttc gcc tct ggt att atg aaa aac tca caa gag aat tta ggg aac      816
Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn
               260                     265                   270
tcc gac ttg ggc tat aaa ttg cca ttt gct tta caa tgg att tgg cct      864
Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro
         275                    280                     285
gct cct tta atg atc ggt atc ttt ttc gct cct gag tcg ccc tgg tgg      912
Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp
    290                      295                     300
ttg gtg aga aag gat agg gtc gct gag gca aga aaa tct tta agc aga      960
Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg
305                    310                    315                   320
att ttg agt ggt aaa ggc gcc gag aag gac att caa gtt gat ctt act     1008
Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr
                    325                     330                   335
tta aag cag att gaa ttg act att gaa aaa gaa aga ctt tta gca tct     1056
Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser
              340                    345                     350
aaa tca gga tca ttc ttt aat tgt ttc aag gga gtt aat gga aga aga     1104
Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg
          355                   360                     365
acg aga ctt gca tgt tta act tgg gta gct caa aat agt agc ggt gcc     1152
Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala
      370                           375                      380
gtt tta ctt ggt tac tcg aca tat ttt ttt gaa aga gca ggt atg gcc     1200
Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala
385                     390                    395                 400
acc gac aag gcg ttt act ttt tct cta att cag tac tgt ctt ggg tta     1248
Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu
                  405                     410                     415
gcg ggt aca ctt tgc tcc tgg gta ata tct ggc cgt gtt ggt aga tgg     1296
Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp
              420                      425                    430
aca ata ctg acc tat ggt ctt gca ttt caa atg gtc tgc tta ttt att     1344
Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile
          435                    440                    445
att ggt gga atg ggt ttt ggt tct gga agc agc gct agt aat ggt gcc     1392
Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala
     450                    455                     460
ggt ggt tta ttg ctg gct tta tca ttc ttt tac aat gct ggt atc ggt     1440
Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly
465                   470                    475                   480
gca gtt gtt tac tgt atc gtt gct gaa att cca tca gcg gag ttg aga     1488
Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg
                    485                      490                  495
act aag act ata gtg ctg gcc cgt att tgc tac aat ctc atg gcc gtt     1536
Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val
               500                     505                    510
att aac gct ata tta acg ccc tat atg cta aac gtg agc gat tgg aac     1584
Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn
          515                     520                     525
tgg ggt gcc aaa act ggt cta tac tgg ggt ggt ttc aca gca gtc act     1632
Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr
    530                     535                     540
tta gct tgg gtc atc atc gat ctg cct gag aca act ggt aga acc ttc     1680
Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe
545                      550                     555                560
agt gaa att aat gaa ctt ttc aac caa ggg gta cca gca aga aag ttc     1728
Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe
                    565                   570                   575
aag tcg act aaa gtc gac cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca     1776
Lys Ser Thr Lys Val Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala
              580                    585                      590
gaa att aat gtt aaa gat ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta     1824
Glu Ile Asn Val Lys Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val
          595                    600                     605
gat gaa ggg cga aac acc tca tct gtt gtg aac aaa                     1860
Asp Glu Gly Arg Asn Thr Ser Ser Val Val Asn Lys
      610                     615                     620
<210>8
<211>620
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<400>8
Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys
1                   5                       10                    15
Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln
             20                      25                       30
Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser
         35                     40                      45
Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
     50                     55                    60
Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala
65                    70                      75                  80
Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu
                  85                     90                     95
Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu
              100                    105                      110
Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser
         115                     120                    125
Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn
    130                     135                     140
Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn
145                     150                     155                  160
Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr
                  165                    170                     175
Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly
              180                   185                     190
Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala
         195                      200                       205
Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe
    210                      215                      220
Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu
225                     230                     235                  240
Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln
                  245                      250                    255
Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn
                260                    265                   270
Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro
         275                    280                     285
Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp
    290                      295                     300
Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg
305                   310                     315                 320
Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr
                    325                     330                   335
Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser
              340                     345                    350
Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg
          355                   360                     365
Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala
    370                     375                     380
Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala
385                     390                     395                400
Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu
                  405                     410                   415
Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp
              420                     425                     430
Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile
          435                     440                    445
Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala
     450                     455                    460
Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly
465                   470                     475                  480
Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg
                    485                      490                 495
Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val
               500                     505                    510
Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn
          515                     520                     525
Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr
     530                    535                     540
Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe
545                      550                    555                 560
Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe
                    565                   570                     575
Lys Ser Thr Lys Val Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala
              580                     585                     590
Glu Ile Asn Val Lys Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val
          595                     600                    605
Asp Glu Gly Arg Asn Thr Ser Ser Val Val Asn Lys
    610                     615                     620
<210>9
<211>1851
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AMA
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1851)
<223>AMAp
<400>9
atg aaa aat atc att tca ttg gta agc aag aag aag gct gcc tca aaa       48
Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys
1                   5                       10                     15
aat gag gat aaa aac att tct gag tct tca aga gat att gta aac caa       96
Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln
             20                      25                       30
cag gag gtt ttc aat act gaa gat ttt gaa gaa ggg aaa aag gat agt      144
Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser
         35                     40                      45
gcc ttt gag cta gac cac tta gag ttc acc acc aat tca gcc cag tta      192
Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
     50                    55                     60
gga gat tct gac gaa gat aac gag aat gtg att aat gag atg aac gct      240
Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala
65                    70                      75                   80
act gat gat gca aat gaa gct aac agc gag gaa aaa agc atg act ttg      288
Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu
                  85                     90                     95
aag cag gcg ttg cta aaa tat cca aaa gca gcc ctg tgg tcc ata tta      336
Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu
              100                    105                      110
gtg tcg aca aca ttg att caa gag ggt tat gac aca gcc att cta gga      384
Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly
          115                     120                     125
gct ttc tat gcc ctg cct gtt ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat      432
Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn
     130                     135                    140
agc aat aca gga gat tat gaa att tca gtt tct tgg caa atc ggt cta      480
Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu
145                     150                     155                 160
tgt cta tgc tac atg gca ggt gaa att gtg ggg cta cag cta acg ggg      528
Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly
                 165                      170                   175
ccc tcc gtg gat ctt gtt gga aat cgt tac aca ttg atc atg gcg ttg      576
Pro Ser Val Asp Leu Val Gly Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu
              180                    185                     190
ttc ttt tta gcg gct ttc att ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg      624
Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu
         195                      200                    205
ggt atg att gcc gtg gga cag gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt      672
Gly Met Ile Ala Val Gly Gln Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys
    210                     215                     220
ttc caa tgt ttg acc gtt tct tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc      720
Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala
225                    230                      235                240
cta aga tac tat ttg acg act tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt      768
Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly
                  245                     250                    255
caa ctt ttc gct gct ggt att atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc      816
Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala
             260                     265                     270
aac tca gaa cta gga tat aag cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg      864
Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp
         275                    280                     285
ccc ctt cct ttg gcg gta ggt att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg      912
Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp
    290                     295                     300
tgg ctg gtt aaa aaa gga agg att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa      960
Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu
305                     310                     315                 320
aga aca tta agt ggt aaa gga ccc gag aaa gaa tta cta gtg act atg     1008
Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met
                  325                     330                    335
gaa ctc gat aaa atc aaa act act ata gaa aag gag cag aaa atg tct     1056
Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser
             340                      345                     350
gat gaa gga act tac tgg gat tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga     1104
Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg
         355                    360                     365
aga acg aga ata gct tgt tta tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt     1152
Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly
    370                     375                     380
gca tca tta att ggt tat tca act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt     1200
Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val
385                     390                     395                 400
agc act gat acg gct ttt act ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt     1248
Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly
                   405                      410                  415
att gct gca acg ttt gta tcc tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga     1296
Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg
               420                      425                    430
ttt gac ctt tat gct ttt ggg ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc     1344
Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe
         435                    440                     445
att atc ggt ggt tta gga tgt tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt     1392
Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly
      450                    455                     460
agt ggt gct ctt cta atg gtt gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att     1440
Ser Gly Ala Leu Leu Met Val Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile
465                   470                     475                   480
gca cct gtt gtt ttt tgc tta gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta     1488
Ala Pro Val Val Phe Cys Leu Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu
                   485                    490                     495
aga acc aaa aca att att ttg gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa     1536
Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln
              500                     505                      510
gtt gta gtt aca gtt ttg att atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg     1584
Val Val Val Thr Val Leu Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp
          515                     520                    525
aat tgg ggt gct aaa tca ggc ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc     1632
Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala
    530                     535                     540
act tta gct tgg gct gtt gtc gat tta cca gaa acc gct ggc agg act     1680
Thr Leu Ala Trp Ala Val Val Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr
545                     550                     555                 560
ttt att gag ata aat gaa ttg ttt aga ctt ggg gta cct gcc aga aaa     1728
Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys
                    565                   570                   575
ttt gca tct act gtg gtt gat cca ttc gga aag gga aaa act caa cat     1776
Phe Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His
              580                     585                    590
gat tcg cta gct gat gag agt atc agt cag tcc tca agc ata aaa cag     1824
Asp Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln
         595                     600                       605
cga gaa tta aat gca gct gat aaa tgt                                  1851
Arg Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys
    610                     615
<210>10
<211>617
<212>PRT
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223>合成构建体
<400>10
Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys
1                   5                       10                     15
Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln
             20                      25                      30
Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser
         35                     40                      45
Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
    50                      55                      60
Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala
65                    70                      75                     80
Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu
                  85                     90                      95
Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu
              100                    105                      110
Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly
          115                     120                     125
Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn
    130                      135                    140
Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu
145                    150                      155                  160
Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly
                  165                     170                   175
Pro Ser Val Asp Leu Val Gly Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu
              180                     185                     190
Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu
         195                      200                    205
Gly Met Ile Ala Val Gly Gln Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys
    210                     215                     220
Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala
225                    230                      235                 240
Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly
                   245                    250                   255
Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala
              260                    265                     270
Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp
         275                    280                     285
Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp
    290                     295                     300
Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu
305                     310                     315                  320
Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met
                  325                    330                    335
Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser
              340                     345                     350
Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg
         355                    360                     365
Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly
    370                     375                     380
Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val
385                     390                     395                  400
Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly
                    405                     410                   415
Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg
                420                     425                     430
Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe
         435                    440                     445
Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly
    450                      455                     460
Ser Gly Ala Leu Leu Met Val Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile
465                   470                      475                  480
Ala Pro Val Val Phe Cys Leu Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu
                    485                   490                   495
Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln
              500                      505                     510
Val Val Val Thr Val Leu Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp
          515                     520                    525
Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala
    530                     535                     540
Thr Leu Ala Trp Ala Val Val Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr
545                     550                     555                  560
Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys
                    565                   570                    575
Phe Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His
              580                     585                    590
Asp Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln
         595                     600                      605
Arg Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys
    610                     615
<210>11
<211>1863
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>AMM
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1863)
<223>AMMp
<400>11
atg aaa aat atc att tca ttg gta agc aag aag aag gct gcc tca aaa       48
Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys
1                   5                       10                     15
aat gag gat aaa aac att tct gag tct tca aga gat att gta aac caa       96
Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln
             20                       25                      30
cag gag gtt ttc aat act gaa gat ttt gaa gaa ggg aaa aag gat agt      144
Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser
         35                     40                      45
gcc ttt gag cta gac cac tta gag ttc acc acc aat tca gcc cag tta      192
Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
    50                      55                    60
gga gat tct gac gaa gat aac gag aat gtg att aat gag atg aac gct      240
Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala
65                    70                      75                   80
act gat gat gca aat gaa gct aac agc gag gaa aaa agc atg act ttg      288
Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu
                  85                     90                     95
aag cag gcg ttg cta aaa tat cca aaa gca gcc ctg tgg tcc ata tta      336
Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu
              100                    105                      110
gtg tcg aca aca ttg att caa gag ggt tat gac aca gcc att cta gga      384
Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly
          115                     120                     125
gct ttc tat gcc ctg cct gtt ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat      432
Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn
    130                     135                     140
agc aat aca gga gat tat gaa att tca gtt tct tgg caa atc ggt cta      480
Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu
145                     150                     155                 160
tgt cta tgc tac atg gca ggt gaa att gtg ggg cta cag cta acg ggg      528
Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly
                  165                     170                    175
ccc tcc gtg gat ctt gtt gga aat cgt tac aca ttg atc atg gcg ttg      576
Pro Ser Val Asp Leu Val Gly Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu
              180                     185                     190
ttc ttt tta gcg gct ttc att ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg      624
Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu
         195                      200                    205
ggt atg att gcc gtg gga cag gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt      672
Gly Met Ile Ala Val Gly Gln Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys
    210                     215                     220
ttc caa tgt ttg acc gtt tct tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc      720
Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala
225                    230                      235                  240
cta aga tac tat ttg acg act tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt      768
Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly
                  245                     250                    255
caa ctt ttc gct gct ggt att atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc      816
Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala
              260                    265                     270
aac tca gaa cta gga tat aag cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg      864
Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp
         275                    280                     285
ccc ctt cct ttg gcg gta ggt att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg      912
Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp
    290                     295                     300
tgg ctg gtt aaa aaa gga agg att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa      960
Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu
305                     310                     315                  320
aga aca tta agt ggt aaa gga ccc gag aaa gaa tta cta gtg act atg     1008
Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met
                  325                     330                    335
gaa ctc gat aaa atc aaa act act ata gaa aag gag cag aaa atg tct     1056
Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser
             340                      345                     350
gat gaa gga act tac tgg gat tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga     1104
Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg
         355                    360                     365
aga acg aga ata gct tgt tta tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt     1152
Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly
    370                     375                     380
gca tca tta att ggt tat tca act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt     1200
Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val
385                     390                     395                 400
agc act gat acg gct ttt act ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt     1248
Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly
                    405                     410                  415
att gct gca acg ttt gta tcc tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga     1296
Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg
                420                     425                    430
ttt gac ctt tat gct ttt ggg ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc     1344
Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe
         435                    440                     445
att atc ggt ggt tta gga tgt tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt     1392
Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly
      450                    455                     460
agt ggt gct ctt cta atg gtt gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att     1440
Ser Gly Ala Leu Leu Met Val Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile
465                   470                      475                  480
gca cct gtt gtt ttt tgc tta gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta     1488
Ala Pro Val Val Phe Cys Leu Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu
                    485                   490                    495
aga acc aaa aca att att ttg gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa     1536
Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln
              500                      505                     510
gtt gta gtt aca gtt ttg att atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg     1584
Val Val Val Thr Val Leu Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp
          515                     520                     525
aat tgg ggt gct aaa tca ggc ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc     1632
Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala
    530                     535                    540
act tta gct tgg gct gtt gtc gat tta cca gaa acc gct ggc agg act     1680
Thr Leu Ala Trp Ala Val Val Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr
545                     550                     555                560
ttt att gag ata aat gaa ttg ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag     1728
Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys
                    565                   570                    575
ttc aag tcg act aaa gtc gac cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct     1776
Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala
              580                     585                     590
gca gaa att aat gtt aaa gat ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg     1824
Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val
          595                     600                   605
gta gat gaa ggg cga aac acc tca tct gtt gtg aac aaa                 1863
Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr Ser Ser Val Val Asn Lys
    610                     615                     620
<210>12
<211>621
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<400>12
Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys
1                   5                       10                     15
Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln
             20                       25                      30
Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser
         35                     40                      45
Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
     50                     55                     60
Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala
65                     70                      75                   80
Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu
                  85                      90                    95
Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu
              100                    105                      110
Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly
          115                     120                     125
Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn
    130                     135                     140
Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu
145                    150                      155                 160
Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly
                 165                      170                     175
Pro Ser Val Asp Leu Val Gly Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu
              180                    185                     190
Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu
         195                      200                    205
Gly Met Ile Ala Val Gly Gln Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys
    210                      215                    220
Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala
225                    230                      235                240
Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly
                  245                     250                   255
Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala
              260                    265                     270
Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp
         275                    280                     285
Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp
    290                     295                     300
Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu
305                     310                     315                320
Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met
                  325                     330                   335
Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser
             340                      345                    350
Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg
        355                     360                     365
Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly
    370                     375                     380
Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val
385                     390                     395                 400
Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly
                   405                      410                   415
Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg
                420                     425                    430
Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe
         435                    440                     445
Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly
      450                    455                     460
Ser Gly Ala Leu Leu Met Val Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile
465                   470                      475                  480
Ala Pro Val Val Phe Cys Leu Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu
                    485                   490                    495
Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln
              500                      505                     510
Val Val Val Thr Val Leu Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp
          515                     520                     525
Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala
    530                     535                    540
Thr Leu Ala Trp Ala Val Val Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr
545                     550                     555                 560
Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys
                    565                   570                    575
Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala
              580                     585                     590
Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val
          595                    600                    605
Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr Ser Ser Val Val Asn Lys
     610                    615                     620
<210>13
<211>1827
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MAA
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1827)
<223>MAAp
<400>13
atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac       48
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                     15
tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac       96
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                      25                     30
tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt ggt ctt tcc      144
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser
          35                     40                     45
cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa      192
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu
     50                      55                     60
gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca      240
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                       70                         75             80
gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat      288
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                     90                     95
cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtg tcg act acc ctg gtt atg      336
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Val Met
              100                     105                     110
gaa ggt tat gat acc gca cta ctg agc gca ctg tat gcc ctg cca gtt      384
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val
         115                    120                     125
ttt cag aga aaa ttc ggt act ttg aac ggg gag ggt tct tac gaa att      432
Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile
    130                     135                   140
act tcc caa tgg cag att ggt tta aac atg tgt gtc ctt tgt ggt gag      480
Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn Met Cys Val Leu Cys Gly Glu
145                     150                    155                160
atg att ggt ttg caa atc acg act tat atg gtt gaa ttt atg ggg aat      528
Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr Met Val Glu Phe Met Gly Asn
                   165                     170                  175
cgt tat acg atg att aca gca ctt ggt ttg tta act gct tat atc ttt      576
Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe
              180                     185                     190
atc ctc tac tac tgt aaa agt tta gct atg att gct gtg gga caa att      624
Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala Met Ile Ala Val Gly Gln Ile
          195                     200                     205
ctc tca gct ata cca tgg ggt tgt ttc caa agt ttg gct gtt act tat      672
Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr
    210                      215                    220
gct tcg gaa gtt tgc cct tta gca tta aga tat tac atg acc agt tac      720
Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr
225                     230                     235                 240
tcc aac att tgt tgg tta ttt ggt caa atc ttc gcc tct ggt att atg      768
Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met
                    245                     250                 255
aaa aac tca caa gag aat tta ggg aac tcc gac ttg ggc tat aaa ttg      816
Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu
              260                   265                     270
cca ttt gct tta caa tgg att tgg cct gct cct tta atg ate ggt atc      864
Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile
         275                     280                      285
ttt ttc gct cct gag tcg ccc tgg tgg ttg gtg aga aag gat agg gtc      912
Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Arg Lys Asp Arg Val
    290                     295                     300
gct gag gca aga aaa tct tta agc aga att ttg agt ggt aaa ggc gcc      960
Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala
305                       310                         315                   320
gag aag gac att caa gtt gat ctt act tta aag cag att gaa ttg act     1008
Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr
                   325                    330                    335
att gaa aaa gaa aga ctt tta gca tct aaa tca gga tca ttc ttt aat     1056
Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn
              340                     345                    350
tgt ttc aag gga gtt aat gga aga aga acg aga ctt gca tgt tta act     1104
Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr
         355                    360                    365
tgg gta gct caa aat agt agc ggt gcc gtt tta ctt ggt tac tcg aca     1152
Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr
    370                      375                    380
tat ttt ttt gaa aga gca ggt atg gcc acc gac aag gcg ttt act ttt     1200
Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe
385                    390                    395                    400
tct cta att cag tac tgt ctt ggg tta gcg ggt aca ctt tgc tcc tgg     1248
Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp
                    405                   410                    415
gta ata tct ggc cgt gtt ggt aga tgg aca ata ctg acc tat ggt ctt     1296
Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu
                420                    425                     430
gca ttt caa atg gtc tgc tta ttt att att ggt gga atg ggt ttt ggt     1344
Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly
         435                    440                     445
tct gga agc agc gct agt aat ggt gcc ggt ggt tta ttg ctg gct tta     1392
Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu
     450                     455                    460
tca ttc ttt tac aat gct ggt atc ggt gca gtt gtt tac tgt atc gtt     1440
Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly Ala Val Val Tyr Cys Ile Val
465                     470                     475                    480
gct gaa att cca tca gcg gag ttg aga act aag act ata gtg ctg gcc     1488
Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala
                    485                    490                     495
cgt att tgc tac aat ctc atg gcc gtt att aac gct ata tta acg ccc     1536
Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro
               500                     505                     510
tat atg cta aac gtg agc gat tgg aac tgg ggt gcc aaa act ggt cta     1584
Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu
         515                     520                    525
tac tgg ggt ggt ttc aca gca gtc act tta gct tgg gtc atc atc gat     1632
Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp
     530                    535                      540
ctg cct gag aca act ggt aga acc ttc agt gaa att aat gaa ctt ttc     1680
Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe
545                      550                         555                    560
aac caa ggg gtt cct gcc aga aaa ttt gca tct act gtg gtt gat cca     1728
Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Ala Ser Thr Val Val Asp Pro
                  565                     570                    575
ttc gga aag gga aaa act caa cat gat tcg cta gct gat gag agt atc     1776
Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp Ser Leu AlaAsp Glu Ser Ile
              580                    585                    590
agt cag tcc tca agc ata aaa cag cga gaa tta aat gca gct gat aaa     1824
Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys
         595                      600                    605
tgt                                                                 1827
Cys
<210>14
<211>609
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<400>14
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                    15
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                      25                     30
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser
          35                     40                     45
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu
 50                     55                      60
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                     70                     75                   80
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                    90                      95
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Val Met
               100                    105                    110
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val
         115                    120                     125
Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile
    130                     135                     140
Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn Met Cys Val Leu Cys Gly Glu
145                      150                    155                160
Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr Met Val Glu Phe Met Gly Asn
                    165                     170                  175
Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe
             180                      185                     190
Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala Met Ile Ala Val Gly Gln Ile
          195                     200                     205
Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr
    210                      215                    220
Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr
225                     230                     235                   240
Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met
                    245                     250                   255
Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu
              260                   265                     270
Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile
         275                      280                     285
Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Arg Lys Asp Arg Val
    290                     295                     300
Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala
305                     310                     315                 320
Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr
                    325                   330                   335
Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn
              340                     345                    350
Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr
         355                    360                     365
Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr
    370                     375                     380
Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe
385                     390                   395                     400
Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp
                    405                   410                    415
Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu
                420                   425                      430
Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly
         435                    440                     445
Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu
    450                      455                    460
Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly Ala Val Val Tyr Cys Ile Val
465                     470                     475                   480
Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala
                    485                     490                   495
Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro
              500                     505                     510
Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu
         515                     520                    525
Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp
    530                     535                     540
Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe
545                    550                      555                 560
Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Ala Ser Thr Val Val Asp Pro
                   565                     570                   575
Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp Ser Leu AlaAsp Glu Ser Ile
              580                    585                    590
Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys
         595                      600                     605
Cys
<210>15
<211>1839
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MAM
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1839)
<223>MAMp
<400>15
atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac       48
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                     15
tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac       96
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                      25                     30
tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt ggt ctt tcc      144
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser
          35                     40                     45
cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa    192
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu
    50                      55                      60
gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca    240
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                     70                     75                   80
gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat    288
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                     90                     95
cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtg tcg act acc ctg gtt atg    336
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Val Met
              100                     105                    110
gaa ggt tat gat acc gca cta ctg agc gca ctg tat gcc ctg cca gtt    384
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val
         115                    120                     125
ttt cag aga aaa ttc ggt act ttg aac ggg gag ggt tct tac gaa att    432
Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile
    130                     135                   140
act tcc caa tgg cag att ggt tta aac atg tgt gtc ctt tgt ggt gag    480
Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn Met Cys Val Leu Cys Gly Glu
145                     150                    155                160
atg att ggt ttg caa atc acg act tat atg gtt gaa ttt atg ggg aat    528
Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr Met Val Glu Phe Met Gly Asn
                      165                         170                   175
cgt tat acg atg att aca gca ctt ggt ttg tta act gct tat atc ttt      576
Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe
              180                     185                     190
atc ctc tac tac tgt aaa agt tta gct atg att gct gtg gga caa att      624
Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala Met Ile Ala Val Gly Gln Ile
          195                     200                     205
ctc tca gct ata cca tgg ggt tgt ttc caa agt ttg gct gtt act tat      672
Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr
    210                      215                    220
gct tcg gaa gtt tgc cct tta gca tta aga tat tac atg acc agt tac      720
Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr
225                     230                     235                  240
tcc aac att tgt tgg tta ttt ggt caa atc ttc gcc tct ggt att atg      768
Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met
                    245                     250                    255
aaa aac tca caa gag aat tta ggg aac tcc gac ttg ggc tat aaa ttg      816
Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu
              260                   265                     270
cca ttt gct tta caa tgg att tgg cct gct cct tta atg atc ggt atc      864
Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile
         275                      280                     285
ttt ttc gct cct gag tcg ccc tgg tgg ttg gtg aga aag gat agg gtc      912
Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Arg Lys Asp Arg Val
    290                     295                     300
gct gag gca aga aaa tct tta agc aga att ttg agt ggt aaa ggc gcc      960
Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala
305                     310                     315                  320
gag aag gac att caa gtt gat ctt act tta aag cag att gaa ttg act     1008
Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr
                   325                    330                     335
att gaa aaa gaa aga ctt tta gca tct aaa tca gga tca ttc ttt aat     1056
Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn
              340                     345                    350
tgt ttc aag gga gtt aat gga aga aga acg aga ctt gca tgt tta act     1104
Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr
         355                    360                     365
tgg gta gct caa aat agt agc ggt gcc gtt tta ctt ggt tac tcg aca     1152
Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr
    370                     375                     380
tat ttt ttt gaa aga gca ggt atg gcc acc gac aag gcg ttt act ttt     1200
Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe
385                    390                    395                  400
tct cta att cag tac tgt ctt ggg tta gcg ggt aca ctt tgc tcc tgg     1248
Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp
                      405                       410                     415
gta ata tct ggc cgt gtt ggt aga tgg aca ata ctg acc tat ggt ctt     1296
Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu
                420                   425                      430
gca ttt caa atg gtc tgc tta ttt att att ggt gga atg ggt ttt ggt     1344
Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly
         435                    440                     445
tct gga agc agc gct agt aat ggt gcc ggt ggt tta ttg ctg gct tta     1392
Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu
    450                      455                    460
tca ttc ttt tac aat gct ggt atc ggt gca gtt gtt tac tgt atc gtt     1440
Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly Ala Val Val Tyr Cys Ile Val
465                     470                     475                  480
gct gaa att cca tca gcg gag ttg aga act aag act ata gtg ctg gcc     1488
Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala
                    485                    490                   495
cgt att tgc tac aat ctc atg gcc gtt att aac gct ata tta acg ccc     1536
Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro
               500                     505                     510
tat atg cta aac gtg agc gat tgg aac tgg ggt gcc aaa act ggt cta     1584
Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu
         515                    520                     525
tac tgg ggt ggt ttc aca gca gtc act tta gct tgg gtc atc atc gat     1632
Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp
    530                     535                      540
ctg cct gag aca act ggt aga acc ttc agt gaa att aat gaa ctt ttc     1680
Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe
545                    550                      555                 560
aac caa ggg gta cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac cct     1728
Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp Pro
                  565                     570                    575
ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat ccg     1776
Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp Pro
              580                     585                     590
aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc tca     1824
Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr Ser
         595                     600                    605
tct gtt gtg aac aaa                                                 1839
Ser Val Val Asn Lys
    610
<210>16
<211>613
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<400>16
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                     15
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                     25                      30
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser
          35                     40                     45
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu
    50                      55                      60
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                      70                    75                   80
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                    90                      95
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Val Met
             100                     105                     110
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val
         115                    120                     125
Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile
    130                     135                   140
Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn Met Cys Val Leu Cys Gly Glu
145                     150                    155                  160
Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr Met Val Glu Phe Met Gly Asn
                   165                     170                   175
Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe
             180                      185                     190
Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala Met Ile Ala Val Gly Gln Ile
          195                     200                     205
Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr
    210                      215                    220
Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr
225                     230                    235                  240
Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met
                    245                     250                 255
Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu
              260                   265                     270
Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile
         275                      280                     285
Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Arg Lys Asp Arg Val
    290                     295                     300
Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala
305                     310                     315                320
Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr
                   325                    330                   335
Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn
             340                     345                    350
Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr
         355                    360                    365
Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr
    370                     375                     380
Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe
385                     390                   395                 400
Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp
                    405                   410                   415
Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu
                420                    425                     430
Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly
         435                    440                     445
Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu
    450                      455                    460
Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly Ala Val Val Tyr Cys Ile Val
465                    470                      475                 480
Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala
                    485                    490                   495
Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro
              500                      505                     510
Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu
         515                    520                     525
Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp
    530                     535                      540
Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe
545                     550                     555                 560
Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp Pro
                  565                     570                   575
Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp Pro
             580                     585                    590
Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr Ser
         595                     600                    605
Ser Val Val Asn Lys
     610
<210>17
<211>1830
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MMA
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1830)
<223>MMAp
<400>17
atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac       48
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                     15
tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac       96
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                      25                     30
tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt ggt ctt tcc      144
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser
          35                     40                     45
cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa      192
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu
     50                     55                      60
gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca      240
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                     70                     75                   80
gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat      288
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                     90                     95
cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa      336
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln
              100                     105                      110
gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt      384
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val
         115                     120                     125
ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa      432
Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu
      130                        135                        140
att tca gtt tct tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt    480
Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly
145                       150                    155                  160
gaa att gtg ggg cta cag cta acg ggg ccc tcc gtg gat ctt gtt gga    528
Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly Pro Ser Val Asp Leu Val Gly
                    165                   170                    175
aat cgt tac aca ttg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att    576
Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile
              180                    185                     190
ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag    624
Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln
          195                    200                     205
gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct    672
Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser
    210                     215                   220
tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act    720
Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr
225                     230                     235                240
tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att    768
Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile
                  245                    250                    255
atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag      816
Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys
             260                     265                     270
cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt      864
Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly
         275                      280                    285
att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg      912
Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg
     290                     295                     300
att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga      960
Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly
305                     310                    315                 320
ccc gag aaa gaa tta cta gtg act atg gaa ctc gat aaa atc aaa act     1008
Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr
                  325                    330                     335
act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat     1056
Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp
              340                     345                    350
tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta     1104
Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu
         355                     360                     365
tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca     1152
Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser
     370                         375                         380
act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act     1200
Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr
385                     390                     395                  400
ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt gta tcc     1248
Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser
                     405                     410                  415
tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg     1296
Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly
               420                    425                    430
ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt     1344
Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys
         435                     440                      445
tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt     1392
Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val
     450                    455                     460
gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta     1440
Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu
465                     470                     475                  480
gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg     1488
Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu
                   485                    490                    495
gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg att     1536
Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile
              500                     505                      510
atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc     1584
Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly
         515                    520                     525
ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc     1632
Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val
    530                     535                   540
gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg     1680
Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu
545                    550                     555                  560
ttt aga ctt ggg gta cct gcc aga aaa ttt gca tct act gtg gtt gat     1728
Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Ala Ser Thr Val Val Asp
                  565                     570                    575
cca ttc gga aag gga aaa act caa cat gat tcg cta gct gat gag agt     1776
Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp Ser Leu Ala Asp Glu Ser
              580                    585                    590
atc agt cag tcc tca agc ata aaa cag cga gaa tta aat gca gct gat     1824
Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg Glu Leu Asn Ala Ala Asp
          595                       600                    605
aaa tgt                                                             1830
Lys Cys
    610
<210>18
<211>610
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<400>18
Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp
1                 5                       10                     15
Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn
              20                      25                     30
Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser
          35                     40                     45
His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu
     50                     55                      60
Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala
65                    70                     75                     80
Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr
                  85                    90                      95
Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln
              100                     105                     110
Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val
         115                     120                     125
Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu
    130                     135                     140
Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly
145                       150                    155               160
Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly Pro Ser Val Asp Leu Val Gly
                    165                   170                   175
Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile
              180                    185                     190
Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln
          195                    200                     205
Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser
    210                    215                   220
Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr
225                     230                     235                 240
Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile
                  24                     5250                   255
Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys
             260                     265                    270
Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly
         275                     280                     285
Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg
     290                     295                     300
Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly
305                    310                   315                  320
Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr
                  325                    330                    335
Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp
              340                     345                    350
Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu
         355                     360                     365
Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser
    370                     375                      380
Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr
385                     390                    395                 400
Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser
                    405                     410                 415
Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly
              420                    425                     430
Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys
         435                     440                      445
Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val
     450                    455                    460
Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu
465                     470                     475                  480
Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu
                   485                    490                   495
Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile
              500                     505                      510
Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly
         515                    520                     525
Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val
    530                    535                     540
Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu
545                     550                     555                  560
Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Ala Ser Thr Val Val Asp
                  565                     570                   575
Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp Ser Leu Ala Asp Glu Ser
              580                    585                    590
Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg Glu Leu Asn Ala Ala Asp
          595                       600                   605
Lys Cys
    610
<210>19
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物(Primer)
<400>19
agagctcagc atataaagag aca                                               23
<210>20
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>20
tggatccgta tctacctact gg                                        22
<210>21
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>21
tgagctcaca tagaagaaca tcaaa                                     25
<210>22
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>22
atggatccat atgaaaaata tcatt                                     25
<210>23
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>23
gtaaaacgac ggccagt                                              17
<210>24
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>24
ggaaacagct atgaccatg                                            19
<210>25
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>25
tgtcgactac cctggttatg                                           20
<210>26
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>26
agtcgacact aatatggacc a                                         21
<210>27
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>27
gggtacctgc cagaaaattt                                           20
<210>28
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>28
aggtacccct tggttgaaaa                                           20
<210>29
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>29
tgtcgacaac attgattcaa gag                                       23
<210>30
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>30
tgtcgacact aatagtgacc aag                                       23
<210>31
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>31
gggtaccagc aagaaagttc aa                                        22
<210>32
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>32
tggtacccca agtctaaaca att                                       23

Claims (11)

1.多核苷酸，其是编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸，其特征在于，编码由序列号14、16或18的氨基酸序列组成的蛋白质。
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其由序列号13、15或17的碱基序列组成。
3.如权利要求1或2所述的多核苷酸，其是DNA。
4.蛋白质，其是由权利要求1～3中任一项所述的多核苷酸编码的蛋白质。
5.载体，其是包含权利要求1～3中任一项所述的多核苷酸的载体。
6.转化酵母，其是导入有权利要求5所述的载体的转化酵母。
7.如权利要求6所述的转化酵母，其通过导入权利要求5所述的载体，提高了低聚糖分解能力。
8.如权利要求7所述的转化酵母，其通过增加权利要求4所述的蛋白质的表达量，提高了低聚糖分解能力。
9.酒类的制造方法，其中，使用了权利要求6～8中任一项所述的转化酵母。
10.如权利要求9所述的酒类的制造方法，其中，所酿造的酒类是麦芽饮料。
11.如权利要求9所述的酒类的制造方法，其中，所酿造的酒类是葡萄酒。
CN2008800006496A 2008-09-09 2008-09-09 杂交的α-葡萄糖苷转运蛋白 Expired - Fee Related CN101861388B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/JP2008/066239 WO2010029610A1 (ja) 2008-09-09 2008-09-09 ハイブリッドアルファーグルコシドトランスポーター

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101861388A CN101861388A (zh) 2010-10-13
CN101861388B true CN101861388B (zh) 2012-01-25

Family

ID=42004879

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008800006496A Expired - Fee Related CN101861388B (zh) 2008-09-09 2008-09-09 杂交的α-葡萄糖苷转运蛋白

Country Status (6)

Country Link
US (1) US8048667B2 (zh)
EP (1) EP2189525B1 (zh)
JP (1) JP4430132B1 (zh)
CN (1) CN101861388B (zh)
DK (1) DK2189525T3 (zh)
WO (1) WO2010029610A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2013014536A (es) * 2011-06-21 2014-09-22 Syngenta Participations Ag Levadura recombinante que expresa agt1.
JPWO2018181774A1 (ja) * 2017-03-31 2020-02-20 株式会社カネカ 新規モノオキシゲナーゼおよびその利用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1629270A (zh) * 2004-08-19 2005-06-22 张澄宇 柠檬啤酒及其加工方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3426633B2 (ja) * 1993-02-26 2003-07-14 サントリー株式会社 ビールの製造法
FI20050870L (fi) * 2005-09-01 2007-03-02 Panimolaboratorio Bryggerilabo Parannettu fermentointimenetelmä hiivageenejä korjaamalla

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1629270A (zh) * 2004-08-19 2005-06-22 张澄宇 柠檬啤酒及其加工方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. Dietvorst et al..Maltotriose utilization in lager yeast strains: MTT1 encodes a maltotriose transporter.《Yeast》.2005,第22卷第775-788. *

Also Published As

Publication number Publication date
US8048667B2 (en) 2011-11-01
EP2189525A4 (en) 2012-03-28
US20100272855A1 (en) 2010-10-28
JP4430132B1 (ja) 2010-03-10
EP2189525B1 (en) 2015-03-18
CN101861388A (zh) 2010-10-13
WO2010029610A1 (ja) 2010-03-18
DK2189525T3 (en) 2015-04-27
JPWO2010029610A1 (ja) 2012-02-02
EP2189525A1 (en) 2010-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101952425B (zh) 葡萄糖诱导性失活及降解抗性转运蛋白基因及其用途
CN101861388B (zh) 杂交的α-葡萄糖苷转运蛋白
JP2009060790A (ja) 酵母に乾燥耐性および／または低温保存耐性を付与する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子及びその用途
CN1932014B (zh) 醇乙酰转移酶基因及其用途
CN101978053B (zh) 葡萄糖诱导性失活及降解抗性转运蛋白基因及其用途
CN101024838A (zh) 编码乙酰乳酸合成酶的基因及其用途
CN101024833B (zh) 编码具有降低连二酮或双乙酰活性的蛋白质的基因及其用途
CN1936006B (zh) 编码细胞壁甘露糖蛋白的基因及其用途
JP4478718B2 (ja) グリコーゲン合成開始因子をコードする遺伝子及びその用途
JP4460004B2 (ja) システインシンターゼ遺伝子及びその用途
CN101024835B (zh) 氨转运蛋白基因及其用途
JPWO2007026956A1 (ja) 低温発酵性及び／又は冷凍耐性を増強させる遺伝子及びその用途
AU2008297026B2 (en) Hybrid alpha-glucoside transporter
AU2008297027B2 (en) Glucose-induced inactivation/degradation-resistant transporter gene and use thereof
CN101253265A (zh) 色氨酸转运蛋白基因及其用途
JP2009528020A (ja) グリコーゲン分岐酵素をコードする遺伝子及びその用途
CN101024834A (zh) 氨转运蛋白基因及其用途
JP2009528021A (ja) グリコーゲン合成酵素をコードする遺伝子及びその用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20120125

Termination date: 20160909

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee