CN101952425B

CN101952425B - 葡萄糖诱导性失活及降解抗性转运蛋白基因及其用途

Info

Publication number: CN101952425B
Application number: CN200880000636.9A
Authority: CN
Inventors: 畠中治代; 大村文彦
Original assignee: Suntory Holdings Ltd
Current assignee: Suntory Holdings Ltd
Priority date: 2008-09-09
Filing date: 2008-09-09
Publication date: 2012-08-15
Anticipated expiration: 2028-09-09
Also published as: AU2008297025B2; EP2202300A4; CN101952425A; JPWO2010029609A1; EP2202300A1; WO2010029609A1; EP2202300B1; US8735092B2; JP4560581B2; AU2008297025A1; DK2202300T3; US20140248689A1; US20110104331A1

Abstract

本发明涉及葡萄糖诱导性失活/降解抗性转运蛋白基因及其用途，特别涉及对低聚糖(麦芽糖、麦芽三糖等)分解性优异的酿造酵母、使用该酵母制造的酒类、其制造方法等。特别是本发明涉及Mal21p、突变Mal31p、突变Mal61p、突变Mtt1p、突变Agt1p等葡萄糖诱导性失活/降解抗性转运蛋白、编码该转运蛋白的基因、利用该转运蛋白的酒类的制造方法等。

Description

葡萄糖诱导性失活及降解抗性转运蛋白基因及其用途

技术领域

本发明涉及葡萄糖诱导性失活/降解抗性转运蛋白基因及其用途，特别涉及对低聚糖(麦芽糖、麦芽三糖等)分解性优异的酿造酵母、使用该酵母制造的酒类、其制造方法等。

背景技术

在制造啤酒、发泡酒、威士忌等麦芽发酵饮料时，将麦芽等进行糖化后的麦汁中所含有的糖主要为葡萄糖、麦芽糖和麦芽三糖这3种。这些来自麦芽的糖的比率，根据糖化方法可具有若干变化，但在不添加酶剂、不添加糖化淀粉的情况下，则无大的改变，可以说大约是1∶5∶1的比例。其中，葡萄糖是单糖，是最适合于酵母的糖，首先被分解。

酵母中有多种基因在葡萄糖存在下转录过程受到抑制，将这种抑制控制称为葡萄糖阻遏。将麦芽糖、麦芽三糖转运到酵母中所必需的多种转运蛋白均受到此种抑制。并且已知这些受到葡萄糖阻遏的基因的产物，即使在翻译后，也会在葡萄糖存在下失活。已知α-葡萄糖苷转运蛋白也属于这一类，在葡萄糖存在下被快速降解。因为麦芽糖、麦芽三糖分解的第一步骤是通过该转运蛋白将其转运到酵母细胞内，所以如果转运蛋白被降解，则这些分解也会停止，这就是将转运蛋白的表达称为分解的限速步骤的理由。

非专利文献1 Brondijk，T.H.，van der Rest，M.E.，Pluim，D.，deVries，Y.de.，Stingl，K.，Poolman，B.，and Konings，W.N.(1998)J BiolChem 273(25)，15352-15357

非专利文献2 Medintz，I.，Wang，X.，Hradek，T.，and Michels，C.A.(2000)Biochemistry 39(15)，4518-4526

非专利文献3 Gadura，N.，and Michels，C.A.(2006)Curr Genet 50(2)，101-114

发明内容

发明要解决的课题

在这种情况下，期望提供包含不易因葡萄糖而导致失活或降解的低聚糖转运蛋白、且使麦芽糖等低聚糖的分解能力提高的酵母。

解决课题的方法

本发明者为了解决上述课题进行了刻苦研究，开发出了用于筛选不易因葡萄糖而导致失活、降解的转运蛋白(以下称为“葡萄糖诱导性失活/降解抗性转运蛋白”)或包含其的酵母的新方法，并且根据该筛选方法，找到了葡萄糖诱导性失活/降解抗性转运蛋白或包含其的酵母，从而完成了本发明。

即，本发明涉及编码葡萄糖诱导性失活/降解抗性转运蛋白的基因、被该基因编码的转运蛋白、该基因的表达受到调控的转化酵母、通过使用该基因的表达受到调控的酵母来制造酒类的方法等。更加具体地说，本发明提供以下所示的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体、导入了该载体的转化酵母、使用该转化酵母的酒类的制造方法等。

(1)多核苷酸，其编码由使序列号4、6、8或10的氨基酸序列发生突变后的突变序列组成、且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白，其中，

使序列号4、6或8的氨基酸序列的第39～52位的氨基酸序列(QGKKSDFDLSHLEY或QGKKSDFDLSHHEY)、或者序列号10的氨基酸序列的第44～57位的氨基酸序列(GKKDSAFELDHLEF)中发生1～5个氨基酸的缺失、取代、插入及/或添加的突变。

(2)如上述1所述的多核苷酸，其编码由使所述第39～52位的氨基酸序列或第44～57位的氨基酸序列以外的序列部分进一步发生1～15个氨基酸的缺失、取代、插入及/或添加的突变后的突变序列组成的转运蛋白。

(3)如上述1或2所述的多核苷酸，其中，使序列号4、6或8的氨基酸序列的第46～51位的氨基酸序列(DLSHLE或DLSHHE)、或者序列号的10的第51～56位的氨基酸序列(ELDHLE)中发生1～5个氨基酸的缺失、取代、插入及/或添加的突变。

(4)多核苷酸，其包含由序列号25、27、29、31、33、35、37、39、41、 43、45、47或49的碱基序列组成的多核苷酸。

(5)多核苷酸，其包含由序列号29、33、35、39、41、43或47的碱基序列组成的多核苷酸。

(6)多核苷酸，其包含编码由序列号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48或50的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。

(7)多核苷酸，其包含编码由序列号30、34、36、40、42、44或48的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。

(8)如上述1～7中任一项所述的多核苷酸，其为DNA。

(9)蛋白质，其为由上述1～8中任一项所述的多核苷酸编码的蛋白质。

(10)载体，其中含有上述1～8中任一项所述的多核苷酸。

(11)转化酵母，向其中导入了上述10所述的载体。

(12)如上述11所述的酿造用酵母，其中，通过导入上述10所述的载体，提高了低聚糖分解能力。

(13)如上述12所述的酿造用酵母，其中，通过增加上述9所述的蛋白质的表达量，提高了低聚糖分解能力。

(14)酒类的制造方法，其中，使用上述11～13中任一项所述的酵母。

(15)如上述14所述的酒类的制造方法，其中，酿造的酒类是麦芽饮料。

(16)如上述14所述的酒类的制造方法，其中，酿造的酒类是葡萄酒。

(17)酒类，其为利用上述14～16中任一项所述的方法制造的酒类。

(18)获取包含具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的酵母的方法，其中，包括：

步骤(1)，将多个被测酵母在含有2-脱氧葡萄糖的低聚糖培养基上培养，将生长繁殖水平作为指标，筛选包含不易因葡萄糖而导致失活或降解的转运蛋白的酵母；

步骤(2)，通过比较步骤(1)中筛选的酵母中包含的转运蛋白的氨基酸序列和因葡萄糖而导致失活或降解的水平已知的转运蛋白的氨基酸序列，鉴定有助于提高因葡萄糖而导致的失活或降解的难度的氨基酸残基或氨基酸序列；

步骤(3)，根据步骤(2)中获得的氨基酸序列信息，设计编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸；以及

步骤(4)，将步骤(3)中设计的多核苷酸导入酵母中，将该酵母在低聚糖培养基上培养，测定该酵母中包含的转运蛋白的葡萄糖诱导性失活/降解抗性、该酵母的低聚糖分解能力、增殖速度及/或在麦汁中的发酵速度。

(18a)上述18所述的方法，其中，上述步骤(1)中多个被测酵母是自然界中存在的酵母，或者是使从自然界中获得的发生突变的酵母。

(18b)上述18所述的方法，其中，上述步骤(4)中的导入步骤(3)设计的多核苷酸的酵母包含：在Mal31p蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型Mal31p蛋白质、在Mal61p蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型Mal61p蛋白质、在Mtt1p蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型Mtt1p蛋白质、或者在Agt1p蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型Agt1p蛋白质。

发明的效果

通过使用本发明涉及的酵母，本发明具有可加快含有麦芽糖、麦芽三糖等低聚糖的酒醪的发酵速度的优点。本发明涉及的转运蛋白基因可导入任何酿造用酵母或实验室酵母中。特别是在大量含有葡萄糖、果糖等单糖的发酵原液中含有本发明涉及的转运蛋白可转运的低聚糖(麦芽糖、麦芽三糖、松二糖(Turanose)、海藻糖(trehalose)等)的情况下，更加有效。

附图说明

图1是表示实验室酵母株在2-脱氧葡萄糖存在下的生长繁殖的不同的图。

图2是表示MAL21基因的碱基序列。

图3是表示Mal21p的氨基酸序列。

图4是表示Mal21p、Mal31p及Mal61p在葡萄糖存在下的降解速度的图。

图5是表示突变型Mal31p在葡萄糖存在下的降解速度的图。

图6是表示Mal21/Mal31/Mal61/Mtt1/Agt1的比对。

图7是表示Mal21/Mal31/Mal61/Mtt1/Agt1的比对(接续图6)。

图8是表示突变型Agt1p在葡萄糖存在下的降解速度的图。

图9是表示具有突变型MAL61基因的菌株在2-脱氧葡萄糖存在下的生长繁殖的不同的图(对降解速度产生大的影响的氨基酸残基的鉴定)。

图10是表示突变型Mal61p在葡萄糖存在下的降解速度的图(对降解速度产生大的影响的氨基酸残基的鉴定)。

图11是表示具有天然型MTT1和突变型MTT1基因的菌株在2-脱氧葡萄糖存在下的生长繁殖的不同的图。

图12是表示高表达MAL21基因的实验室株在麦芽糖培养基上的生长繁殖的图。

图13是表示高表达MAL21基因的下面啤酒酵母株的发泡酒或者发泡酒(富含葡萄糖)麦汁中麦芽糖发酵速度的图。

图14是表示高表达不易因葡萄糖而导致降解的转运蛋白的上面啤酒酵母的麦汁中麦芽糖发酵速度的图。

图15是表示质粒pJHXSB的组成图。

图16是表示质粒pJHIXSB的组成图。

图17是表示质粒pYCGPY的组成图。

图18是表示质粒pUP3GLP的组成图。

图19是表示质粒pYCp49H的组成图。

具体实施方式

本发明者认为，如果能够控制翻译后的转运蛋白因葡萄糖而导致的失活或降解，即使在葡萄糖存在下，麦芽糖及麦芽三糖也可被酵母更高效地分解。基于这种想法进行了刻苦研究，结果从自然界中发现了不易被降解的α-葡萄糖苷转运蛋白Mal21p，并且证明Mal21p的降解速度远远低于其他转运蛋白。

此外，利用UV使转运蛋白基因发生突变，采用独特的方法成功筛选出了具有葡萄糖诱导性失活或降解抗性的转运蛋白。更加具体地说，使容易因葡萄糖而导致失活或降解的α-葡萄糖苷转运蛋白Mal31p和Agt1p发生突变，获取了多种不易被降解的转运蛋白。并且从这些突变型转运蛋白的氨基酸序列及Mal21p的氨基酸序列中，鉴定出有助于提高降解难度的氨基酸残基。其结果是，对于下面啤酒酵母具有的新型α-葡萄糖苷转运蛋白Mtt1p，根据其信息通过进行氨基酸取代，成功地将其改造为不易因葡萄糖而导致失活或降解的转运蛋白。此外，通过高表达发现的或者新获取的不易因葡萄糖而导致失活或降解的转运蛋白，确实成功地提高了在麦芽糖培养基中的增殖速度。且在啤酒酿造中可提高麦芽糖的分解速度。根据这种设想和研究成果，本发明得以完成。

本发明中获得的基因及其核苷酸序列，以及被这些基因编码的转运蛋白及其氨基酸序列如下所示。

序列号1：MAL21的核苷酸序列

序列号2：Mal21p α-葡萄糖苷转运蛋白的氨基酸序列

序列号3：MAL31的核苷酸序列

序列号4：Mal31p α-葡萄糖苷转运蛋白的氨基酸序列

序列号5：MAL61的核苷酸序列

序列号6：Mal61 α-葡萄糖苷转运蛋白的氨基酸序列

序列号7：MTT1的核苷酸序列

序列号8：Mtt1p α-葡萄糖苷转运蛋白的氨基酸序列

序列号9：AGT1的核苷酸序列

序列号10：Agt1p α-葡萄糖苷转运蛋白的氨基酸序列

序列号25：MAL61[D46G]的核苷酸序列

序列号26：Mal61p[Gly46]的氨基酸序列

序列号27：MAL61[L50H]的核苷酸序列

序列号28：Mal61p[His50]的氨基酸序列

序列号29：MAL61[D46G，L50H]的核苷酸序列

序列号30：Mal61p[G1y46，His50]的氨基酸序列

序列号31：AGT1[E56K]的核苷酸序列

序列号32：Agt1p[Lys56]的氨基酸序列

序列号33：AGT1[E56G]的核苷酸序列

序列号34：Agt1p[Gly56]的氨基酸序列

序列号35：MTT1[D46G]的核苷酸序列

序列号36：Mtt1p[Gly46]的氨基酸序列

序列号37：MAL31[E51V]的核苷酸序列

序列号38：Mal31p[Val51]的氨基酸序列

序列号39：MAL31[S48P]的核苷酸序列

序列号40：Mal31p[Pro48]的氨基酸序列

序列号41：MAL31[H49P]的核苷酸序列

序列号42：Mal31p[Pro49]的氨基酸序列

序列号43：MAL31[L50P]的核苷酸序列

序列号44：Mal31p[Pro50]的氨基酸序列

序列号45：MAL31[E51K]的核苷酸序列

序列号46：Mal31p[Lys51]的氨基酸序列

序列号47：MAL31[L50F，E51K]的核苷酸序列

序列号48：Mal31p[Phe50，Lys51]的氨基酸序列

序列号49：MAL31[H49R]的核苷酸序列

序列号50：Mal31p[Arg49]的氨基酸序列

本说明书中使用的“α-葡萄糖苷转运蛋白”是指与α-葡萄糖苷的跨膜转运相关的蛋白质，这种α-葡萄糖苷转运蛋白包括麦芽糖转运蛋白、麦芽三糖转运蛋白等。

1.本发明的多核苷酸

首先，本发明提供的多核苷酸是：编码由使序列号4、6、8或10的氨基酸序列发生突变后的突变序列组成、且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸，其中，使序列号4、6或8的氨基酸序列的第39～52位的氨基酸序列(QGKKSDFDLSHLEY或QGKKSDFDLSHHEY)、或者序列号10的氨基酸序列的第44～57位的氨基酸序列(GKKDSAFELDHLEF)中发生1～5个(优选1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸的缺失、取代、插入及/或添加的突变的多核苷酸(具体为DNA，以下有时也简称为“DNA”)。本发明还包括：由使上述氨基酸序列的第39～52位或第44～57位的氨基酸序列的氨基酸序列以外的序列部分，进一步发生1～15个(优选1～14个、1～13个、1～12个、1～11个、1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸的缺失、取代、插入及/或添加的突变后的突变序列组成的上述转运蛋白。

进一步，本发明的优选蛋白质，包括使上述序列号4、6或8的氨基酸序列的第46～51位的氨基酸序列(DLSHLE或DLSHHE)、或者序列号10的第51～56位的氨基酸序列(ELDHLE)中发生1～5个(优选1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸的缺失、取代、插入及/或添加的突变的上述转运蛋白。本发明的优选转运蛋白，包括由序列号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48或50的氨基酸序列组成的蛋白质，更优选包括由序列号30、34、36、40、42、44或48的氨基酸序列组成的蛋白质。

此外，作为本发明的转运蛋白，可例举，由在序列号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48或50的氨基酸序列中，缺失、取代、插入及/或添加例如1～15个、1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个(1～数个)、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个、1个氨基酸残基后的氨基酸序列组成，并且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。通常情况下，上述氨基酸残基的缺失、取代、插入及/或添加的数量越小越好。

此外，作为这种蛋白质，可例举，具有与序列号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48或50的氨基酸序列具有约90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、99.1％以上、99.2％以上、99.3％以上、99.4％以上、99.5％以上、99.6％以上、99.7％以上、99.8％以上、99.9％以上的同一性的氨基酸序列，并且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。通常情况下，上述同源性数值越大越好。

<葡萄糖诱导性失活/降解抗性的评价>

在本发明中，葡萄糖诱导性失活/降解抗性，可按例如以下方法进行评价。首先，确认表达各转运蛋白的菌株在含有0～2mM 2-脱氧葡萄糖的麦芽糖等的最小必需培养基(无氨基酸酵母氮源(Yeast Nitrogen Base w/o amino acids)6.7g/L、麦芽糖等20g/L，但对于营养缺陷型转化株，含有其营养素)、或者在含有0～8.0mM的2-脱氧葡萄糖的麦芽糖完全合成培养基(SCM)(无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖20g/L、硫酸腺嘌呤20mg/ml、尿嘧啶20mg/ml、L-色氨酸20mg/ml、L-组氨酸盐酸盐20mg/ml、L-精氨酸盐酸盐20mg/ml、L-蛋氨酸20mg/ml、L-酪氨酸30mg/ml、L-亮氨酸30mg/ml、L-异亮氨酸30mg/ml、L-赖氨酸盐酸盐30mg/ml、L-苯丙氨酸50mg/ml、L-谷氨酸100mg/ml、L-天冬氨酸100mg/ml、L-缬氨酸150mg/ml、L-苏氨酸200mg/ml、L-丝氨酸400mg/ml)中的生长繁殖状况，即使产生葡萄糖诱导性失活/降解信号的酵母，也要从中筛选其转运蛋白具有麦芽糖转运活性并发挥作用的菌株。接着，将该菌株接种到YPD(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L)中，30℃振荡培养过夜。将培养液接种到YPM培养基(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、麦芽糖5g/L)中，使OD660＝1.0，30℃振荡培养2.5小时，并收集菌。测取60个OD660单位的细胞，使其悬浮于30ml预先在30℃保温的降解速度测定用培养基[无氨基酸酵母氮源(不含氨)(Yeast Nitrogen Base w/o amino acids and ammonia)1.7g/L、葡萄糖20g/L、环己酰亚胺25μg/L]中，30℃进行温育。在适当的时间(0、10、20、30及40分钟或者0、30、60、90及120分钟)抽取细胞悬浮液样品5ml，快速离心弃除上清液，将细胞用乙醇干冰冷冻。根据常规方法检测冷冻细胞中的转运蛋白，测定蛋白条带的强度，由其减少速度计算半衰期。在本发明中优选转运蛋白，例如与Mal31p比较，具有2倍以上、3倍以上、4倍以上、5倍以上、6倍以上或8倍以上的半衰期。

本发明还包括在严谨条件下与本发明的多核苷酸杂交，并且编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸，该本发明的多核苷酸为：编码由使序列号4、6、8或10的氨基酸序列发生突变后的突变序列组成、且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸，其中，使序列号4、6或8的氨基酸序列的第39～52位的氨基酸序列(QGKKSDFDLSHLEY或QGKKSDFDLSHHEY)、或者序列号10的氨基酸序列的第44～57位的氨基酸序列(GKKDSAFELDHLEF)中发生1～5个(优选1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸的缺失、取代、插入及/或添加的突变的多核苷酸等。

本发明的优选多核苷酸为上述特定的多核苷酸，具体为含有由序列号25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47或49的碱基序列组成的多核苷酸的多核苷酸，更优选多核苷酸为含有由序列号29、33、35、39、41、43或47的碱基序列组成的多核苷酸的多核苷酸。在下述实施例中，已证明在Mal21p、突变Mal31p、突变Mal61p及突变Mtt1p中序列号4、6或8的第46～51位的氨基酸序列与葡萄糖诱导性失活/降解抗性相关，在Agt1中序列号10的第51～56位的氨基酸序列与葡萄糖诱导性失活/降解抗性相关，因此，在进行突变时期望考虑该序列信息。

在此，“在严谨条件下进行杂交的多核苷酸(DNA)”是指，以由序列号25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47或49的碱基序列的互补碱基序列组成的DNA，或者编码序列号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48或50的氨基酸序列的DNA的全部或一部分作为探针，通过使用菌落杂交法、噬菌斑杂交法或Southern杂交法等所得到的DNA。杂交方法，可使用例如Molecular Cloning 3rd Ed.、Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons 1987-1997等中所记载的方法。

本说明书中所述的“严谨条件”，可以为低严谨条件、中严谨条件及高严谨条件中的任一种。“低严谨条件”，例如为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、32℃的条件。此外，“中严谨条件”，例如为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、42℃的条件。“高严谨条件”，例如为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、50℃的条件。在上述条件中，温度越高，越可能高效获得具有高同源性的DNA。但是，影响杂交严谨性的因素有温度、探针浓度、探针长度、离子强度、时间、盐浓度等多种因素，本领域技术人员可通过适当选择这些因素实现同样的严谨性。

此外，杂交中使用市售试剂盒时，可使用例如Alkphos Direct LabellingReagents(Amersham Pharmacia公司制)。此时，根据试剂盒中附带的说明方案，与标记后的探针保温过夜后，在55℃的条件下用含有0.1％(w/v)SDS的1次洗涤缓冲液洗涤膜后，可检出杂交后的DNA。

除上述以外，作为可杂交的DNA，可例举，通过FASTA、BLAST等同源性搜索软件，使用默认参数计算时，与编码序列号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48或50的氨基酸序列的DNA具有约90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、99.1％以上、99.2％以上、99.3％以上、99.4％以上、99.5％以上、99.6％以上、99.7％以上99.8％以上、99.9％以上同一性的DNA。

此外，氨基酸序列、碱基序列的同一性，可根据Karlin及Altschul的BLAST算法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，872264-2268，1990；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：5873，1993)测定。已开发出基于BLAST算法的被称为BLASTN、 BLASTX的程序(Altschul SF，et al：J.Mol.Biol.215：403，1990)。使用BLASTN分析碱基序列时，参数例如为分数(score)＝100、字长(wordlength)＝12。此外，使用BLASTX分析氨基酸序列时，参数例如为分数＝50、字长＝3。使用BLAST和Gapped BLAST程序时，使用各程序的默认参数。

2.本发明的蛋白质

本发明提供由上述多核苷酸中任一个所编码的蛋白质。本发明的优选蛋白质为：由序列号4、6、8或10的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1～1 5个(优选1～14个、1～13个、1～12个、1～11个、1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸后的氨基酸序列组成，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。

作为这种蛋白质，可例举，由序列号4、6、8或10的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加上述数量的氨基酸残基后的氨基酸序列组成，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。

作为这种转运蛋白，优选例举，由序列号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48或50的氨基酸序列组成的蛋白质，更优选例举由序列号30、34、36、40、42、44或48的氨基酸序列组成的蛋白质。此外，作为这种蛋白质，可例举，具有与序列号26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48或50的氨基酸序列有上述同源性的氨基酸序列，且具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白。这种蛋白质，可使用《Molecular Cloning 3》、《Current Protocols in Molecular Biology》、“Nuc.Acids.Res.，10，6487(1982)”、“Proc.Natl.Acad.Sci.USA，79，6409(1982)”、“Gene，34，315(1985)”、“Nuc.Acids.Res.，13，4431(1985)”、“Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，488(1985)”等所述的定点突变引入法而获得。

本发明蛋白质的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1～15个(优选为1～1 4个、1～13个、1～12个、1～11个、1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸残基，是指在同一序列中的任意并且1～15个氨基酸序列的位置上，缺失、取代、插入及/或添加1～15个(优选为1～14个、1～13个、1～12个、1～11个、1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个或1个)氨基酸残基，缺失、取代、插入及添加中的2种以上可同时发生。

下面列举可互相取代的氨基酸残基。同一组中包含的氨基酸残基可互相取代。A组：亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、缬氨酸、正缬氨酸、丙氨酸、2-氨基丁酸、蛋氨酸、o-甲基丝氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、环己丙氨酸；B组：天冬氨酸、谷氨酸、异天冬氨酸、异谷氨酸、2-氨基己二酸、2-氨基辛二酸；C组：天冬酰胺、谷氨酰胺；D组：赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、2，4-二氨基丁酸、2，3-二氨基丙酸；E组：脯氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸；F组：丝氨酸、苏氨酸、高丝氨酸；G组：苯丙氨酸、酪氨酸。

本发明的蛋白质，也可以通过Fmoc法(芴甲氧羰基法)、tBoc法(叔丁氧羰基法)等化学合成法制备。此外，也可以利用Advanced Chem Tech公司、PerkinElmer公司、Pharmacia公司、Protein Technology Installment公司、Synthecell-Vega公司、PerSeptive公司、岛津制作所等制造的肽合成仪进行化学合成。

3.本发明的载体及导入该载体的转化酵母

本发明提供含有上述多核苷酸的载体。本发明的载体，含有上述任一项所述的多核苷酸(DNA)。并且，本发明的载体，通常以包含表达盒的形式构成，该表达盒包含的结构要素为：(x)在酵母细胞内可转录的启动子；(y)以正向或反向与该启动子连接的上述任一项所述的多核苷酸(DNA)；以及(z)与RNA分子的转录终止及多聚腺苷化作用相关，在酵母内发挥作用的信号。此外，要使上述本发明的蛋白质进行高表达，优选将本说明书中所述的多核苷酸(DNA)相对于该启动子正向导入，以促进这些多核苷酸(DNA)的表达。

作为向酵母中导入时使用的载体，可利用多拷贝型(YEp型)、单拷贝型(YCp型)、染色体整合型(YIp型)中的任一种。例如，作为YEp型载体，已知有YEp24(J.R.Broach et al.，Experimental Manipulation of Gene Expression，Academic Press，New York，83，1983)；作为YCp型载体，已知有YCp50(M.D.Rose et al.，gene，60，237，1987)；作为YIp型载体，已知有YIp5(K. Struhl et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USP，76，1035，1979)，且容易获得。此外，也可使用染色体整合型pUP3GLP(Omura，F.et al.，FEMS Microbiol.Lett.，194，207，2001)(图18)、pJHIXSB(图16)、pYCGPY(Kodama，Y.etal.，Appl.Environ.Microbiol.，67，3455，2001)(图17)、pJHXSB(图15)等单拷贝复制型质粒。

用于调控酵母中基因表达的启动子/终止子，只要在酿造用酵母中发挥作用的同时不受醪液中的糖、氨基酸等成分的浓度影响，可以任意组合。例如可利用甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(TDH3)的启动子、3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)的启动子等。这些基因均已被克隆，如在M.F.Tuite et al.，EMBOJ.，1，603(1982)中有详细记载，通过已知的方法可容易地获得。在表达载体中使用的启动子，根据发酵醪液的糖组成、糖浓度、多种转运蛋白的组合等，可有效地改变成具有适当转录活性的启动子。

因酿造用酵母不能利用营养缺陷型标记，所以转化使用的选择性标记可利用遗传霉素(Geneticin)抗性基因(G418r)、铜抗性基因(CUP1)(Marin etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81，337 1984)、浅蓝菌素抗性基因(fas2m，PDR4)(猪腰淳嗣等，生物化学，64，660，1992；Hussain et et al.，gene，101，149，1991)等。将上述构建的载体导入宿主酵母内。宿主酵母，可例举可用于酿造的任何酵母，例如啤酒、葡萄酒、清酒等的酿造用酵母等。具体地，可例举酵母属(Saccharomyces)等的酵母，在本发明中，可使用啤酒酵母如巴斯德酵母(Saccharomyces pastorianus)W34/70等；卡尔斯伯酵母(Saccharomyces carlsbergensis)NCYC453、NCYC456等；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)NBRC1951、NBRC1952、NBRC1953、NBRC1954等。并且还可使用威士忌酵母如酿酒酵母NCYC90等；葡萄酒酵母如协会葡萄酒用1号、葡萄酒用3号、葡萄酒用4号等葡萄酒酵母；清酒酵母如协会酵母清酒用7号、清酒用9号等清酒酵母，但并不限于这些酵母。在本发明中，优选使用啤酒酵母例如巴斯德酵母(Saccharomyces pastorianus)。

制备本说明书中所述的各转运蛋白基因时使用的染色体DNA，并不限定于酿酒酵母ATCC20598、ATCC96955等的菌株，只要是属于具有各基因的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的酵母，可以从任何酵母中制备。

酵母的转化可利用通常使用的公知方法。例如可实施电穿孔法“Meth.Enzym.，194，p182(1990)”、原生质球法(Spheroplast)“Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75 p1929(1978)”、乙酸锂法“J.Bacteriology，153，p163(1983)”、Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75 p1929(1978)、Methods in yeast genetics，2000 Edition：A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual等记载的方法，但并不限于这些方法。

此外，转化菌株，可以通过将宿主的营养缺陷型互补基因(例如URA3)整合到表达质粒中，用不含尿嘧啶的琼脂培养基来筛选。或者可以通过将抗药性基因(例如环己酰亚胺的抗药性基因YAP1或者遗传霉素(Geneticin)的抗性基因G418R)整合到表达质粒中，用含有环己酰亚胺(例如0.3μg/ml)或者遗传霉素(Geneticin)(例如300μg/ml)的琼脂培养基来筛选。

更具体地说，将宿主酵母在标准酵母营养培养基(如YEPD培养基“GeneticEngineering.Vol.1，Plenum Press，New York，117(1979)”等)中培养至OD600nm值为1～6。将该培养酵母离心分离并收集、洗涤，用浓度约为1M～2M的碱性金属离子(优选用锂离子)进行预处理。将上述细胞在约30℃下静置约60分钟后，与待导入的DNA(约1～20μg)同时在约30℃下静置约60分钟。添加聚乙二醇，优选添加约4,000道尔顿的聚乙二醇，使最终浓度约为20％～50％。在约30℃下静置约30分钟后，将上述细胞在约42℃下加热处理约5分钟。优选用标准酵母营养培养基洗涤上述细胞悬浮液，并加入到规定量的新鲜标准酵母营养培养基中，在约30℃下静置约60分钟。然后，将其转移到含有作为选择性标记使用的抗生素等的标准琼脂培养基上，获得转化体。

此外，对于常规克隆技术，可参照《Molecular Cloning 3》、“Methods inYeast Genetics、A laboratory manual(Cold Spring Harbor LaboratoryPress、Cold Spring Harbor，NY)”等。

4.本发明的酒类制造方法以及通过该方法获得的酒类

将上述本发明的载体导入适合酿造作为制造对象的酒类的酵母中，通过使用该酵母，可制造具有特定氨基酸组成的酒类。可作为制造对象的酒类有啤酒、葡萄酒、威士忌、清酒等，但并不限于这些。在制造上述酒类时，除使用本发明获得的酿造酵母代替亲株之外，可利用公知的方法。因此，原料、制造设备、制造管理等可与以往的方法完全相同，不会因制造发酵时间缩短的酒类而增加成本。也就是说，根据本发明能够使用已有的设备进行制造而不增加成本。

5.本发明酵母的获取方法

获取包含本发明的具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的酵母的方法，包括以下步骤(1)～(4)。

[步骤(1)]

在步骤(1)中，首先将多数被测酵母在含有2-脱氧葡萄糖的麦芽糖培养基上培养，将其生长繁殖水平作为指标，筛选包含不易因葡萄糖而导致失活的转运蛋白的酵母。

作为被测酵母，可使用自然界存在的酵母，也可使用对从自然界获取的酵母实施突变后的酵母。作为被测酵母，可例举，例如可用于酿造的任何酵母，例如啤酒、葡萄酒、清酒等的酿造用酵母等。具体可以为酵母属(Saccharomyces)等酵母，在本发明中可以使用啤酒酵母例如巴斯德酵母(Saccharomyces pastorianus)W34/70等，卡尔斯伯酵母(Saccharomycescarlsbergensis)NCYC453、NCYC456等，酿酒酵母NBRC1951、NBRC1952、NBRC1953、NBRC1954等。并且也可以使用威士忌酵母如酿酒酵母NCYC90等；葡萄酒酵母如协会葡萄酒用1号、葡萄酒用3号、葡萄酒用4号等葡萄酒酵母；清酒酵母如协会酵母清酒用7号、清酒用9号等清酒酵母，但并不限于这些酵母。在本发明中，优选使用啤酒酵母如巴斯德酵母(Saccharomycespastorianus)。此外，作为被测酵母，可优选使用下述实施例中使用的酵母。

在本发明中，被测酵母优选使用引入定点突变后的酵母。

定点突变的引入，可使用本领域技术人员公知的方法进行。引入定点突变时没有限制，例如可利用(1)寡核苷酸引导的双琥珀型法(Oligonucleotide-directed Dual Amber法，ODA法)/Takara Biomedicals、(2)LA PCR体外产生突变法/Takara Biomedicals及(3)ExSite^TMPCR-BasedSite-Directed Mutagenesis试剂盒/STRATAGENE。以下对各方法进行简单说明。

(1)寡核苷酸引导的双琥珀型法(ODA法)/Takara Biomedicals

在卡那霉素抗性基因(Km)具有琥珀型突变的质粒(pKF 18k-2/19k-2等)内插入目标基因。获得的DNA通过热变性变为单链DNA后，与修复Km的琥珀型突变的合成寡核苷酸和用于在目标基因中引入目标突变的突变用合成寡核苷酸同时进行杂交。在维持引入的突变的同时使该DNA进行复制，最终仅筛选Km的琥珀型突变被完全修复的DNA。筛选出的DNA中以高准确率在目标基因中引入目标突变。

(2)通过LA PCR体外产生突变的方法/Takara Biomedicals

将期望引入突变的DNA片段插入任意质粒的多克隆位点中。通过引入目标基因的目标突变的引物和多克隆位点附近的引物进行PCR(I)。另一方面，通过在目标基因的突变引入的相反方向使多克隆位点中的一个位点(A)消失的引物，进行可覆盖插入的DNA片段全体的PCR(II)。将PCR(I)及(II)的产物混合，进行包括引入的突变在内的插入DNA片段全体可扩增的PCR。由此获得的DNA片段中具有目标突变的片段，因为克隆位点(A)已消失，所以用限制性内切酶(A)酶切PCR产物后，如果进行利用位点(A)的亚克隆操作，在此被再克隆的片段理论上引入了所有的目标突变。

(3)ExSite^TMPCR-Based Site-Directed Mutagenesis试剂盒/STRATAGENE

将期望引入突变的DNA片段插入适当的质粒内。通过在dam+(有DNA甲基化酶活性)的大肠杆菌内增殖所获得的DNA，使GATC序列中的A成为甲基化状态。在正、反两个方向合成用于引入目标突变的合成寡核苷酸，将这些合成寡核苷酸作为引物利用所述质粒作为模板进行PCR。PCR之后，对于获得的DNA片段，用仅能酶切甲基化DNA的限制性内切酶DpnI进行酶切，仅留下含有目标突变的DNA片段。将其用T4 DNA连接酶连接，形成环状DNA后即可回收在目标基因内引入目标突变的质粒。

在本发明中，为了鉴定与MAL21转运蛋白的葡萄糖诱导性降解抗性相关的残基，或者为了使MTT1转运蛋白具有对于葡萄糖诱导性降解的抗性，将位于MAL61或者MTT1转运蛋白N末端细胞质侧区域的第46位或者第50位氨基酸残基，分别取代为甘氨酸或者组氨酸。即：将编码天冬氨酸的密码子GAT取代为编码甘氨酸的密码子GGT，将编码亮氨酸的密码子CTT取代为编码组氨酸的密码子CAT。可通过利用本领域技术人员公知的方法分析突变操作结束后DNA碱基序列来进行突变引入的确认。

此外，被测酵母也可使用实施突变处理后的酵母。突变处理，例如可使用紫外线照射、放射线照射等物理方法，EMS(甲基磺酸乙酯)、N-甲基-N-亚硝基胍等药剂处理的化学方法等任何方法(如参照大嶋泰治编著的“生物化学实验法39：酵母分子遗传学实验法”，p67-75，学会出版中心等)。

上述被测酵母优选使用包含在MAL31或AGT1蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型MAL31或突变型AGT1蛋白质的被测酵母。

在低聚糖培养基(例如，麦芽糖培养基)上的培养，可利用公知的方法。在这种培养过程中，将该酵母的生长繁殖水平作为指标，筛选包含不易因葡萄糖而导致失活或降解的转运蛋白的酵母。

转化株(以不具有α-葡萄糖苷转运蛋白基因的菌株作为宿主)中导入的转运蛋白基因进行表达并发挥作用，例如，可通过在以0.5％的麦芽糖或者麦芽三糖为唯一碳源、含抗霉素3mg/L的最小必需培养基(无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖或者麦芽三糖5g/L、抗霉素3mg/L)上有无生长繁殖来检验。即使是α-葡萄糖苷转运蛋白不发挥作用的菌株，在以麦芽糖或者麦芽三糖为唯一碳源的最小必需培养基上，也会有略微增殖。但是，如果在以麦芽糖或者麦芽三糖为唯一碳源的最小必需培养基中加入呼吸阻断剂抗霉素，该菌株则无法生长繁殖，所以由此可明确地判断α-葡萄糖苷转运蛋白的功能。例如利用一个铂金勺从YPD平板(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L)上挑取供试菌株，悬浮于1ml的灭菌水中，OD660＝0.2。收集菌，并再次悬浮于1ml的灭菌水中，然后再进行10倍、100倍的稀释。将这些细胞悬浮液的系列稀释液各3μl点样在试验培养基上，30℃培养2-3天。生长繁殖的菌株，表示整合了表达载体、导入的α-葡萄糖苷转运蛋白进行表达并发挥作用的菌株。接着，在含有0-2.0mM 2-脱氧葡萄糖的麦芽糖最小必需培养基(无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖20g/L、2-脱氧葡萄糖0-2.0mM)上、或者在含有0-8.0mM 2-脱氧葡萄糖的麦芽糖完全合成培养基(SCM)(无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖20g/L、硫酸腺嘌呤20mg/ml、尿嘧啶20mg/ml、L-色氨酸20mg/ml、L-组氨酸盐酸盐20mg/ml、L-精氨酸盐酸盐20mg/ml、L-蛋氨酸20mg/ml、L-酪氨酸30mg/ml、L-亮氨酸30mg/ml、L-异亮氨酸30mg/ml、L-赖氨酸盐酸盐30mg/ml、L-苯丙氨酸50mg/ml、L-谷氨酸100mg/ml、L-天冬氨酸100mg/ml、L-缬氨酸150mg/ml、L-苏氨酸200mg/ml、L-丝氨酸400mg/ml)上进行同样点样，筛选在2-脱氧葡萄糖存在下也可生长繁殖的菌株。可以判断，在2-脱氧葡萄糖存在下生长繁殖的菌株中，葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白进行表达并具有活性。

[步骤(2)]

下面，通过将步骤(1)筛选的酵母中包含的转运蛋白的氨基酸序列和因葡萄糖而导致失活的水平已知的转运蛋白的氨基酸序列进行比较，鉴定有助于提高因葡萄糖而导致的失活或降解的难度的氨基酸残基或氨基酸序列。

在该步骤中，根据常规方法从筛选的酵母中分离编码转运蛋白的基因，根据常规方法确定该基因的DNA序列，由DNA序列翻译成氨基酸序列。将所述待鉴定的氨基酸序列和因葡萄糖而导致降解的水平已知的转运蛋白的氨基酸序列进行比较。因葡萄糖而导致降解的水平已知的转运蛋白，例如，有α-葡萄糖苷转运蛋白Mal31p、Mal61p、Mtt1p、Agt1p以及这些转运蛋白的突变型蛋白质等(对于该各种核苷酸序列，例如参照Saccharomyces Genome Database的YBR298C(MAL31)及YGR289C(AGT1)、以及GenBank的X17391(MAL61)及DQ010171(MTT1))。如下述实施例所述，根据该方法对具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性特征的转运蛋白和无该特征的转运蛋白的氨基酸序列进行分析，结果确认Mal21p、Mal31p、Mal61p及Mtt1p中序列号2、4、6或8的第46～51位的氨基酸序列，Agt1中序列号10的第51～56位的氨基酸序列与葡萄糖诱导性失活/降解抗性相关。对于各种氨基酸的位置，参照图6及图7。

[步骤(3)]

在该步骤中，根据步骤(2)中获得的氨基酸序列信息，设计编码具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的多核苷酸。例如如上所述，因为确认Mal21p、Mal31p、Mal61p及Mtt1p中序列号2、4、6或8的第46～51位的氨基酸序列，Agt1中序列号10的第51～56位的氨基酸序列与葡萄糖诱导性失活/降解抗性相关，所以进行突变时考虑这种序列信息，设计例如编码将该部分的氨基酸取代为其它氨基酸后的序列的多核苷酸。此外，如上所述，因为可取代的氨基酸的种类在某种程度上可特定，所以可设计编码将这种可取代的氨基酸取代后的氨基酸序列的多核苷酸序列。作为基础氨基酸序列，可例举，例如从自然界获得的Mal21p(序列号2)、在下述实施例中获得的突变Mal31p(序列号38、40、42、44、46或48)、突变Mal61p(序列号26或28)、突变Mtt1p(序列号34)、突变Agt1p(序列号32、34)等序列。

[步骤4]

在该步骤中，构建含有步骤(3)设计的多核苷酸的表达载体，根据常规方法将其导入酵母中，将该酵母在低聚糖培养基(例如麦芽糖培养基)上进行培养。导入步骤(3)设计的多核苷酸的酵母，优选包含在Mal31p蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型Mal31p蛋白质、在Mal61p蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型Mal61p蛋白质、在Mtt1p蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型Mtt1p蛋白质、或在Agt1p蛋白质的氨基酸序列中引入定点突变后的突变型Agt1p蛋白质。进行培养时，通过测定该酵母中包含的转运蛋白的葡萄糖诱导性失活/降解抗性、该酵母的低聚糖分解能力、增殖速度、在麦汁中的发酵速度等，可评价该酵母的适应性。葡萄糖诱导性失活/降解抗性、低聚糖分解能力、增殖速度、在麦汁中的发酵速度等，可通过下述实施例中使用的方法进行评价。

实施例

以下通过实施例对本发明进行更加详细地说明，但本发明并不限于这些实施例。

[试验方法]

在本实施例中使用的试验项目和试验方法如下所示。只要无特别限制，本实施例中的试验方法以此为标准。

<MAL61，MAL31，MAL21及AGT1基因的获取>

已经克隆了酿酒酵母的MAL61、MAL31、AGT1基因，并报道了其碱基序列。本说明书中使用的MAL31(序列号3)从酵母基因组数据库(SaccharomycesGenome Database)注册号：YBR298C中获得，MAL61(序列号5)从基因库(GenBank)注册号：X17391中获得，以及AGT1(序列号9)从酵母基因组数据库(Saccharomyces Genome Database)注册号：YGR289C中获得。因此，以MAL61、MAL31以及AGT1基因的碱基序列信息为基础，使用从具有所述各种基因的酵母酿酒酵母中制备的染色体DNA作为PCR模板，通过PCR扩增、分离来获取MAL61、MAL31及AGT1基因。

对于MAL21，已知其被III号染色体编码，但并不知道其DNA序列。但是因为考虑到被II号染色体编码的MAL31与被VIII号染色体编码的MAL61基因具有99％以上的同一性，所以预测与MAL21也具有相当高的同一性。

实际上本实施例中的MAL21、MAL31及MAL61基因的全部基因，以仅具有各自的α-葡萄糖苷转运蛋白的酵母的染色体DNA作为模板，使用相同引物(5’AGAGCTCAGCATATAAAGAGACA 3’(序列号11)和5’TGGATCCGTATCTACCTACTGG 3’(序列号12))即可获取。AGT1是使用引物(5’TGAGCTCACATAGAAGAACATCAAA 3’(序列号13)和5’ATGGATCCATATGAAAAATATCATT 3’(序列号14))来获取的。具体来说，MAL31和AGT1是利用酿酒酵母S288C(ATCC204508(Rose，M.D.，Winston，F.and Hieter，P.(1990)：Methods in Yeast Genetics：ALaboratory Course Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY))通过PCR来获取的，MAL61是利用酿酒酵母ATCC96955通过PCR来获取的，MAL21是利用酿酒酵母ATCC20598通过PCR来获取的。

使用Invitrogen公司的TOPO TA克隆试剂盒将获取的DNA片段插入到载体pCR(注册商标)2.1-TOPO后，通过DNA测序确认插入的基因序列。对于MAL31、MAL61、AGT1，确认与数据库中注册的序列(注册号分别为YBR298C、X17391及YGR289C)相同。对于MAL21，独立对10个克隆以上测序，确定了其序列(序列号1)。

此外，所使用引物中起始密码子的上游有XbaI或者SacI位点，终止密码子的下游有BamHI位点，这些位点已整合到表达载体内。通过使用染色体DNA的目标基因的PCR扩增以及其后的分离，包括PCR引物的制备，均可利用本领域技术人员公知的方法进行。

<MTT1基因的获取>

制备下面啤酒酵母Weihenstephan 34/70的基因组DNA，将质粒YCp49H(图19)作为载体，构建DNA文库。将该文库转化到酿酒酵母HH150(CB11Δ agt1::G418R)中，涂布于含有300μg/ml潮霉素和0.5％麦芽三糖的最小必需培养基上。因为CB11菌株是ade1菌株，所以作为腺嘌呤的前体的5-氨基咪唑核苷(5-アミノイミダゾ一ルリボシド)蓄积，并进一步发生聚合从而使菌落呈红色。AGT1被破坏的HH150(CB11Δagt1::G418R)菌株涂布于以麦芽三糖为唯一碳源的培养基上时，生长繁殖非常缓慢，并且菌落为白色。如果在培养基上添加抗霉素，可完全阻止其在以麦芽三糖为唯一碳源的培养基上的生长繁殖。但是，因为抗霉素的毒性高，所以可通过在不使用抗霉素的情况下筛选红色菌落的试验来获取麦芽三糖转运蛋白。在30℃培养3天，将生长繁殖的红色菌落在相同培养基上划线，并确认在相同培养基上的生长繁殖情况。从生长繁殖良好的21个红色菌落中制备质粒，将该质粒转化到大肠杆菌DH5α中，利用大肠杆菌大量制备质粒。再次转化到HH150中，并涂布于相同培养基上。从生长繁殖良好的18个红色菌落中提取质粒。

将插入片段的DNA进行测序，结果在17个中发现认为与MAL61有90％同一性的转运蛋白的相同序列。因为该基因具有与J.Dietvorst et.al.Yeast 2005；22：775-788中报道的MTT1(GenBank注册号DQ010171)完全相同的序列，所以将该基因称为MTT1(核苷酸序列用序列号7表示，氨基酸序列用序列号8表示)。使用引物(5’TCTAGAATTACATCCAAGACTATTAATTAACTATG 3’(序列号15)和5’TGGATCCGTATCTACCTACTGG 3’(序列号16))，通过PCR在起始密码子的上游导入XbaI位点、终止密码子的下游导入BamHI位点，从而将MTT1基因整合到表达载体内。

<表达质粒、文库构建质粒>

在本发明中，使用(1)～(4)的4个表达载体，文库构建用质粒使用(5)。

(1)pJHXSB(图15)

(2)pJHIXSB(图16)

(3)pYCGPY(图17)

(4)pUP3GLP(图18)

(5)YCp49H(图19)

<酵母株>

在本发明中，在获取转运蛋白基因和进行菌株之间比较时使用菌株(1)～ (6)，在利用转运蛋白高表达菌株确认生长繁殖速度、发酵速度时使用菌株(7)～(10)，在获取突变型基因时使用菌株(11)。

(1)酿酒酵母S288C(ATCC204508)(MATalpha SUC2 mal mel gal2 CUP1)

(2)酿酒酵母ATCC96955(MATa MAL61 MAL62 MAL63 mal64 mal11 MAL12mal13 ura3-52 leu2-3 leu2-112 trp1 his)

(3)酿酒酵母ATCC20598(MATa suc MAL2 MEL1 his4 leu2)

(4)酿酒酵母CB11(Berkley Stock Center)(MATa ade1 MAL61 MAL62MAL63 AGT1 MAL12 MAL31 MAL32)

(5)下面啤酒酵母Weihenstephan 34/70

(6)酿酒酵母HH150＝(CB11Δagt1::G418R)(MATa ade1 MAL61 MAL62MAL63Δagt1::G418R MAL12 MAL31 MAL32)

(7) 酿酒酵母HH1001(MATa SUC2 mal mel gal2 CUP1TPI1::TPI1pr-MAL32-G418R ura3)

(8)酿酒酵母Δ152MS(MATa mal61::TRP1 MAL62 MAL63 mal64 mal11 MAL12mal13 leu2-3 leu2-112 his URA3::TDH3p::MAL62)

(9)上面啤酒酵母AH135

(10)下面啤酒酵母Weihenstephan 194

(11)酿酒酵母HH1002(MATa SUC2 mal mel gal2 CUP1 TPI1::TPI1pr-MAL32-G418R ura3 dog1 dog2)

<定点突变的引入>

在本实施例中，将获取的转运蛋白基因导入表达载体pJHIXSB内后，使用引物(表1)，通过ExSite^TMPCR-Based Site-Directed Mutagenesis试剂盒/STRATAGENE引入突变。突变引入方法的详细内容，根据STRATAGENE公司的操作指南。

表1

表1定点突变使用的引物序列

<转运蛋白的2-脱氧葡萄糖抗性的评价>

已知2-脱氧葡萄糖(2-DOG)只能代谢成2-DOG-6-磷酸，所以是不能作为碳源的糖类似物，但产生与葡萄糖同样水平的葡萄糖阻遏或者同样水平的因葡萄糖而导致失活。因此，在这种平板上生长繁殖的菌株，具有不易因葡萄糖而导致失活的α-葡萄糖苷转运蛋白的可能性较高。使用以下2种培养基，通过下述方法来检验对2-DOG的抗性：在[1]含有0-2.0mM 2-脱氧葡萄糖的麦芽糖完全合成培养基(SCM)(无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖20g/L、硫酸腺嘌呤20mg/ml、尿嘧啶20mg/ml、L-色氨酸20mg/ml、L-组氨酸盐酸盐20mg/ml、L-精氨酸盐酸盐20mg/ml、L-蛋氨酸20mg/ml、L-酪氨酸30mg/ml、L-亮氨酸30mg/ml、L-异亮氨酸30mg/ml、L-赖氨酸盐酸盐30mg/ml、L-苯丙氨酸50mg/ml、L-谷氨酸100mg/ml、L-天冬氨酸100mg/ml、L-缬氨酸150mg/ml、L-苏氨酸200mg/ml、L-丝氨酸400mg/ml)，或者[2]含有0-2.0mM 2-脱氧葡萄糖的麦芽糖最小必需培养基(无氨基酸酵母氮源6.7g/L、麦芽糖20g/L)的任一种平板上，分别将各转运蛋白表达株的细胞悬浮液的系列稀释液3μl点样在试验培养基上，30℃培养2～3天。

<转运蛋白在菌体内蓄积量的测定>

转运蛋白的菌体内的蓄积量，可通过例如Western印迹法进行测定。例如从10ml培养液中回收处于对数增殖期的供试菌株，在裂解缓冲液中(8M尿素、5％(w/v)SDS、40mM Tris-HCl(pH6.8)、0.1mM EDTA、1％β-巯基乙醇)通过用玻璃珠搅拌破碎，获得细胞提取液。用SDS-凝胶电泳分离总蛋白质为60μg的样本，并转印到硝基纤维素膜上，随后使用抗Mal61p的兔多克隆抗体进行Western印迹分析。

抗Mal61p的兔多克隆抗体根据以下方法获取。将编码Mal61p N末端区域(Met1-Leu181)的DNA与pET表达载体(Novagen公司)的GST标签的下游连接，并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，将所述转化体的细胞破碎液加入到GST树脂结合柱中，通过洗脱与柱子结合的蛋白质来制备所述抗体。详细内容根据Novagen公司的pET表达系统，GST·Bind^TM亲和树脂(Novagen社)内附加的操作指南。制备的融合蛋白质，通过SDS-PAGE确认纯度后，将其作为抗原来免疫兔从而获得多克隆抗体。对于抗体的有效性，通过下述方法确认，即：将表达了α-葡萄糖苷转运蛋白基因(MAL61，MAL31，MAL21)的酵母株和不具有该基因的宿主株在YPM培养基(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、麦芽糖5.0g/L)上培养，利用上述方法使用相应的细胞破碎液和所述抗体进行Western印迹分析。利用所述抗体，仅在表达α-葡萄糖苷转运蛋白基因的酵母株破碎液中，检测出与68kDa的α-葡萄糖苷转运蛋白(MAL61，MAL31，MAL21)分子量一致的阳性条带。

构建编码在Agt1p的C末端部串联连接2个红细胞凝集素(HA)标签的融合蛋白的基因，利用上述方法获取表达该基因的菌株，来测定Agt1p的菌体内蓄积量。抗体使用抗红细胞凝集素(hematoagglutinin)的小鼠单克隆抗体(Covance，Research，Products，Inc.公司)。

<转运蛋白的降解速度的测定>

将表达各转运蛋白的菌株接种于YPD中，30℃振荡培养过夜。将培养液接种于YPM培养基中，使OD660＝1.0，30℃振荡培养2.5小时，并收集菌。测取60个OD660单位的细胞，使其悬浮于30ml预先在30℃保温的降解速度测定用培养基[无氨基酸酵母氮源(不含氨)1.7g/L、葡萄糖20g/L、环己酰亚胺25μg/L]中，30℃进行温育。在适当的时间(0、10、20、30及40分钟或者0、30、60、90及120分钟)抽取细胞悬浮液样品5ml，快速离心弃除上清液，将细胞用乙醇干冰冷冻。根据上述方法从冷冻细胞中检测转运蛋白，测定蛋白条带的强度，由强度的减少速度计算半衰期。

<突变型Mal61p/突变型Agt1p/突变型Mtt1p/突变型Mal31p>

本发明的突变型Mal61p/突变型Agt1p/突变型Mtt1p/突变型Map31p，分别是表2、3、4及5所示的13个转运蛋白。

表2突变型及天然型α-葡萄糖苷转运蛋白(Mal61p)第39～52位的氨基酸序列和半衰期

表3突变型及天然型α-葡萄糖苷转运蛋白(Agt1p)的第44～57位的氨基酸序列和半衰期

表4突变型及天然型α-葡萄糖苷转运蛋白(Mtt1p)的第39～52位的氨基酸序列

表5 突变型及天然型α-葡萄糖苷转运蛋白(Mal31p)的第39～52位的氨基酸序列和半衰期

在此仅仅表示了含有与各种天然型转运蛋白不同的氨基酸残基的区域。通过用紫外线突变处理、或者用定点突变操作而被取代的氨基酸残基用粗体字表示。本发明的突变型转运蛋白，具有在酵母内即使在葡萄糖存在下稳定性也很高的特征。此外，表中也记载了天然型转运蛋白的序列。在天然型转运蛋白中，仅Mal21p具有在酵母内即使在葡萄糖存在下稳定性也很高的特征。Mal21p中与Mal31p或者Mal61p不同的氨基酸用粗体字表示。

此外，文章中对突变型转运蛋白的蛋白质的记载如下所示。例如Mal61p[Gly46，His50](序列号30)表示第46位的天冬氨酸取代为甘氨酸、第50位的亮氨酸取代为组氨酸后的突变型Mal61p。此外，该突变型转运蛋白的基因用MAL61[D46G，L50H](序列号：29)表示。

<麦芽糖分解能力的评价>

对于组成型表达突变型转运蛋白的酵母对麦芽糖的分解，通过在适合该酵母的条件下对其进行有氧培养或发酵，测定培养基中的麦芽糖量进行评价。糖的测定，可利用本领域技术人员公知的方法，例如通过使用IR检测器的液相色谱法进行测定。在本发明涉及的下述酵母中，麦芽糖的转运能力得到改善。

实施例1：具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的α-葡萄糖苷转运蛋白的筛选

在含有2％麦芽糖的完全合成培养基(SCM)中加入2-脱氧葡萄糖(2-DOG)0mM～2mM来制作平板。已知2-脱氧葡萄糖(2-DOG)只能代谢成2-DOG-6-磷酸，所以是不能作为碳源的糖类似物，但可产生与葡萄糖同样水平的葡萄糖阻遏或者同样水平的因葡萄糖而导致的失活。因此，在该平板上生长繁殖的菌株，具有不易因葡萄糖而导致失活的α-葡萄糖苷转运蛋白的可能性高。对于各种酵母株，用细胞悬浮液点样，30℃进行温育。结果是，具有MAL21的酵母株ATCC20598与其他菌株不同，其在含有1mM的2-DOG的平板上也生长繁殖，因此可预测MAL21是不易因葡萄糖而导致降解的转运蛋白(图1)。于是，根据MAL61的5’上游和3’下游的碱基序列信息设计引物(表1；如上所述)，以ATCC20598的基因组DNA作为模板，通过PCR扩增MAL21基因，克隆入Invitrogen公司的pCR2.1-TOPO内并进行DNA测序。碱基序列(序列号1)如图2所示，氨基酸序列(序列号2)如图3所示。

将该MAL21基因整合到质粒pJHIXSB(图16)的SacI-BamHI位点中。该质粒pJHIMAL21经URA3基因上的EcoRV切割后，通过TPI1启动子作为组成型转录的表达单元整合到酵母HH1001内，形成HH206株。因为HH1001是mal-株X2180-1A的ura3-姊妹株，整合了TPI1p::MAL32(编码麦芽糖酶基因)，所以麦芽糖酶可进行组成型表达。对HH206株在含有0mM～2mM 2-DOG的麦芽糖的最小必需培养基平板上的生长繁殖状况进行检验，结果显示具有MAL61、MAL31及AGT1基因的HH108、HH227及HH228株在1.0mM 2-DOG的平板上均不能生长繁殖，而HH206株在2.0mM 2-DOG的平板上可以生长繁殖。

此外，使用抗Mal61p抗体，通过Western印迹法检验葡萄糖诱导的Mal21p的降解速度，半衰期约为2小时。与此相对应，Mal31p和Mal61p的半衰期约为20分钟，证明与其他转运蛋白相比Mal21p具有相当长的半衰期(图4)。

实施例2：具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的突变型Mal31p和突变型Agt1p的筛选

与实施例1相同，通过PCR由酿酒酵母S288C株获取MAL31和AGT1基因。将这些基因插入到pJHXSB(图15)的TPI1启动子的下游，构建质粒pJHMAL31 和pJHAGT1，并转化到HH1002中。HH1002是HH1001中编码2-脱氧葡萄糖磷酸盐脱磷酸酶的DOG1和DOG2被破坏的菌株。因为2-脱氧葡萄糖磷酸盐脱磷酸酶进行高表达时2-DOG对酵母的毒性消失，所以认为即使转运蛋白没有获得对葡萄糖诱导性失活/降解的抗性，引入这2个基因的突变高表达菌株在含有2-DOG的SCM培养基上也能够进行生长繁殖。因此，在获取突变型转运蛋白基因时，使用缺失DOG1和DOG2的HH1002株。将HH1002(pJHMAL31)和HH1002(pJHAGT1)在添加了8.0mM 2-DOG的SCM平板上以10⁹个细胞/平板进行涂布。

紫外线照射该平板使致死率为80％，并在30℃温育8天，结果显示HH1002(pJHMAL31)生长繁殖了180个菌落，HH1002(pJHAGT1)生长繁殖了92个菌落。再次将这些菌落在添加2.0mM 2-DOG的SCM平板上进行划线，结果HH1002(pJHMAL31)生长繁殖了169个菌落，HH1002(pJHAGT1)生长繁殖了6个菌落。

从其中的数个菌株中提取质粒，转化到大肠杆菌DH5α中，从转化体中制备质粒，并再次转化到HH1002株中。对于该转化体，通过确认其在添加2.0mM2-DOG的SCM平板上的生长繁殖情况，确定突变型转运蛋白具有2-DOG抗性特性。

对42个MAL31突变基因、20个AGT1突变基因进行测序，结果获得7个不同的MAL31突变基因和2个不同的AGT1突变基因。将MAL31突变基因序列翻译成氨基酸序列时，所有MAL31突变基因在编码由第48位丝氨酸到第51位谷氨酸组成的4个氨基酸残基-SHLE区域发生了突变(表5)。在这些突变体中，用Western印迹法对Mal31p[Val51](序列号38)、Mal31p[Pro48](序列号40)、Mal31p[Pro49](序列号42)、Mal31p[Pro50](序列号44)、Mal31p[Lys51](序列号46)、Mal31p[Phe50，Lys51](序列号48)这6个突变型Mal31p的葡萄糖诱导降解速度进行检测时，如图5所示，全部突变型转运蛋白均具有远比野生型长的半衰期。

此外，将AGT1突变基因序列翻译成氨基酸序列时，2个AGT1突变基因在第56位谷氨酸的密码子上发生了突变(表4)。对于在突变型Agt1p Agt1p[Gly56](序列号34)的C末端融合HA-标签后的Agt1-HAp[Gly56]，和在野生型Agtlp上同样融合HA-标签后的Agt1-HAp，通过Western印迹法分析

从Mal31p和Agt1p的氨基酸序列的比对来看，Agt1p的第56位谷氨酸相当于Mal31p的第51位谷氨酸。因此，证明在所述两个转运蛋白中，通过在对应的4个氨基酸残基(Mal31p为SHLE、Agt1p为DHLE)中引入氨基酸取代，可使其具有对于葡萄糖诱导降解的抗性。

此外，在突变株中，进行脯氨酸、赖氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、甘氨酸等的取代，因为侧链、主链中含有大的氨基酸或脯氨酸、甘氨酸等具有破坏α-螺旋倾向性的氨基酸残基等，所以通过在该区域附近改变二级结构，可获得2-脱氧葡萄糖抗性-即不易因葡萄糖诱导而失活或者降解的特性。

实施例3：Mal21p中与葡萄糖诱导失活/降解的抗性相关的氨基酸残基的鉴定

将Mal21p和Mal61p、或者Mal21p和Mal31p的氨基酸序列进行比较，两者共有的不同氨基酸残基是Gly46、His50、Leu167、Leu174、Val175、Thr328这6个。根据实施例2获得的信息，在这些不同的氨基酸残基中制备编码Mal61p的Asp46取代为Gly46、Leu50取代为His50后的转运蛋白的基因MAL61[D46G，L50H](序列号29)，导入质粒pJHIXSB中。

质粒pJHIMAL61[D46G，L50H]经URA3基因上的EcoRV切割后，通过TPI1启动子作为组成型转录的表达单元整合到酵母HH1001中，形成HH207株。检验HH207株在添加2-DOG的SCM平板上的生长繁殖状况，结果显示，与具有Mal21p的HH206株相同，HH207株可以在含有2mM 2-DOG的麦芽糖最小必需培养基上生长繁殖，并具有与Mal21p同等的葡萄糖抗性。

接着，制备编码具有所述2个残基中的各1个残基取代的转运蛋白基因MAL61[D46G](序列号25)和MAL61[L50H](序列号27)，与上述相同，制备其表达株HH210和HH209。对这两个表达株在含有2-DOG的麦芽糖最小必需培养基上的生长繁殖情况进行检验，发现这两个菌株与具有Mal61p的HH108株相比对2-DOG的抗性虽然高，但比HH206株的抗性低，为了赋予Mal61p与Mal21p同等的抗性，必须进行Asp46→Gly46和Leu50→His50两个取代(图9)。

对于Mal61p[Gly46，His50](序列号30)、Mal61p[Gly46](序列号26)和Mal61p[His50](序列号28)这3个突变型转运蛋白，通过Western印迹法检测葡萄糖诱导性降解速度，与根据2-DOG抗性所类推的结果相同，仅Mal61p[Gly46，His50]显示与Mal21p几乎相同的半衰期(图9)。

也就是说，除实施例2表示的Mal31p中从第48位丝氨酸到第51位谷氨酸这4个氨基酸外，第46位的天冬氨酸也是赋予葡萄糖诱导性失活/降解抗性的氨基酸取代的恰当残基。此外，在实施例3中，虽然将第46位的天冬氨酸取代为甘氨酸，但甘氨酸是具有破坏α-螺旋倾向性的氨基酸。

将第50位的亮氨酸取代为组氨酸，组氨酸也是具有破坏α-螺旋倾向性的氨基酸。通过Chou-Fasman进行二级结构预测，预测Mal61p第44-54位氨基酸区域是α-螺旋，进行Asp46→Gly46及Leu50→Hsp50的任一种取代时，预测该区域的结构均由α-螺旋变化为无规卷曲。考虑到实施例2和实施例3的结果，通过导入包含的区域的二级结构发生变化的氨基酸取代，可赋予α-葡萄糖苷转运蛋白和α-葡萄糖苷转运蛋白对于葡萄糖诱导性失活/降解抗性。

实施例4：具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的α-葡萄糖苷转运蛋白MTT1的制备

下面啤酒酵母具有酿酒酵母实验室株所不具有的种类的α-葡萄糖苷转运蛋白基因MTT1，其与α-葡萄糖苷转运蛋白基因MAL61在氨基酸水平上有约90％的同一性(其DNA序列及氨基酸序列分别用序列号7、序列号8表示)。Mal12p/Mal31p/Mal61p/Mtt1p/Agt1p的氨基酸序列的比对图如图6及图7所示。对转运蛋白Mtt1p进行检验，发现Mtt1p具有在低温下活性高、比Agt1p转运麦芽三糖的速度快等优异性质，但与Mal21p不同，Mtt1p对2-DOG的抗性低。

因此，根据实施例2和3对第46-51位的氨基酸进行研究。Mtt1p的第46-51位氨基酸是DLSHHE，与Mal21p比较，仅第46位的残基与Mal21p不同，但与Mal61p相同都是天冬氨酸(第1个字母氨基酸标记的D)。

因此制作将该残基取代为甘氨酸的突变型MTT1[D46G]基因(序列号35)，导入质粒pJHIXSB内。质粒pJHIMTT1[D46G]经URA3基因上的EcoRV切割后，通过TPI1启动子作为进行组成型转化的表达单元整合到酵母HH1001内，形成HH212株。

整合了pJHIMTT1的HH211株在含有0.5mM 2-DOG的麦芽糖最小必需培养基上几乎不生长繁殖，而HH212株在含有1mM 2-DOG的麦芽糖最小必需培养基有略微生长繁殖，这证明其具有比天然型Mtt1p强的葡萄糖抗性(图11)。

实施例5：MAL61高表达株和MAL21株高表达株在麦芽糖培养基上的生长繁殖

将MAL61和MAL21整合到质粒pYCGPY的TDH3启动子的下游SacI-BamHI位点中，分别形成质粒pYCGPYMAL61及pYCGPYMAL21。质粒pYCGPY是具有CEN-ARS的YCp型质粒，具有G418抗性基因、Ap抗性基因等(图17)。将pYCGPYMAL61及pYCGPYMAL21转化入Δ152MS株。Δ152株是通过TRP1标记物破坏ATCC96955具有的MAL61并导入TDH3启动子控制下的MAL62(麦芽糖酶基因)的菌株。将Δ152MS(pYCGPYMAL61)和Δ152MS(pYCGPYMAL21)接种到YPM(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、麦芽糖5.0g/L)中，在30℃振荡培养，使OD660＝，集菌。每1.5小时测定OD660(图12)。与Δ152MS(pYCGPYMAL61)相比，Δ152MS(pYCGPYMAL21)在麦芽糖上生长繁殖较快，在实验室株中证实了对于葡萄糖诱导性降解具有抗性的转运蛋白的效果。

实施例6：高表达MAL21的下面啤酒酵母的发泡酒麦汁发酵试验

将对于葡萄糖诱导性降解具有抗性的转运蛋白MAL21整合到质粒pUP3GLP的XbaI(或者SacI)-BamHI位点中。pUP3GLP如图18所示。pUP3GLP是YIp型质粒，转运蛋白基因通过甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(TDH3p)得到表达。各质粒经URA3中的EcoRV位点切割后，转化到下面啤酒酵母(Weihenstephan 194)中，并涂布于含有0.3μg/ml环己酰亚胺的YPG平板(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、半乳糖20g/L)上。通过PCR来确认目标表达盒已插入到Weihenstephan 194染色体上的URA3基因内。

将Weihenstephan 194(URA3::TDH3p::MAL21)和亲株Weihenstephan 194接种到2种发泡酒麦汁中。发泡酒麦汁是除水之外的原料中麦芽使用比率低于 25％且使用了糖化淀粉、啤酒花等的麦汁。发泡酒用麦汁中的一种的初期浸出物浓度为14.0％，含有组成比为葡萄糖1.2％、麦芽糖6.6％、麦芽三糖2.2％的糖。另一种富含葡萄糖的发泡酒麦汁的初期浸出物浓度为15.6％，含有组成比为葡萄糖4.7％、麦芽糖5.4％、麦芽三糖1.7％的糖。各发泡酒麦汁分别通过在相同量的麦汁(最终浓度、麦芽比率低于25％)中加入糖组成不同的糖化淀粉来制备。在各发泡酒麦汁中加入湿菌体，使其为7.5g/L，在15℃进行发酵，测定发酵中酒醪的麦芽糖浓度。其结果如图13所示。

在任一种发泡酒麦汁中，MAL21高表达株对麦芽糖的分解速度均显著快于亲株Weihenstephan 194。特别是富含葡萄糖的发泡酒麦汁，其效果显著。初期浸出物浓度高是指葡萄糖浓度高，这充分体现了对于葡萄糖诱导性降解具有抗性的转运蛋白的效果。

实施例7：高表达MAL21或AGT1[E56G]的上面啤酒酵母的麦汁发酵试验

将对于葡萄糖诱导性降解具有抗性的转运蛋白MAL21或者AGT1[E56G]整合到质粒pUP3GLP的XbaI(或者SacI)-BamHI位点中。pUP3GLP如图18所示。pUP3GLP是YIp型质粒，转运蛋白基因通过甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(TDH3p)得到表达。各质粒经URA3中的EcoRV位点切割后，转化到上面啤酒酵母AH135中，并涂布于含有0.3μg/ml环己酰亚胺的YPG平板(酵母浸膏10g/L、多聚蛋白胨20g/L、半乳糖20g/L)上。通过PCR来确认目标表达盒已插入到AH135染色体上的URA3基因内。将AH135(URA3::TDH3p::MAL21)和AH135(URA3::TDH3p::AGT1[E56G])加入初期浸出物浓度为13％或者20％的100％麦芽麦汁中，使湿菌体为5g/L，15℃进行发酵，测定发酵中酒醪的麦芽糖浓度，其结果如图14所示。

不论使用哪一种菌株，麦芽糖的分解速度均快于亲株AH135。特别是初期浸出物浓度为20％时，其效果显著。初期浸出物浓度高是指葡萄糖浓度高，可以说体现了对葡萄糖诱导性降解具有抗性的转运蛋白的效果。并且证明对葡萄糖诱导性降解具有抗性的转运蛋白的高表达，不仅对下面啤酒酵母有效，而且对上面啤酒酵母也是有效的。

如上所述，发现原本在几种酵母中存在的Mal21p与其它α-葡萄糖苷转运蛋白不同，不易因葡萄糖而导致降解。此外，鉴定了对于原本因葡萄糖而导致快速降解的α-葡萄糖苷转运蛋白的降解速度产生较大影响的氨基酸区域，通过将该区域的氨基酸残基取代，可赋予转运蛋白对葡萄糖诱导性降解的抗性。此外还证明，使用表达该突变型转运蛋白的酵母(实验室株、酿造用酵母均可)时，可加快酒醪中麦芽糖等该转运蛋白可转运的糖的分解。特别是葡萄糖等单糖浓度高时更加有效。

工业实用性

包含本发明涉及的具有葡萄糖诱导性失活/降解抗性的转运蛋白的酵母，对低聚糖的分解能力提高，并且分解麦芽糖等低聚糖的能力优异。这种酵母可有效用于啤酒、葡萄酒的酿造中。

序列表

<110>三得利株式会社(SUNTORY，LTD)

<120>葡萄糖诱导性失活/降解抗性转运蛋白基因及其用途

<130>PCF090216C

<160>50

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>1842

<212>DNA

<213>酿造酵母

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal21转运蛋白

<400>1

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt ggt ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser

35 40 45

cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser LeuIle Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr AlaIle Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tct tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gaa att gtg ggg cta cag cta acg ggg ccc tcc gtg gat ctt gtt gga 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly Pro Ser Val Asp Leu Val Gly

165 170 175

aat cgt tac aca ttg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg act atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt gta tcc 1248

Phe SerIle Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg att 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>2

<211>614

<212>PRT

<213>酿造酵母

<400>2

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser

35 40 45

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Leu Thr Gly Pro Ser Val Asp Leu Val Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Thr Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys ThrIle Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>3

<211>1842

<212>DNA

<213>酿造酵母

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal31转运蛋白

<400>3

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cat ctt gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa atg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg gcg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr ArgIle Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt ata tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa ata ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>4

<211>614

<212>PRT

<213>酿造酵母

<400>4

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Ash Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

His Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly MetIle Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>5

<211>1842

<212>DNA

<213>酿造酵母

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal61转运蛋白

<400>5

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cat ctt gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa gtg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Val Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala GlyIle

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttg gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Leu Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat cag gcg agg aga tca ctt gaa aga ata tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt gta tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr PheIle GluIle Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga agc acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser Thr

595 600 605

cca tct gtt gtg aac aaa 1842

Pro Ser Val Val Asn Lys

610

<210>6

<211>614

<212>PRT

<213>酿造酵母

<400>6

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

His Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Val Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Leu Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser Thr

595 600 605

Pro Ser Val Val Asn Lys

610

<210>7

<211>1845

<212>DNA

<213>酿造酵母

<220>

<221>CD8

<222>(1)..(1845)

<223>Mtt1转运蛋白

<400>7

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta aca cca aac gat aat aat gaa 192

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Thr Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga tct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr AlaIle Leu Gly Ser Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gct tcc tgg caa att ggc ttg tcc tta tgc gtt acg gct ggt 480

Ile Ser Ala Ser Trp Gln Ile Gly Leu Ser Leu Cys Val Thr Ala Gly

145 150 155 160

gaa att gta ggt ttg caa atg act ggg cct ttt gta gat tat atg ggt 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Phe Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aat cgc tat aca ttg att ttg gca ttg att ctt ctt gct gca ttc acc 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Leu Ala Leu Ile Leu Leu Ala Ala Phe Thr

180 185 190

ttt att ctg tat ttt tgc aag ggt ttg ggt atg att gct gtg gga caa 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Gly Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gta ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Val Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct atg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Met Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aac tcc caa aat aag tac cct aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Pro Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg cct gct cct ctt gca ata ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Ala Ile Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gca agg aga tca ctt gaa aga aca ttg agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aag gaa tta ctg gta agt atg gag cta gat aat atc aaa gta 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Asn Ile Lys Val

325 330 335

acc att gaa aag gaa aaa aag ctg tca gac tca gaa ggt tcc tat tgg 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Lys Lys Leu Ser Asp Ser Glu Gly Ser Tyr Trp

340 345 350

gat tgt ctg aag gac agt gtt aat agg aga aga acg aga ata gct tgt 1104

Asp Cys Leu Lys Asp Ser Val Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys

355 360 365

tta tgt tgg gtc ggt caa acc acc tgt ggt aca tca tta att ggt aat 1152

Leu Cys Trp Val Gly Gln Thr Thr Cys Gly Thr Ser Leu Ile Gly Asn

370 375 380

tca act tac ttt tat gaa aaa gct gga gtt ggt act gat acg gct ttc 1200

Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Gly Thr Asp Thr Ala Phe

385 390 395 400

act ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gcc gca aca ttt ctt 1248

Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Leu

405 410 415

tct tgg tgg gct tca aaa tat ttt ggt agg ttt gac ctt tac gca ttt 1296

Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Phe Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe

420 425 430

gga ttg gct ata caa aca gtt tca ttg ttt atc ata gga ggt ttg gga 1344

Gly Leu Ala Ile Gln Thr Val Ser Leu Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly

435 440 445

tgc tcc gac tcg cat ggc gct gaa atg gga agt ggt tct ctt tta atg 1392

Cys Ser Asp Ser His Gly Ala Glu Met Gly Ser Gly Ser Leu Leu Met

450 455 460

gtt ctt tcc ttc ttc tac aat ttg ggt att gct ccc gtt gtg ttt tgc 1440

Val Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys

465 470 475 480

tta gtg tcc gaa ata cca tcc tca agg cta aga act aaa tcg att att 1488

Leu Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Ser Ile Ile

485 490 495

ctg gct cgt aac gca tat aat atg gca tct att gta act act gtt ttg 1536

Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Met Ala SerIle Val Thr Thr Val Leu

500 505 510

atc atg tac caa ttg aac tca gaa aaa tgg aac tgg ggt gcc aag tcg 1584

Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser

515 520 525

ggc ttt ttc tgg gga ggg tta tgt ttt gcc act cta gtt tgg gcc gta 1632

Gly Phe Phe Trp Gly Gly Leu Cys Phe Ala Thr Leu Val Trp Ala Val

530 535 540

att gac cta cca gaa act gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa 1680

Ile Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu

545 550 555 560

ttg ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc 1728

Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val

565 570 575

gac cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa 1776

Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys

580 585 590

gat ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga agc 1824

Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser

595 600 605

acc cca tct gtt gtg aac aaa 1845

Thr Pro Ser Val Val Asn Lys

610 615

<210>8

<211>615

<212>PRT

<213>酿造酵母

<400>8

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Thr Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ser Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Ala Ser Trp Gln Ile Gly Leu Ser Leu Cys Val Thr Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Phe Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Leu Ala Leu Ile Leu Leu Ala Ala Phe Thr

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Gly Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Val Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Met Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Pro Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Ala Ile Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Asn Ile Lys Val

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Lys Lys Leu Ser Asp Ser Glu Gly Ser Tyr Trp

340 345 350

Asp Cys Leu Lys Asp Ser Val Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys

355 360 365

Leu Cys Trp Val Gly Gln Thr Thr Cys Gly Thr Ser Leu Ile Gly Asn

370 375 380

Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Gly Thr Asp Thr Ala Phe

385 390 395 400

Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Leu

405 410 415

Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Phe Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe

420 425 430

Gly Leu Ala Ile Gln Thr Val Ser Leu Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly

435 440 445

Cys Ser Asp Ser His Gly Ala Glu Met Gly Ser Gly Ser Leu Leu Met

450 455 460

Val Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys

465 470 475 480

Leu Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Ser Ile Ile

485 490 495

Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Met Ala Ser Ile Val Thr Thr Val Leu

500 505 510

Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser

515 520 525

Gly Phe Phe Trp Gly Gly Leu Cys Phe Ala Thr Leu Val Trp Ala Val

530 535 540

Ile Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu

545 550 555 560

Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val

565 570 575

Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys

580 585 590

Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser

595 600 605

Thr Pro Ser Val Val Asn Lys

610 615

<210>9

<211>1848

<212>DNA

<213>酿造酵母

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1848)

<223>Agtl转运蛋白

<400>9

atg aaa aat atc att tca ttg gta agc aag aag aag gct gcc tca aaa 48

Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys

1 5 10 15

aat gag gat aaa aac att tct gag tct tca aga gat att gta aac caa 96

Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln

20 25 30

cag gag gtt tte aat act gaa gat ttt gaa gaa ggg aaa aag gat agt 144

Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser

35 40 45

gcc ttt gag cta gac cac tta gag ttc acc acc aat tca gcc cag tta 192

Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu

50 55 60

gga gat tct gac gaa gat aac gag aat gtg att aat gag atg aac gct 240

Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala

65 70 75 80

act gat gat gca aat gaa gct aac agc gag gaa aaa agc atg act ttg 288

Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu

85 90 95

aag cag gcg ttg cta aaa tat cca aaa gca gcc ctg tgg tcc ata tta 336

Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu

100 105 110

gtg tct act acc ctg gtt atg gaa ggt tat gat acc gca cta ctg agc 384

Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser

115 120 125

gca ctg tat gcc ctg cca gtt ttt cag aga aaa ttc ggt act ttg aac 432

Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn

130 135 140

ggg gag ggt tct tac gaa att act tcc caa tgg cag att ggt tta aac 480

Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp GlnIle Gly Leu Asn

145 150 155 160

atg tgt gtc ctt tgt ggt gag atg att ggt ttg caa atc acg act tat 528

Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr

165 170 175

atg gtt gaa ttt atg ggg aat cgt tat acg atg att aca gca ctt ggt 576

Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly

180 185 190

ttg tta act gct tat atc ttt atc ctc tac tac tgt aaa agt tta gct 624

Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala

195 200 205

atg att gct gtg gga caa att ctc tca gct ata cca tgg ggt tgt ttc 672

Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe

210 215 220

caa agt ttg gct gtt act tat gct tcg gaa gtt tgc cct tta gca tta 720

Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu

225 230 235 240

aga tat tac atg acc agt tac tcc aac att tgt tgg tta ttt ggt caa 768

Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln

245 250 255

atc ttc gcc tct ggt att atg aaa aac tca caa gag aat tta ggg aac 816

Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn

260 265 270

tcc gac ttg ggc tat aaa ttg cca ttt gct tta caa tgg att tgg cct 864

Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro

275 280 285

gct cct tta atg atc ggt atc ttt ttc gct cct gag tcg ccc tgg tgg 912

Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp

290 295 300

ttg gtg aga aag gat agg gtc gct gag gca aga aaa tct tta agc aga 960

Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg

305 310 315 320

att ttg agt ggt aaa ggc gcc gag aag gac att caa gtt gat ctt act 1008

Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr

325 330 335

tta aag cag att gaa ttg act att gaa aaa gaa aga ctt tta gca tct 1056

Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser

340 345 350

aaa tca gga tca ttc ttt aat tgt ttc aag gga gtt aat gga aga aga 1104

Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg

355 360 365

acg aga ctt gca tgt tta act tgg gta gct caa aat agt agc ggt gcc 1152

Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala

370 375 380

gtt tta ctt ggt tac tcg aca tat ttt ttt gaa aga gca ggt atg gcc 1200

Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala

385 390 395 400

acc gac aag gcg ttt act ttt tct cta att cag tac tgt ctt ggg tta 1248

Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu

405 410 415

gcg ggt aca ctt tgc tcc tgg gta ata tct ggc cgt gtt ggt aga tgg 1296

Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp

420 425 430

aca ata ctg acc tat ggt ctt gca ttt caa atg gtc tgc tta ttt att 1344

Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile

435 440 445

att ggt gga atg ggt ttt ggt tct gga agc agc gct agt aat ggt gcc 1392

Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala

450 455 460

ggt ggt tta ttg ctg gct tta tca ttc ttt tac aat gct ggt atc ggt 1440

Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly

465 470 475 480

gca gtt gtt tac tgt atc gtt gct gaa att cca tca gcg gag ttg aga 1488

Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg

485 490 495

act aag act ata gtg ctg gcc cgt att tgc tac aat ctc atg gcc gtt 1536

Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val

500 505 510

att aac gct ata tta acg ccc tat atg cta aac gtg agc gat tgg aac 1584

Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn

515 520 525

tgg ggt gcc aaa act ggt cta tac tgg ggt ggt ttc aca gca gtc act 1632

Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr

530 535 540

tta gct tgg gtc atc atc gat ctg cct gag aca act ggt aga acc ttc 1680

Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe

545 550 555 560

agt gaa att aat gaa ctt ttc aac caa ggg gtt cot gcc aga aaa ttt 1728

Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe

565 570 575

gca tct act gtg gtt gat cca ttc gga aag gga aaa act caa cat gat 1776

Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp

580 585 590

tcg cta gct gat gag agt ate agt cag tcc tca agc ata aaa cag cga 1824

Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg

595 600 605

gaa tta aat gca gct gat aaa tgt 1848

Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys

610 615

<210>10

<211>616

<212>PRT

<213>酿造酵母

<400>10

Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys

1 5 10 15

Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln

20 25 30

Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser

35 40 45

Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu

50 55 60

Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala

65 70 75 80

Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu

85 90 95

Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu

100 105 110

Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser

115 120 125

Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn

130 135 140

Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn

145 150 155 160

Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr

165 170 175

Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly

180 185 190

Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala

195 200 205

Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe

210 215 220

Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu

225 230 235 240

Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln

245 250 255

Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn

260 265 270

Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro

275 280 285

Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp

290 295 300

Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg

305 310 315 320

Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr

325 330 335

Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser

340 345 350

Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg

355 360 365

Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala

370 375 380

Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala

385 390 395 400

Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu

405 410 415

Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp

420 425 430

Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile

435 440 445

Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala

450 455 460

Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly

465 470 475 480

Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg

485 490 495

Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val

500 505 510

Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn

515 520 525

Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr

530 535 540

Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe

545 550 555 560

Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe

565 570 575

Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp

580 585 590

Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg

595 600 605

Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys

610 615

<210>11

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>11

agagctcagc atataaagag aca 23

<210>12

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物(Primer)

<400>12

tggatccgta tctacctact gg 22

<210>13

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>13

tgagctcaca tagaagaaca tcaaa 25

<210>14

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>14

atggatccat atgaaaaata tcatt 25

<210>15

<211>35

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物(Primer)

<400>15

tctagaatta catccaagac tattaattaa ctatg 35

<210>16

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>16

tggatccgta tctacctact gg 22

<210>17

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>17

gtctttccca tcttgagtac ggtcc 25

<210>18

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>18

caaaatcact tttcttacct tgctcct 27

<210>19

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>19

atgagtacgg tccaggttca ctaa 24

<210>20

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>20

gatgggaaag atcaaaatca cttttc 26

<210>21

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>21

gtctttccca tcatgagtac ggtcca 26

<210>22

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>22

caaaatcact tttcttacct tgctcct 27

<210>23

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>23

gtcttt ccca tcatgagtac ggtccc 26

<210>24

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>24

caaaatcact tttcttacct tgctcct 27

<210>25

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL61[D46G]

<220>

<221>CD8

<222>(1)..(1842)

<223>Mal61p[Gly46]

<400>25

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt ggt ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser

35 40 45

cat ctt gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa gtg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Val Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttg gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Leu Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat cag gcg agg aga tca ctt gaa aga ata tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt gta tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga agc acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser Thr

595 600 605

cca tct gtt gtg aac aaa 1842

Pro Ser Val Val Asn Lys

610

<210>26

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>26

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser

35 40 45

His Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Val Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Leu Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser Thr

595 600 605

Pro Ser Val Val Asn Lys

610

<210>27

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL61[L50H]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal61p[His50]

<400>27

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa gtg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Val Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttg gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Leu Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat cag gcg agg aga tca ctt gaa aga ata tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp LysIle Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt gta tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu GlyIle Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga agc acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser Thr

595 600 605

cca tct gtt gtg aac aaa 1842

Pro Ser Val Val Asn Lys

610

<210>28

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>28

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Val Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Leu Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Set Thr

595 600 605

Pro Ser Val Val Asn Lys

610

<210>29

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL61[D466，L50H]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal61p[Gly46，His50]

<400>29

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt ggt ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser

35 40 45

cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 7 0 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa gtg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Val Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttg gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Leu Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat cag gcg agg aga tca ctt gaa aga ata tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt gta tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa atg ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga agc acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser Thr

595 600 605

cca tct gtt gtg aac aaa 1842

Pro Ser Val Val Asn Lys

610

<210>30

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>30

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser

35 40 45

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Val Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala GlyIle

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Leu Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Val Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Met Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser Thr

595 600 605

Pro Ser Val Val Asn Lys

610

<210>31

<211>1848

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>AGT1[E56K]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1848)

<223>Agt1p[Lys56]

<400>31

atg aaa aat atc att tca ttg gta agc aag aag aag gct gcc tca aaa 48

Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys

1 5 10 15

aat gag gat aaa aac att tct gag tct tca aga gat att gta aac caa 96

Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln

20 25 30

cag gag gtt ttc aat act gaa gat ttt gaa gaa ggg aaa aag gat agt 144

Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser

35 40 45

gcc ttt gag cta gac cac tta aag ttc acc acc aat tca gcc cag tta 192

Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Lys Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu

50 55 60

gga gat tct gac gaa gat aac gag aat gtg att aat gag atg aac gct 240

Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala

65 70 75 80

act gat gat gca aat gaa gct aac agc gag gaa aaa agc atg act ttg 288

Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu

85 90 95

aag cag gcg ttg cta aaa tat cca aaa gca gcc ctg tgg tcc ata tta 336

Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu

100 105 110

gtg tct act acc ctg gtt atg gaa ggt tat gat acc gca cta ctg agc 384

Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser

115 120 125

gca ctg tat gcc ctg cca gtt ttt cag aga aaa ttc ggt act ttg aac 432

Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn

130 135 140

ggg gag ggt tct tac gaa att act tcc caa tgg cag att ggt tta aac 480

Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn

145 150 155 160

atg tgt gtc ctt tgt ggt gag atg att ggt ttg caa atc acg act tat 528

Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr

165 170 175

atg gtt gaa ttt atg ggg aat cgt tat acg atg att aca gca ctt ggt 576

Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly

180 185 190

ttg tta act gct tat atc ttt atc ctc tac tac tgt aaa agt tta gct 624

Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala

195 200 205

atg att gct gtg gga caa att ctc tca gct ata cca tgg ggt tgt ttc 672

Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe

210 215 220

caa agt ttg gct gtt act tat gct tcg gaa gtt tgc cct tta gca tta 720

Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu

225 230 235 240

aga tat tac atg acc agt tac tcc aac att tgt tgg tta ttt ggt caa 768

Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln

245 250 255

atc ttc gcc tct ggt att atg aaa aac tca caa gag aat tta ggg aac 816

Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn

260 265 270

tcc gac ttg ggc tat aaa ttg cca ttt gct tta caa tgg att tgg cct 864

Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro

275 280 285

gct cct tta atg atc ggt atc ttt ttc gct cct gag tcg ccc tgg tgg 912

Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp

290 295 300

ttg gtg aga aag gat agg gtc gct gag gca aga aaa tct tta agc aga 960

Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg

305 310 315 320

att ttg agt ggt aaa ggc gcc gag aag gac att caa gtt gat ctt act 1008

Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr

325 330 335

tta aag cag att gaa ttg act att gaa aaa gaa aga ctt tta gca tct 1056

Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser

340 345 350

aaa tca gga tca ttc ttt aat tgt ttc aag gga gtt aat gga aga aga 1104

Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg

355 360 365

acg aga ctt gca tgt tta act tgg gta gct caa aat agt agc ggt gcc 1152

Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala

370 375 380

gtt tta ctt ggt tac tcg aca tat ttt ttt gaa aga gca ggt atg gcc 1200

Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala

385 390 395 400

acc gac aag gcg ttt act ttt tct cta att cag tac tgt ctt ggg tta 1248

Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu

405 410 415

gcg ggt aca ctt tgc tcc tgg gta ata tct ggc cgt gtt ggt aga tgg 1296

Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp

420 425 430

aca ata ctg acc tat ggt ctt gca ttt caa atg gtc tgc tta ttt att 1344

Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile

435 440 445

att ggt gga atg ggt ttt ggt tct gga agc agc gct agt aat ggt gcc 1392

Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala

450 455 460

ggt ggt tta ttg ctg gct tta tca ttc ttt tac aat gct ggt atc ggt 1440

Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala GlyIle Gly

465 470 475 480

gca gtt gtt tac tgt atc gtt gct gaa att cca tca gcg gag ttg aga 1488

Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg

485 490 495

act aag act ata gtg ctg gcc cgt att tgc tac aat ctc atg gcc gtt 1536

Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val

500 505 510

att aac gct ata tta acg ccc tat atg cta aac gtg agc gat tgg aac 1584

Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn

515 520 525

tgg ggt gcc aaa act ggt cta tac tgg ggt ggt ttc aca gca gtc act 1632

Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr

530 535 540

tta gct tgg gtc atc atc gat ctg cct gag aca act ggt aga acc ttc 1680

Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe

545 550 555 560

agt gaa att aat gaa ctt ttc aac caa ggg gtt cct gcc aga aaa ttt 1728

Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe

565 570 575

gca tct act gtg gtt gat cca ttc gga aag gga aaa act caa cat gat 1776

Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp

580 585 590

tcg cta gct gat gag agt atc agt cag tcc tca agc ata aaa cag cga 1824

Ser Leu Ala Asp Glu SerIle Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg

595 600 605

gaa tta aat gca gct gat aaa tgt 1848

Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys

610 615

<210>32

<211>616

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>32

Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys

1 5 10 15

Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln

20 25 30

Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser

35 40 45

Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Lys Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu

50 55 60

Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala

65 70 75 80

Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu

85 90 95

Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu

100 105 110

Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser

115 120 125

Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn

130 135 140

Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn

145 150 155 160

Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr

165 170 175

Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly

180 185 190

Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala

195 200 205

Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe

210 215 220

Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu

225 230 235 240

Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln

245 250 255

Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn

260 265 270

Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro

275 280 285

Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp

290 295 300

Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg

305 310 315 320

Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr

325 330 335

Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser

340 345 350

Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg

355 360 365

Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala

370 375 380

Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala

385 390 395 400

Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu

405 410 415

Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp

420 425 430

Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile

435 440 445

Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala

450 455 460

Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly

465 470 475 480

Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg

485 490 495

Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val

500 505 510

Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn

515 520 525

Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr

530 535 540

Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe

545 550 555 560

Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe

565 570 575

Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp

580 585 590

Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg

595 600 605

Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys

610 615

<210>33

<211>1848

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>AGT1[E56G]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1848)

<223>Agt1p[Gly56]

<400>33

atg aaa aat atc att tca ttg gta agc aag aag aag gct gcc tca aaa 48

Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys

1 5 10 15

aat gag gat aaa aac att tct gag tct tca aga gat att gta aac caa 96

Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln

20 25 30

cag gag gtt ttc aat act gaa gat ttt gaa gaa ggg aaa aag gat agt 144

Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser

35 40 45

gcc ttt gag cta gac cac tta ggg ttc acc acc aat tca gcc cag tta 192

Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Gly Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu

50 55 60

gga gat tct gac gaa gat aac gag aat gtg att aat gag atg aac gct 240

Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala

65 70 75 80

act gat gat gca aat gaa gct aac agc gag gaa aaa agc atg act ttg 288

Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu

85 90 95

aag cag gcg ttg cta aaa tat cca aaa gca gcc ctg tgg tcc ata tta 336

Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu

100 105 110

gtg tct act acc ctg gtt atg gaa ggt tat gat acc gca cta ctg agc 384

Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser

115 120 125

gca ctg tat gcc ctg cca gtt ttt cag aga aaa ttc ggt act ttg aac 432

Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn

130 135 140

ggg gag ggt tct tac gaa att act tcc caa tgg cag att ggt tta aac 480

Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn

145 150 155 160

atg tgt gtc ctt tgt ggt gag atg att ggt ttg caa atc acg act tat 528

Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr

165 170 175

atg gtt gaa ttt atg ggg aat cgt tat acg atg att aca gca ctt ggt 576

Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly

180 185 190

ttg tta act gct tat atc ttt atc ctc tac tac tgt aaa agt tta gct 624

Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala

195 200 205

atg att gct gtg gga caa att ctc tca gct ata cca tgg ggt tgt ttc 672

Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe

210 215 220

caa agt ttg gct gtt act tat gct tcg gaa gtt tgc cct tta gca tta 720

Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu

225 230 235 240

aga tat tac atg acc agt tac tcc aac att tgt tgg tta ttt ggt caa 768

Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln

245 250 255

atc ttc gcc tct ggt att atg aaa aac tca caa gag aat tta ggg aac 816

Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn

260 265 270

tcc gac ttg ggc tat aaa ttg cca ttt gct tta caa tgg att tgg cct 864

Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro

275 280 285

gct cct tta atg atc ggt atc ttt ttc gct cct gag tcg ccc tgg tgg 912

Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp

290 295 300

ttg gtg aga aag gat agg gtc gct gag gca aga aaa tct tta agc aga 960

Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg

305 310 315 320

att ttg agt ggt aaa ggc gcc gag aag gac att caa gtt gat ctt act 1008

Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr

325 330 335

tta aag cag att gaa ttg act att gaa aaa gaa aga ctt tta gca tct 1056

Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser

340 345 350

aaa tca gga tca ttc ttt aat tgt ttc aag gga gtt aat gga aga aga 1104

Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg

355 360 365

acg aga ctt gca tgt tta act tgg gta gct caa aat agt agc ggt gcc 1152

Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala

370 375 380

gtt tta ctt ggt tac tcg aca tat ttt ttt gaa aga gca ggt atg gcc 1200

Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala

385 390 395 400

acc gac aag gcg ttt act ttt tct cta att cag tac tgt ctt ggg tta 1248

Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser LeuIle Gln Tyr Cys Leu Gly Leu

405 410 415

gcg ggt aca ctt tgc tcc tgg gta ata tct ggc cgt gtt ggt aga tgg 1296

Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp

420 425 430

aca ata ctg acc tat ggt ctt gca ttt caa atg gtc tgc tta ttt att 1344

Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile

435 440 445

att ggt gga atg ggt ttt ggt tct gga agc agc gct agt aat ggt gcc 1392

Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala

450 455 460

ggt ggt tta ttg ctg gct tta tca ttc ttt tac aat gct ggt atc ggt 1440

Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly

465 470 475 480

gca gtt gtt tac tgt atc gtt gct gaa att cca tca gcg gag ttg aga 1488

Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg

485 490 495

act aag act ata gtg ctg gcc cgt att tgc tac aat ctc atg gcc gtt 1536

Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala ArgIle Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val

500 505 510

att aac gct ata tta acg ccc tat atg cta aac gtg agc gat tgg aac 1584

Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn

515 520 525

tgg ggt gcc aaa act ggt cta tac tgg ggt ggt ttc aca gca gtc act 1632

Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr

530 535 540

tta gct tgg gtc atc atc gat ctg cct gag aca act ggt aga acc ttc 1680

Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe

545 550 555 560

agt gaa att aat gaa ctt ttc aac caa ggg gtt cct gcc aga aaa ttt 1728

Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe

565 570 575

gca tct act gtg gtt gat cca ttc gga aag gga aaa act caa cat gat 1776

Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp

580 585 590

tcg cta gct gat gag agt atc agt cag tcc tca agc ata aaa cag cga 1824

Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg

595 600 605

gaa tta aat gca gct gat aaa tgt 1848

Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys

610 615

<210>34

<211>616

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>34

Met Lys Asn Ile Ile Ser Leu Val Ser Lys Lys Lys Ala Ala Ser Lys

1 5 10 15

Asn Glu Asp Lys Asn Ile Ser Glu Ser Ser Arg Asp Ile Val Asn Gln

20 25 30

Gln Glu Val Phe Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Ser

35 40 45

Ala Phe Glu Leu Asp His Leu Gly Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu

50 55 60

Gly Asp Ser Asp Glu Asp Asn Glu Asn Val Ile Asn Glu Met Asn Ala

65 70 75 80

Thr Asp Asp Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr Leu

85 90 95

Lys Gln Ala Leu Leu Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile Leu

100 105 110

Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu Ser

115 120 125

Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Leu Asn

130 135 140

Gly Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu Asn

145 150 155 160

Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Ile Thr Thr Tyr

165 170 175

Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu Gly

180 185 190

Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu Ala

195 200 205

Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Ile Pro Trp Gly Cys Phe

210 215 220

Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala Leu

225 230 235 240

Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly Gln

245 250 255

Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly Asn

260 265 270

Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro

275 280 285

Ala Pro Leu Met Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp

290 295 300

Leu Val Arg Lys Asp Arg Val Ala Glu Ala Arg Lys Ser Leu Ser Arg

305 310 315 320

Ile Leu Ser Gly Lys Gly Ala Glu Lys Asp Ile Gln Val Asp Leu Thr

325 330 335

Leu Lys Gln Ile Glu Leu Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala Ser

340 345 350

Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asn Gly Arg Arg

355 360 365

Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly Ala

370 375 380

Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met Ala

385 390 395 400

Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Leu

405 410 415

Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg Trp

420 425 430

Thr Ile Leu Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe Ile

435 440 445

Ile Gly Gly Met Gly Phe Gly Ser Gly Ser Ser Ala Ser Asn Gly Ala

450 455 460

Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile Gly

465 470 475 480

Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu Arg

485 490 495

Thr Lys Thr Ile Val Leu Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala Val

500 505 510

Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp Asn

515 520 525

Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val Thr

530 535 540

Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr Phe

545 550 555 560

Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe

565 570 575

Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Lys Thr Gln His Asp

580 585 590

Ser Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ser Gln Ser Ser Ser Ile Lys Gln Arg

595 600 605

Glu Leu Asn Ala Ala Asp Lys Cys

610 615

<210>35

<211>1845

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MTT1[D46G]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1845)

<223>Mtt1p[Gly46]

<400>35

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt ggt ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser

35 40 45

cat cat gag tac ggt cca ggt tca cta aca cca aac gat aat aat gaa 192

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Thr Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga tct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ser Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gct tcc tgg caa att ggc ttg tcc tta tgc gtt acg gct ggt 480

Ile Ser Ala Ser Trp Gln Ile Gly Leu Ser Leu Cys Val Thr Ala Gly

145 150 155 160

gaa att gta ggt ttg caa atg act ggg cct ttt gta gat tat atg ggt 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Phe Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aat cgc tat aca ttg att ttg gca ttg att ctt ctt gct gca ttc acc 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Leu Ala Leu Ile Leu Leu Ala Ala Phe Thr

180 185 190

ttt att ctg tat ttt tgc aag ggt ttg ggt atg att gct gtg gga caa 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Gly Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gta ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Val Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct atg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Met Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg acg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aac tcc caa aat aag tac cct aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Pro Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg cct gct cct ctt gca ata ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Ala Ile Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gca agg aga tca ctt gaa aga aca ttg agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aag gaa tta ctg gta agt atg gag cta gat aat atc aaa gta 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Asn Ile Lys Val

325 330 335

acc att gaa aag gaa aaa aag ctg tca gac tca gaa ggt tcc tat tgg 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Lys Lys Leu Ser Asp Ser Glu Gly Ser Tyr Trp

340 345 350

gat tgt ctg aag gac agt gtt aat agg aga aga acg aga ata gct tgt 1104

Asp Cys Leu Lys Asp Ser Val Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys

355 360 365

tta tgt tgg gtc ggt caa acc acc tgt ggt aca tca tta att ggt aat 1152

Leu Cys Trp Val Gly Gln Thr Thr Cys Gly Thr Ser Leu Ile Gly Asn

370 375 380

tca act tac ttt tat gaa aaa gct gga gtt ggt act gat acg gct ttc 1200

Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Gly Thr Asp Thr Ala Phe

385 390 395 400

act ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gcc gca aca ttt ctt 1248

Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Leu

405 410 415

tct tgg tgg gct tca aaa tat ttt ggt agg ttt gac ctt tac gca ttt 1296

Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Phe Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe

420 425 430

gga ttg gct ata caa aca gtt tca ttg ttt atc ata gga ggt ttg gga 1344

Gly Leu Ala Ile Gln Thr Val Ser Leu Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly

435 440 445

tgc tcc gac tcg cat ggc gct gaa atg gga agt ggt tct ctt tta atg 1392

Cys Ser Asp Ser His Gly Ala Glu Met Gly Ser Gly Ser Leu Leu Met

450 455 460

gtt ctt tcc ttc ttc tac aat ttg ggt att gct ccc gtt gtg ttt tgc 1440

Val Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys

465 470 475 480

tta gtg tcc gaa ata cca tcc tca agg cta aga act aaa tcg att att 1488

Leu Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Ser Ile Ile

485 490 495

ctg gct cgt aac gca tat aat atg gca tct att gta act act gtt ttg 1536

Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Met Ala Ser Ile Val Thr Thr Val Leu

500 505 510

atc atg tac caa ttg aac tca gaa aaa tgg aac tgg ggt gcc aag tcg 1584

Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser

515 520 525

ggc ttt ttc tgg gga ggg tta tgt ttt gcc act cta gtt tgg gcc gta 1632

Gly Phe Phe Trp Gly Gly Leu Cys Phe Ala Thr Leu Val Trp Ala Val

530 535 540

att gac cta cca gaa act gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa 1680

Ile Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr PheIle Glu Ile Asn Glu

545 550 555 560

ttg ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc 1728

Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val

565 570 575

gac cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa 1776

Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala GluIle Asn Val Lys

580 585 590

gat ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga agc 1824

Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser

595 600 605

acc cca tct gtt gtg aac aaa 1845

Thr Pro Ser Val Val Asn Lys

610 615

<210>36

<211>615

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>36

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Gly Leu Ser

35 40 45

His His Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Thr Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ser Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Ala Ser Trp Gln Ile Gly Leu Ser Leu Cys Val Thr Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Phe Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Leu Ala Leu Ile Leu Leu Ala Ala Phe Thr

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Gly Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Val Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Met Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Thr Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Pro Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Ala Pro Leu Ala Ile Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Asn Ile Lys Val

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Lys Lys Leu Ser Asp Ser Glu Gly Ser Tyr Trp

340 345 350

Asp Cys Leu Lys Asp Ser Val Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys

355 360 365

Leu Cys Trp Val Gly Gln Thr Thr Cys Gly Thr Ser Leu Ile Gly Asn

370 375 380

Ser Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Gly Thr Asp Thr Ala Phe

385 390 395 400

Thr Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Leu

405 410 415

Ser Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Phe Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe

420 425 430

Gly Leu Ala Ile Gln Thr Val Ser Leu Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly

435 440 445

Cys Ser Asp Ser His Gly Ala Glu Met Gly Ser Gly Ser Leu Leu Met

450 455 460

Val Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys

465 470 475 480

Leu Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Ser Ile Ile

485 490 495

Leu Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Met Ala Ser Ile Val Thr Thr Val Leu

500 505 510

Ile Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser

515 520 525

Gly Phe Phe Trp Gly Gly Leu Cys Phe Ala Thr Leu Val Trp Ala Val

530 535 540

Ile Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu

545 550 555 560

Leu Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val

565 570 575

Asp Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys

580 585 590

Asp Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Ser

595 600 605

Thr Pro Ser Val Val Asn Lys

610 615

<210>37

<211>1842

<212>DNA

<213>人工构建

<220>

<223>MAL31[E51V]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal31p[Val51]

<400>37

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cat ctt gtg tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His Leu Val Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr LeuIle Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa atg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser GluIle Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg gcg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala GlyIle

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser LeuIle Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt ata tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa ata ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn ValIle Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>38

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>38

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

His Leu Val Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>39

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL31[S48P]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal31p[Pro48]

<400>39

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt ccc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Pro

35 40 45

cat ctt gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa atg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg gcg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt ata tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa ata ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile GluIle Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>40

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>40

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Pro

35 40 45

His Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>41

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL31[H49P]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal31p[Pro49]

<400>41

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cct ctt gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

Pro Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp GlnIle Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa atg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg gcg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala GlyIle

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser LeuIle Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt ata tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa ata ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>42

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>42

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

Pro Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>43

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL31[L50P]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal31p[Pro50]

<400>43

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cat cct gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His Pro Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr LeuIle Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa atg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg gcg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt age act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt ata tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa ata ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>44

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>44

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

His Pro Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Ash Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>45

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL31[E51K]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal31p[Lys51]

<400>45

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cat ctt aag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His Leu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser LeuIle Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr AlaIle Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa atg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg gcg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser LeuIle Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt ata tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa ata ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn ValIle Gln Val Val Val Thr Val LeuIle

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>46

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>46

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

His Leu Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>47

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL31[L50F，E51K]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal31p[Phe50，Lys51]

<400>47

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cat ttt aag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

His Phe Lys Tyr Gly Pro Gly Ser LeuIle Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa atg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg gcg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt ata tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa ata ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>48

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

His Phe Lys Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>49

<211>1842

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>MAL31[H49R]

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1842)

<223>Mal31p[Arg49]

<400>49

atg aag gga tta tcc tca tta ata aac aga aaa aaa gac agg aac gac 48

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

tca cac tta gat gag atc gag aat ggc gtg aac gct acc gaa ttc aac 96

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

tcg ata gag atg gag gag caa ggt aag aaa agt gat ttt gat ctt tcc 144

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

cgt ctt gag tac ggt cca ggt tca cta ata cca aac gat aat aat gaa 192

Arg Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

gaa gtc ccc gac ctt ctc gat gaa gct atg cag gac gcc aaa gag gca 240

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

gat gaa agt gag agg gga atg cca ctc atg aca gct ttg aag aca tat 288

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

cca aaa gct gct gct tgg tca cta tta gtt tcc aca aca ttg att caa 336

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

gag ggt tat gac aca gcc att cta gga gct ttc tat gcc ctg cct gtt 384

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

ttt caa aaa aaa tat ggt tct ttg aat agc aat aca gga gat tat gaa 432

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

att tca gtt tcc tgg caa atc ggt cta tgt cta tgc tac atg gca ggt 480

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

gag att gtc ggt ttg caa atg act ggg cct tct gta gat tac atg ggc 528

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

aac cgt tac act ctg atc atg gcg ttg ttc ttt tta gcg gct ttc att 576

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

ttc att ctg tat ttt tgc aag agt ttg ggt atg att gcc gtg gga cag 624

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

gca ttg tgt ggt atg cca tgg ggt tgt ttc caa tgt ttg acc gtt tct 672

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

tat gct tct gaa att tgt cct ttg gcc cta aga tac tat ttg acg act 720

Tyr Ala Ser GluIle Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

tat tct aat tta tgt tgg gcg ttc ggt caa ctt ttc gct gct ggt att 768

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

atg aaa aat tcc cag aac aaa tat gcc aac tca gaa cta gga tat aag 816

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

cta cct ttt gct ttg cag tgg atc tgg ccc ctt cct ttg gcg gta ggt 864

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

att ttt ttt gca cca gag tct cca tgg tgg ctg gtt aaa aaa gga agg 912

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

att gat caa gcg agg aga tca ctt gaa aga aca tta agt ggt aaa gga 960

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

ccc gag aaa gaa tta cta gtg agt atg gaa ctc gat aaa atc aaa act 1008

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

act ata gaa aag gag cag aaa atg tct gat gaa gga act tac tgg gat 1056

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

tgt gtg aaa gat ggt att aac agg aga aga acg aga ata gct tgt tta 1104

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

tgt tgg atc ggt caa tgc tcc tgt ggt gca tca tta att ggt tat tca 1152

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser LeuIle Gly Tyr Ser

370 375 380

act tac ttt tat gaa aaa gct ggt gtt agc act gat acg gct ttt act 1200

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

ttc agt att atc caa tat tgt ctt ggt att gct gca acg ttt ata tcc 1248

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Ile Ser

405 410 415

tgg tgg gct tca aaa tat tgt ggc aga ttt gac ctt tat gct ttt ggg 1296

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

ctg gct ttt cag gct att atg ttc ttc att atc ggt ggt tta gga tgt 1344

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

tca gac act cat ggc gct aaa atg ggt agt ggt gct ctt cta atg gtt 1392

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

gtc gcg ttc ttt tac aac ctc ggt att gca cct gtt gtt ttt tgc tta 1440

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu GlyIle Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

gtg tct gaa ata ccg tct tca agg cta aga acc aaa aca att att ttg 1488

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

gct cgt aat gct tac aat gtg atc caa gtt gta gtt aca gtt ttg atc 1536

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

atg tac caa ttg aac tca gag aaa tgg aat tgg ggt gct aaa tca ggc 1584

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

ttt ttc tgg gga gga ttt tgt ctg gcc act tta gct tgg gct gtt gtc 1632

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

gat tta cca gaa acc gct ggc agg act ttt att gag ata aat gaa ttg 1680

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

ttt aga ctt ggt gtt cca gca aga aag ttc aag tcg act aaa gtc gac 1728

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

cct ttt gca gct gcc aaa gca gca gct gca gaa att aat gtt aaa gat 1776

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

ccg aag gaa gat ttg gaa act tct gtg gta gat gaa ggg cga aac acc 1824

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

tca tct gtt gtg aac aaa 1842

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

<210>50

<211>614

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>50

Met Lys Gly Leu Ser Ser Leu Ile Asn Arg Lys Lys Asp Arg Asn Asp

1 5 10 15

Ser His Leu Asp Glu Ile Glu Asn Gly Val Asn Ala Thr Glu Phe Asn

20 25 30

Ser Ile Glu Met Glu Glu Gln Gly Lys Lys Ser Asp Phe Asp Leu Ser

35 40 45

Arg Leu Glu Tyr Gly Pro Gly Ser Leu Ile Pro Asn Asp Asn Asn Glu

50 55 60

Glu Val Pro Asp Leu Leu Asp Glu Ala Met Gln Asp Ala Lys Glu Ala

65 70 75 80

Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Pro Leu Met Thr Ala Leu Lys Thr Tyr

85 90 95

Pro Lys Ala Ala Ala Trp Ser Leu Leu Val Ser Thr Thr Leu Ile Gln

100 105 110

Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Ile Leu Gly Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Val

115 120 125

Phe Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asn Ser Asn Thr Gly Asp Tyr Glu

130 135 140

Ile Ser Val Ser Trp Gln Ile Gly Leu Cys Leu Cys Tyr Met Ala Gly

145 150 155 160

Glu Ile Val Gly Leu Gln Met Thr Gly Pro Ser Val Asp Tyr Met Gly

165 170 175

Asn Arg Tyr Thr Leu Ile Met Ala Leu Phe Phe Leu Ala Ala Phe Ile

180 185 190

Phe Ile Leu Tyr Phe Cys Lys Ser Leu Gly Met Ile Ala Val Gly Gln

195 200 205

Ala Leu Cys Gly Met Pro Trp Gly Cys Phe Gln Cys Leu Thr Val Ser

210 215 220

Tyr Ala Ser Glu Ile Cys Pro Leu Ala Leu Arg Tyr Tyr Leu Thr Thr

225 230 235 240

Tyr Ser Asn Leu Cys Trp Ala Phe Gly Gln Leu Phe Ala Ala Gly Ile

245 250 255

Met Lys Asn Ser Gln Asn Lys Tyr Ala Asn Ser Glu Leu Gly Tyr Lys

260 265 270

Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Val Gly

275 280 285

Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp Trp Leu Val Lys Lys Gly Arg

290 295 300

Ile Asp Gln Ala Arg Arg Ser Leu Glu Arg Thr Leu Ser Gly Lys Gly

305 310 315 320

Pro Glu Lys Glu Leu Leu Val Ser Met Glu Leu Asp Lys Ile Lys Thr

325 330 335

Thr Ile Glu Lys Glu Gln Lys Met Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Trp Asp

340 345 350

Cys Val Lys Asp Gly Ile Asn Arg Arg Arg Thr Arg Ile Ala Cys Leu

355 360 365

Cys Trp Ile Gly Gln Cys Ser Cys Gly Ala Ser Leu Ile Gly Tyr Ser

370 375 380

Thr Tyr Phe Tyr Glu Lys Ala Gly Val Ser Thr Asp Thr Ala Phe Thr

385 390 395 400

Phe Ser Ile Ile Gln Tyr Cys Leu Gly Ile Ala Ala Thr PheIle Ser

405 410 415

Trp Trp Ala Ser Lys Tyr Cys Gly Arg Phe Asp Leu Tyr Ala Phe Gly

420 425 430

Leu Ala Phe Gln Ala Ile Met Phe Phe Ile Ile Gly Gly Leu Gly Cys

435 440 445

Ser Asp Thr His Gly Ala Lys Met Gly Ser Gly Ala Leu Leu Met Val

450 455 460

Val Ala Phe Phe Tyr Asn Leu Gly Ile Ala Pro Val Val Phe Cys Leu

465 470 475 480

Val Ser Glu Ile Pro Ser Ser Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ile Ile Leu

485 490 495

Ala Arg Asn Ala Tyr Asn Val Ile Gln Val Val Val Thr Val Leu Ile

500 505 510

Met Tyr Gln Leu Asn Ser Glu Lys Trp Asn Trp Gly Ala Lys Ser Gly

515 520 525

Phe Phe Trp Gly Gly Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Trp Ala Val Val

530 535 540

Asp Leu Pro Glu Thr Ala Gly Arg Thr Phe Ile Glu Ile Asn Glu Leu

545 550 555 560

Phe Arg Leu Gly Val Pro Ala Arg Lys Phe Lys Ser Thr Lys Val Asp

565 570 575

Pro Phe Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Ala Glu Ile Asn Val Lys Asp

580 585 590

Pro Lys Glu Asp Leu Glu Thr Ser Val Val Asp Glu Gly Arg Asn Thr

595 600 605

Ser Ser Val Val Asn Lys

610

Claims

1.多核苷酸，其编码由序列号34的氨基酸序列编码的转运蛋白。

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，其为由序列号33的碱基序列组成的多核苷酸。

3.如权利要求1或2所述的多核苷酸，其特征在于，其为DNA。

4.蛋白质，其特征在于，其为由权利要求1～3中任一项所述的多核苷酸编码的蛋白质。

5.载体，其特征在于，包含权利要求1～3中任一项所述的多核苷酸。

6.转化酵母，其特征在于，向该转化酵母中导入了权利要求5所述的载体。

7.如权利要求6所述的转化酵母，其特征在于，通过导入权利要求5所述的载体，低聚糖分解能力提高。

8.如权利要求7所述的转化酵母，其特征在于，通过增加权利要求4所述的蛋白质的表达量，低聚糖分解能力提高。

9.酒类的制造方法，其特征在于，使用权利要求6～8中任一项所述的酵母。

10.如权利要求9所述的酒类的制造方法，其特征在于，酿造的酒类是麦芽饮料。

11.如权利要求9所述的酒类的制造方法，其特征在于，酿造的酒类是葡萄酒。