CN101848989A - 乳酸菌生存性提高剂及生存性提高方法,及食品组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及提高酸奶中所含益生菌等乳酸菌株的生存性。解决方法为含有丙酸菌发酵物的提高乳酸菌的生存性的乳酸菌生存性提高剂。上述丙酸菌是属于丙酸杆菌(Propionibacterium)属菌。所述属于丙酸杆菌(Propionibacterium)属菌是费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)。所述费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)是费氏丙酸杆菌ET-3(FERMBP-8115)。

Description

乳酸菌生存性提高剂及生存性提高方法，及食品组合物
技术领域
本发明涉及提高酸奶等中所含乳酸菌株，如益生菌等的生存性。
背景技术
近年来，具有益生菌功能的菌株引起广泛重视，由于摄入这类菌而起到改善、促进消化道健康及与之相应的免疫调节作用的预防医学繁荣发展。其中尤其是乳酸菌更是被称为益生菌，自古以来作为各种各样的食品被摄入。最近，比以往更加重视的是对功能性的开发，作为承载着这些功能性的新商品也在持续不断的开发中。作为这类菌种，可举例：加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)株等。
虽然作为乳酸菌的摄入方法存在着各种食品，但是，在以发酵乳制品为代表的发酵食品中由于是一个低pH值的环境，这对乳酸菌的生存是不利的。
由于乳酸菌具有上述益生菌功能，因此提高乳酸菌在食品中的生存性，特别是提高摄入后乳酸菌的生存性，将是对预防医学极大的贡献。
关于提高乳酸菌在食品中及摄入后的生存性，目前已知的方法有以下几种。
非专利文献1中提到，添加半胱氨酸、乳清粉、WPC、酪蛋白水合物或胰蛋白胨，可以使含双歧杆菌或嗜酸菌的酸奶在保存过程中菌数维持的方面得到改善。
其次，非专利文献2中提到，添加作为活性氧清除剂的抗坏血酸，可以改善益生菌(嗜酸菌)菌数的消长。
另一方面，专利文献1中指出，作为“乳酸菌生存性提高剂”乳或乳的原材料(例如，奶油乳清、酪乳)经过特定的处理能够得到包含一定量脂类的提高剂。尤其是可以将这种提高剂添加到乳酸菌的培养基中使用。
此外，专利文献2中公开了改善双歧杆菌的生存性的方法，其特征在于使用丙酸菌及/或生产具有萘醌环化合物的菌的培养物、溶剂提取物及/或其处理物。特别提到丙酸菌可以产生促进双歧杆菌增殖的物质。
以往技术是通过添加乳蛋白及活性氧清除剂等来改良乳酸菌的生存性。这些物质对于酸奶的风味及物性有很大的影响，且使用上有一定的限制。特别是抗氧化剂等活性氧清除剂是通过自身的氧化来达到除氧的目的，因此，不能保证添加的活性氧清除剂能够持久发挥作用。
此外，使用乳或乳的原材料时需要经过特定的处理，这个过程繁琐复杂，甚至会引起成本的上升。
另外，虽然已经证实使用丙酸菌等，可以产生具有促进双歧杆菌增殖的效果的物质，但对于除此之外的作用机理等尚未阐明，且对于乳酸菌的作用效果也尚不清楚。
专利文献1：特开2007-097447号公报
专利文献2：特开平7-227207号公报
非专利文献1：R.I.Dave等(R.I.Dave和N.P.Shah)，“IngredientSupplementation Effects on Viability of Probiotic Bacteria inYogurt”，J.Dairy Sci 81，2804-2816(1998)
非专利文献2：R.I.Dave等(Rajiv I.Dave和Negendra P.Shah)，“Effectiveness of Ascorbic Acid as an Oxygen Scavenger in ImprovingViability of Probiotic bacteria in Yoghurts Made with CommercialStarter Cultures”，Int.Dairy Journal 7，435-443(1997)
发明内容
发明拟解决的技术课题
本发明旨在提高乳酸菌的生存性。
本发明尤其旨在提高发酵乳等为代表的食品中的乳酸菌的生存性，尤其是提高摄入后的乳酸菌的生存性。
本发明尤其旨在不影响含乳酸菌的食品组合物的风味、物性的同时，能够提高该食品组合物中所含乳酸菌株的生存性。
在此，作为本发明中的乳酸菌，可为属于例如乳杆菌(Lactobacillus)属、链球菌(Streptococcus)属中的微生物，尤其可以近年来被证明具有优异效能的加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)为例。
另外，本发明中的“乳酸菌”被定义为相比同化的乳糖，乳酸的产生量在50％以上的乳酸菌。本发明中的“乳酸菌”不包括双歧杆菌。
解决课题的技术方案
本申请的发明人，在不影响含乳酸菌的食品组合物的风味及物性的前提下，以提高该食品组合物中所含乳酸菌的生存性为目的，研究了与以往通过添加抗氧化剂等物质来提高乳酸菌的生存性及活性的方法完全不同的方法。
结果发现，通过使用丙酸菌的发酵物(培养物)，可以在不影响含乳酸菌株的食品组合物的风味及物性的同时，提高所含乳酸菌的持久性、维持贮藏中的品质，从而完成本发明。
发明(1)：含有丙酸菌发酵物的乳酸菌生存性提高剂。
发明(2)：发明(1)的乳酸菌生存性提高剂，其中所述丙酸菌是属于丙酸杆菌(Propionibacterium)属的菌。
发明(3)：发明(2)的乳酸菌生存性提高剂，其中所述属于丙酸杆菌(Propionibacterium)属的菌是费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)。
发明(4)：发明(3)的乳酸菌生存性提高剂，其中所述费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)是费氏丙酸杆菌ET-3(FERM BP-8115)。
发明(5)：发明(1)～(4)中任一项的乳酸菌生存性提高剂，其中所述乳酸菌是加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)株、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)株、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)株中的至少一种。
发明(6)：提高乳酸菌生存性的方法，其特征在于，向含乳酸菌的组合物中加入发明(1)～(5)中任一项的乳酸菌生存性提高剂。
发明(7)：发明(6)的提高乳酸菌生存性的方法，其特征在于，在发酵所述含乳酸菌的组合物之前，将所述乳酸菌生存性提高剂加入所述含乳酸菌的组合物。
发明(8)：含有发明(1)的乳酸菌生存性提高剂和乳酸菌的食品组合物。
技术效果
本发明可提高乳酸菌的生存性。另外，本发明可提高以发酵乳等为代表的发酵食品中的乳酸菌的生存性。还可以提高摄入后乳酸菌的生存性。
另外，本发明可在不影响含乳酸菌株的食品组合物的风味及物性的同时，提高该食品组合物中所含乳酸菌的生存性。
本发明可在不影响含乳酸菌的食品组合物的风味及物性的同时，提高乳杆菌(Lactobacillus)属、链球菌(Streptococcus)属等的乳酸菌，尤其可提高近年来已被证明具有优异功能性的加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)株的生存性。
因此，能够提供在不损害作为对象的食品本身所具备的风味及物性的同时，即使经过长期保存也能具有高效益生菌功能的食品等。
实施方式
本发明提案的乳酸菌生存性提高剂中包含丙酸菌发酵物。
即，本发明使用丙酸菌的发酵物来提高酸奶等中所含益生菌等乳酸菌株的生存性，并提供包含丙酸菌发酵物的乳酸菌生存性提高剂，进而达到上述目的。
自古以来，丙酸菌就被用作埃曼塔尔干酪等的发酵剂(starter)，因此其安全性可以保证。
本发明提案的乳酸菌生存性提高剂中使用的丙酸菌发酵物，可以按以下说明，通过常规培养丙酸菌的方法培养得到。
在本说明书中的“丙酸菌发酵物”是指通过丙酸菌的发酵得到的培养物本身。
本发明的包含丙酸菌发酵物的乳酸菌生存性提高剂包括丙酸菌发酵物及其处理产，例如：可为上述培养物(丙酸菌发酵物)经过滤、离心分离或膜分离除菌后得到的培养滤液及培养上清液，也可为上述培养滤液、培养上清液或丙酸菌发酵物等通过蒸馏等浓缩得到的浓缩物、糊化物、稀释物或(冷冻、加热、减压等)干燥物。
在本发明中制备处理物时，可以从过滤、离心分离、膜过滤等除菌处理、沉淀、浓缩、糊化、稀释、干燥等上述处理工序中选择一种或几种组合使用。
此外，本发明中的上述发酵物及其处理物未经加热灭菌处理。
制备丙酸菌发酵物的培养基包含普通微生物增殖时所需的营养源。作为营养源，可为：乳清、酪蛋白、脱脂奶粉、乳清蛋白浓缩物(WPC)、乳清蛋白分离物(WPI)、酵母提取物、大豆提取物、胰蛋白酶解酪蛋白等蛋白胨、葡萄糖、乳糖等糖类、乳清矿物质等矿物质类等或者可以添加富含这些物质的食品。又或者可以添加它们的酶处理物。尤其优选使用乳清或其酶解物，但并不限于此。在本说明书中，使用乳清、WPC或WPI等源于乳清的营养源的丙酸菌发酵物，以下称为：丙酸菌乳清发酵物。
酶解上述营养源时使用的酶，可为蛋白酶或肽酶中的一种或几种的组合。所用的蛋白酶或肽酶并没有特定的限制，可为例如：食品级蛋白酶、内切蛋白酶、外切蛋白酶、外切肽酶/内切蛋白酶复合酶、蛋白酶/肽酶复合酶。内切蛋白酶，可为例如：凝乳酶(EC 3.4.23.4，Maxiren，源于改良的酵母-乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)，GIST-BROCADES N.V.)、AlcalaseR(源于藓样芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)，Novo公司)、Esperase(源于迟缓芽孢杆菌(B.lentus)，Novo公司)、NeutraseR(源于枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，Novo公司)、Protamex(源于细菌，Nove公司)、PTN6.0S(猪胰脏胰蛋白酶，Novo公司)等。外切肽酶/内切蛋白酶复合酶，可为例如：复合风味酶(Flavourzyme)(源于米曲霉菌(Aspergillus oryzae)，Nove公司)等。其他内切蛋白酶，可为例如：胰蛋白酶(CASNo.9002-07-7，EC 3.4.21.4，源于牛胰脏、货号：T8802、SIGMA)、胃蛋白酶(CAS No.9001-75-6，EC 3.4.4.1、源于猪胃粘膜、SIGMA)、胰凝乳蛋白酶(Novo公司，Boehringer公司)、蛋白酶N“amano”G(源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，天野Enzyme)、Bioplase(源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，Nagase产业)、木瓜蛋白酶W-40(天野Enzyme)；作为外切蛋白酶，可为例如：胰羧肽酶、小肠绒毛的氨肽酶等。此外，作为蛋白酶/肽酶复合酶，可为例如：蛋白酶A“amano”G(源于米曲霉菌(Aspergillus oryzae)，天野Enzyme)、Umamizyme G(肽酶及蛋白酶、源于米曲霉菌(Aspergillus oryzae)，天野Enzyme)。酶的来源不受上述限制，可以源于动物、植物、微生物中的任一种，但优选源于米曲霉菌(Aspergillus oryzae)的酶。以上这些酶不受商品名、来源、制造商等信息的限定。在本发明的实施过程中，可以使用一种酶也可以两种以上的酶组合使用。作为适当举例，可为蛋白酶A“amano”G(源于米曲霉菌(Aspergillus oryzae)，天野Enzyme)，但不限于此例。另外，上述酶组合使用时，各酶的反应可同时发生，也可以分别进行。
上述营养源通过酶进行分解时，作为原料的营养源分散、溶解到水或温水后再加入酶。酶解起始pH值、酶解时间、酶反应温度在本发明中并没有特别的限制。但是如果要举例的话，酶解起始pH值为3.0～7.5，优选4.5～7.0，更优选为6.0～7.0。酶解时间为0.5～300个小时，优选1～20小时，更优选为1～5小时。酶反应温度为20～57℃，优选30～52℃，更优选为40～50℃。
为了制备丙酸菌发酵物在配制培养基时，作为适当的例子，举例如下：乳清粉(10w/w％)及蛋白酶amano A“amano”G(0.07w/w％，天野Enzyme公司制)用水溶解，47℃(pH6.6)下酶解2小时，之后在85℃下加热10分钟，使酶失活，接着添加啤酒酵母提取物(0.10w/w％，朝日啤酒公司制)及硫酸铵(0.27w/w％)，调节pH为6.7，121℃下灭菌7分钟即可。但这个例子仅旨在说明本发明，无意限定本发明的范围。
制备丙酸菌发酵物使用的丙酸菌可为，例如：丙酸杆菌(Propionibacterium)属、(Propionicimonas)属、Propioniferax属、Propionimicrobium属、丙酸弧菌(Propionivibrio)属等，虽然没有特别的限制，但优选属于丙酸杆菌属的菌。
作为丙酸杆菌属的菌，可为例如：费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)、产丙酸丙酸杆菌(Propionibacteriumacidipropionici)、詹氏丙酸杆菌(Propionibacterium jensenii)等芝士用菌、贪婪丙酸杆菌(Propionibacterium avidum)、痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)、嗜淋巴丙酸杆菌(Propionibacteriumlymphophilum)、颗粒丙酸杆菌(Propionibacterium granulosam)、阿拉伯糖丙酸杆菌(Propionibacterium arabinosum)、环己烷丙酸杆菌(Propionibacterium cyclohexanicum)、Propionibacteriuminnocuum、Propionibacterium intermediu、戊糖丙酸杆菌(Propionibacterium pentosaceum)、彼得森丙酸杆菌(Propionibacterium peterssonii)、丙酸丙酸杆菌(Propionibacteriumpropionicum)、玉米丙酸杆菌(Propionibacterium zeae)等，其中优选费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)(以下简称P.freudenreichii)，更优选费氏丙酸杆菌IFO 12424或费氏丙酸杆菌ATCC 6207、尤其优选费氏丙酸杆菌ET-3(FERM BP-8115)。
本申请的发明人，将费氏丙酸杆菌ET-3株保藏在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心。以下，记录了保藏的相关内容：
(1)保藏机构名称：独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心
(2)地址：305-8566茨城县筑波市东1丁目1番1中央第6
(3)保藏号：FERM BP-8115
(4)识别用标识：ET-3
(5)原保藏日：2001年8月9日
(6)按布达佩斯条约规定保藏移交日：2002年7月11日
上述费氏丙酸杆菌ET-3是从埃曼塔尔干酪中分离的，革兰氏阳性短杆菌，硝酸还原能力呈阴性、吲哚生产能力呈阴性、硫化氢生产能力呈阴性、乳糖发酵能力呈阳性。此外，也具有生产1，4-二羟基-2-萘酸(DHNA)。
其次，菌株名中记载为ATCC的菌株是从美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection)得到的标准株，菌株名中记载为IFO的菌株是从财团法人发酵研究所得到的标准株。
另外，这种丙酸菌通过上述培养基培养。培养方法可以采用公知的厌氧或有氧培养法，但优选使用液体培养基厌氧或有氧培养法。发酵起始pH值、发酵时间、发酵温度只要可得到本发明的乳酸菌生存性提高剂，则没有特别限定，但发酵起始pH值为3.0～7.5，优选5.0～7.5，更优选pH5.5～7.0。发酵时间为0.5～200个小时，优选50～100小时，更优选60～99小时。发酵温度为20～50℃，优选25～45℃，更优选30～40℃。如此得到的培养液，可在培养后直接使用，但优选将培养液冷却(3～20℃，优选约10℃)，保存2～4周左右之后使用。作为优选例可例举以下方法：将费氏丙酸杆菌ET-3(FERM BP-8115株)的复活培养液以0.01～2.5％接种到调节pH到6.8经过121℃灭菌7分钟的培养基中，并在氮气氛下于32～37℃厌氧培养72～99小时，该培养液作为丙酸菌发酵物得到。但这个例子仅旨在说明本发明，无意限定本发明的范围。
例如：约10w/w％的乳清水溶液用蛋白酶A“amano”G酶解(40～52℃、pH6.0～7.0、培养1～5小时)后，在添加啤酒酵母提取物及硫酸铵而制成培养基中以0.01～2.5％接种上述费氏丙酸杆菌ET-3的复活培养液，并在氮气氛下，于32～37℃厌氧培养72～99小时，从而制备丙酸菌乳清发酵物时，其中，费氏丙酸杆菌ET-3菌浓度约0.5～50×cfu/mL、DHNA含量约5～500μg/mL、固形物约5～15w/w％。
本发明的乳酸菌生存性提高剂由上述丙酸菌的发酵物或其处理物直接得到，或作为所述丙酸菌的发酵物或其处理物的经溶剂稀释的可溶性级分或不溶性级分得到。作为溶剂，可为水及常用溶剂，例如：乙醇类、碳氢化合物类、有机酸、有机盐、无机酸、无机盐、超临界流体等，既可以单独使用，也可以几种组合使用。
另外，可作为组合了上述丙酸菌的发酵物其自身及/或其处理物与水、蛋白质、糖类、脂类、维生素类、矿物质类、有机酸、有机碱、果汁、风味剂类等食品组合物的乳酸菌生存性提高剂。
根据本申请的发明人的研究证明，本发明的乳酸菌生存性提高剂可以提高在低pH值环境下乳酸菌的生存性。以发酵乳为代表的包含乳酸菌的食品通常会处于低pH值的环境下，这对于乳酸菌的生存是不利的。由于本发明的乳酸菌生存性提高剂发挥提高在低pH值环境下乳酸菌生存性的功能，因此对于提高以发酵乳为代表的包含乳酸菌的食品中所含乳酸菌的生存性是有用的。在考虑到含乳酸菌食品的pH值等因素后，能够让本发明的乳酸菌生存性提高剂的功能更有效发挥的低pH值环境，优选pH2.5～6.5，更优选pH3.5～5.5，更优选pH3.8～4.8。
通过使用本发明的乳酸菌生存性提高剂确实能够提高生存性的乳酸菌株(特别作为益生菌)可例举属于乳杆菌(Lactobacillus)属、链球菌(Streptococcus)属中的微生物。
在以下菌株中确认了本发明的乳酸菌生存性提高剂可提高生存性，所述菌株例如：加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)株、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)株、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)株，特别是保加利亚乳杆菌JCM 1002T、保加利亚乳杆菌OLL1255(NITE P-76)株和嗜热链球菌ATCC 19258T、嗜热链球菌OLS3294(NITE P-77)株及加氏乳杆菌OLL2716(加氏乳杆菌OLL2716：FERM BP-6999)株等。
这些菌株单独一种或两种以上组合在一起的时候，也可以通过使用乳酸菌生存性提高剂来提高它们的生存性。
其中，关于保加利亚乳杆菌OLL1255(NITE P-76)株、嗜热链球菌OLS3294(NITE P-77)株、加氏乳杆菌OLL2716(加氏乳杆菌OLL2716：FERM BP-6999)株的保藏信息如下所述。
保加利亚乳杆菌OLL1255(NITE P-76)株
(1)保藏机构名称：独立行政法人制品评价技术基盘机构专利微生物保藏中心
(2)地址：292-0818千叶县木更津市上总镰足2-5-8
(3)保藏号：NITE P-76
(4)识别用标识：保加利亚乳杆菌OLL1255(NITE P-76)
(5)原保藏日：2005年2月10日
嗜热链球菌OLS3294(NITE P-77)株
(1)保藏机构名称：独立行政法人制品评价技术基盘机构专利微生物保藏中心
(2)地址：
Figure GPA00001073167800102
292-0818千叶县木更津市上总镰足2-5-8
(3)保藏号：NITE P-77
(4)识别用标识：嗜热链球菌OLS3294
(5)原保藏日：2005年2月10日
加氏乳杆菌OLL2716(加氏乳杆菌OLL2716：FERM BP-6999)株
(1)保藏机构名称：独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心
(2)地址：305-8566茨城县筑波市东1丁目1番1中央第6
(3)保藏号：FERM BP-6999
(4)识别用标识：加氏乳杆菌OLL2716
(5)原保藏日：1999年5月24日
(6)按布达佩斯条约规定保藏移交日：2000年1月14日
本发明中的乳酸菌生存性提高的方法通过将含有上述丙酸菌发酵物的乳酸菌生存性提高剂添加到含乳酸菌的组合物中来进行。添加的时间可为含乳酸菌的组合物发酵前、发酵中或发酵后中的任意时期，并没有特定限制，但优选发酵前。
根据本发明，还可在食品组合物中使用本发明的生存性提高剂的，即，含有上述生存性提高剂和上述乳酸菌的食品组合物。
作为食品组合物，可例举各种饮食品(清凉饮料、发酵乳、酸奶等)。
含有上述生存性提高剂和上述乳酸菌的本发明的食品组合物既可以直接使用，也可以与其他食品成分混合等，按照通常食品组合物中的常规方法来使用。另外，其性状也可为通常所用饮食品的状态，可为例如固体状(粉末、颗粒状及其他)、糊状、非液悬浊状中的任意状态。
对于其他成分并没有特别的限定，上述食品组合物中可作为其成分使用例如，水、蛋白质、糖类、脂类、维生素类、矿物质类、有机酸、有机碱、果汁、风味剂类等。可以将两种以上的这些成分组合起来使用，也可以使用合成物及/或富含这些成分的食品。
以下将通过实施例对本发明进行具体说明。然而这些实施例仅旨在说明本发明，无意限定本发明的范围。
实施例
研究本发明的乳酸菌生存性提高剂对LG21酸奶(明治乳业株式会社制)中的益生菌株-加氏乳杆菌OLL2716(加氏乳杆菌OLL2716)的生存性及其在低pH值下的增殖活性的影响。
由牛奶、脱脂奶粉、甜味剂等构成的酸奶原料，经加热灭菌后，同时添加发酵剂(starter)(2重量％的保加利亚乳杆菌OLL1255株和嗜热链球菌OLS3294、0.05重量％的加氏乳杆菌OLL2716(加氏乳杆菌OLL2716)株的浓缩菌、0.5重量％的浓缩至1，4-二羟基-2-萘酸DHNA浓度达100μg/mL的丙酸菌发酵物)混匀，在43℃下进行发酵培养，至乳酸酸度达0.75％时止，从而制备酸奶。
此外，要配制没有添加丙酸菌发酵物的酸奶作为比较酸奶。
上述丙酸菌发酵物按下法制备。
将180g脱脂奶粉(明治乳业(株)制)溶解于1000g水中，将温度调到47℃。向其中加入3.75g蛋白酶，并在47℃下分解蛋白质3个小时。用碳酸钾水溶液调整蛋白分解中的pH值为6.6～6.8。
蛋白质分解完成后，加热到80℃保持10分钟使蛋白酶失活。添加7.5g啤酒酵母提取物、15g乳糖，用碳酸钾水溶液调节pH值为6.95。
用水将溶液定容到1500mL，倒入容量为2L的发酵罐中，进行培养基灭菌(乳糖浓度质量约为6.1％)。灭菌条件为121℃，7分钟。
灭菌后，向发酵罐中通入氮气，使培养温度稳定于33℃，添加0.75mL冷冻浓缩的发酵剂(费氏丙酸杆菌ET-3)，开始培养。培养中的温度为33℃，pH调至6.5，通入氮气。调整pH值使用了40％(wt/wt)的碳酸钾水溶液。
开始培养72小时后由通入氮气转换成通入空气，开始培养168小时后结束培养。通入空气时，空气流量为2L/分、搅拌速度为150rpm。
结果得到DHNA浓度为52μg/mL的培养物(丙酸菌发酵物)。72小时后的乳糖浓度约为1.9质量％、丙酸菌数为3.5×1010cfu/mL。
其中，培养物(丙酸菌发酵物)中的DHNA的量可通过下述方法计算：向10mL培养液中添加0.1％(w/v)的抗坏血酸钠后，调节pH为7.0，用水定量到20mL后，取3mL与等量甲醇混合，以3000rpm离心10分钟，将上清液用0.45μm的滤膜过滤，根据HPLC的峰面积与DHNA浓度的关系(标准曲线)及事先求得的市售DHNA(和光纯药(株)制)标准品的保留时间(13分钟左右)即可求出所述DHNA的量。
研究了这些酸奶在10℃下保存16天(通常酸奶的保质期)的过程中，各乳酸菌株的菌数的变化及OLL2716株在低pH值环境下增殖性的变化情况。
其中，盛放酸奶的容器使用聚苯乙烯制的杯和铝制的盖。
酸奶中丙酸菌的菌数通过使用YEL(Yeast Extract Lactate)琼脂培养基，在30℃厌氧培养后测定。从新鲜酸奶到保存了16天后其菌数始终维持在1×108cfu/g左右。
保存了16天后的酸奶中的OLL2716株的存活率以新鲜物为基准，比较例的存活率为7.8％，本实施例的存活率为50.8％。
保存了16天后的酸奶中的OLS3294株的存活率以新鲜物为基准，比较例的存活率为7.5％，本实施例的存活率为73.6％。
保存了16天后的酸奶中的OLL1255株的存活率以新鲜物为基准，比较例的存活率为50％，本实施例的存活率为98％。
低pH值环境下的增殖活性，通过以下方法呈现：各样品稀释10倍之后，将100μL的稀释液接种到5mL的MRS-肉汤(pH＝4.5)中，37℃下有氧培养6小时，计算OLL2716株的增殖倍数。
此时，关于低pH下的增殖活性，在经过1天的时间点，比较例的增殖倍数为2.6倍、本实施例为3.5倍；在经过16天的时间点，比较例的增殖倍数为0.9倍、本实施例为1.8倍。
其中，对于添加丙酸菌发酵物对酸奶的风味及物性的影响，无论是刚生产出来的时候还是保存了16天后都觉察不到。
在上述实施例中，相比添加0.5重量％的将如上所述制备的丙酸菌发酵物浓缩至DHNA浓度达100μg/mL的丙酸菌发酵物，通过改变添加量而进行了同样的研究。
结果证实，为了能够达到提高加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)在冷藏保存中生存性和活力(活性)的目的，优选相对含乳酸菌的组合物0.1～10重量％，优选0.3～5重量％。
从以上结果可以看出，通过将丙酸菌的发酵物添加到酸奶中，益生菌(加氏乳杆菌)在冷藏保存中的生存性和活力(活性)有了大幅的提高。此外，作为基础发酵剂使用的嗜热菌的生存性同样也同样得到提高。
另外，因为丙酸菌在酸奶中的生存性很高，因此推测，本发明的效果在酸奶的保质期(25天左右)内可以充分长久保持。
工业实用性
通过使用本发明中的乳酸菌生存性提高剂，可以提高各种乳酸菌，特别是加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)株等乳杆菌(Lactobacillus)属、链球菌(Streptococcus)属等乳酸菌的生存性。另外能够提供在不损失食品本来风味或物性的同时，即使长期保存后也能具有高效益生菌功能的食品等。

Claims (8)

1.含有丙酸菌发酵物的乳酸菌生存性提高剂。
2.权利要求1的乳酸菌生存性提高剂，其中所述丙酸菌是属于丙酸杆菌(Propionibacterium)属的菌。
3.权利要求2的乳酸菌生存性提高剂，其中所述属于丙酸杆菌(Propionibacterium)属的菌是费氏丙酸杆菌(Propionibacteriumfreudenreichii)。
4.权利要求3的乳酸菌生存性提高剂，其中所述费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)是费氏丙酸杆菌ET-3(FERMBP-8115)。
5.权利要求1～4中任一项的乳酸菌生存性提高剂，其中所述乳酸菌是加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)株、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)株、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)株中的至少一种。
6.提高乳酸菌生存性的方法，其特征在于，向含乳酸菌的组合物中加入权利要求1～5中任一项的乳酸菌生存性提高剂。
7.权利要求6的提高乳酸菌生存性的方法，其特征在于，在发酵所述含乳酸菌的组合物之前，将所述乳酸菌生存性提高剂加入所述含乳酸菌的组合物。
8.含有权利要求1的乳酸菌生存性提高剂和乳酸菌的食品组合物。
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