CN101843296B - 一种干燥保存活性乳酸菌的方法及乳酸菌制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种干燥保存活性乳酸菌的方法及乳酸菌制剂。本发明的制备乳酸菌菌剂的方法，是将乳酸菌菌体或乳酸菌菌液与特定含水量的载体混合，得到混合物，即为乳酸菌菌剂。实验证明本发明方法使菌剂活菌损失小、质量稳定，保质期长、使用效果更佳，省去了乳酸菌菌液的脱水操作步骤，显著提高活性乳酸菌的回收率。另外，本发明方法操作简便，大大降低了生产成本。虽然成品中乳酸菌的浓度比较低，但是由于生产成本很低，对于畜禽用乳酸菌制剂来说，添加的比例可以比较大，只要载体是饲料原料，就不会对饲料的营养配比造成困难。
Description
技术领域
本发明涉及一种干燥保存活性乳酸菌的方法及乳酸菌制剂。
背景技术
乳酸菌制剂是一种很有效的畜禽养殖用活菌制剂，能改善畜禽的消化和健康水平。但是乳酸菌普遍对热和氧气都很敏感，乳酸菌一般都是液体培养，成品的干燥和保存对产品的质量起着决定性作用。
采用常规的气流干燥，乳酸菌的活性损失一般都要超过90％以上。即使采用瞬时喷雾干燥，活力损失也要超过85％。干燥后的制剂，在20℃条件下，在空气中暴露24小时，活力损失会达到40％以上，给实际推广使用造成了很大困难。
近年来，世界各地的畜牧科研工作者在活性乳酸菌的干燥保存方面进行了大量研究，提出了很多高科技的方法，其中比较常用的方法是抽真空冷冻干燥和包埋造粒。真空冷冻干燥需要消耗大量的电力，生产成本极高，处理1公斤培养液至少需要30元。如果培养液的干物质含量以5.0％计算，每公斤干燥成品的加工费用至少在600元以上。包埋造粒是在气流干燥的同时与载体(一般是一些纤维化合物)快速混合、流态化造粒，与真空冷冻干燥相比，操作成本明显下降，每公斤成品的加工费用在20-30元左右，载体的重量约占成品总量的60％，但是造粒过程中活性乳酸菌的损失也很高，至少达到80％以上。
传统的微生物培养液的干燥都是设法先除去培养液中的自由水。但是对于乳酸菌培养液来说，除水是比较困难的单元操作，即使是高浓度的乳酸菌培养液，其含水量一般都超过90％，干物质的含量不超过10％，除水通常需要较长的时间。对于厌氧的乳酸菌来说，与空气接触时间越长，活力损失也越大。采用气流干燥的方式除水，在实际生产中有很大的困难。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种制备乳酸菌菌剂的方法。
本发明所提供的制备乳酸菌菌剂的方法，是将乳酸菌菌体或乳酸菌菌液与特定含水量的载体混合，得到混合物，即为乳酸菌菌剂。
上述方法中，所述特定含水量为5％-8％或5％-7％或6％-8％，具体为5％、6％、7％或8％，所述百分含量为质量百分含量。
上述方法中，所述乳酸菌菌液中乳酸菌的浓度为4.12×109cfu/g-2.0×1011cfu/g或4.12×109cfu/g-4.2×1010cfu/g或4.37×109cfu/g-2.0×1011cfu/g，具体为4.12×109cfu/g、4.37×109cfu/g、4.2×1010cfu/g或2.0×1011cfu/g。
上述方法中，所述乳酸菌菌液的含水量为85％-99％或91％-96％或91.6％-95.8％或91.6％-95.7％或91.6％-93.0％或91.8％-95.8％或91.8％-95.7％或93.0％-95.8％，具体为91.6％、91.8％、93.0％、95.7％或95.8％，所述百分含量为质量百分含量。
上述方法中，所述特定含水量的载体是将原始载体按照包括如下步骤的方法进行处理得到的：将所述原始载体在温度为90℃-120℃或90℃或120℃的条件下气流干燥，至得到所述特定含水量的载体；所述气流干燥的时间为2小时；
上述方法中，在所述气流干燥后，在所述混合前，包括如下冷却步骤：将所述特定含水量的载体冷却至40℃以下；
上述方法中，所述乳酸菌菌液是按照如下方法1)或2)得到的：
1)发酵培养所述乳酸菌，得到的发酵容器内的所有物质即为所述乳酸菌菌液；和/或，所述发酵培养的条件为：温度为35℃-42℃或35℃或42℃，密封厌氧、时间为11小时-24小时或11小时或24小时；
2)将所述乳酸菌与水混合，得到的混合物即为所述乳酸菌菌液；
和/或，所述1)中，所述发酵培养所用的培养基为如下a)或b)或c)所示：
a)红糖与纯牛奶的混合物，其中纯牛奶与红糖的质量配比为92∶8；
b)白砂糖与纯牛奶的混合物，其中纯牛奶与白砂糖的质量配比为92∶8；
c)红糖与豆浆的混合物，其中豆浆与红糖的质量配比为94∶6；所述豆浆为蛋白质浓度为2.0％(质量百分含量)的豆浆；
和/或，所述乳酸菌菌体为培养所述乳酸菌后得到的湿菌体。
上述方法中，所述乳酸菌为禽畜用乳酸菌(主要是以细菌为主，进行同型乳酸发酵乳酸菌、异型乳酸发酵乳酸菌、兼型乳酸发酵乳酸菌和双歧乳酸发酵乳酸菌)；
所述禽畜用乳酸菌为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、动物双歧杆菌、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、或粪肠球菌(Enterococcus faecalis)；
所述嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)为嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)CGMCC No.1.1864，所述发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC 1.485，所述嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC 1.1878，所述唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)为唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)CGMCC 1.1881，所述屎肠球菌(Enterococcus faecium)为屎肠球菌(Enterococcusfaecium)CGMCC 1.2025，所述粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)CGMCC 1.101。
上述方法中，所述原始载体或所述特定含水量的载体为禽畜饲料原料；
所述禽畜饲料原料为麦粉、麦麸和/或玉米粉；
所述原始载体的含水量为14％(质量百分含量)。
上述方法中，所述特定含水量的载体与所述乳酸菌菌液的质量比为920kg∶(60kg-160kg)或920kg∶(60kg-140kg)或920kg∶(60kg-120kg)或920kg∶(60kg-100kg)或920kg∶(80kg-160kg)或920kg∶(80kg-140kg)或920kg∶(80kg-120kg)或920kg∶(100kg-160kg)或920kg∶(100kg-140kg)或920kg∶(120kg-160kg)，具体为920kg∶60kg、920kg∶80kg、920kg∶100kg、920kg∶120kg、920kg∶140kg或920kg∶160kg。
上述方法中，所述乳酸菌菌剂中所述乳酸菌的浓度为3.36×109cfu/g-1.23×1010cfu/g或3.36×109cfu/g-6.18×109cfu/g或3.36×109cfu/g-5.5×109cfu/g或3.36×109cfu/g-4.37×109cfu/g或4.12×109cfu/g-1.23×1010cfu/g或4.12×109cfu/g-6.18×109cfu/g或4.12×109cfu/g-5.5×109cfu/g或4.37×109cfu/g-1.23×1010cfu/g或4.37×109cfu/g-6.18×109cfu/g或5.5×109cfu/g-1.23×1010cfu/g，具体为3.36×109cfu/g、4.12×109cfu/g、4.37×109cfu/g、5.5×109cfu/g、6.18×109cfu/g或1.23×1010cfu/g；
上述方法中，所述乳酸菌菌剂的含水量为10％-25％或11％-19％或11％-17％或11％-16％或11％-14％或13％-19％或13％-17％或13％-16％或14％-19％或14％-17％或15％-19％，具体为11.27％或12.88％或14.43％或15.92％或17.36％或18.74％，所述百分含量为质量百分含量。
由上述任一所述方法得到的乳酸菌菌剂也属于本发明的保护范围。所述乳酸菌制剂为禽畜用乳酸菌菌剂。
本发明的最后一个目的是提供一种干燥保存活性乳酸菌的方法，是按照上述任一所述制备乳酸菌菌剂的方法进行操作，即干燥保存了活性乳酸菌。
本发明是用经过干燥的麦麸、麦粉或者玉米粉为载体(含水量在5.0％左右)，吸附乳酸菌菌液，使混合物的水分含量在11-20％之间，从而使乳酸菌处于休眠状态，不易失活。将干燥冷却后的载体以大比例与乳酸菌培养液混合，可以迅速地吸附培养液中的游离水。实验证明本发明方法使菌剂活菌损失小、质量稳定，保质期长、使用效果更佳，省去了乳酸菌菌液的脱水操作步骤，显著提高活性乳酸菌的回收率。另外，本发明方法操作简便，大大降低了生产成本。虽然成品中乳酸菌的浓度比较低，但是由于生产成本很低，对于畜禽用乳酸菌制剂来说，添加的比例可以比较大，只要载体是饲料原料，就不会对饲料的营养配比造成困难。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
干燥保存方法包括如下步骤：1、载体的干燥，2、乳酸菌菌液的获得，3、干燥载体与乳酸菌菌液混合，4、保存。
载体可为禽畜饲料，具体可为麦麸(麦麸可以事先经过粉碎过筛)、麦粉、或者玉米粉。此类载体的正常含水量一般在14％左右。
1、含水量的检测方法及计算方法参照GB/T6435-2006(等同于ISO6496：1999)。
2、检测菌剂中菌的存活率和活菌损失情况的方法如下：
取1.00g样品，用无菌生理盐水做梯度稀释。取稀释度为10-5至10-7的稀释液0.5mL，均匀涂布在固体琼脂培养基上。每个稀释度做5个重复，在37℃厌氧培养48小时，统计形成的菌落数量。
样品中活性乳酸菌数量A＝D×N/0.5
D：样品的稀释倍数；N：对应稀释度下的平均菌落数；0.5：取样量(0.5mL)。配制无菌生理盐水：配制浓度为0.9％的氯化钠溶液1000mL，在120℃消毒灭菌30分钟，自然冷却后备用。
活菌损失情况的表征：X＝100％×(AO-AX)/AO；
(X：活菌损失率；AO：产品中起始活菌含量；AX：在测定时产品中的活菌含量)
表1-1、固体琼脂培养基的组成
| 蛋白胨 | 10g |
| 牛肉膏 | 8g |
| 酵母浸出汁粉 | 4g |
| 葡萄糖 | 20g |
| 吐温80 | 1.0mL |
| 磷酸氢二钾 | 2g |
| 三水乙酸钠 | 5g |
| 柠檬酸三铵 | 2g |
| 七水硫酸镁 | 0.2g |
| 一水硫酸锰 | 0.05g |
| 琼脂 | 15.0g |
| 水 | 1000ml |
酵母浸出汁粉购自上海亿欣生物工程有限公司，产品目录号为LP0021。
下面详细说明：
实施例1、活性乳酸菌的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌剂
一、菌剂的制备方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)
(一)载体的干燥
载体为麦粉。选取常规的无霉变商品大麦，粉碎，过20目筛。
对麦粉进行120℃气流干燥2小时，检测其含水量。结果表明，干燥后的麦粉的含水量为5％(质量百分含量)。将干燥后的麦粉收集在缓冲仓内，抽气冷却至40℃。
如果缓冲仓内的物料不超过1吨，冷却时间一般不超过2小时，干燥后麦粉的含水量只增加0.3％左右，对后续的吸附操作影响很小。必要时可在冷却完成后，将干燥后的麦粉进行抽真空包装以防止吸湿回潮，包装袋的容量在10-50公斤之间比较合适。
(二)乳酸菌菌液的获得
乳酸菌为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus，也称为唾液链球菌嗜热亚种Streptococcus salivarius)CGMCC No.1.1864，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)。
嗜热链球菌种子液的培养方法如下：将嗜热链球菌接种于种子培养基(表1-2)中，在37℃恒温培养30小时，得到嗜热链球菌种子液。
表1-2、种子培养基组成
| 蛋白胨 | 6.0g |
| 酵母浸出汁粉 | 4.0g |
| 葡萄糖 | 20g |
| 磷酸氢二钾 | 1.0g |
| 三水乙酸钠 | 4.0g |
| 柠檬酸三铵 | 2.0g |
| 七水硫酸镁 | 0.2g |
| 一水硫酸锰 | 0.04g |
| 水 | 2000ml |
将嗜热链球菌的种子液接种于发酵培养基中(接种量为0.5％)，在35℃条件下密封厌氧培养11小时，得到的发酵容器内的所有物质即为嗜热链球菌菌液，其中活菌的浓度为2.0×1011cfu/g。菌液中干物质的百分含量为7.0％左右(即菌液的含水量为93.0％，质量百分含量)。
发酵培养基按照如下方法配制：将红糖(或白砂糖)溶解于无抗生素(或抗生素残留量不超过0.5mg/kg)的纯牛奶中，纯牛奶与红糖(或白砂糖)的质量配比为92∶8，得到培养基。将培养基在95℃至105℃条件下消毒10分钟至15分钟，冷却至40℃以下。
(三)干燥载体与乳酸菌菌液混合
取920kg含水量为5％的麦粉与60kg乳酸菌菌液混合，得到980kg混合物，即为乳酸菌剂成品；检测乳酸菌剂成品的含水量和活菌情况。
菌剂成品的组成如下：菌剂由本实施例中的乳酸菌菌液与含水量为5％的麦粉组成，乳酸菌菌液与含水量为5％的麦粉的质量比为15.3∶1；菌剂的含水量为11.27％，菌剂中乳酸菌的起始浓度为1.23×1010cfu/g。
(四)包装保存
将制备得到的乳酸菌制剂成品装于致密性很好的包装袋中，抽真空密封。
二、菌剂的保存期及活菌损失情况
将真空包装的菌剂置于常温中保存，在保存时间为1个月、3个月、6个月时，分别检测菌剂中活菌损失情况。
实验设3次重复。将菌剂在环境温度为25℃的环境下保存，结果参见表1-3：
表1-3：嗜热链球菌制剂保存试验(25℃)，真空保存，含水量11.27％
| 保存时间(天) | 10 | 30 | 90 | 180 |
| 存活率(％) | 91.4 | 81.2 | 54.2 | 31.8 |
实施例2、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌剂
一、菌剂的制备方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)
(一)载体的干燥
载体为玉米粉。
干燥方法与实施例1中所述相同，干燥后的玉米粉的含水量为7％。将干燥后的玉米粉冷却至40℃。
必要时可在冷却完成后，将干燥后的玉米粉进行抽真空包装以防止吸湿回潮。
(二)乳酸菌菌液的获得
乳酸菌为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
下述发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)的培养方法为现有技术。
发酵乳杆菌种子液的获得方法：
将发酵乳杆菌接种于种子培养基中，在37℃恒温培养26小时，得到发酵乳杆菌种子液。
表2-1、种子培养基
| 蛋白胨 | 6.0g |
| 酵母浸出汁粉 | 4.0g |
| 葡萄糖 | 30g |
| 磷酸氢二钾 | 1.0g |
| 三水乙酸钠 | 5.0g |
| 柠檬酸三铵 | 2.0g |
| 七水硫酸镁 | 0.3g |
| 一水硫酸锰 | 0.04g |
| 水 | 2000ml |
将乳酸菌种子液接种于发酵培养基中，接种量为2.0％，在42℃条件下密封厌氧培养24小时，得到的发酵容器内的所有物质即为发酵乳杆菌菌液，其中活菌的浓度为4.2×1010cfu/g菌液，菌液中干物质的质量百分含量为8.4％(即菌液的含水量为91.6％)。
发酵培养基按照如下方法配制：向蛋白质浓度为2.0％(质量百分含量)的豆浆中加入红糖(豆浆与红糖的质量配比为94∶6)，在40℃至80℃条件下缓慢溶解。接着在95℃至105℃条件下消毒15分钟至20分钟，冷却至40℃以下。
(三)干燥载体与乳酸菌菌液混合
取920kg含水量为7％的玉米粉与80kg乳酸菌菌液混合，得到1000kg混合物，即为乳酸菌剂成品；检测乳酸菌剂成品的含水量，检测乳酸菌剂成品中活菌情况。
菌剂由本实施例中的乳酸菌菌液与含水量为7％的玉米粉混合而成，乳酸菌菌液与干燥的玉米粉的质量比为11.5∶1；菌剂的含水量为12.88％，菌剂成品中乳酸菌的浓度为3.36×109cfu/g。
(四)包装保存
将制备得到的乳酸菌制剂成品装于致密性很好的包装袋中，抽真空密封。
二、菌剂的保存期及活菌损失情况
将真空包装的菌剂置于常温中保存，在保存时间为1个月、3个月、6个月时，分别检测菌剂中菌存活率情况。
实验设3次重复。菌的存活率如表2-2所示。
表2-2：发酵乳杆菌制剂保存试验(25℃)，真空保存，含水量12.88％
| 保存时间(天) | 10 | 30 | 90 | 180 |
| 存活率(％) | 88.3 | 79.2 | 62.1 | 46.8 |
实施例3、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌剂
一、菌剂的制备方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)
(一)载体的干燥
载体为麦麸。
对麦麸进行90℃气流干燥2小时，检测其含水量，结果表明，干燥后的麦麸的含水量为8％。将干燥后的麦麸冷却至40℃。
必要时可在冷却完成后，将干燥后的麦麸进行抽真空包装以防止吸湿回潮。
(二)乳酸菌菌液的获得
乳酸菌为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
乳酸菌培养方法与实施例2中所述相同。得到的菌液中活菌的浓度为4.2×1010cfu/g菌液，菌液的含水量为95.8％。
(三)干燥载体与乳酸菌菌液混合
取920kg含水量为8％的麦麸与100kg乳酸菌菌液混合，得到1020kg混合物，即为乳酸菌剂成品；检测乳酸菌剂成品的含水量，检测乳酸菌剂成品中活菌损失情况。
菌剂由本实施例中的乳酸菌菌液与含水量为8％的麦麸混合而成，乳酸菌菌液与含水量为8％的麦麸的质量比为9.2∶1；菌剂的含水量为14.43％，菌剂中乳酸菌的浓度为4.12×109cfu/g。
(四)包装保存
将制备得到的乳酸菌制剂成品装于致密性很好的包装袋中，抽真空密封。
二、菌剂的保存期及活菌损失情况
将真空包装的菌剂置于常温中保存，在保存时间为10天、1个月、3个月、6个月时，分别检测菌剂中活菌损失情况。
实验设3次重复，菌的存活率如表3所示。
表3：发酵乳杆菌制剂保存试验(25℃)，真空保存，含水量14.43％
| 保存时间(天) | 10 | 30 | 90 | 180 |
| 存活率(％) | 81.6 | 64.4 | 55.2 | 31.5 |
实施例4、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌剂
一、菌剂的制备方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)
(一)载体的干燥
载体为玉米粉。
对玉米粉进行90℃气流干燥2小时，检测其含水量，结果表明，干燥后的玉米粉的含水量为6％。将干燥后的玉米粉冷却至40℃。
必要时可在冷却完成后，将干燥后的玉米粉进行抽真空包装以防止吸湿回潮。
(二)乳酸菌菌液的获得
乳酸菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC 1.485购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
乳酸菌培养方法如实施例2中所述。得到的菌液中活菌的浓度为3.8×1010cfu/g菌液，菌液的含水量为95.7％。
(三)干燥载体与乳酸菌菌液混合
取920kg含水量为6％的玉米粉与120kg乳酸菌菌液混合，得到1040kg混合物，即为乳酸菌剂成品；检测乳酸菌剂成品的含水量，检测乳酸菌剂成品中活菌损失情况。
菌剂由本实施例中的乳酸菌菌液与含水量为6％的玉米粉混合而成，乳酸菌菌液与含水量为6％的玉米粉的质量比为7.7∶1；菌剂的含水量为15.92％，菌剂中乳酸菌的浓度为4.37×109cfu/g。
(四)包装保存
将制备得到的乳酸菌制剂成品装于致密性很好的包装袋中，抽真空密封。
二、菌剂的保存期及活菌损失情况
将真空包装的菌剂置于常温中保存，在保存时间为1个月、3个月、6个月时，分别检测菌剂中活菌损失情况。实验设3次重复。结果参见表4：
表4：植物乳杆菌制剂保存试验(25℃)，真空保存，含水量15.92％
| 保存时间(天) | 10 | 30 | 90 | 180 |
| 存活率(％) | 67.5 | 42.3 | 37.6 | 32 |
实施例5、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌剂
一、菌剂的制备方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)
(一)载体的干燥
载体为麦粉。
对麦粉进行90℃气流干燥2小时，检测其含水量，结果表明，干燥后的麦粉的含水量为5％。将干燥后的麦粉冷却至40℃。
必要时可在冷却完成后，将干燥后的麦粉进行抽真空包装以防止吸湿回潮。
(二)乳酸菌菌液的获得
乳酸菌为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
乳酸菌培养方法与实施例2中所述相同。得到的菌液中活菌的浓度为4.2×1010cfu/g菌液，菌液的含水量为95.7％。
(三)干燥载体与乳酸菌菌液混合
取920kg干燥后的麦粉与140kg乳酸菌菌液混合，得到1060kg混合物，即为乳酸菌剂成品；检测乳酸菌剂成品的含水量，检测乳酸菌剂成品中活菌损失情况。
菌剂由本实施例中的乳酸菌菌液与干燥的麦粉混合而成，乳酸菌菌液与干燥的麦粉的质量比为6.6∶1；菌剂的含水量为17.36％，菌剂中乳酸菌的浓度为5.5×109cfu/g。
(四)包装保存
将制备得到的乳酸菌制剂成品装于致密性很好的包装袋中，抽真空密封。
二、菌剂的保存期及活菌损失情况
将真空包装的菌剂置于常温中保存，在保存时间为1个月、3个月、6个月时，分别检测菌剂中活菌损失情况。
实验设3次重复，菌的存活率如表5所示。
表5：发酵乳杆菌制剂保存试验(25℃)，真空保存，含水量17.36％
| 保存时间(天) | 10 | 30 | 90 | 180 |
| 存活率(％) | 69.5 | 46.2 | 38.7 | 34.2 |
实施例6、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌剂
一、菌剂的制备方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)
(一)载体的干燥
载体为麦麸。
对麦麸进行90℃气流干燥2小时，检测其含水量，结果表明，干燥后的麦麸的含水量为6％。将干燥后的麦麸冷却至40℃。
必要时可在冷却完成后，将干燥后的麦麸进行抽真空包装以防止吸湿回潮。
(二)乳酸菌菌液的获得
乳酸菌为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
乳酸菌培养方法与实施例1中所述相同。得到的菌液中活菌的浓度为4.2×1010cfu/g菌液，菌液的含水量为91.8％。
(三)干燥载体与乳酸菌菌液混合
取920kg干燥后的麦麸与160kg乳酸菌菌液混合，得到1080kg混合物，即为乳酸菌剂成品；检测乳酸菌剂成品的含水量，检测乳酸菌剂成品中活菌损失情况。
菌剂由本实施例中的乳酸菌菌液与干燥的麦麸混合而成，乳酸菌菌液与干燥的麦麸的质量比为5.8∶1；菌剂的含水量为18.74％，菌剂中乳酸菌的浓度为6.18×109cfu/g。
(四)包装保存
将制备得到的乳酸菌制剂成品装于致密性很好的包装袋中，抽真空密封。
二、菌剂的保存期及活菌损失情况
将真空包装的菌剂置于常温中保存，在保存时间为1个月、3个月、6个月时，分别检测菌剂中活菌损失情况。
实验设3次重复，菌的存活率如表6所示。
表6：发酵乳杆菌制剂保存试验(25℃)，真空保存，含水量18.74％
| 保存时间(天) | 10 | 30 | 90 | 180 |
| 存活率(％) | 53.2 | 38.7 | 34.6 | 28 |
综上所述，成品含水量不超过15％时，菌剂保存6个月后，活菌损失不超过50％，完全可以满足实际应用的要求。在畜禽饲料中添加0.1％至0.3％就能显著改善畜禽的健康状况，养殖场的氨味明显减少。
在工业化干燥操作中，高温气流干燥1吨含水量为14％的麦粉，最终含水量达到5％，即获得干燥成品约900公斤，需要的操作费用约250元(包括电耗、煤耗和人工费)。这些载体可以吸附干物质含量为10％的高浓度乳酸菌培养液100公斤，获得活菌浓度降低10倍的活菌制剂1吨，含水量仍然为14％左右；若每kg成品一个单独真空包装，整个1000kg成品的总生产成本不超过4000元，因此，本发明方法大大降低了生产成本。
Claims (4)
1.一种制备乳酸菌菌剂的方法，是将乳酸菌菌液与特定含水量的载体混合，得到混合物，即为乳酸菌菌剂；
所述特定含水量为5％-8％或5％-7％或6％-8％，所述百分含量为质量百分含量；
所述特定含水量的载体是将原始载体按照包括如下步骤的方法进行处理得到的：将所述原始载体在温度为90℃-120℃或90℃或120℃的条件下气流干燥，至得到所述特定含水量的载体；所述气流干燥的时间为2小时；
所述原始载体或所述特定含水量的载体为禽畜饲料原料；所述禽畜饲料原料为麦粉、麦麸和/或玉米粉；所述原始载体的含水量为14％，所述百分含量为质量百分含量；
所述乳酸菌菌液中乳酸菌的浓度为4.12×109cfu/g-2.0×1011cfu/g或4.12×109cfu/g-4.2×1010cfu/g或4.37×109cfu/g-2.0×1011cfu/g；
所述乳酸菌菌液的含水量为85％-99％或91％-96％或91.6％-95.8％或91.6％-95.7％或91.6％-93.0％或91.8％-95.8％或91.8％-95.7％或93.0％-95.8％，所述百分含量为质量百分含量；
在所述气流干燥后，在所述混合前，包括如下冷却步骤：将所述特定含水量的载体冷却至40℃以下；
所述乳酸菌为禽畜用乳酸菌；
所述禽畜用乳酸菌为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、动物双歧杆菌、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、或粪肠球菌(Enterococcus faecalis)；
所述嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)为嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)CGMCC No.1.1864，所述发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC 1.485，所述嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC 1.1878，所述唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)为唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)CGMCC 1.1881，所述屎肠球菌(Enterococcus faecium)为屎肠球菌(Enterococcusfaecium)CGMCC 1.2025，所述粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)CGMCC 1.101；
所述特定含水量的载体与所述乳酸菌菌液的质量比为920kg∶(60kg-160kg)或920kg∶(60kg-140kg)或920kg∶(60kg-120kg)或920kg∶(60kg-100kg)或920kg∶(80kg-160kg)或920kg∶(80kg-140kg)或920kg∶(80kg-120kg)或920kg∶(100kg-160kg)或920kg∶(100kg-140kg)或920kg∶(120kg-160kg)。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述乳酸菌菌剂中所述乳酸菌的浓度为3.36×109cfu/g-1.23×1010cfu/g或3.36×109cfu/g-6.18×109cfu/g或3.36×109cfu/g-5.5×109cfu/g或3.36×109cfu/g-4.37×109cfu/g或4.12×109cfu/g-1.23×1010cfu/g或4.12×109cfu/g-6.18×109cfu/g或4.12×109cfu/g-5.5×109cfu/g或4.37×109cfu/g-1.23×1010cfu/g或4.37×109cfu/g-6.18×109cfu/g或5.5×109cfu/g-1.23×1010cfu/g；
所述乳酸菌菌剂的含水量为10％-25％或11％-19％或11％-17％或11％-16％或11％-14％或13％-19％或13％-17％或13％-16％或14％-19％或14％-17％或15％-19％，所述百分含量为质量百分含量。
3.由权利要求1或2所述方法获得的乳酸菌菌剂。
4.一种干燥保存活性乳酸菌的方法，是按照权利要求1或2所述制备乳酸菌菌剂的方法进行操作，即干燥保存了活性乳酸菌。
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