CN106834164A - 用于饲料的红豆杉固体培养基及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于饲料的红豆杉固体培养基及其使用方法。本发明提供的红豆杉固体培养基包括如下组分：红豆杉枝条粉末、麸皮、稻壳、玉米粉、豆粕、硫酸镁和硫酸锰。采用本发明提供的红豆杉固体培养基，对益生菌进行发酵能够提高菌种的生长及其活菌数量，也开辟了一条红豆杉枝条的新用途；同时利用所述红豆杉培养基对益生菌进行培养，尤其是对枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行培养能够成为家禽饲料的添加剂以增强家禽的生长速度和免疫力，具有广阔的应用前景。

Description

用于饲料的红豆杉固体培养基及其使用方法

技术领域

本发明属于生物发酵饲料领域，具体涉及一种用于饲料的红豆杉固体培养基及其制备方法。

背景技术

红豆杉是近年来世界范围内研究得最多的抗癌植物之一。经研究发现红豆杉体内含有作用机制独特的抗癌活性物质，其中以紫杉醇的活性最强，以成为一下抗癌药物；但是由于红豆杉人工栽培量大，紫杉醇化学合成技术成熟，植物提取市场降低，为充分开发利用红豆杉，发挥其各类有效成分作用，故本发明通过微生物处理，将其作为家禽饲料添加剂。

固体发酵(Solid-state fermentation，简称SSF)是指利用自然底物做碳源及能源，或利用惰性底物做固体支持物，其体系无水或接近于无水的任何发酵过程，固体发酵技术发展已久，应用广泛。在古代中国就已经被应用在制曲酿酒、腌制食品、肥料堆积等方面。受科技发展的限制，在过去的很长一段时间内固体发酵技术都停留在一个比较原始落后的状态，甚至在现代的工业生产上仍然在沿用这样的发酵技术。在最近二十年间，关于固体发酵技术的研究和应用得到了迅速发展，人们在固体发酵领域的研究及其在资源环境、蛋白质饲料中的应用取得了进展，主要表现在生物饲料、生物燃料、生物农药、生物转化、生物解毒及生物修复等方面的应用。目前还没有专利利用微生物和红豆杉采用固体发酵技术，增加红豆杉紫杉醇的含量，对其与益生菌进行复合培养的相关报道也十分罕见。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种适合益生菌生长、发酵后活菌数量多的用于饲料的红豆杉固体培养基及其使用方法。

为达到上述目的，本发明提供的解决方案为：红豆杉固体培养基包括如下组分：红豆杉枝条粉末、麸皮、稻壳、玉米粉、豆粕、硫酸镁和硫酸锰。

进一步的，上述红豆杉固体培养基包括如下质量份组分：10-20份红豆杉枝条粉末、60-70份麸皮、5-10份稻壳、5-10份玉米粉、5-10份豆粕、0.05-0.1份硫酸镁和0.01-0.02份硫酸锰。

利用上述常见且廉价的成分通过适当配比，即可形成利于益生菌培养的固体培养基，红豆杉枝条粉末可以是红豆杉加工中的边角料，这对红豆杉可以进行很好的二次利用。同时，红豆杉培养基能够最大限度地将其活性成分通过培养出的益生菌进行活性维存，利于后续家禽或者人类吸收，应用前景巨大。

进一步的，上述红豆杉固体培养基中所述红豆杉枝条粉末按如下方法制备：红豆杉枝条经自然风干，用粉碎机打成粉末。此处的粉末可以是数十目的粗粉也可以是200目甚至更高目数的细粉，但红豆杉枝条需是自然风干的，其最终培养出的益生菌活菌数量及其含有的红豆杉活性成分最高。

进一步的，上述红豆杉固体培养基中所述各组分构成的培养基含水量为50-55％。

本发明还提供一种利用上述红豆杉固体培养基培养益生菌的使用方法：将红豆杉枝条培养基和多种益生菌菌液分别经固体发酵，冷冻干燥粉碎后混合。

进一步的，上述红豆杉固体培养基的使用方法中所述益生菌菌液与固体培养基的比例为：300ml菌液/1kg固体培养基。

进一步的，上述红豆杉固体培养基的使用方法中所述益生菌菌液包括如下组分枯草芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、双歧杆菌菌液。这三种益生菌在本发明提供的红豆杉固体培养基中易于培养，且其复配极其适合家禽饲料的配制以提高家禽的生产速度和自身免疫能力。

进一步的，上述红豆杉固体培养基的使用方法中，所述冷冻干燥粉碎后的混合物中包括如下质量份组分的发酵产物：30～40份枯草芽孢杆菌固体发酵产物、30～40份嗜酸乳杆菌固体发酵产物和30～40份双歧杆菌固体发酵产物。

进一步的，上述红豆杉固体培养基的使用方法中，所述益生菌菌液按照如下方法与红豆杉固体培养基进行固体发酵：将枯草芽孢杆菌菌液与红豆杉固体培养基混合37℃下固体发酵至少36h，将嗜酸乳杆菌菌液与红豆杉固体培养基混合37℃下固体发酵至少36h，将双歧杆菌菌液与红豆杉固体培养基混合37℃下固体发酵至少36h，上述菌液分别发酵，将上述分别发酵的混合物混合均匀所得混合物即可用于家禽饲料的添加剂中；然后将发酵后的产物冷冻干燥后混合粉碎。

进一步的，上述红豆杉固体培养基的使用方法中，所述枯草芽孢杆菌菌液按如下方法制备：

A.将组分按质量份混合：2～5份葡萄糖、0.2～0.8份氯化钠、0.2～0.8份酵母膏和1～2份蛋白胨，将混合物pH调至7.0；

B.将枯草芽孢杆菌菌种接种至已灭菌的液体培养基中，装液量20％，培养基至于37℃恒温摇床220r/min，培养24h，即得枯草芽孢杆菌菌液；

所述嗜酸乳杆菌菌液按如下方法制备：

将嗜酸乳杆菌菌种接种至MRS培养基中，装液量20％，至37℃恒温摇床220r/min，培养24h，即得嗜酸乳杆菌菌液；

所述双歧杆菌菌液按如下方法制备：

将双歧杆菌菌种接种至MRS培养基中，装液量20％，至37℃恒温摇床220r/min，培养24h，即得双歧杆菌菌液。

采用本发明提供的红豆杉固体培养基，对益生菌进行发酵能够提高菌种的生长及其活菌数量，也开辟了一条红豆杉枝条的新用途；同时利用所述红豆杉培养基对益生菌进行培养，尤其是对枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行培养能够成为家禽饲料的添加剂以增强家禽的生长速度和免疫力，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。需要说明的是，本发明所记载的实施例仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一

红豆杉枝条经自然风干，用粉碎机打成100目粉末，按如下重量配比混合：10kg红豆杉枝条粉末、70kg麸皮、5kg稻壳、8kg玉米粉、6kg豆粕、50g硫酸镁和20g硫酸锰，用水作为粘合剂，最终形成含水量为55％的红豆杉固体培养基。

实施例二

红豆杉枝条经自然风干，用粉碎机打成200目粉末，按如下重量配比混合：20kg红豆杉枝条粉末、65kg麸皮、9kg稻壳、5kg玉米粉、10kg份豆粕、100g硫酸镁和10g硫酸锰，用水作为粘合剂，最终形成含水量为55％的红豆杉固体培养基。

实施例三

红豆杉枝条经自然风干，用粉碎机打成50目粉末，按如下重量配比混合：15kg红豆杉枝条粉末、68kg麸皮、7kg稻壳、8kg玉米粉、6kg豆粕、75g硫酸镁和15g硫酸锰，用水作为粘合剂，最终形成含水量为55％的红豆杉固体培养基。

使用例一

菌种液的制备

本实施例仅以枯草芽孢杆菌(ACCC01185)、嗜酸乳杆菌(ACCC03955)、双歧杆菌(ACCC11054)为例对发明能容进行详细介绍，并不限制菌种来源。

(1)将枯草芽孢杆菌(ACCC01185)、嗜酸乳杆菌(ACCC03955)、双歧杆菌(ACCC11054)分别活化至规定保藏斜面培养基，30℃培养24～36h。

三种菌种的保藏培养基及发酵培养基如下：

枯草芽孢杆菌(ACCC01185)保藏培养基及发酵培养基：葡萄糖0.5％；Nacl0.5％；酵母膏0.8％；蛋白胨1％；琼脂2％；pH＝7.0；

嗜酸乳杆菌(ACCC03955)、双歧杆菌(ACCC11054)保藏培养基及发酵培养基使用的是MRS培养基；MRS培养基：蛋白胨10.0g；牛肉粉5.0g酵母粉4.0g；葡萄糖20.0g；吐温801.0mL；磷酸氢二钾2.0g；乙酸钠5.0g；柠檬酸三铵2.0g；硫酸镁0.2g；硫酸锰0.05g；琼脂粉15.0g；蒸馏水1000mL；

三种菌种的发酵培养基为以上配方不加琼脂即可。

(2)将活化好的菌种分别接种于各自液体培养基中，装液量20％，37℃，220r/min培养24h至对数生长期，得到种子液，即菌液。

固体发酵及添加剂制备

(1)红豆杉固体培养基配制：红豆杉枝条粉末20％、麸皮60％、稻壳10％、玉米粉5％、豆粕5％、硫酸镁0.05％，硫酸锰0.01％，称量好各组分，并混合均匀。

(2)上述培养基混合均匀后，加入少量水润湿培养基，分别加入新鲜的已培养好的菌液，混合均匀，使其含水量保持在55％，将接种后的培养基平铺于三角瓶中，37℃条件下，静置培养36h；

(3)将培养后的产物，经过冷冻干燥，除去水分，粉碎，得各发酵产物粉末。

(4)将各发酵产物粉末按照枯草芽孢杆菌发酵产物粉末40％，嗜酸乳杆菌发酵产物粉末30％，双歧杆菌发酵产物粉末30％的比例混合均匀，即得饲料添加剂粉末。

(5)将饲料添加剂粉末按照5％的添加量加入家禽常规饲料中，正常喂养即可。

将上述制备所得的三种菌液分别与红豆杉固体培养基按照上述固体发酵步骤进行发酵后混合所得产物的活菌菌落数量如下表所示，可见其发酵效果十分良好。

序号	菌种名称	红豆杉培养基发酵后菌落计数(cfu/g)
			1	枯草芽孢杆菌
2	嗜酸乳杆菌
			3	双歧杆菌

应用例一

将纯红豆杉枝条粉末、红豆杉培养基混合物以及红豆杉固体培养基与实施例一所制得的菌液分别按照实施例二所述的培养条件进行固体发酵后的混合物进行对比喂养实验。其中实施例一中所述三种菌液分别与红豆杉固体培养基进行固体发酵，并分别冻干后再混合使用。

对比例一

将红豆杉枝条粉碎成粗粉，按1％(添加剂中红豆杉分含量)加入量添加入日常饲料中，正常喂养；

对比例二

将红豆杉枝条粉末20％、麸皮60％、稻壳10％、玉米粉5％、豆粕5％，组成为发酵添加剂，按5％添加量添加入家禽日常培养基中，正产喂养

对比效果

选取公司鸡场400只30周正在下单的母鸡作为样本，随机分成4组，每组分别喂养在单独区域内，除添加剂不同外，其他饲养条件一致进行实验，喂养60天。

得到下表结果：

名称	鸡蛋数量(个)	饲料用量(kg)	死亡数(只)
				添加剂组	4320	450	0
对比例一组	3905	405	2
				对比例二组	4012	412	1
未添加组	3950	403	1

Claims (10)

1.一种红豆杉固体培养基，其特征在于：包括如下组分：红豆杉枝条粉末、麸皮、稻壳、玉米粉、豆粕、硫酸镁和硫酸锰。

2.根据权利要求1所述的红豆杉固体培养基，其特征在于：包括如下质量份组分：10-20份红豆杉枝条粉末、60-70份麸皮、5-10份稻壳、5-10份玉米粉、5-10份豆粕、0.05-0.1份硫酸镁和0.01-0.02份硫酸锰。

3.根据权利要求1所述的红豆杉固体培养基，其特征在于：所述红豆杉枝条粉末按如下方法制备：红豆杉枝条经自然风干，用粉碎机打成粉末。

4.根据权利要求1所述的红豆杉枝条粉末的固体培养基，其特征在于：所述各组分构成的培养基含水量为50-55％。

5.如权利要求1至4中任意一项所述红豆杉固体培养基的使用方法，其特征在于：将红豆杉枝条培养基和多种益生菌菌液分别经固体发酵，冷冻干燥粉碎后混合。

6.根据权利要求5所述的红豆杉固体培养基的使用方法，其特征在于：所述益生菌菌液与固体培养基的比例为：300ml菌液/1kg固体培养基。

7.根据权利要求5所述的红豆杉固体培养基的使用方法，其特征在于：所述益生菌菌液包括如下种类：枯草芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液和双歧杆菌菌液。

8.根据权利要求5所述的红豆杉固体培养基的使用方法，其特征在于：所述冷冻干燥粉碎后的混合物中包括如下质量份组分的发酵产物：30～40份枯草芽孢杆菌固体发酵产物、30～40份嗜酸乳杆菌固体发酵产物和30～40份双歧杆菌固体发酵产物。

9.根据权利要求7或8所述的红豆杉固体培养基的使用方法，其特征在于：所述益生菌菌液按照如下方法与红豆杉固体培养基进行固体发酵：将枯草芽孢杆菌菌液与红豆杉固体培养基混合37℃下固体发酵至少36h，将嗜酸乳杆菌菌液与红豆杉固体培养基混合37℃下固体发酵至少36h，将双歧杆菌菌液与红豆杉固体培养基混合37℃下固体发酵至少36h，上述菌液分别发酵；然后将发酵后的产物冷冻干燥后混合粉碎。

10.根据权利要求9所述的红豆杉固体培养基的使用方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌菌液按如下方法制备：

A.将组分按质量份混合：2～5份葡萄糖、0.2～0.8份氯化钠、0.2～0.8份酵母膏和1～2份蛋白胨，将混合物pH调至7.0；

B.将枯草芽孢杆菌菌种接种至已灭菌的液体培养基中，装液量20％，培养基至于37℃恒温摇床220r/min，培养24h，即得枯草芽孢杆菌菌液；

所述嗜酸乳杆菌菌液按如下方法制备：

将嗜酸乳杆菌菌种接种至MRS培养基中，装液量20％，至37℃恒温摇床220r/min，培养24h，即得嗜酸乳杆菌菌液；

所述双歧杆菌菌液按如下方法制备：

将双歧杆菌菌种接种至MRS培养基中，装液量20％，至37℃恒温摇床220r/min，培养24h，即得双歧杆菌菌液。