CN109022333A - 一种复合微生物发酵菌剂的制备方法及其应用 - Google Patents

一种复合微生物发酵菌剂的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种复合微生物发酵菌剂，具体地，所述发酵菌剂包括：(a)复合微生物，其中所述复合微生物包括至少二种微生物，且所述微生物选自下组：细菌、单细胞真菌、或其组合；(b)糖类成分，其中所述糖类成分包括(b1)单糖、二糖或其组合，和(b2)糖蜜粉；(c)蛋白胨；(d)酵母提取物；和(e)任选的盐类物质；其中，所述发酵菌剂为溶解型固体制剂，并且制剂中微生物活菌数为1亿‑100亿/克制剂。本发明的复合微生物发酵菌剂菌种稳定性高、易于保存和运输、使用方便、制备成本低。

Description

一种复合微生物发酵菌剂的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，更具体的，涉及一种复合微生物发酵菌剂的生产方法及应用。
背景技术
近年来，微生物广泛应用于食品，医药，农业种植、养殖，环保等诸多领域，越来越多的科研工作者也开展益生菌的研究与应用。在日常生活中，常见的富含益生菌的产品有酸奶，保健品、固体颗粒饮料等，而酸奶主要就是利用固体发酵剂来制作的。家庭式用的发酵剂使用简单，只需将发酵剂加入至一定量的牛奶中，经过合适的温度与适当的时间即可制作成活性益生菌酸奶。
目前，在农业种植、养殖领域也有微生物发酵剂的出现。但是，绝大多数产品在使用的时候，除了加入水之外，还需额外要加入一定量的红糖，磷酸氢二钾等营养成分，培养制作方法复杂，活菌数不高，应用受到限制。
在已有的技术中，制备的复合微生物发酵菌剂只是简单的将液体或者干粉微生物制剂进行复配，在使用时需要额外加入碳源物质如红糖和麦芽汁来活化菌种。液体发酵剂不易保存，使用时额外加入碳源物质增加了终端使用成本，操作步骤稍显繁琐。目前，在农业种植、养殖，环保领域所使用的微生物产品主要以纯固体或者液体菌种出现。其中，固体菌种的稳定性较高，便于运输及保存，但是价格相对比较高，使用时需要预先激活。液体菌种价格便宜，但是菌种稳定性不高，不易保存和运输。
因此，本领域迫切需要开发菌种稳定性高、易于保存和运输、使用方便、低成本的微生物发酵菌剂。
发明内容
本发明的目的就是提供一种菌种稳定性高、易于保存和运输、使用方便、低成本的微生物发酵菌剂。
在本发明的第一方面，提供了一种复合微生物发酵菌剂，所述发酵菌剂包括：
(a)复合微生物，其中所述复合微生物包括至少二种微生物，且所述微生物选自下组：细菌、单细胞真菌、或其组合；
(b)糖类成分，其中所述糖类成分包括(b1)单糖、二糖或其组合，和(b2)糖蜜粉；
(c)蛋白胨；
(d)酵母提取物；和
(e)任选的盐类物质；
其中，所述发酵菌剂为溶解型固体制剂，并且制剂中微生物活菌数为1亿-100亿/克制剂。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂具有以下溶解性：在20℃，在100g水中，所述的发酵菌剂的溶解度≤30g，通常为10-35g，更佳地为20-30g。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂具有以下溶解性：在20℃，在100g水中，当加入30g(或20g)所述的发酵菌剂时，未溶解成分M1的重量百分比≤1％，较佳地≤0.5％，更佳地≤0.2％，其中，所述重量百分比按所述发酵菌剂的总重量计。
在另一优选例中，所述的溶解性是在将所述发酵菌剂加入水中，并放置30分钟后进行测试。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂具有即时发酵性。
在另一优选例中，所述的即时发酵性指将所述发酵菌剂与水混合后(不额外添加其他成分)就可进入发酵状态。
在另一优选例中，将所述发酵菌剂100g(其中，微生物活菌数为A0)加入2500g水中，在37℃条件下，放置48小时后，在经发酵后的水体中源自所述发酵菌剂的微生物活菌数为A1，且A1/A0之比为2-30，较佳地3-20或5-30，更佳地5-15或5-20或10-30。
在另一优选例中，所述的A1为1-15亿/ml，较佳地3-15或3-12亿/ml，更佳地4-10或5-15亿/ml。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂为颗粒状(或粉末状)。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂的平均粒径为400微米，较佳地300微米。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂中，至少90％的颗粒的粒径在300微米范围内。
在另一优选例中，在所述发酵菌剂中，糖蜜粉含量为5-60wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，在所述发酵菌剂中，糖蜜粉含量为8-50wt％，更佳地10-40wt％。
在另一优选例中，所述的组分(b1)包括葡萄糖。
在另一优选例中，所述的组分(b1)包括葡萄糖和蔗糖。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，糖蜜粉与单糖的质量比为1:1至1:10，较佳地1:2至1:8。
在另一优选例中，所述的单糖包括葡萄糖。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(b2)糖蜜粉与组分(b1)的质量比为1:1至1:12，较佳地1:2至1:10。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(c)和(d)的总质量与组分(b)的质量之比为1:5至1:50，较佳地1:8至1:30，更佳地1:10至1:20。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(c)的重量百分比为2-10wt％，较佳地3-8wt％，更佳地4-6wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(d)的重量百分比为2-10wt％，较佳地3-8wt％，更佳地4-6wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(e)的重量百分比为0.05-3wt％，较佳地0.2-2wt％，更佳地0.5-1.5wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(a)复合微生物的含量为0.1-3wt％，较佳地0.2-2wt％，更佳地0.5-1wt％。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(b)的重量百分比为70-95wt％，较佳地75-92wt％，更佳地80-90wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述的复合微生物为粉剂形式。
在另一优选例中，所述的粉剂选自下组：冻干粉剂、喷雾干燥粉剂、或其组合。
在另一优选例中，所述的酵母提取物包括酵母浸粉。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂中，微生物活菌数为1亿-100亿/g，较佳地2亿-80亿/g，更佳地5亿-50亿/g。
在另一优选例中，所述的微生物包括n种微生物，其中n为≥2的正整数，较佳地为2-50，更佳地为3-30，最佳地为3-10。
在另一优选例中，所述微生物选自下组：杆菌(bacillus)、球菌(coccus)、光合细菌(Photosynthetic Bacteria)、酵母菌(Yeast)、或其组合。
在另一优选例中，所述组分(a)包括：乳杆菌(lactobacillus)、芽孢杆菌(Bacillus)、酵母菌(Saccharomyces)、光合细菌(Photosynthetic Bacteria)，或其组合。
在另一优选例中，所述乳杆菌包括：干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、屎肠球菌(Enterococcus Faecium)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)，或其组合。
在另一优选例中，所述芽孢杆菌包括：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus Krassilnikov)，或其组合。
在另一优选例中，所述酵母菌包括：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、产朊假丝酵母(Candida utilis)，或其组合。
在另一优选例中，所述光合细菌包括：沼泽红假单胞菌(Rhodop seudanonaspalustris)。
在另一优选例中，所述组分(a)中，活菌数为≥200亿/g。
在另一优选例中，所述组分(b)包括：葡萄糖、蔗糖、红糖、糖蜜粉、淀粉等，或其组合。
在另一优选例中，所述组分(e)包括：钠盐、钾盐等，或其组合。
在另一优选例中，所述钠盐包括：乙酸钠、氯化钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钠等，或其组合。
在另一优选例中，所述钾盐包括：磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钾等，或其组合。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂包括：复合微生物、葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠、磷酸二氢钾、糖蜜粉。
在另一优选例中，所述微生物生长所需的营养成分包括：
组分(b)490-1480重量份，较佳地600-1280重量份，更佳地800-980重量份；
组分(c)1-300重量份，较佳地5-200重量份，更佳地10-100重量份；
组分(d)1-300重量份，较佳地5-200重量份，更佳地10-100重量份；
组分(e)0-20重量份，较佳地0.5-15重量份，更佳地1-10重量份。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂中，除组分(a)之外的组分包括：
葡萄糖50-980重量份，较佳地200-900重量份，更佳地790-800重量份；
蔗糖0-500重量份，较佳地0-300重量份，更佳地0-290重量份；
蛋白胨1-100重量份，较佳地5-50重量份，更佳地50重量份；
酵母浸粉1-100重量份，较佳地5-50重量份，更佳地50重量份；
磷酸二氢钾0-20重量份，较佳地0.5-10重量份，更佳地1-5重量份；
氯化钠0-20重量份，较佳地0.5-10重量份，更佳地1-5重量份；
糖蜜粉50-600重量份，较佳地100-400重量份，更佳地100重量份。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂还包括组分(f)抗结剂。
在另一优选例中，所述抗结剂包括：磷酸三钙、二氧化硅，或其组合。
在另一优选例中，所述抗结剂为磷酸三钙。
在另一优选例中，所述抗结剂在所述复合微生物发酵菌剂中的含量为0.1-5wt％，较佳地0.2-3wt％，更佳地0.25-2wt％。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂还包括(g)有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)。
在另一优选例中，所述有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)选自下组：抗坏血酸钠(Vc钠)、半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸及其钠盐、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C(抗坏血酸)、维生素E，或其组合。
在另一优选例中，所述组分(g)为抗坏血酸钠(Vc钠)。
在另一优选例中，所述组分(g)在所述复合微生物发酵菌剂中的含量为0-5wt％，较佳地0.05-3wt％，更佳地1-2wt％。
在本发明的第二方面，提供了一种复合微生物发酵菌剂的制备方法，包括步骤：
(1)提供原料成分，所述原料成分包括组分(a)、(b)、(c)、(d)、和任选的(e)，其中各组分如本发明第一方面中所定义；和
(2)将所述原料成分进行混合，从而形成本发明第一方面所述的复合微生物发酵菌剂。
在另一优选例中，所述的原料成分还包括：组分(f)：抗结剂。
在另一优选例中，所述的原料成分还包括：组分(g)：保护剂。
在另一优选例中，所述抗结剂包括：磷酸三钙、二氧化硅，或其组合。
在另一优选例中，所述抗结剂为磷酸三钙。
在另一优选例中，所述抗结剂在所述复合微生物发酵菌剂中的含量为0.1-5wt％，较佳地0.2-3wt％，更佳地0.25-2wt％。
在另一优选例中，所述有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)选自下组：抗坏血酸钠(Vc钠)、半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸及其钠盐、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C(抗坏血酸)、维生素E，或其组合。
在另一优选例中，所述有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)为抗坏血酸钠(Vc钠)。
在另一优选例中，所述有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)在所述复合微生物发酵菌剂中的含量为0-5wt％，较佳地0.05-3wt％，更佳地1-2wt％。
在本发明的第三方面，提供了一种水体处理方法，所述方法包括步骤：
(a)向需要处理的水体中，添加本发明第一方面所述的复合微生物发酵菌剂，或用所述复合微生物发酵菌剂发酵形成的发酵液。
在另一优选例中，所述发酵包括步骤：
(i)提供所述的复合微生物发酵菌剂；
(ii)将所述复合微生物发酵菌剂与水混合，形成第一混合物；和
(iii)在适合发酵的条件下，对第一混合物进行发酵培养，从而获得经发酵的发酵液(即活性菌剂)。
在另一优选例中，所述步骤(ii)中，所述的第一混合物中，原复合微生物发酵菌剂的质量占第一混合物的1-5％，较佳地2-4％，更佳地4％。
在另一优选例中，所述步骤(iii)中，所述适合发酵的条件中，培养的温度为25-40℃，较佳地28-32℃，更佳地30℃。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述适合发酵的条件中，培养的时间为2-5天，较佳地3-4.5天，更佳地4天。
在另一优选例中，所述水体包括：江河、湖泊、运河、河道、水库、水塘、水池，或其组合。
在另一优选例中，所述水体为水产养殖业的水塘。
在另一优选例中，所述水产养殖业的水塘中，所述活性菌剂(II)的施用量为0.1-5kg/亩，较佳地0.5-3kg/亩，更佳地0.8-2kg/亩，最佳地1kg/亩。
在另一优选例中，所述水产养殖业的水塘中，所述活性菌剂(II)的施用频率为1-5次/月，较佳地2-4次/月，更佳地4次/月。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂中，复合微生物包括：枯草芽孢杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌等。
在另一优选例中，所述水体为养殖业的粪水处理池。
在另一优选例中，所述养殖业的粪水处理池中，所述活性菌剂(II)的施用量为0.1-5kg/m3，较佳地0.5-2kg/m3，更佳地0.8-1.2kg/m3，最佳地1kg/m3。
在另一优选例中，所述养殖业的粪水处理池中，所述活性菌剂(II)的施用频率为1-5次/月，较佳地2-4次/月，更佳地4次/月。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂中，复合微生物包括：地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、屎肠球菌、干酪乳杆菌、光合细菌等。
在本发明的第四方面，提供了一种除臭方法，所述方法包括步骤：
(a)向需要处理的空间中，施用本发明第一方面所述的复合微生物发酵菌剂，或用所述复合微生物发酵菌剂发酵形成的发酵液。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂中，复合微生物包括：枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌等。
在另一优选例中，所述需要处理的空间包括：垃圾中转站、垃圾填埋场、肠衣加工厂、畜禽养殖舍、餐厨垃圾加工厂、有机肥加工厂、化工厂、制药厂。
在另一优选例中，所述需要处理的空间的空气中包括：超标的氨气、硫化氢、挥发性脂肪酸、粪臭素、甲胺类、硫醇类、甲苯类，或其组合。
在另一优选例中，所述活性菌剂(II)的施用量为100-2000g/100m2，较佳地500-1500g/100m2，更佳地800-1000g/100m2。
在另一优选例中，所述活性菌剂(II)的施用频率为1-10次/月，较佳地2-8次/月，更佳地4-6次/月。
在另一优选例中，所述方法中，在步骤(a)中，所述施用之前还包括步骤：将所述的复合微生物发酵菌剂，或用所述复合微生物发酵菌剂发酵形成的发酵液进行加水稀释，并进行雾化处理。
在另一优选例中，所述稀释的比例为10-50倍，较佳地15-30倍，更佳地20-25倍。
在另一优选例中，所述施用的方式为使用喷淋塔进行喷淋。
在另一优选例中，所述雾化处理过的活性菌剂(II)的施用时长为0.5-12小时/天，较佳地1-8小时/天，更佳地2-4小时/天。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，经过大量的筛选，首次开发出一种同时包括复合微生物和微生物生长所需的营养成分的复合微生物发酵菌剂。制备好的复合微生物发酵菌剂为全溶解型粉末，稳定性和均一性较好，细度可达40-60目，使用方法简单，只需按照1％-5％的比例加入水，置于合适的容器中，25-40度发酵2-5天，经活菌计数检测，可获得1-20亿/ml的活性微生物。在此基础上完成了本发明。
术语
如本文所用，“复合微生物发酵菌剂”、“本发明发酵菌剂”、“本发明复合微生物制剂”、“本发明的溶解型固体制剂”等可互换使用，指本发明第一方面中所述的发酵菌剂。
复合微生物发酵菌剂
本发明提供了一种复合微生物发酵菌剂，所述发酵菌剂包括：
(a)复合微生物，其中所述复合微生物包括至少二种微生物，且所述微生物选自下组：细菌、单细胞真菌、或其组合；(b)糖类成分，其中所述糖类成分包括(b1)单糖、二糖或其组合，和(b2)糖蜜粉；(c)蛋白胨；(d)酵母提取物；和(e)任选的盐类物质；
其中，所述发酵菌剂为溶解型固体制剂，并且制剂中微生物活菌数为1亿-100亿/克制剂。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂具有以下溶解性：在20℃，在100g水中，当加入30g所述的发酵菌剂时，未溶解成分M1的重量百分比≤1％，较佳地≤0.5％，更佳地≤0.2％，其中，所述重量百分比按所述发酵菌剂的总重量计。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂具有即时发酵性。在另一优选例中，所述的即时发酵性指将所述发酵菌剂与水混合后(不额外添加其他成分)就可进入发酵状态。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂为颗粒状(或粉末状)。
在另一优选例中，所述的发酵菌剂的平均粒径为400微米，较佳地300微米。在另一优选例中，所述的发酵菌剂中，至少90％的颗粒的粒径在300微米范围内。
在另一优选例中，在所述发酵菌剂中，糖蜜粉含量为5-60wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述的组分(b1)包括葡萄糖和/或蔗糖。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，糖蜜粉与单糖的质量比为1:1至1:10，较佳地1:2至1:8。在另一优选例中，所述的单糖包括葡萄糖。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(b2)糖蜜粉与组分(b1)的质量比为1:1至1:12，较佳地1:2至1:10。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(c)和(d)的总质量与组分(b)的质量之比为1:5至1:50，较佳地1:8至1:30，更佳地1:10至1:20。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(c)的重量百分比为2-10wt％，较佳地3-8wt％，更佳地4-6wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(d)的重量百分比为2-10wt％，较佳地3-8wt％，更佳地4-6wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(e)的重量百分比为0.05-3wt％，较佳地0.2-2wt％，更佳地0.5-1.5wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(a)复合微生物的含量为0.1-3wt％，较佳地0.2-2wt％，更佳地0.5-1wt％。
在另一优选例中，所述发酵菌剂中，组分(b)的重量百分比为70-95wt％，较佳地75-92wt％，更佳地80-90wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
在另一优选例中，所述的复合微生物为粉剂形式。在另一优选例中，所述的粉剂选自下组：冻干粉剂、喷雾干燥粉剂、或其组合。
在另一优选例中，所述的酵母提取物包括酵母浸粉。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂中，微生物活菌数为1亿-100亿/g，较佳地2亿-80亿/g，更佳地5亿-50亿/g。
在另一优选例中，所述的微生物包括n种微生物，其中n为≥2的正整数，较佳地为2-50，更佳地为3-30，最佳地为3-10。
在另一优选例中，所述微生物选自下组：杆菌、球菌、光合细菌、酵母菌、或其组合。
在另一优选例中，所述组分(a)包括：乳杆菌(lactobacillus)、芽孢杆菌(Bacillus)、酵母菌(Saccharomyces)、光合细菌(Photosynthetic Bacteria)，或其组合。在另一优选例中，所述乳杆菌包括：干酪乳杆菌、屎肠球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌，或其组合。在另一优选例中，所述芽孢杆菌包括：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌，或其组合。在另一优选例中，所述酵母菌包括：酿酒酵母、产朊假丝酵母，或其组合。在另一优选例中，所述光合细菌包括：沼泽红假单胞菌。
在另一优选例中，所述组分(a)中，活菌数为≥200亿/g。
在另一优选例中，所述组分(b)包括：葡萄糖、蔗糖、红糖、糖蜜粉、淀粉等，或其组合。
在另一优选例中，所述组分(e)包括：钠盐、钾盐等，或其组合。
在另一优选例中，所述钠盐包括：乙酸钠、氯化钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钠等，或其组合。在另一优选例中，所述钾盐包括：磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钾等，或其组合。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂包括：复合微生物、葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠、磷酸二氢钾、糖蜜粉。
在另一优选例中，所述微生物生长所需的营养成分包括：
组分(b)490-1480重量份，较佳地600-1280重量份，更佳地800-980重量份；
组分(c)1-300重量份，较佳地5-200重量份，更佳地10-100重量份；
组分(d)1-300重量份，较佳地5-200重量份，更佳地10-100重量份；
组分(e)0-20重量份，较佳地0.5-15重量份，更佳地1-10重量份。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂中，除组分(a)之外的组分包括：
葡萄糖50-980重量份，较佳地200-900重量份，更佳地790-800重量份；
蔗糖0-500重量份，较佳地0-300重量份，更佳地0-290重量份；
蛋白胨1-100重量份，较佳地5-50重量份，更佳地50重量份；
酵母浸粉1-100重量份，较佳地5-50重量份，更佳地50重量份；
磷酸二氢钾0-20重量份，较佳地0.5-10重量份，更佳地1-5重量份；
氯化钠0-20重量份，较佳地0.5-10重量份，更佳地1-5重量份；
糖蜜粉50-600重量份，较佳地100-400重量份，更佳地100重量份。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂还包括组分(f)抗结剂。
在另一优选例中，所述抗结剂为磷酸三钙。在另一优选例中，所述抗结剂在所述复合微生物发酵菌剂中的含量为0.1-5wt％，较佳地0.2-3wt％，更佳地0.25-2wt％。
在另一优选例中，所述复合微生物发酵菌剂还包括(g)有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)。
在另一优选例中，所述组分(g)为抗坏血酸钠(Vc钠)。在另一优选例中，所述组分(g)在所述复合微生物发酵菌剂中的含量为0-5wt％，较佳地0.05-3wt％，更佳地1-2wt％。
在一个典型的实施例中，本发明的发酵菌剂中除了微生物之外的原料配比为：葡萄糖200-900重量份、蔗糖10-300重量份、蛋白胨5-50重量份、酵母浸粉5-50重量份、磷酸二氢钾1-5重量份、氯化钠1-5重量份、糖蜜粉50-400重量份。
本发明所提供的复合微生物发酵菌剂，是将高浓度的粉剂微生物菌种和其营养成分复配，经过配方筛选优化和混合后稳定性优化之后，制备成全溶解型复合微生物发酵菌剂，在使用的时候，操作简单，只需加入溶剂水，在春夏秋季当中，室温静置2-3天，即可获得高活性的新鲜复合微生物，实现即用即配。制备好的复合微生物可应用于水产畜禽养殖，环保水处理，微生物除臭，农业种植等诸多领域，方法简单、成本低、便于推广和应用。
干粉菌剂
本发明复合微生物发酵菌剂的一个主要成分是活的微生物，优选干粉菌剂。
在本发明中，可选择各个菌种的高浓度干粉菌剂，通常活菌数要求100亿/g以上，较佳地200亿/g以上。
在本发明中，高浓度干粉菌剂可采用常规方法制备或通过市售方式获得。一种典型的干粉菌剂的生产工艺流程包括：以500L发酵罐生产植物乳杆菌冻干粉为例，取甘油管保存的菌种2ml接种至200ml一级种子MRS培养液中，培养好之后再转接至10L二级MRS种子培养液中，培养好之后转接至500L的发酵罐中进行高密度补料分批发酵，培养好的发酵液中活菌数可达200亿/ml，将发酵液高速离心收集菌泥，加入相应的冻干保护剂混合均匀，超低温冻干制备出活菌数5000亿/g以上的冻干粉，可低温保存一年以上。
在另一优选例中，高浓度干粉菌剂是从专业微生物菌剂生产企业采购的不同的干粉菌剂，再根据复合微生物发酵菌剂的应用需要来进行复配制备。
复合微生物发酵菌剂的制备方法
本发明提供了一种复合微生物发酵菌剂的制备方法，包括步骤：
(1)提供原料成分，所述原料成分包括组分(a)复合微生物，其中所述复合微生物包括至少二种微生物，且所述微生物选自下组：细菌、单细胞真菌、或其组合；(b)糖类成分，其中所述糖类成分包括(b1)单糖、二糖或其组合，和(b2)糖蜜粉；(c)蛋白胨；(d)酵母提取物；和(e)任选的盐类物质；和
(2)将所述原料成分进行混合，从而形成本发明第一方面所述的复合微生物发酵菌剂。
在另一优选例中，所述的原料成分还包括：组分(f)：抗结剂。
在另一优选例中，所述的原料成分还包括：组分(g)：保护剂。
在另一优选例中，所述抗结剂包括：磷酸三钙、二氧化硅，或其组合。在另一优选例中，所述抗结剂为磷酸三钙。在另一优选例中，所述抗结剂在所述复合微生物发酵菌剂中的含量为0.1-5wt％，较佳地0.2-3wt％，更佳地0.25-2wt％。
在另一优选例中，所述有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)选自下组：抗坏血酸钠(Vc钠)、半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸及其钠盐、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C(抗坏血酸)、维生素E，或其组合。
在另一优选例中，所述有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)为抗坏血酸钠(Vc钠)。在另一优选例中，所述有助于保持微生物活力的物质(如保护剂)在所述复合微生物发酵菌剂中的含量为0-5wt％，较佳地0.05-3wt％，更佳地1-2wt％。
在本发明中，制备好的复合微生物发酵菌剂为全溶解型粉末，稳定性和均一性较好，细度可达40-60目，使用方法简单，只需按照1％-5％的比例加入水，置于合适的容器中，25-40度发酵2-5天，经活菌计数检测，可获得1-20亿/ml的活性微生物。发酵好的活性菌液pH在3-4之间，出现均匀细腻的菌体悬浮在液体中，略有酸香味。
复合微生物发酵菌剂的应用
本发明的复合微生物发酵菌剂，根据应用的领域不同，可以对复合微生物发酵菌剂中的粉剂微生物种类进行调整。
比如在水产养殖中，选择枯草芽孢杆菌，屎肠球菌和乳杆菌作为发酵剂菌种，经过养殖塘口现场简单的塑料桶扩培发酵，可获得5亿/ml以上乳酸菌，2亿/ml以上的枯草芽孢杆菌。扩培的活性发酵液可以直接泼洒在水塘中净化水质，构建水塘的生态平衡，也可按照一定的比例拌食饲料投喂，提高饲料利用率，改善水产动物肠道健康。
在规模化养殖场，垃圾中转站等需要除臭领域，可选择枯草芽孢杆菌，植物乳杆菌和凝结芽孢杆菌作为发酵剂菌种，扩培后的活性复合微生物发酵液，用水稀释10-100倍，可直接喷洒在需要除臭的空间，在短时间内即可降低氨气，硫化氢，挥发性脂肪酸等臭味物质，除臭方法简便，使用效果明显，保持期长。
在养殖场粪水，垃圾渗滤液，污水厂等氨氮和COD含量较高等处理领域，可选择枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，光合细菌，屎肠球菌，干酪乳杆菌，植物乳杆菌，巨大芽孢杆菌，酵母菌作为发酵剂菌种，扩培后的活性复合微生物发酵液，按照一定的比例投放到水体中，可降低氨氮至5mg/L以下，降低COD至200mg/L以下。
复合微生物发酵菌剂中的营养成分
本发明将微生物生长所需的通用营养成分复配在一起，既要满足微生物生长所需，又要保证各种成分混合在一起之后的稳定性、均一性、以及方便使用。
微生物生长所需的营养成分主要为碳源、氮源、无机盐及少量维生素、氨基酸等。其中最关键的成分就是碳源和氮源，在发酵中常用的碳源有葡萄糖，蔗糖，红糖，淀粉等，其中葡萄糖和蔗糖为白色颗粒，稳定性和均一性较好；红糖为褐色颗粒，有粘性易结块；淀粉为大分子碳源，使用时需要配合淀粉酶。优选葡萄糖和蔗糖作为碳源，蔗糖的颗粒较大，因此，更优选葡萄糖。
发酵中常用的氮源主要有蛋白胨，酵母浸粉，酵母膏、牛肉膏，黄豆饼粉、豆粕粉等，其中蛋白胨、酵母浸粉、酵母膏、牛肉膏为速效氮源，稳定性和均一性较好；黄豆饼粉和豆粕粉为迟效氮源，颗粒较大，在水中溶解性不好。优选速效氮源蛋白胨、酵母浸粉、酵母膏和牛肉膏，而酵母膏和牛肉膏为固体膏状，若要使用时需要单独包装，因此更优选蛋白胨和酵母浸粉。
发酵中常用的无机盐主要有钠盐和钾盐、其中钠盐主要包括乙酸钠、氯化钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钠等，钾盐主要有磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钾等，优选氯化钠和磷酸二氢钾。
除以上成分外，微生物发酵还需要少量的维生素、辅因子、氨基酸、微量元素等，如若每一种成分单独加入，混合时不方便，成本也高。糖蜜粉有机物含量80％，富含上述营养成分，黄褐色粉末状，稳定性和均一性较好，较适合作为营养成分。
综上所述，营养成分优选葡萄糖，蔗糖，蛋白胨，酵母浸粉，氯化钠，磷酸二氢钾，糖蜜粉。
本发明的主要优点在于：
(1)本发明制备的复合微生物发酵菌剂为粉剂产品，均一性较好，全溶解型，保存周期长，便于包装和运输。
(2)本发明复合微生物发酵菌剂产品可根据需要，在2-5天内制备出新鲜的高活性微生物，使用方法简单，应用范围广，成本低。
(3)本发明可针对不同的应用领域开发具有针对性的定制的溶解型复合微生物发酵菌剂产品，满足不同行业的需求。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
如无特别说明，实施例所用的材料和试剂均为市售产品。
材料和通用方法
干粉菌剂
干粉菌剂购自专业微生物菌剂的生产企业采购，必要时，可根据复合微生物发酵菌剂的应用需要来进行复配。
活菌数量的测定
1.1发酵
制备混合好的复合微生物发酵菌剂按照1-5％的比例加入水溶解，置于合适的容器中密封发酵，25-40度发酵2-5天(通常为48小时)。另外，pH变可为3-4之间，出现均匀细腻的菌体悬浮在液体中，略有酸香味，可判断发酵结束。
1.2计数
发酵好的活性微生物(或未经发酵处理的发酵菌剂)可选择适当的培养基进行逐级稀释法平板涂布活菌计数。取1ml活性发酵液加入至9ml无菌水中稀释10倍，为一级稀释10-1梯度，再取一级稀释液1ml至9ml无菌水中再稀释10倍，为二级稀释10-2梯度，依此类推稀释至10-5，10-6，10-7，10-8后取1ml涂平板培养，分别统计各自平板菌落总数，只统计平板上30-300个菌数的平板，每个样品做3个平行，计算平均数。乳酸菌选择标准MRS培养基，芽孢杆菌选择标准营养琼脂培养基，酵母菌可选择标准YPD培养基，37度培养箱培养1-2天。
实施例1复合微生物发酵菌剂的营养成分配方优化及抗结稳定性的优化
复合微生物菌剂选择枯草芽孢杆菌，屎肠球菌，植物乳杆菌。
复合微生物菌剂用量如下：5000亿粉剂枯草芽孢杆菌取2份，5000亿粉剂屎肠球菌取2份，5000亿粉剂植物乳杆菌取2份。
营养成分原料配方优选：葡萄糖，蔗糖，蛋白胨，酵母浸粉，氯化钠，磷酸二氢钾，糖蜜粉。
考察所选营养成分复配混合后，再经过发酵后的活菌数量，同时考察复配后发酵菌剂的抗结稳定性。
如表1所示，进行营养成分的复配优化，使用量单位：份，混合后按照4％的用量加水培养2天。
表1营养成分复配的优化
由上表可以看出，在基本营养成分碳源、氮源、无机盐等存在的情况下，经过培养发酵后，活菌数都可以达到数亿级/ml。从2和3，4和5的比较中可以看出，碳源用蔗糖取代部分葡萄糖，活菌数稍有下降，所以优选葡萄糖。1和2的比较中，加入无机盐氯化钠和磷酸二氢钾对活菌数有所提高。4号配方中提高了糖蜜粉的比例，减少了葡萄糖的用量，活菌数有所下降。6号配方减少了氮源蛋白胨和酵母浸粉的用量，活菌数也有所降低，同时7号配方中也增加糖蜜粉取代部分葡萄糖，活菌数依然降低。综上所述，优选2号配方中各营养成分的用量份数，可以实现发酵后的活菌数保持在较高的水平。
此外，配方1-3的A1/A0之比均大于5。
同时，对上述7个配方混合的发酵菌剂抗结稳定性进行考察。由于蛋白胨，酵母浸粉，糖蜜粉属于易吸潮物质，用量如果太多，整个发酵菌剂在混合的过程中就极易吸潮导致在保存的过程中结块，不利于后续操作。因此，在优选的2号配方的混合料中加入抗结剂磷酸三钙，并对其用量比例进行优化，在6个月内，对结块程度进行考察。
表2发酵菌剂抗结稳定性的考察
由上表可以看出，发酵菌剂中磷酸三钙的添加量在0.25％以上，可保持较好的形态，不易结块。除此之外，值得注意的是，在夏季高温期，混合发酵剂若放置在室温环境下，更容易结块。因此，混合后的发酵菌剂除了加入磷酸三钙以外，可存放至25度以下的环境中，保持良好的抗结稳定性，均一性。加入磷酸三钙的发酵菌剂经过培养之后，活菌数量同样可以达到数亿/ml，不影响微生物的生长。
实施例2复合微生物发酵菌剂使用量比例的优化
复合微生物选择枯草芽孢杆菌，屎肠球菌，植物乳杆菌。
复合微生物菌剂用量如下：5000亿粉剂枯草芽孢杆菌取2份，5000亿粉剂屎肠球菌取2份，5000亿粉剂植物乳杆菌取2份，
营养成分原料配比如下：葡萄糖294份，蔗糖200份，糖蜜粉200份，磷酸二氢钾50份，氯化钠50份，酵母浸粉100g份，蛋白胨100份。
上述物料配制好的复合微生物发酵菌剂按照1-5％的添加比例加入水进行发酵，温度选择37度，发酵4天后放置在室温下保存，检测活菌数，结果如下：
表3发酵菌剂使用量添加比例优化
由上表可以看出，发酵液的起始活菌数维持在0.3-1.5亿/ml，最终的活菌数都可以达到数亿/ml，同时菌体湿重有着明显的增加，提高了生物量。此外，发酵菌剂的使用量比例越大，活菌数和菌体湿重量越高，发酵2-4天的活菌数变化基本不大，发酵结束后，在常温下保存至15天，菌体湿重增加，但是活菌数均下降至千万/ml，因此，在实际使用发酵过程中，可根据用量需求来制备活性微生物，并且在一周内使用完，可以保证活性微生物发挥最大的功能。
综合考虑发酵时间、活菌数量、菌体含量以及使用领域，发酵菌剂的使用量比例控制在2-4％之间即可。
实施例3复合微生物发酵菌剂中加入保护剂抗坏血酸钠
抗坏血酸钠(Vc钠)具有抗氧化的作用，在微生物发酵体系中加入Vc钠，其进入微生物细胞内，有利于维持较低的氧化还原电势，保持微生物的活性，提高活菌数量。对其在培养发酵液中添加量比例进行考察。
复合微生物选择枯草芽孢杆菌，屎肠球菌，植物乳杆菌，
复合微生物菌剂用量如下：5000亿粉剂枯草芽孢杆菌取2份，5000亿粉剂屎肠球菌取2份，5000亿粉剂植物乳杆菌取2份。
营养成分原料配方：葡萄糖790份，蛋白胨50份，酵母浸粉50份，氯化钠5份，磷酸二氢钾5份，糖蜜粉100份。
按照4％的用量进行发酵培养，根据发酵液的体积，按照表4添加相应量的Vc钠，考察培养6个月内的活菌数量。
表4复合发酵剂的培养液中添加Vc钠对活菌数的考察
由上述结果可以看出，在培养液中随着Vc钠的添加，活菌数都有不同程度的提高。其中1号不添加Vc钠，在培养液存放3-6个月后，活菌数下降到千万级/ml的水平。而添加了Vc钠，可以维持活菌数在数亿级/ml。Vc钠的添加量在0.5％以上可以使活菌数达到10亿/ml以上。
综上所述，优选Vc钠在发酵液中的添加量范围0.5％-2％时，可保持活菌数在10亿/ml以上，并且在保存数月之后还可以维持至亿级/ml的水平。复合微生物菌剂按照4％使用量培养，换算之后，Vc钠在复合发酵菌剂的使用配比为1.25-50％，优选12.5-50％。如若考虑到使用成本，更优选12.5％的使用配比，即可满足实际的应用需求。
实施例4复合微生物发酵菌剂保存数月后的活菌数考察
复合微生物选择枯草芽孢杆菌，屎肠球菌，植物乳杆菌。
复合微生物菌剂用量如下：5000亿粉剂枯草芽孢杆菌取2份，5000亿粉剂屎肠球菌取2份，5000亿粉剂植物乳杆菌取2份。
营养成分原料配比如下：葡萄糖444份，蔗糖50份，糖蜜200份，磷酸二氢钾50份，氯化钠50份，酵母浸粉100g份，蛋白胨100份。
上述物料配制好的复合微生物发酵菌剂装入铝箔袋后封口，在25度室温阴凉干燥处存放。然后分别在0个月，3个月，6个月，12个月对保存的发酵菌剂，按照4％的添加比例，37度培养箱中，再进行发酵培养2天后，活菌计数检测，结果如下：
表5发酵菌剂保存周期考察
检测内容 0个月 3个月 6个月 12个月
活菌数(亿/ml) 7.2 6.8 4.9 5.6
菌体湿重(g/L) 3.1 2.92 2.88 3.02
可以看出，常温下保存初始0个月和随后的3个月，6个月，12个月的样品，再进行发酵培养活性微生物，依然可以维持在数亿/ml级别的活菌数，不影响产品的制备液体活性微生物的使用效果。
实施例5水产养殖用复合微生物发酵菌剂的制备及应用
水产养殖用复合微生物选择枯草芽孢杆菌，屎肠球菌，嗜酸乳杆菌。
复合微生物菌剂用量如下：5000亿粉剂枯草芽孢杆菌取2份，5000亿粉剂屎肠球菌取2份，5000亿粉剂嗜酸乳杆菌取2份，
营养成分原料配比如下：葡萄糖294份，红糖200份，糖蜜粉200份，磷酸二氢钾50份，氯化钠50份，酵母浸粉100g份，蛋白胨100份。
上述物料配制好的复合微生物发酵菌剂按照4％的用量比例加入水进行简单发酵，温度30度，发酵4天制备出新鲜的活性微生物。在江苏宜兴某大闸蟹养殖基地进行使用。水塘面积20亩，于4月份蟹生长初期在水塘使用，按照每亩用量1kg液体菌剂泼洒，每周使用1次。同时在饲料中添加2％的菌液拌料后投喂。整个养殖周期，未使用其他抗生素等药剂。11月份收获期，亩产280斤，四两以上的蟹占比20％。整个养殖过程中，由于活性微生物菌剂的使用，水塘水质表现比较稳定，未出现大规模病情，无抗生素使用，饲料利用率提高，整体产量和大蟹数量相较往年要高。
实施例6环保用复合微生物发酵菌剂的制备及应用
复合微生物选择地衣芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，屎肠球菌，干酪乳杆菌，光合细菌。
复合微生物菌剂用量如下：2000亿粉剂地衣芽孢杆菌取5份，5000亿粉剂枯草芽孢杆菌取5份，1000亿粉剂巨大芽孢杆菌取2份，5000亿粉剂屎肠球菌取2份，5000亿粉剂干酪乳杆菌取2份，1000亿光合细菌取2份。
营养成分原料配比如下：葡萄糖594份，红糖100份，糖蜜150份，磷酸二氢钾25份，氯化钠25份，酵母浸粉40g份，蛋白胨40份。
上述物料配制好的复合微生物发酵菌剂按照4％的用量加入水，30度密封培养4天制备出新鲜的活性微生物，投放于养殖场粪水处理池中。投放量按照1立方处理粪水使用液体菌种1kg。投放前后，粪水池中COD，氨氮，总氮含量如下表6所示：
表6微生物菌剂在养殖粪水中的作用
后续未在进行补充菌种，粪水池中各项指标基本稳定，未有大幅度变化，达到排放标准。由此可见，新鲜的活性微生物按照适当的投放量加入至粪水中后，有利于粪水池中建立稳定、固有的微生物平衡，实现可持续的粪污处理能力。
实施例7除臭用复合微生物发酵菌剂的制备及应用
除臭用复合微生物选择枯草芽孢杆菌，凝结芽孢杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌。
复合微生物菌剂用量如下：5000亿粉剂枯草芽孢杆菌取2份，1000亿粉剂凝结芽孢杆菌取5份，5000亿粉剂嗜酸乳杆菌取2份，5000亿粉剂植物乳杆菌取2份，
营养成分原料配比如下：葡萄糖539份，蔗糖50份，糖蜜100份，磷酸二氢钾50份，氯化钠50份，酵母浸粉100g份，蛋白胨100份。
上述物料配制好的复合微生物发酵菌剂按照4％的用量比例加入水进行简单发酵，温度选择30度，发酵4天后制备出新鲜的活性除臭用微生物。
在临安市某规模化养猪场，其中一个300平方的养殖猪舍中试验，氨气浓度15ppm，有明显的刺激性粪便臭气味，采用制备好的液体活性微生物菌剂进行喷洒除臭。300平方的除臭空间使用3kg制备好的液体活性菌剂，用水稀释10倍后用喷雾器喷洒至整个养殖空间，2小时内，猪舍中臭味极大的减轻，经检测后氨气浓度降低至2ppm以下。一周内使用2次，可维持整个养殖舍内空气洁净。
肠衣厂臭味去除试验，在湖南某肠衣生产加工肝素钠企业，由于高温加热工艺及肠衣自身存在恶臭气味，其主要臭气成分为氨气、硫化氢、挥发性脂肪酸、粪臭素等。工厂臭味处理采用两种工艺，生产加工车间顶部安装有雾化器，覆盖整个厂房。其余臭气通过管道收集，再进入喷淋塔中除臭。将制备好的新鲜活性液体除臭微生物稀释20倍之后，加入至雾化和喷淋塔管路，处理当天臭味程度减轻60％以上，持续使用两周后，车间内臭味极大减轻，在后续正常维护期内，车间雾化每天只需运行2-4小时，喷淋塔除臭剂菌液需要1-2周更换一次。
实施例8复合微生物发酵菌剂的溶解性测试
1.测试方法
在20℃，在100g水中，当加入10g、20g和30g所述的发酵菌剂(实施例1－7中)，搅拌混合均匀，放置30分钟后，分离不溶物，将不溶物干燥、称重，从而评估溶解性。
2.测试结果
未溶解成分M1的重量百分比≤1％，较佳地≤0.5％，更佳地≤0.2％，实验添加比例都体现了优良的溶解性。
在实际使用时，发酵菌剂的用量比较少，仅需1-5％的用量即可，即100g水中，加入1-5g的发酵菌剂，可充分溶解。
表7发酵菌剂的溶解性测试
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种复合微生物发酵菌剂，其特征在于，所述发酵菌剂包括：
(a)复合微生物，其中所述复合微生物包括至少二种微生物，且所述微生物选自下组：细菌、单细胞真菌、或其组合；
(b)糖类成分，其中所述糖类成分包括(b1)单糖、二糖或其组合，和(b2)糖蜜粉；
(c)蛋白胨；
(d)酵母提取物；和
(e)任选的盐类物质；
其中，所述发酵菌剂为溶解型固体制剂，并且制剂中微生物活菌数为1亿-100亿/克制剂。
2.如权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂，其特征在于，所述的发酵菌剂具有以下溶解性：在20℃，在100g水中，当加入30g所述的发酵菌剂时，未溶解成分M1的重量百分比≤1％，较佳地≤0.5％，更佳地≤0.2％，其中，所述重量百分比按所述发酵菌剂的总重量计。
3.如权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂，其特征在于，所述的发酵菌剂具有即时发酵性。
4.如权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂，其特征在于，所述的发酵菌剂为颗粒状(或粉末状)。
5.如权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂，其特征在于，所述的发酵菌剂的平均粒径为400微米，较佳地300微米。
6.如权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂，其特征在于，在所述发酵菌剂中，糖蜜粉含量为5-60wt％，按所述发酵菌剂中除组分(a)复合微生物之外的总重量计。
7.如权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂，其特征在于，所述微生物生长所需的营养成分包括：
组分(b)490-1480重量份，较佳地600-1280重量份，更佳地800-980重量份；
组分(c)1-300重量份，较佳地5-200重量份，更佳地10-100重量份；
组分(d)1-300重量份，较佳地5-200重量份，更佳地10-100重量份；
组分(e)0-20重量份，较佳地0.5-15重量份，更佳地1-10重量份。
8.一种复合微生物发酵菌剂的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(1)提供原料成分，所述原料成分包括组分(a)、(b)、(c)、(d)、和任选的(e)，其中各组分如权利要求1中所定义；和
(2)将所述原料成分进行混合，从而形成权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂。
9.一种水体处理方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(a)向需要处理的水体中，添加权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂，或用所述复合微生物发酵菌剂发酵形成的发酵液。
10.一种除臭方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(a)向需要处理的空间中，施用权利要求1所述的复合微生物发酵菌剂，或用所述复合微生物发酵菌剂发酵形成的发酵液。
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