CN105265769B - 一种多功能菌发酵复合酶饲料及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多功能菌发酵复合酶饲料，由白曲霉菌、拟内孢霉菌和芽孢杆菌按体积比(1‑2)：(2‑3)：(4‑6)复合的菌液，与饲料混合、发酵，然后向发酵后的发酵料中加入由酵母菌、益生菌和光合菌按体积比(2‑3)：(4‑6)：(2‑3)复合的菌液，进行厌氧发酵而制成；所述饲料是由麸皮、豆饼粉和蘑菇菌渣按质量比(50‑70)：(10‑20)：(10‑20)混合而成。本发明还公开了该复合酶饲料的制备方法。本发明的复合酶饲料由多种菌对饲料进行发酵，不仅产生了酸性蛋白酶、中性蛋白酶和纤维素酶，还大幅提高了饲料中的蛋白含量，并且能够有效消除牲畜粪便异味。

Description

一种多功能菌发酵复合酶饲料及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种多功能菌发酵复合酶饲料及其制备方法。

背景技术

饲用复合酶是一类水解酶，包括淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等多种酶。家畜添食中的有机物有相当一部分不能被消化，而添加复合酶能补充动物内源酶的不足，消除饲料中的抗营养因子，可显著提高饲料的利用率，扩大可以用饲料资源范围，降低养殖成本，改善养殖生态环境。

近几年来人们对酶在饲料工业中的应用取得了快速的发展，在畜禽应用上取得了很好的效果。据报道,猪、鸡增重均在5-40％之间,节约饲料10-30％,并且可以减少畜、禽疾病和死亡率。但同时我国复合酶发酵饲料也存在着菌种单一，发酵技术落后等不足，造成我国复合酶发酵饲料的不稳定，达不到预期效果。

发明内容

针对上述现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种多功能菌发酵复合酶饲料，由多种菌对饲料进行发酵，不仅产生了酸性蛋白酶、中性蛋白酶和纤维素酶，还大幅提高了饲料中的蛋白含量，并且能够有效消除牲畜粪便异味。

本发明的另一目的是提供该多功能菌发酵复合酶饲料的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种多功能菌发酵复合酶饲料，由白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌按体积比(1-2)：(2-3)：(4-6)复合的菌液，与饲料混合、发酵，然后向发酵后的发酵料中加入由酵母菌、益生菌和光合细菌按体积比(2-3)：(4-6)：(2-3)复合的菌液，进行厌氧发酵而制成；

所述饲料是由麸皮、豆饼粉和蘑菇菌渣按质量比(50-70)：(10-20)：(10-20)混合而成；

所述白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌复合的菌液的加入量为饲料质量的5-15％；

所述酵母菌、益生菌和光合细菌复合的菌液的加入量为饲料质量的6-15％；

所述益生菌为嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌中的一种或多种。

本发明中所用的发酵菌株均可以通过常规的商业途径购买得到。

优选的，本发明中所用的白曲霉菌具体为中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为3.7885的菌株；拟内孢霉菌具体为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC31258的菌株；枯草芽孢杆菌具体为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC21312的菌株。

该多功能菌发酵复合酶饲料的制备方法，步骤如下：

(1)一级种子液的制备：分别刮取白曲霉菌、酵母菌和拟内孢霉菌斜面菌种接种到PDA液体培养基中，培养，分别得到白曲霉、酵母菌和拟内孢霉的一级种子液；将益生菌菌种接种到MRS培养基中，培养，得到益生菌的一级种子液；将光合细菌液体菌种接种到光合细菌培养基培养，得到光合菌的一级种子液；将枯草芽孢杆菌接种到LB培养基中培养，得到芽孢杆菌的一级种子液。

(2)二级种子液的制备：分别将步骤(1)制备的白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌的一级种子液接种到固体发酵培养基中进行培养，分别得到白曲霉菌、拟内孢霉菌和枯草芽孢杆菌的的二级种子液；将酵母菌的一级种子液接种到PDA液体培养基中，培养，得到酵母菌的二级种子液；益生菌菌种的一级种子液接种到MRS培养基中，培养，得到益生菌的二级种子液；将光合细菌采用光合细菌培养基培养，得到光合菌的二级种子液；

(3)将步骤(2)制备的白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌的二级种子液按体积比(1-2)：(2-3)：(4-6)复合，将复合后的菌液接种到由麸皮、豆饼粉和蘑菇菌渣按质量比(50-70)：(10-20)：(10-20)混合而成的饲料中，发酵培养，得发酵料；

(4)将步骤(2)制备的酵母菌、益生菌和光合菌的二级种子液按体积比(2-3)：(4-6)：(2-3)复合，将复合后的菌液接种到步骤(3)的发酵料中，进行厌氧发酵，将发酵产物低温干燥，即得。

步骤(3)中，白曲霉、拟内孢霉和芽孢杆菌的二级种子液复合后的菌液的接种量为饲料质量的5-15％；

步骤(4)中，酵母菌、益生菌和光合菌的二级种子液复合后的菌液的接种量为饲料质量的6-15％；

步骤(3)中，发酵培养条件为：30-34℃，发酵5-7天；

步骤(4)中，厌氧发酵的条件为：36-39℃，发酵5-7天。

本发明的有益效果：

(1)本发明发酵所用的菌株，其中，白曲霉具有高的糖化酶、蛋白酶活性；拟内孢霉能够发酵葡萄糖，同化可溶性淀粉；酵母菌、益生菌和光合菌是适宜饲料发酵的优良菌种，能够协同和促进各菌株的生长、有效抑制饲料中含有的大量杂菌、有害菌的生长繁殖；各菌株之间不存在拮抗作用，而且能够协同产生蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶等，对饲料进行进一步的分解，使其更容易被消化和吸收，而且蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶属于内源性酶，还能增强畜禽的自身消化能力；酵母菌和益生菌复合使用，能够产生乳酸，形成酸性环境，一方面可抑制饲料的腐败，另一方面能够有效的抑制畜禽肠道腐败菌的繁殖，促进有益菌的生长，减少肠道疾病的发生；益生菌和光合菌的复合使用，通过益生菌对畜禽肠道内菌群环境的改善，光合菌对粪便的分解作用，内外协同作用，有效降低了畜禽粪便的异味。

(2)本发明中用于发酵的饲料中含有蘑菇菌渣，通过对蘑菇菌渣肥料的回收利用，降低了肥料的成本，而且绿色环保。

具体实施方式

结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

实施例1：多功能菌发酵复合酶饲料的制备

1.发酵用菌株：

白曲霉为中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为3.7885的菌株；拟内孢霉为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC 31258的菌株；枯草芽孢杆菌为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC 21312的菌株；益生菌为嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌按质量比1:1:1:1混合而成，其中，嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌均可通过购买得到；酵母菌和光合菌为市售产品。

2.培养基：

PDA液体培养基：马铃薯200g去皮，沸水煮半个小时，纱布过滤，加入20g蔗糖或葡萄糖，加水至1000ml，pH自然，121℃20min灭菌。

MRS培养基：蛋白陈10.0g、牛肉膏5.0g、酵母粉4.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0mL、磷酸氢二钾2.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸三铵2.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15.0g、蒸馏水加至1000mL，pH6.5，121℃20min灭菌。

LB培养基：蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠10g，pH7.2，121℃20min灭菌。

光合细菌培养基：醋酸钠1.145g、蛋白胨0.055g、碳酸氢钠0.6g、硫代硫酸钠0.4g、氯化钠0.3g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.05g，pH7.0，121℃20min灭菌。

固体发酵培养基：麸皮55％、红糖6％，均为质量百分比，121℃20min灭菌。

3.制备方法：

(1)一级种子液制备：将白曲霉、酵母菌、拟内孢霉接种到PDA液体培养基中，30℃摇瓶培养3天。益生菌接种到MRS培养基，38℃静止培养4天。光合细菌采用光合细菌培养基，30℃光照静止培养6天。枯草芽孢杆菌采用LB培养基，32℃摇瓶培养18h。

(2)二级种子液制备：将白曲霉、拟内孢霉的一级种子液按体积百分比为5％的接种量接种到固体发酵培养基上，30℃固体发酵4-5天；酵母菌的一级种子液按体积百分比为5％的接种量接种到PDA液体培养基中，30℃培养2-3天，益生菌的一级种子液按体积百分比为5％的接种量接种到MRS培养基，38℃培养；枯草芽孢杆菌的一级种子液按体积百分比为5％的接种量接种到固体发酵培养基上，32℃固体发酵；光合细菌的一级种子液按体积百分比为5％的接种量接种到光合细菌培养基，30℃液体发酵；分别得到上述各株菌的二级种子液。

(3)将白曲霉、拟内孢霉和芽孢杆菌的二级种子液按体积比2：3：5复合，将复合后的菌液接种到由麸皮、豆饼粉和蘑菇菌渣按质量比60：15：15混合而成的饲料中，32℃，发酵培养6天，得发酵料；复合后的菌液的接种量为饲料质量的10％。

(4)将酵母菌、益生菌和光合菌的二级种子液按体积比2：5：3复合，将复合后的菌液按饲料质量的9％接种到步骤(3)的发酵料中，进行厌氧发酵，38℃发酵6天，将发酵产物低温干燥，即得。

(5)发酵后的饲料进行低温(40℃)烘干，装袋。

经发酵后，饲料中的酵母菌和益生菌的活菌数达10亿/克以上。

实施例2：多功能菌发酵复合酶饲料相关指标测检测

对实施例1制备的多功能菌发酵复合酶饲料中粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、游离氨基酸和复合酶等指标进行检测，以未发酵的饲料作为对比，结果见表1-3.

表1发酵前后样品指标检测结果

表2发酵前后样品中游离氨基酸分析

表3发酵前后饲料复合酶分析

由表1-3可以看出，本发明的多功能菌发酵复合酶饲料中粗蛋白和粗脂肪的含量明显提高，多种游离氨基酸的含量也得到提高，而且，淀粉酶、纤维素酶、酸性蛋白酶和木聚糖酶相对于发酵前，也有了显著的提高。

实施例3：多功能菌发酵复合酶饲料除臭效果验证

选择体重为40Kg左右的杜长大健康猪80头，随机分为2组(包括1个试验组和1个对照组)，试验组I给予实施例1制备的多功能菌发酵复合蛋白酶饲料，对照组给予常规的市售猪饲料；各组试验猪分配在同一猪舍以隔板隔开、气体不对流、相对独立、环境一致的2个舍内，每舍均以圈为单位设置4个重复，每个重复10头，试验猪只均自由采食，试验期为30天。

分别于试验前(第0天)、第7天、第14天、第21天、第28天对刚排泄的粪便进行采样，现场将粪便充分混合，样品带回实验室后立即处理，进行硫化物和氨态氮的含量测定。硫化物含量采用碘量法测定，氨态氮含量采用凯氏定氮法测定，结果见表4和表5，其中：

硫化物(氨态氮)含量相对降幅(％)＝[第0天硫化物(氨态氮)含量-第28天硫化物(氨态氮)含量]/第0天硫化物(氨态氮)含量×100％

表4猪粪中硫化物含量的变化情况

表5猪粪中氨态氮含量的变化情况

由表4和表5可以看出，使用实施例1制备的多功能菌发酵复合酶饲料后，生猪粪便中硫化物和氨态氮的含量呈显著下降的趋势，且硫化物含量的相对降幅在45％以上，氨态氮含量的相对降幅在34％以上，明显优于对照组，除臭效果显著。

Claims (7)

1.一种多功能菌发酵复合酶饲料，其特征在于，由白曲霉菌、拟内孢霉菌和枯草芽孢杆菌按体积比1-2:2-3:4-6复合的菌液，与饲料混合、发酵，然后向发酵后的发酵料中加入由酵母菌、益生菌和光合菌按体积比2-3:4-6:2-3复合的菌液，进行厌氧发酵而制成；益生菌为嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌按质量比1:1:1:1混合而成；

所述白曲霉菌为中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为3.7885的菌株；拟内孢霉菌为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC31258的菌株；枯草芽孢杆菌为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC21312的菌株。

2.根据权利要求1所述的多功能菌发酵复合酶饲料，其特征在于，所述饲料是由麸皮、豆饼粉和蘑菇菌渣按质量比50-70:10-20:10-20混合而成。

3.根据权利要求1所述的多功能菌发酵复合酶饲料，其特征在于，所述白曲霉菌、拟内孢霉菌和枯草芽孢杆菌复合的菌液的加入量为饲料质量的5-15％。

4.根据权利要求1所述的多功能菌发酵复合酶饲料，其特征在于，所述酵母菌、益生菌和光合细菌复合的菌液的加入量为饲料质量的6-15％。

5.权利要求1至4任一项所述的多功能菌发酵复合酶饲料的制备方法，其特征在于，步骤如下：

(1)一级种子液的制备：分别刮取白曲霉菌、酵母菌和拟内孢霉菌斜面菌种接种到PDA液体培养基中，培养，分别得到白曲霉、酵母菌和拟内孢霉的一级种子液；将益生菌菌种接种到MRS培养基中，培养，得到益生菌的一级种子液；将光合细菌液体菌种接种到光合细菌培养基培养，得到光合菌的一级种子液；将枯草芽孢杆菌接种到LB培养基中培养，得到芽孢杆菌的一级种子液；

(2)二级种子液的制备：分别将步骤(1)制备的白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌的一级种子液接种到固体发酵培养基中进行培养，分别得到白曲霉菌、拟内孢霉菌和枯草芽孢杆菌的的二级种子液；将酵母菌的一级种子液接种到PDA液体培养基中，培养，得到酵母菌的二级种子液；益生菌的一级种子液接种到MRS培养基中，培养，得到益生菌的二级种子液；将光合细菌采用光合细菌培养基培养，得到光合菌的二级种子液；

(3)将步骤(2)制备的白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌的二级种子液按体积比1-2:2-3:4-6复合，将复合后的菌液接种到由麸皮、豆饼粉和蘑菇菌渣按质量比50-70:10-20:10-20混合而成的饲料中，发酵培养，得发酵料；

(4)将步骤(2)制备的酵母菌、益生菌和光合菌的二级种子液按体积比2-3:4-6:2-3复合，将复合后的菌液接种到步骤(3)的发酵料中，进行厌氧发酵，将发酵产物低温干燥，即得。

6.根据权利要求5所述的多功能菌发酵复合酶饲料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，白曲霉、拟内孢霉和芽孢杆菌的二级种子液复合后的菌液的接种量为饲料质量的5-15％；

步骤(4)中，酵母菌、益生菌和光合菌的二级种子液复合后的菌液的接种量为饲料质量的6-15％。

7.根据权利要求5所述的多功能菌发酵复合酶饲料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，发酵培养条件为：30-34℃，发酵5-7天。