CN101822832A - 一种具有抗肿瘤作用的组合物及其在制备治疗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种具有抗肿瘤作用的组合物及其应用，该组合物是一类由0.01～10重量份数的纯蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮生药和0.01～99.9重量份数的具有抗心律失常作用的药物组成。本发明提供的抗肿瘤作用的组合物，组分之间配比科学合理，且经过多种体外肿瘤细胞毒和在体抑瘤实验表明，本发明提供的组合物具有很好的抗肿瘤效果，组合后起到了协同增效的作用；并且通过心脏毒性实验表明，本发明提供的组合物的心脏毒性明显降低，经组合后可以降低原来单独使用蟾蜍甾烯类化合物、蟾酥或蟾皮所引起的心脏毒性，起到解毒的作用。因此，使用更安全、有效，有望开发成为新一代抗癌药物。

Description

一种具有抗肿瘤作用的组合物及其在制备治疗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种药物，具体设计一种以蟾蜍甾烯类化合物为活性成分的抗肿瘤组合物及其该组合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。

背景技术

恶性肿瘤是死亡率较高的疾病，据统计我国癌症每年新发病例为200万，因癌症死亡人数为140万，我国居民死亡5人中，即有1人死于癌症。目前肿瘤治疗的主要手段有手术、放疗、化疗和生物治疗，以及内分泌治疗等，但是西医治疗存在较严重的不良反应，且价格昂贵。

中药蟾酥是蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥而成。蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍等的皮，异名为蛤蚆皮，癞蟆皮，蟾蜍衣，简称蟾衣，又名蟾壳、蟾蜕，即由二栖动物类脱下之表皮衣。大量的临床实践和国内外的科学研究均表明，中药蟾酥或蟾皮或蟾衣具有确切的抗肿瘤作用，具有良好的新药开发前景，但蟾酥类中药有毒，时有不慎过量使用导致中毒、死亡的报道。蟾酥中含大量的蟾蜍毒素类物质，此类物质属于甾族化合物，为蟾蜍甾烯类(蟾蜍二烯内酯，bufadienolide)，是一类在C-17的β位连接六元不饱和内酯环(α-吡喃酮环)的强心甾类化合物，包括脂蟾毒配基(resibufogenin)、华蟾蜍精(Cinobufagin)、蟾毒灵(Bufalin)、羟基华蟾毒精(cinobufotalin)、蟾毒它灵(Bufotalin)、远华蟾蜍精(Teloeinobufagin)、去乙酰华蟾蜍它灵(Desacetylcinobufotalin)、蟾蜍它里宁(Bufotalinin)、沙蟾蜍精(Arenobufagin)、嚏根草甙元(Hellebrigenin)、日蟾蜍它灵(Gamabufotalin)，蟾蜍二烯内酯化合物与氨基酸或辛二酸或糖分子形成的蟾蜍毒素的一种或几种组成的混合物。蟾蜍甾烯类化合物既是抗肿瘤活性成分同时也是心脏毒性成分。临床和实验表明蟾酥具有心脏和神经系统毒性，以诱发室性心律失常的心脏毒性为主。现代毒理研究表明，蟾酥大剂量则使麻醉猫心率减慢不齐，传导阻滞，心脏停止于收缩期，中毒量蟾蜍甾烯还通过兴奋交感神经系统影响心肌自律性，加剧钙超载，导致瞬间性内向离子流，在动作电位4相期产生“迟后除极”和触发活动，以致心律失常。因此，心脏毒性严重制约着蟾酥类制剂的临床用药安全和新药开发。

中国专利，申请号为02135923.7、02135926.1、02114028.6、01128204.5、01128205.3、92102701.X、93104343.3、94105789.5、94114881.5、94110281.5、96121433.3、98114410.1、98100693.0、97111973.2、00110369.5、00110461.6、98112624.3、99121442.0、98125018.1、2007101984718、200710193175.9、200810050571.0、200310116881.5、03150213.X、02144901.5、200510071081.5、200610042484.1、200610066458.2、200610018348.9、200610043412.9、200810107563.5的专利申请有公开含有蟾酥药材的抗肿瘤组合物，但是上述专利保护了含有多达几十余味药材为特征的用于肿瘤疾病的大处方，并未解决组方中既有活性又有毒性的蟾酥所带来的致命性心脏毒性问题，尤其是上述专利组方中大量使用其它有毒药物，如：马钱子、藤黄、斑蝥、雄黄等可进一步加剧了蟾酥的心脏毒性。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中蟾酥存在致命性心脏毒性问题的不足，提供一种抗肿瘤活性强，且没有心脏毒性的以蟾蜍甾烯类为主要活性物质的组合物。

本发明所述的蟾蜍甾烯类化合物的结构式如下：

式中R1为CHO或CH3；R2为OH或H；R3为OH；R4为H；或R3和R4形成环氧桥；R5为H或OAc。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有抗肿瘤作用的组合物，它由下列重量份数的原料制成：

含有蟾蜍甾烯类化合物的物质0.01～10份，具有抗心律失常作用的药物0.01～99.9份。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤作用的组合物，是由下列重量份数的原料制成：

含有蟾蜍甾烯类化合物的物质1～10份，具有抗心律失常作用的药物1～99.9份。

作为更优的方案，以上所述的具有抗肿瘤作用的组合物，是由下列重量份数的原料制成：

含有蟾蜍甾烯类化合物的物质1～10份，具有抗心律失常作用的药物10～90份。

作为优选方案，以上所述的含有蟾蜍甾烯类化合物的物质可为纯蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮。

本发明所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其中所述的具有抗心律失常作用的药物为具有抗心律失常作用的中药、中药提取物、中药复方、天然产物或化学药品中的一种或多种混合物。

作为优选方案，所述的具有抗心律失常作用的中药为人参、西洋参、黄芪、红景天、灵芝、山楂、薤白或黄杨等补气理气类中药中的一种或几种的混合物或者为人参芍药汤(组方：红参、黄芪、麦冬、五味子、甘草、白芍、当归)、补中益气汤、甘麦大枣汤、瓜蒌薤白半夏汤、逍遥散等补气理气类中药复方中的一种或几种的混合物，以上药物和蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍组合后，抗肿瘤活性仍然较强，但心脏毒性的不良反应明显降低。

作为另一优选方案，所述的具有抗心律失常作用的中药也可为麦冬、薯蓣、五味子、山茱萸、桑寄生或熟地等滋阴类中药中的一种或几种的混合物或者为复脉汤(组方为炙甘草、生姜、桂枝、人参、生地黄、阿胶、麦门冬、麻仁、大枣)加减方、生脉散加减方、五味子汤或六味地黄汤等滋阴类中药复方，经抗肿瘤活性实验筛选和心脏毒性实验研究表明，以上药物和蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍组合后，抗肿瘤活性不变甚至有增强趋势，但心脏毒性明显降低。

作为另一优选方案，以上所述的具有抗心律失常作用的药物也可以为当归、酸枣仁、丹参、三七、赤芍、葛根或银杏等补血、活血类中药中的一种或几种的混合物或者为当归补血汤、归脾汤、酸枣仁汤(组方为酸枣仁、甘草、知母、茯苓、川芎)、龙骨牡蛎汤加味或血府逐瘀汤等补血、活血类中药复方，经抗肿瘤活性实验筛选和心脏毒性实验研究表明，以上药物和蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍组合后，抗肿瘤活性仍然较强，但心脏毒性的不良反应明显降低。

作为另一优选方案，以上所述的具有抗心律失常作用的药物也可以选用金银花、黄连、苦参、山豆根、菊花、黄连解毒汤中的清热解毒类药物或者也可以选用桂枝、肉桂、淫羊藿、桂枝甘草汤中的温阳类药物，经抗肿瘤活性筛选和心脏毒性实验研究，以上药物和蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍组合后，抗肿瘤活性不变甚至有增强趋势，但心脏毒性明显降低。

作为其它优选方案，以上所述的具有抗心律失常作用的药物为胆红素、牛磺酸、小檗碱、槲皮素、芦丁、薯蓣皂苷元、薯蓣皂苷、环维黄杨星D、黄芪皂苷、关附甲素、芍药苷、葛根素、丹参酚酸、银杏内酯、苦参碱、槐果碱、番茄红素、茶多酚等天然产物，经抗肿瘤活性筛选和心脏毒性实验研究，以上药物和蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍组合后，抗肿瘤活性不变甚至有更强，但心脏毒性的不良反应明显降低。

作为进一步优选方案，所述的具有抗心律失常作用的药物为β受体阻断剂、奎尼丁、氯化钾、硫酸镁、苯妥英钠、维拉帕米、尼莫地平、阿托品、利多卡因、普鲁卡因酰胺、异搏停、莫索尼定、西酞普兰、利血平、奥扎格雷化学药品中的一种或多种混合物，经抗肿瘤活性筛选和心脏毒性实验研究，以上药物和蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍组合后，抗肿瘤活性不变或进一步提高，但心脏毒性的不良反应明显降低。

本发明所述的具有抗肿瘤作用的组合物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。作为优选方案，本发明所述的具有抗肿瘤作用的组合物在制备治疗肝癌、胃癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病或肺癌药物中的应用。

以上所述的组合物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用，具体是将本发明提供的组合物和药学上可接受的载体如稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，必要时还可以加入香味剂、甜味剂等制备成注射液、片剂、粉针剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种剂型。

本发明提供的组合物制成片剂时，把组合物和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。本发明提供的组合物制成胶囊剂时把组合物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。本发明提供的组合物制成颗粒剂时，把组合物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。如把本发明提供的组合物制成注射液时，取组合物提取液加入增溶剂，搅拌均匀，80℃加热30分钟，过滤，调节PH值，用垂熔玻璃漏斗或其它滤器过滤至澄明，灌装，在100至115℃灭菌30分钟制成注射液。

有益效果：本发明提供的蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮和具有抗心律失常作用的药物的组合物和现有技术相比具有以下优点：

1、本发明提供的具有抗肿瘤作用的组合物，组成成分的配比经过大量实验筛选得到，组分之间配比科学合理，且经过多种肿瘤细胞毒性和在体抑瘤实验表明，本发明提供的组合物不但具有很好的抗肿瘤效果，且部分组合物的抗肿瘤效果明显比原来单独使用蟾蜍甾烯类化合物、蟾酥或蟾皮的抗肿瘤效果更强，组合后起到了协同增效的作用；并且通过心脏毒性实验表明，本发明提供的组合物的心脏毒性明显比原来单独使用蟾蜍甾烯类化合物、蟾酥或蟾皮的心脏毒性低，因此，经组合后可以降低原来单独使用蟾蜍甾烯类化合物、蟾酥或蟾皮的心脏毒性，起到解毒增效的作用，使用更安全。

2、本发明提供的具有抗肿瘤作用的组合物，实验结果表明对多种肿瘤都具有较强的抑制作用，应用范围广泛，且其中减毒增效的组分可以选用具有抗心律失常作用的中药、中药提取物、中药复方、天然产物或化学药品中的一种或多种混合物，因此本发明提供的组合物，原料易得，可实现工业化大生产。

具体实施方式：

下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1蟾酥与减毒辅药提取物组合对多种肿瘤细胞增殖的抑制活性

采用MTT法检测蟾酥和蟾酥与不同药物的组合物对人胃癌细胞MGC803、人肝癌细胞SMMC7721、人肺癌细胞A549、人白血病细胞HL-60、人宫颈癌细胞SiHa、人卵巢癌细胞A2780、人乳腺癌细胞MCF-7、人前列腺癌细胞PC-3的增殖影响，并以二甲基亚砜作为阴性对照组，以紫杉醇作为阳性对照组，具体实验结果如表1和表2。

表1蟾酥与不同药物的组合物对肿瘤细胞增殖的抑制作用

表2蟾酥与不同药物的组合物对肿瘤细胞增殖的抑制作用

如表1和表2所示，蟾酥在10μg/ml的剂量下，能够显著抑制人胃癌细胞MGC803、人肝癌细胞SMMC7721、人肺癌细胞A549、人白血病细胞HL-60、人宫颈癌细胞SiHa、人卵巢癌细胞A2780、人乳腺癌细胞MCF-7、人前列腺癌细胞PC-3的增殖，其抑制率分别为73.8％、82.6％、62.4％、70.8％、80.7％、86.8％、66.7％、58.4％。蟾酥与不同药物的组合物的抗肿瘤活性与蟾酥单独比较，有不同程度的增加，尤其是蟾酥(10μg/ml)与薯蓣提取物(100μg/ml)的组合，对上述人胃癌细胞MGC803、人肝癌细胞SMMC7721、人肺癌细胞A549、人白血病细胞HL-60、人宫颈癌细胞SiHa、人卵巢癌细胞A2780、人乳腺癌细胞MCF-7、人前列腺癌细胞PC-3的抑制率达到了97.4％、90.5％、95.3％、95.0％、98.2％、98.6％、96.3％和95.9％，其抗肿瘤效果显著优于蟾酥，并且优于对照药物紫杉醇(10μg/ml)的抗癌活性；其它多种单味中药或复方与蟾酥组合后，其抗肿瘤活性在不同瘤株上均有不同程度增加，以上实验结果表明蟾酥与当归、酸枣仁等中药提取液或者人参芍药汤、瓜蒌薤白半夏汤、复脉汤等具有抗心率失常的复方组合后，抗肿瘤效果更好，表明组合物各成分之间具有协同增效的作用。

实施例2蟾蜍甾烯与不同药物组合后对多种肿瘤细胞增殖的抑制活性

采用MTT法检测蟾酥甾烯(脂蟾毒配基、日蟾蜍它灵华蟾蜍精、蟾毒灵、羟基华蟾毒精、蟾毒它灵、远华蟾蜍精、去乙酰华蟾蜍它灵、蟾蜍它里宁、沙蟾蜍精、嚏根草甙元的混合物，下同)和蟾酥甾烯与不同药物的组合物对人胃癌细胞MGC803、人肝癌细胞SMMC7721、人肺癌细胞A549、人白血病细胞HL-60、人宫颈癌细胞SiHa、人卵巢癌细胞A2780、人乳腺癌细胞MCF-7、人前列腺癌细胞PC-3的增殖影响，并以二甲基亚砜作为阴性对照组，以紫杉醇作为阳性对照组，具体实验结果如表3所示。

表3蟾蜍甾烯与不同药物的组合物对肿瘤细胞增殖的抑制作用

由表3抗肿瘤实验结果表明，蟾蜍甾烯(2.5μg/ml)具有与蟾酥(10μg/ml)类似的抗肿瘤作用，能够显著抑制MGC803、SMMC7721、A549、HL-60、SiHa、A2780、MCF-7和PC-3细胞的增殖，其抑制率分别为71.5％、84.3％、64.5％、79.6％、71.1％、89.5％、63.5％、70.1％。蟾蜍甾烯与不同减毒物质组合后抗肿瘤活性有不同程度增加。尤其是蟾蜍甾烯(2.5μg/ml)与薯蓣皂苷(10μg/ml)的组合，对上述肿瘤细胞抑制率分别达到了94.3％、93.3％、84.9％、82.3％、91.4％、95.6％、87.5％和90.3％，抗肿瘤效果显著优于蟾蜍甾烯，且通过实验结果表明该组合物的抗肿瘤效果优于对照药物紫杉醇(10μg/ml)，因此，实验结果也进一步表明蟾蜍甾烯类化合物和不同药物组合后具有协同增效的作用，抗肿瘤活性更强。

实施例3蟾蜍与中药复方的组合物对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用

取小鼠60只，分为6组，每组10只，每只小鼠接种H22荷瘤稀释液0.2ml，然后每天给与蟾酥25mg/kg、蟾酥+当归补血汤25+600mg/kg，蟾酥+人参芍药汤25+1600mg/kg、蟾酥+生脉汤25+500mg/kg、蟾酥+复脉汤25+1000mg/kg，连续给药七天后，处死小鼠剥离各组小鼠H22荷瘤，称量瘤重，计算抑瘤率，具体实验结果如表4所示。

表4、蟾酥与中药复方的组合物对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制情况

药物	剂量(mg/kg)	肿瘤重量(g)	抑瘤率(％)
				模型对照		1.63±0.54
蟾酥	25	0.89±0.32	45.4*
				蟾酥+当归补血汤	25+600	0.64±0.25	60.7**
蟾酥+人参芍药汤	25+1600	0.39±0.20	75.5**
				蟾酥+生脉汤	25+500	0.72±0.16	55.8**
蟾酥+复脉汤	25+1000	0.48±0.28	70.4**

由以上实验结果表明本发明提供的蟾蜍与中药复方组合后，具有更好的抗肿瘤效果，蟾酥在25mg/kg的剂量下，对H22荷瘤小鼠的抑瘤率为45.4％；而蟾酥+当归补血汤、蟾酥+人参芍药汤、蟾酥+生脉汤、蟾酥+复脉汤组对H22荷瘤小鼠的抑瘤率分别为60.7％、75.5％、55.8％和70.4％，均高于较蟾酥组的抑瘤率，实验结果也说明蟾蜍与中药复方组合后同样也可以起到协同增效抗肿瘤的作用。

实施例4蟾蜍甾烯与不同减毒物质组合后对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用

取小鼠80只，分为8组，每组10只，每只小鼠接种H22荷瘤稀释液0.2ml，然后每天给与蟾酥甾烯5mg/kg、蟾蜍甾烯+黄芪皂苷5+100mg/kg，蟾蜍甾烯+薯蓣皂苷5+100mg/kg，蟾蜍甾烯+牛磺酸5+200mg/kg，蟾蜍甾烯+小檗碱5+100mg/kg，蟾蜍甾烯+苯妥英钠5+40mg/kg，蟾蜍甾烯+薯蓣皂苷+牛磺酸5+100+200mg/kg，连续给药七天后，处死小鼠剥离各组小鼠H22荷瘤，称量瘤重，计算抑瘤率，具体实验结果如表5所示。

表5、蟾蜍甾烯与不同天然产物组合后对H22荷瘤小鼠肿瘤重量的影响

药物	剂量(mg/kg)	肿瘤重量(g)	抑瘤率(％)
				模型对照		1.35±0.24

药物	剂量(mg/kg)	肿瘤重量(g)	抑瘤率(％)
				蟾蜍甾烯	5	0.65±0.32	51.8**
蟾蜍甾烯+黄芪皂苷	5+100	0.45±0.24	66.7**
				蟾蜍甾烯+薯蓣皂苷	5+100	0.29±0.16	78.5**
蟾蜍甾烯+牛磺酸	5+200	0.60±0.26	55.6**
				蟾蜍甾烯+小檗碱	5+100	0.58±0.15	57.1**
蟾蜍甾烯+苯妥英钠	5+40	0.68±0.17	52.3*
				蟾蜍甾烯+薯蓣皂苷+牛磺酸	5+100+200	0.24±0.18	82.2**

由以上表5的实验结果表明，蟾蜍甾烯(5mg/kg)与蟾酥(20mg/kg)具有类似的抗肿瘤效果，对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率为51.8％；而蟾蜍甾烯+黄芪皂苷、蟾蜍甾烯+薯蓣皂苷、蟾蜍甾烯+牛磺酸、蟾蜍甾烯+小檗碱和蟾蜍甾烯+薯蓣皂苷+牛磺酸组的抑瘤率均高于蟾蜍甾烯组，说明这些组合物的抗肿瘤效果优于蟾蜍甾烯，并且蟾蜍甾烯+薯蓣皂苷+牛磺酸的组合物具有更强的抗肿瘤效果。

实施例5蟾皮提取物与减毒物质的组合物对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用

取小鼠40只，分为4组，每组10只，每只小鼠接种H22荷瘤稀释液0.2ml，然后每天给与蟾皮提取物50mg/kg、蟾皮+薯蓣提取物50+300mg/kg、蟾皮+黄芪提取物50+300mg/kg，连续给药七天后，处死小鼠剥离各组小鼠H22荷瘤，称量瘤重，计算抑瘤率，具体实验结果如表6所示。

表6蟾皮提取物与减毒物质组合对H22荷瘤小鼠肿瘤重量的影响

药物	剂量(mg/kg)	肿瘤重量(g)	抑瘤率(％)
				模型对照		1.47±0.57
蟾皮提取物	50	0.92±0.32	37.4
				蟾皮+薯蓣提取物	50+300	0.56±0.25	61.9**
蟾皮+黄芪提取物	50+300	0.69±0.20	53.1**

由以上表6的实验结果表明蟾皮提取物(50mg/kg)较蟾酥(20mg/kg)的抗肿瘤效果弱，抑瘤率为37.4％；而蟾皮提取物+薯蓣提取物、蟾皮提取物+黄芪提取物的抑瘤率达到61.9％和53.1％(表5)，说明这些组合物可以起到协同增效的作用，抗肿瘤效果优于蟾皮提取物。

实施例6蟾酥与不同减毒物质组合后对豚鼠离体心脏的毒性影响

如表7所示，蟾酥诱导豚鼠离体心脏产生心律异常，以蟾蜍甾烯计算(25％得率)，产生致死性心律失常所需的量为32.5±5.0μg；蟾酥与减毒物质共同给予灌流的豚鼠心脏，产生致死性心律失常所需蟾酥的累积剂量显著提高，表明组合物的心脏毒性显著降低，尤其是蟾酥与薯蓣提取物、黄芪提取物、黄连提取物、复脉汤、人参芍药汤、当归补血汤组合后，心脏毒性下降2～3倍，蟾酥与其它减毒物质组合后，心脏毒性均有不同程度降低，实验结果说明蟾酥和薯蓣、西洋参、黄芪、金银花、山茱萸、黄连提取物、复脉汤、人参芍药汤等药物组合后可以大大降低蟾酥的心脏毒性，组合后可以起到减毒的作用，在保证相同或更好的抗肿瘤活性的条件下，心脏毒性更低，更安全。

表7蟾酥及蟾酥与减毒物质组合后对豚鼠离体心脏毒性的比较

实施例7蟾蜍甾烯与减毒物质组合后对豚鼠离体心脏的毒性影响

如表8实验结果所示，蟾蜍甾烯与不同减毒物质组合后给予灌流豚鼠心脏，产生致死性心律失常所需蟾蜍甾烯的累积剂量显著高于蟾蜍甾烯单独灌流，表明组合物的心脏毒性显著降低。其中，蟾蜍甾烯与牛磺酸、薯蓣皂苷、黄芪皂苷、小檗碱和环维黄杨星D组合后，心脏毒性显著下降，毒性约降低2-3倍，蟾蜍甾烯与其它减毒化合物组合后，心脏毒性均有不同程度降低，实验结果也表明，组合后减毒物质可以明显降低蟾蜍甾烯的毒副作用，在保证相同或更好的抗肿瘤活性的条件下，心脏毒性更低。

表8蟾蜍甾烯及蟾蜍甾烯与减毒物质组合后对豚鼠离体心脏的毒性影响

实施例8蟾蜍甾烯与减毒物质的组合物对豚鼠在体心脏毒性

按表9所示剂量灌胃给予蟾蜍甾烯、蟾蜍甾烯与减毒物质的组合物，实验结果表明组合物诱发致死性心率失常所需要的蟾蜍甾烯累积量显著高于单独给予蟾蜍甾烯，尤其是蟾蜍甾烯+薯蓣皂苷+牛磺酸组合物，其诱发致死性心率失常所需蟾蜍甾烯累积量是单独给予蟾蜍甾烯的3.55倍，说明毒性下降3.55倍，因此通过在体心脏毒性研究结果表明，本发明提供的蟾蜍甾烯与减毒物质的组合后，可以显著降低蟾蜍甾烯的心脏毒性。

表9蟾蜍甾烯及蟾蜍甾烯与减毒物质的组合物对豚鼠在体心脏毒性情况

按表10所示剂量灌胃给予蟾蜍甾烯与蟾蜍甾烯和化学药物的组合物，实验结果表明组合物诱发致死性心率失常所需要的蟾蜍甾烯累积量显著高于单独给予蟾蜍甾烯，尤其是蟾蜍甾烯+苯妥英钠组合物，其诱发致死性心率失常所需蟾蜍甾烯累积量是单独给予蟾蜍甾烯的3.2倍，即毒性下降3.2倍。实验结果进一步表明本发明提供的蟾蜍甾烯与具有抗心律失常的化学药物组合后，可以显著降低蟾蜍甾烯的心脏毒性，提高临床用药安全。

表10蟾蜍甾烯及蟾蜍甾烯与化学药物的组合物对豚鼠在体心脏毒性情况

通过以上抗肿瘤活性实验结果表明，本发明提供的蟾蜍甾烯类化合物、蟾酥或蟾皮和其提取物与不同抗心律失常作用中药、中药复方、天然产物或化学药品组合后抗肿瘤活性不减低，甚至有协同增效的作用；且通过离体和在体心脏毒性实验结果表明，蜍甾烯类化合物、蟾蜍或蟾皮和不同中药、中药复方、天然产物或化学药品组合后，可以明显降低单独使用蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮的心脏毒性，起到解毒增效的作用，因此本发明提供的组合物，其抗肿瘤作用更强，心脏毒性更低，有望开发成为新一代抗肿瘤的药物制剂。

Claims (10)

1.一种具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制成：

含有蟾蜍甾烯类化合物的物质0.01～10份，具有抗心律失常作用的药物0.01～99.9份。

2.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，所述的含有蟾蜍甾烯类化合物的物质为纯蟾蜍甾烯类化合物、富含蟾蜍甾烯类化合物的提取物、蟾酥或蟾皮生药。

3.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的药物为具有抗心律失常作用的中药、中药提取物、中药复方、天然产物或化学药品中的一种或多种混合物。

4.根据权利要求3所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的中药为人参、西洋参、黄芪、红景天、灵芝、山楂、薤白或黄杨中的补气理气类中药或人参芍药汤、补中益气汤、甘麦大枣汤、瓜蒌薤白半夏汤、逍遥散中的补气理气类中药复方。

5.根据权利要求3所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的中药为麦冬、薯蓣、五味子、山茱萸、桑寄生或熟地中的滋阴类中药或复脉汤加减方、生脉散加减方、五味子汤或六味地黄汤中的滋阴类中药复方。

6.根据权利要求3所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的药物为当归、酸枣仁、丹参、三七、黄山药、赤芍、葛根或银杏中的补血、理血类中药或当归补血汤、归脾汤、酸枣仁汤、龙骨牡蛎汤加味或血府逐瘀汤中的补血、理血类中药复方。

7.根据权利要求3所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的药物为金银花、黄连、苦参、山豆根、菊花、黄连解毒汤中的清热解毒类药物或者为桂枝、肉桂、淫羊藿、桂枝甘草汤中的温阳类药物。

8.根据权利要求3所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的药物为胆红素、牛磺酸、小檗碱、槲皮素、芦丁、薯蓣皂苷元、薯蓣皂苷、环维黄杨星D、黄芪皂苷、黄芪甲苷、关附甲素、芍药苷、葛根素、丹参酚酸、银杏内酯、苦参碱、槐果碱、番茄红素、茶多酚中的天然产物。

9.根据权利要求3所述的具有抗肿瘤作用的组合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的药物为β受体阻断剂、奎尼丁、氯化钾、硫酸镁、苯妥英钠、维拉帕米、尼莫地平、阿托品、利多卡因、普鲁卡因酰胺、异搏停、莫索尼定、西酞普兰、利血平、奥扎格雷化学药品中的一种或多种混合物。

10.权利要求1至9任一项所述的具有抗肿瘤作用的组合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。