CN101816694A

CN101816694A - 一种紫锥菊口服液及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN101816694A
Application number: CN 201010185585
Authority: CN
Inventors: 郝智慧; 王春元; 贾德强; 王艳玲; 庞云露
Original assignee: QINGDAO CONTINENT BIOTECH CO Ltd
Current assignee: QINGDAO VLAND BIOLOGICAL CO., LTD.
Priority date: 2010-05-28
Filing date: 2010-05-28
Publication date: 2010-09-01
Anticipated expiration: 2030-05-28
Also published as: CN101816694B

Abstract

本发明提供了一种紫锥菊口服液及其制备方法和应用，可以解决现有技术存在的提取有效成分得率低，提取时间长，溶剂使用量大，提取温度较高，有效成分降解多的问题。所述口服液中的菊苣酸含量为3mg/ml-30mg/ml，以紫锥菊为原料，通过粉碎、微波提取、过滤、浓缩、灌装、灭菌工艺制备得紫锥菊口服液，本发明还公开了紫锥菊口服液在提高动物免疫功能方面的应用。本发明以不同浓度的乙醇溶液作为提取溶剂，采用微波辐射辅助提取，有效成分得率高，缩短了提取时间，降低了提取温度，减少了有效成分的降解，减少了提取溶剂的用量，提高了生产效率，节约了生产成本，具有良好的应用和推广前景。

Description

一种紫锥菊口服液及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于植物药制品领域，涉及一种动物免疫增强剂，具体来说，涉及一种紫锥菊口服液及其制备方法和应用。

背景技术

紫锥菊（Echinaceapurpurea）为菊科紫锥菊属多年生草本植物，原产自北美洲的中西部地区，我国部分省市已有引种。是一种免疫促进剂和免疫调节剂，也能抗病毒、抗炎、抗肿瘤、治疗感冒和急慢性上呼吸道感染。研究结果表明，其花及带花枝叶及根中含有大量咖啡酸衍生物、烷基酰胺类、多糖类、生物碱类等物质，咖啡酸衍生物包括菊苣酸、绿原酸、海胆苷、咖啡酒石酸和洋蓟苷等，其中菊苣酸为主要的生理活性成分。研究发现，紫锥菊可促进T淋巴细胞和B淋巴细胞的产生，并增强其活性；增强巨噬细胞的吞噬功能，激活脾细胞并提高其增殖率。紫锥菊在体外可抑制病毒的复制。有资料表明，紫锥菊对微生物感染性的疾病能发挥其优良的生理效应，与抗生素联用能加速严重感染性疾病的痊愈；紫锥菊能通过激活免疫从而达到治疗病毒性感染的目的。与抗生素相比，紫锥菊在使用中不会产生耐药性，无复发，无药物残留，安全性更高。研究结果表明，将紫锥菊添加于鸡饲料中可以提高鸡新城疫和法氏囊疫苗免疫的抗体水平，对新城疫强毒的攻击具有良好的保护能力，也有研究表明紫锥菊散剂内服对肉鸡血浆中总蛋白、白蛋白含量有明显促进作用；将紫锥菊散添加于猪饲料中能提高猪免疫水平，促进仔猪生长发育，提高饲料转化率；紫锥菊能刺激马的免疫活性，提高血红素水平，增加红细胞数量从而提高血液的质量，通过提高生理学参数发挥他们在输氧细胞的作用。以上研究结果证明，紫锥菊是一种良好的动物免疫增强药物。

近些年，国内对紫锥菊的研究仍然较少，对高质量分数紫锥菊制剂的制备大多仍处于基础研究阶段，不适宜于工业化生产，也不利于紫锥菊的深度开发。文献报道的一般制备工艺为将紫锥菊原药材的剪切品或粗粉，加30-90%的乙醇溶液或甲醇溶液加热回流提取或超声提取，这两种方法有效成分得率低，提取时间长，溶剂使用量大，提取温度相对较高，有效成分降解较多，生产效率较低。

微波提取技术是利用微波的热效应对样品及其有机溶剂进行加热，使物质的组织微细结构发生变化，从而将目标组分从样品基体中分离出来的一种新型高效分离技术。与传统提取技术相比，微波提取技术具有提取有效成分得率高，提取时间短，提取温度相对低，溶剂使用量少，提取效率高等多个优点，被誉为“绿色提取技术”，并已成为实现中药现代化的主要关键技术之一。因此如何将微波提取技术应用于制备动物免疫增强剂以发挥其优势则是本发明所面临的课题。

发明内容

本发明提供了一种紫锥菊口服液及其制备方法和应用，可以解决现有技术存在的提取有效成分得率低，提取时间长，溶剂使用量大，提取温度较高，有效成分降解多的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用下述技术方案予以实现，

一种紫锥菊口服液，其中的菊苣酸含量为3mg/ml-30mg/ml。

进一步地，每1ml所述紫锥菊口服液含有原紫锥菊1g-3g。即采用1-3g的紫锥菊制备得1ml口服液。

再进一步地，所述原紫锥菊为紫锥菊药材地上部分，即紫锥菊的茎、叶、花。

更进一步地，所述紫锥菊为紫花紫锥菊（Echinaceapurpurea(L.)Moench.）。

一种紫锥菊口服液的制备方法，包括如下步骤：

（1）紫锥菊的粉碎：将水分含量≤12.0%的紫锥菊药材地上部分粉碎，过60-80目筛得紫锥菊粉末；

（2）乙醇溶液微波提取：将重量百分比浓度为50-80%的乙醇溶液以1︰5-1︰20的料液比与紫锥菊粉末混合，浸泡20-50分钟，微波提取1-3次，过滤并收集滤液和残渣；将残渣以1：3-1:10的料液比与重量百分比浓度为10-30%的乙醇溶液混合，微波提取1次，过滤并收集滤液，合并上述滤液；上述微波提取条件：微波辐射频率为2400-2500MHz，提取温度为30-80℃，每次提取时间为5-30分钟；

（3）浓缩：将上述所得滤液在40-60℃下减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.03-1.10；

（4）将上述浓缩液加适量的对羟基苯甲酸乙酯，充分溶解，调节药液的pH值至4.0-6.0；

（5）药液静置过夜，用微孔滤膜过滤；

（6）加蒸馏水适量，灌装，即得紫锥菊口服液。

本发明的紫锥菊口服液的制备方法包括紫锥菊的粉碎、微波提取、过滤、浓缩、灌装和灭菌步骤，按照四因素三水平L₉（3⁴）的正交实验，选择和优化乙醇浓度、提取温度、提取时间和料液比提取参数，提高了有效成分提取效率和选择性。本发明可以有效的提高有效成分的提取得率，缩短提取时间，提高提取效率，减少有效成分的降解，该制备方法适合于紫锥菊的工业化生产。

上述紫锥菊口服液在制备动物免疫增强剂及各种细菌性、病毒性疾病药物方面的应用。

本发明紫锥菊口服液用于提高动物免疫功能，适用于免疫功能低下动物，提高疫苗免疫效果，配合其他药物治疗各种细菌性、病毒性疾病。

本发明提供一种提取效率高，产品安全性高，提高免疫功能效果好的动物免疫增强剂紫锥菊口服液及其制备方法和应用。

临床试验结果显示，本发明的紫锥菊口服液增强鸡新城疫疫苗免疫效果良好。其用法用量为：

（1）预防疾病混饮：每100L水，紫锥菊口服液用量：鸡100ml；猪500-1000ml，连用10天。

（2）治疗疾病混饮：每100L水，紫锥菊口服液用量：鸡200ml；猪1500-2500ml，连用5天。

（3）治疗疾病内服：每只猪灌服9-20ml紫锥菊口服液。日服三次，3-5天为一个疗程。

下面结合试验方法来说明本发明方法的合理性。

（1）提取溶剂对菊苣酸含量的影响试验

精密称取紫锥菊粉50g共9份，在控制提取温度为70℃，料液比为1：10的条件下，以不同浓度（0-100%）的乙醇溶液为提取溶剂，进行微波辅助提取3次，微波辐射频率为2400-2500MHz，每次提取时间为10分钟，过滤，回收乙醇，浓缩至40ml，至50ml容量瓶中，加中蒸馏水至刻度处，摇匀，取适量测定浓缩液中菊苣酸含量。结果见图1。

图1实验结果显示，在控制提取温度为70℃，料液比为1：10的条件下，以70%的乙醇溶液为提取溶剂的提取物中菊苣酸含量最高。

浓缩液中菊苣酸含量测定方法

色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：色谱柱：ZORBAXEclipsePlusC18(4.6×250μm，5μm)；流动相：甲醇：0.03%磷酸（35：65）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；进样量：10μl；检测波长：327nm。理论塔板数按菊苣酸峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备：精密称取菊苣酸对照品适量，加70%甲醇制成0.128mg/ml的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取本品1ml，置100ml容量瓶中，加10%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

测定方法：分别依次精密吸取菊苣酸对照品初溶液、系列对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。含量以每1ml浓缩液定容后的溶液中的菊苣酸毫克数计。

（2）微波提取的正交试验

精密称取紫锥菊粉50g，按照表2、表3设计的乙醇浓度、提取温度、提取时间和料液比进行微波辅助提取，每份药材提取3次，微波辐射频率为2400-2500MHz，合并提取液，过滤，回收乙醇，浓缩至40ml，至50ml容量瓶中，加中蒸馏水至刻度处，摇匀，精密移取10ml，置于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30分钟，称定重量，计算干膏收率。并按照（1）试验所示方法测定浓缩液中的菊苣酸含量，结果见表4：

表2因素水平表

表3正交试验表

表3 微波提取正交实验结果

极差分析：以干膏得率为考察指标，其影响顺序分别为：A>D>B>C，可见A因素为最主要的因素，即乙醇浓度对干膏得率的影响最大，其他因素影响较小；以菊苣酸含量为考察指标，其影响顺序为：A>B>D>C，由此可见影响菊苣酸含量的主要提取因素为A，即乙醇浓度对菊苣酸含量的影响较大，其他因素影响相对较小。

表4 干浸膏方差分析结果

方差来源	离差平方和	自由度	均方	F	显著性
						A	3.227	2	1.613	484.00	（p＜0.05）
B	0.020	2	0.010	3.00	（p＞0.05）
						D	0.087	2	0.043	13.00	（p＞0.05）
误差C	0.007	2	0.003	——

表5 菊苣酸含量方差分析结果

方差来源	离差平方和	自由度	均方	F	显著性
						A	0.223	2	0.111	8.145	（p＞0.05）
B	0.063	2	0.032	2.321	（p＞0.05）
						D	0.062	2	0.031	2.277	（p＞0.05）

误差C

0.027

2

0.014

—

方差分析：将实验所得数据用SPSS统计软件进行方差分析，结果见表4和表5。方差分析结果表明：以干膏得率为考察指标，A因素有显著意义(P<0.05)，B因素、C因素和D因素的影响均无显著性意义(P>0.05)，正交试验的最佳组合为A2B2C1D3；以菊苣酸含量为考察指标，4个影响均无显著性意义(P>0.05)，正交试验的最佳组合为A2B2C3D3。结合极差分析结果，以菊苣酸为指标成分，提取紫锥菊最佳的微波提取法为：以70%乙醇溶液为提取溶剂，提取3次，料液比为1：10，提取温度60℃，每次提取时间15分钟。

（3）微波提取法与加热回流提取法、超声波提取法的比较

精密称取紫锥菊粉50g各3份，分别按照表6不同提取方法进行提取，每份药材提取3次，合并提取液，过滤，按照（1）试验所示方法测定并计算干膏得率和浓缩液中的菊苣酸含量，结果见表6：

表6不同提取方法提取效果的比较

项目	微波提取法	加热回流提取法	超声波提取法
				提取方法	以70%乙醇溶液为提取溶剂，微波辐射提取3次，辐射频率为2400-2500MHz，料液比为1：10，提取温度60℃，每次提取时间15分钟。	以70%乙醇溶液为提取溶剂，提取3次，料液比为1：10，提取温度60℃，每次提取时间15分钟。	以70%乙醇溶液为提取溶剂，提取3次，料液比为1：10，超声波频率40kHz，提取温度60℃，每次提取时间15分钟。
干膏得率/%	13.2	13.5	12.4
				菊苣酸含量/mg/ml	5.23	3.26	4.94

由实验结果可以看出，采用微波提取法提取紫锥菊，菊苣酸含量高于加热回流提取法和超声波提取法。

综合以上试验结果，结合生产成本考虑，紫锥菊最佳的微波提取条件为：以70%乙醇溶液为提取溶剂，微波辅助提取2-3次，微波辐射频率为2400-2500MHz，料液比为1：5-1：10，提取温度40-60℃，提取时间为5-15分钟。考虑到紫锥菊所含多酚类成分、烷基酰胺类成分和多糖及糖蛋白等均有免疫增强作用，对经70%乙醇微波提取后得到的紫锥菊药渣用20-40%乙醇微波提取一次，过滤，与70%乙醇提取所得滤液混合，减压回收乙醇，浓缩至一定程度，加适量对羟基苯甲酸乙酯，静置过夜，过滤，加适量蒸馏水，灌装，灭菌即得。

本发明采用微波辅助提取技术从紫锥菊植物提取有效成分的工艺方法和所得到的产品与现有提取技术和产品相比，具有以下优点和显著的效果：

1、提取温度低，有效成分降解少，得率高：微波提取紫锥菊药材的温度可控制在40-80℃，对紫锥菊的最佳提取温度为40-60℃，最佳提取时间为5-15分钟，有效避免菊苣酸等对热不稳定、易水解或氧化等成分的破坏，有效成分的得率比加热回流提取法和微波提取法有效成分的得率高5%-15%，且大大降低能耗。

2、缩短提取时间：微波提取紫锥菊在5-15分钟即可获得最佳提取率，提取时间较常规方法缩短50%-90%，提高了提取效率。

3、溶剂用量少：微波提取溶剂使用量是常规方法的40-70%，节省了溶剂的使用量和浓缩时的耗能、耗时，对减轻环境污染意义重大。

4、本发明所得制剂，增强免疫活性和临床疗效可靠，同时，采用口服或混水饮用的给药方式，使用方便，操作简单，药物分散度大，易吸收，生物利用度高，奏效快，药效好，适合在养殖生产中应用。

本发明公开了一种紫锥菊口服液及其制备方法，以紫锥菊为原料，通过粉碎、微波提取、过滤、浓缩、灌装、灭菌工艺制备，同时公开了紫锥菊口服液在提高动物免疫功能方面的应用。本发明以不同浓度的乙醇溶液作为提取溶剂，采用微波辐射辅助提取，有效成分得率高，缩短了提取时间，降低了提取温度，减少了有效成分的降解，减少了提取溶剂的用量，提高了生产效率，节约了生产成本，具有良好的应用和推广前景。

附图说明

图1是提取溶剂中乙醇浓度对菊苣酸含量的影响试验结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

先将水分含量≤12.0%的紫锥菊药材粉碎，过80目筛，称取1000g；加8000ml70%的乙醇溶液与紫锥菊粉末混合，浸泡30分钟，微波提取2次，微波辐射频率为2400-2500MHz，提取温度为60℃，每次提取时间为10分钟，过滤并收集滤液和残渣；将残渣以1：5的料液比与20%的乙醇溶液混合，微波提取1次，微波频率为2400-2500MHz，提取时间为10分钟，提取温度为60℃，过滤，并收集滤液，合并上述滤液；将滤液在40℃下减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.04左右，加适量的对羟基苯甲酸乙酯，充分溶解，用一定浓度的酸调节药液的pH值至4.0；药液静置过夜，用微孔滤膜过滤；加蒸馏水适量至1000ml，灌装，超声波灭菌，即得紫锥菊口服液。

本品为棕红色澄明液体，生药含量为每1ml药液含紫锥菊1g，相对密度为1.03，经高效液相色谱法检测，菊苣酸含量为5.24mg/ml。

实施例2

先将水分含量≤12.0%的紫锥菊药材粉碎，过80目筛，称取1000g；加10000ml70%的乙醇溶液与紫锥菊粉末混合，浸泡30分钟，微波提取2次，微波辐射频率为2400-2500MHz，提取温度为60℃，每次提取时间为15分钟，过滤并收集滤液和残渣；将残渣以1：5的料液比与20%的乙醇溶液混合，微波提取1次，微波频率为2400-2500MHz，提取时间为10分钟，提取温度为60℃，过滤，并收集滤液，合并上述滤液；将滤液在40℃下减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.03左右，加适量的对羟基苯甲酸乙酯，充分溶解，用一定浓度的酸调节药液的pH值至4.5；药液静置过夜，用微孔滤膜过滤；加蒸馏水适量至1000ml，灌装，超声波灭菌，即得。

本品为棕红色澄明液体，生药含量为每1ml药液含紫锥菊1g，相对密度为1.03，经高效液相色谱法检测，菊苣酸含量为5.30mg/ml。

实施例3

先将水分含量≤12.0%的紫锥菊药材粉碎，过80目筛，称取2000g；加20000ml70%的乙醇溶液与紫锥菊粉末混合，浸泡30分钟，微波提取2次，微波辐射频率为2400-2500MHz，提取温度为60℃，每次提取时间为10分钟，过滤并收集滤液和残渣；将残渣以1：5的料液比与30%的乙醇溶液混合，微波提取1次，微波频率为2400-2500MHz，提取时间为10分钟，提取温度为60℃，过滤，并收集滤液，合并上述滤液；将滤液在40℃下减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10左右，加适量的对羟基苯甲酸乙酯，充分溶解，用一定浓度的酸调节药液的pH值至4.0；药液静置过夜，用微孔滤膜过滤；加蒸馏水适量至1000ml，灌装，超声波灭菌，即得。

本品为棕红色澄明液体，生药含量为每1ml药液含紫锥菊2g，相对密度为1.08，经高效液相色谱法检测，菊苣酸含量为10.22mg/ml。

实施例4

上述实施例2所得紫锥菊口服液增强雏鸡免疫功能试验

180只10日龄蛋公鸡，随机分为6组，每组30只，即紫锥菊口服液高剂量组（0.2%）、紫锥菊中剂量组（0.1%）、紫锥菊低剂量组（0.05%），药物对照组（盐酸左旋咪唑-黄芪多糖可溶性粉0.1%混饮），疫苗对照组（不用药）和健康对照组（不用药），连续用药10天。除健康对照组外，10日龄用新城疫IV系苗滴鼻点眼免疫，2头份/只，21日龄开始重复以上用药，24日龄进行二免。通过鸡新城疫HI抗体效价和对鸡外周血淋巴细胞增殖、转化的影响(MTT法)评价紫锥菊口服液增强免疫的效果。

1、鸡新城疫HI抗体效价影响试验分别于7、17、24、32、29日龄每组选10只鸡采血，分离血清做新城疫HI抗体效价测定，具体方法见紫锥菊口服液增强雏鸡免疫功能的临床用药剂量筛选试验。

2、对鸡外周血淋巴细胞增殖、转化的影响(MTT法) 分别于17、24、32、39日龄每组选10只鸡颈静脉采血，进行淋巴细胞转化率测定，具体方法如下：

（1）注射器超净台内吸抗凝剂0.5ml，无菌采血3ml，吸Hank’s液3ml混匀；

（2）离心管内加淋巴细胞分离液3ml，小心将血叠加在分离液上，2000rpm离心10-15min；

（3）用枪头吸取白膜层加入另一离心管中，加Hank’s液，1500r/min离心2-5min，倒掉上清夜，洗两次；

（4）用RPMI-1640重悬细胞，30min内测活计数，调整细胞浓度为5×10⁶个/ml；

（5）将细胞悬液加入到96孔细胞培养板中，80μL/孔，每孔再加20μLConA，每个样品重复4孔，并设RPMI-1640空白孔调零即无细胞孔；

（6）置于37℃、5%CO₂培养箱中培养44h；

（7）取出培养板，每孔加MTT20μL，继续培养4h；

（8）取出培养板，每孔加裂解液100μL，将细胞板置于微量振荡器上振荡5min使沉淀完全溶解；

（9）10min内在酶标仪上检测570nm处的吸光值(OD₅₇₀)，作为T淋巴细胞转化的指标。

数据用平均数±标准差表示，用SPSS软件进行统计分析，HI抗体效价采用方差分析和LSD法多重比较，成活率用x²检验。

试验结果：

新城疫HI抗体效价（log2）

组别	7日龄	17日龄	24日龄	32日龄	39日龄
						低剂量组	2.9±0.8^a	4.5±0.4^b	6.1±0.6^b	7.0±0.8^bc	7.2±0.9^bc
中剂量组	3.0±0.7^a	5.2±0.9^ab	7.3±0.5^a	8.0±1.2^a	8.8±0.7^a
						高剂量组	2.7±0.8^a	5.6±0.7^a	7.1±1.2^a	7.8±1.3^a	8.6±1.0^a
药物对照组	2.5±0.5^a	4.8±1.4^ab	6.6±0.4^ab	7.7±0.7^ab	8.0±0.8^ab
						疫苗对照组	2.5±0.7^a	4.2±0.8^b	5.1±0.5^c	6.0±0.6^d	7.0±0.8^c
健康对照组	2.7±0.7^a	2.3±0.6^c	1.9±0.6^d	1.5±1.2^e	1.2±0.6^d

由上表可见，免疫前各组间新城疫HI抗体效价差异不显著（p＞0.05）；在以后的4次检测中，紫锥菊高、中剂量组均显著高于疫苗对照组（p＜0.05），与药物对照组差异不显著（p＞0.05），说明采用0.1%、0.2%的浓度服用紫锥菊口服液对提高鸡抗体滴度效果较好。

鸡淋巴细胞增殖转化变化(OD ₅₇₀ )

组别	17日龄	24日龄	32日龄	39日龄
					低剂量组	0.53±0.02^ab	0.50±0.01^b	0.45±0.03^c	0.36±0.02^c
中剂量组	0.55±0.03^a	0.53±0.02^a	0.52±0.01^a	0.41±0.01^a
					高剂量组	0.53±0.01^ab	0.53±0.01^a	0.50±0.01^b	0.40±0.02^ab
药物对照组	0.54±0.02^ab	0.51±0.02^ab	0.47±0.03^bc	0.38±0.01^bc
					疫苗对照组	0.49±0.03^c	0.38±0.03^c	0.31±0.02^d	0.31±0.01^d

试验结果显示，32日龄时，第3组显著高于其余各组（p＜0.05），紫锥菊低剂量组与药物对照组差异不显著（p＞0.05）；39日龄时，紫锥菊高剂量组显著高于药物对照组和疫苗对照组（p＜0.05）。以上结果表明，将紫锥菊以0.1%和0.2%的浓度混水饮用，对提高鸡外周血淋巴细胞增殖转化率效果较好，其中效果最好的为紫锥菊中剂量组，即混水饮用浓度为0.1%。

整个试验期内，各组鸡均无死亡情况。

以上试验结果表明，采用本发明方法制备的紫锥菊口服液提高新城疫疫苗免疫效果可靠。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims

1.一种紫锥菊口服液，其特征在于所述口服液中的菊苣酸含量为3mg/ml-30mg/ml。

2.根据权利要求1所述的紫锥菊口服液，其特征在于每1ml所述紫锥菊口服液含有原紫锥菊1g-3g。

3.根据权利要求2所述的紫锥菊口服液，其特征在于所述原紫锥菊为紫锥菊药材地上部分，即紫锥菊的茎、叶、花。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的紫锥菊口服液，其特征在于所述紫锥菊为紫花紫锥菊Echinaceapurpurea(L.)Moench.。

5.一种权利要求1所述的紫锥菊口服液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）紫锥菊的粉碎：将水分的重量百分含量≤12.0%的紫锥菊药材地上部分粉碎，过60-80目筛得紫锥菊粉末；

（2）乙醇溶液微波提取：将重量百分比浓度为50-80%的乙醇溶液以1︰5-1︰20的料液比与紫锥菊粉末混合，浸泡20-50分钟，微波提取1-3次，过滤并收集滤液和残渣；将残渣以1:3-1:10的料液比与重量百分比浓度为10-30%的乙醇溶液混合，微波提取1-3次，过滤并收集滤液，合并上述滤液；上述微波提取条件：微波辐射频率为2400-2500MHz，提取温度为30-80℃，每次提取时间为5-30分钟；

（4）将上述浓缩液加适量的对羟基苯甲酸乙酯，使其浓度达到0.03-0.5%，充分溶解，调节药液的pH值至4.0-6.0；

（5）药液静置过夜，用0.22-0.45μm的微孔滤膜过滤；

（6）加蒸馏水适量，灌装，即得紫锥菊口服液。

6.一种权利要求1所述紫锥菊口服液在制备动物免疫增强剂及各种细菌性、病毒性疾病药物方面的应用。