CN115886126A - 基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于饲料添加剂技术领域，公开了一种基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂、制备方法及应用，基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂由100％的紫锥菊提取物组成。高海拔低氧地区动物饲料按照质量份数由苜蓿20‑25份、麦麸15‑20份、蚯蚓粉15‑20份、青稞10‑15份、油菜粕8‑10份、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂8‑10份以及复合维生素5‑8份组成。本发明的饲料添加剂中添加菊苣酸，能够抑制动物心肌组织ROS活性，增强其抗氧化能力、线粒体功能及能量代谢水平，起到心肌保护作用。本发明的饲料添加剂能够适用于高海拔低氧地区，可以保护高海拔低氧地区的动物的心肌组织。
Description
技术领域
本发明属于饲料添加剂技术领域，尤其涉及一种基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂、制备方法及应用。
背景技术
目前，高海拔地区自然环境特殊，空气中氧气含量随着海拔高度的升高而降低，一般认为海拔2500m以上的地区为低氧环境。当机体受到低氧刺激时，体内氧化与抗氧化系统失衡，氧化中间产物如ROS等大量产生，导致脂质过氧化、线粒体功能损伤、细胞凋亡等，进而威胁机体生命活动健康。心脏是对缺氧反应敏感的器官之一，增强心脏的功能及低氧适应能力，可为高海拔低氧地区动物机体生命活动的维持提供更有利的保障。因此，开发出有效的动物心肌保护饲料添加剂显得极为重要。
菊苣酸又称二咖啡酰酒石酸，是一种咖啡酸类衍生物，主要存在于紫锥菊等植物中，是一种天然的免疫活性成分。众多研究表明，菊苣酸具有增强免疫、抗炎、抗病毒、抗氧化等作用。现有技术1表明，菊苣酸是一种有效的ROS清除剂，可通过减少氧化应激条件下的ROS积累，发挥抗氧化损伤作用。现有技术2表明，菊苣酸可促进SOD、CAT活性，起到抗氧化作用。
然而现有的动物饲料添加剂都不具备保护心肌的功能，同时不适用于高海拔低氧环境中。
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术未见有菊苣酸饲料添加剂，同时现有的添加剂不具备对动物心肌保护的功能；现有技术没有针对高海拔低氧环境的动物的饲料添加剂。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂及其制备方法。
本发明是这样实现的，一种基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂，所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂按照质量份数由紫锥菊提取物组成。
进一步，所述紫锥菊提取物为菊苣酸。
本发明的另一目的在于提供制备所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂的方法，所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂制备方法包括：
步骤一，对紫锥菊进行清洗后再利用烘干装置进行烘干处理，并利用粉碎装置对紫锥菊进行粉碎，得到紫锥菊粉末；
步骤二，向得到的紫锥菊粉末中加入10倍量的去离子水，并进行蒸馏，过滤，得到初次滤液与滤渣；
步骤三，向滤渣中加入8倍量的乙醇溶液浸泡15分钟，利用微波提取装置进行微波提取，过滤得到二次滤液与滤渣；
步骤四，对所述二次滤液利用大孔树脂吸附回收乙醇，吸附后的二次滤液与初次滤液混合得到混合液；对所述混合液进行减压蒸发得到基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂。
进一步，所述微波提取包括：于1800MHz、65℃下提取30分钟。
进一步，所述乙醇浓度为75％。
本发明的另一目的在于提供一种添加有如权利要求1-2任意一项所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂的高海拔低氧地区动物饲料。
进一步，所述高海拔低氧地区动物饲料按照质量份数由苜蓿20-25份、麦麸15-20份、蚯蚓粉15-20份、青稞10-15份、油菜粕8-10份、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂8-10份以及复合维生素5-8份组成。
本发明的另一目的在于提供一种制备如权利要求7所述高海拔低氧地区动物饲料的方法，其特征在于，所述高海拔低氧地区动物饲料的制备方法包括：
按比例称取苜蓿、麦麸、蚯蚓粉、青稞、油菜粕、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂以及复合维生素，利用粉碎装置分别对苜蓿、麦麸、蚯蚓粉、青稞、油菜粕、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂以及复合维生素进行粉碎、过筛、搅拌、造粒得到高海拔低氧地区动物饲料。
进一步，所述过筛包括：过20-30目筛。
本发明的另一目的在于提供一种如权利要求1-2任意一项所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂在用于保护动物心肌的动物保健品中的应用。
结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明的饲料添加剂中添加菊苣酸，能够抑制动物心肌组织ROS活性与积累，增强其抗氧化能力、线粒体功能及能量代谢水平，起到心肌保护作用。本发明的饲料添加剂能够适用于高海拔低氧地区，可以保护高海拔低氧地区的动物的心肌。
本发明添加的菊苣酸是一种天然植物提取物，不仅能够缓解低氧对动物心肌组织损伤，同时能够有效缓解低氧对动物氧化应激的作用。
附图说明
图1是本发明实施例提供的CA对SD大鼠心肌组织ROS活性的影响示意图。
图2是本发明实施例提供的对照组、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg组的MDA含量对比示意图。
图3是本发明实施例提供的对照组、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg组的SOD活性对比示意图。
图4是本发明实施例提供的对照组、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg组的GSH-px活性对比示意图。
图5是本发明实施例提供的对照组、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg组的CAT活性对比示意图。
图6是本发明实施例提供的对照组、10mg/kg组、20mg/kg、40mg/kg组的呼吸链复合体Ⅰ活性对比示意图。
图7是本发明实施例提供的对照组、10mg/kg组、20mg/kg、40mg/kg组的呼吸链复合体Ⅲ活性对比示意图。
图8是本发明实施例提供的对照组、10mg/kg组、20mg/kg、40mg/kg组的Na+K+-ATP酶活性对比示意图。
图9是本发明实施例提供的对照组、10mg/kg组、20mg/kg、40mg/kg组的Ca2+-ATP酶活性对比示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂，下面结合附图对本发明作详细的描述。
本发明实施例提供的基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂按照质量份数由紫锥菊提取物组成。
本发明实施例提供的紫锥菊提取物为菊苣酸。
本发明实施例提供的紫锥菊提取物含4％的菊苣酸。
本发明实施例提供的含4％的菊苣酸由2％-2.2％的菊苣酸、1％-1.5％的咖啡酸、0.5％-1％的绿原酸以及0.3％-0.5％的紫锥菊甙组成。
本发明实施例提供的基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂制备方法包括：
步骤一，对紫锥菊进行清洗后再利用烘干装置进行烘干处理，并利用粉碎装置对紫锥菊进行粉碎，得到紫锥菊粉末；
步骤二，向得到的紫锥菊粉末中加入10倍量的去离子水，并进行蒸馏，过滤，得到初次滤液与滤渣；
步骤三，向滤渣中加入8倍量的75％的乙醇溶液浸泡15分钟，利用微波提取装置于1800MHz、65℃下提取30分钟，过滤得到二次滤液与滤渣；
步骤四，对所述二次滤液利用大孔树脂吸附回收乙醇，吸附后的二次滤液与初次滤液混合得到混合液；对所述混合液进行减压蒸发得到基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂。
本发明实施例提供的高海拔低氧地区动物饲料按照质量份数由苜蓿20-25份、麦麸15-20份、蚯蚓粉15-20份、青稞10-15份、油菜粕8-10份、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂8-10份以及复合维生素5-8份组成。
本发明实施例提供的高海拔低氧地区动物饲料的制备方法包括：
按比例称取苜蓿、麦麸、蚯蚓粉、青稞、油菜粕、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂以及复合维生素，利用粉碎装置分别对苜蓿、麦麸、蚯蚓粉、青稞、油菜粕、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂以及复合维生素进行粉碎、过20-30目筛、搅拌、造粒得到高海拔低氧地区动物饲料。
本发明实施例提供的验证基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂的效果的方法如下：
试验选取60只健康雄性SD大鼠(6～8周龄，192±7.35g)(P<0.05)，适应性喂养2周后，随机分为对照组、不同浓度CA组(10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg)，每组15只，连续灌胃49d。
灌胃第50d采集SD大鼠心脏，并测定各组大鼠心肌组织活性氧(ROS)，抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、过氧化物酶(CAT)活性，线粒体功能相关指标线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性及能量代谢相关指标Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。(结果)结果表明：与对照组相比，CA显著降低ROS活性(P<0.05)；显著降低MDA含量(P<0.05)，显著提高SOD、GSH-px、CAT活性(P<0.05)；显著提高线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性(P<0.05)；显著提高Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性(P<0.05)。(结论)综上所述，CA可通过抑制SD大鼠心肌组织ROS活性，增强其抗氧化能力、线粒体功能及能量代谢水平，起到心肌保护作用，且以40mg/kg组作用最佳。
1材料
1.1试验动物与材料
60只健康雄性SD大鼠(6～8周龄，192±7.35g)(P<0.05)，购于青海喜马拉雅动物实验中心有限公司(动物许可证号：SCXK(陕)2018-001)，于河南蒙古族自治县畜牧兽医工作站(海拔3500m，氧浓度13.65％)进行饲养。
紫锥菊提取物——菊苣酸，购于西安锐博生物科技有限公司。成分：菊苣酸含量4％(菊苣酸(2％-2.2％)+咖啡酸1％-1.5％+绿原酸0.5％-1％+紫锥菊甙0.3％-0.5％)，为黄绿色精细粉末。
1.2主要试剂
实验用维持鼠饲料、实验用杨木刨花垫料，购于江苏省协同医药生物工程有限责任公司；0.9％氯化钠注射液，购于石家庄四药有限公司；水合氯醛，购于上海展云化工有限公司；活性氧(ROS)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)测定试剂盒、过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒、超微量Na+K+-ATP酶测试盒、超微量Ca2+-ATP酶测试盒、总蛋白(TP)测定试剂盒，购于南京建成生物工程研究所；线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒、线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒，购于索莱宝科技有限公司。
2方法
2.1低氧环境下SD大鼠饲养试验
将60只SD大鼠于室温21±2℃进行饲养。适应性喂养2周后将SD大鼠随机分为对照组、不同浓度菊苣酸组(10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg)，每组15只。
每天早上9:00对SD大鼠进行灌胃，对照组SD大鼠灌胃0.5mL生理盐水，试验组SD大鼠分别灌胃10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg剂量的CA，并每日称重，四组SD大鼠饲喂基础饲粮条件一致，连续灌胃49d后进行试验。基础饲粮营养水平见表1。
本发明实施例提供的基础饲粮组成：谷物类原材料占比80％，包含玉米，次粉，小麦，苜蓿草，豆粕；动物性蛋白占比10％，包含秘鲁鱼粉，美国鸡肉粉；预混料占比10％，包含动物预料，谷朊粉，碳酸氢钙，石粉，色拉油，饲料级氯化钠，饲料级氯化镁。其营养水平见表1。
表1基础饲粮营养水平
| 营养水平 | 含量(％) |
| 干物质 | 90.00 |
| 粗蛋白 | 18.00 |
| 粗脂肪 | 4.00 |
| 粗纤维 | 5.00 |
| 粗灰分 | 8.00 |
| 钙 | 1.80 |
| 总磷 | 1.20 |
2.2试验样品采集
试验第50d早上9:00，将四组SD大鼠空腹称重，并每组分别随机抽取3只，用10％水合氯醛腹腔麻醉后取出SD大鼠心脏，将心脏表面血液用生理盐水清洗干净，滤纸吸干后置于液氮中保存待检。
2.3SD大鼠心肌组织ROS活性测定
按试剂盒说明书制备SD大鼠心肌组织单细胞悬液，使用DCFH－DA荧光探针，采用荧光酶标仪在激发波长和发射波长分别为500、525nm处检测各组SD大鼠心肌组织中ROS的活性。
2.4SD大鼠心肌组织抗氧化指标测定
取出SD大鼠心肌组织样品自然解冻后，在提前预冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸擦干，称取0.1～0.2g于研钵中，按重量(g)：体积(mL)＝1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10％的组织匀浆。按前述处理制备各组SD大鼠心肌组织匀浆，随后分别按照试剂盒说明书分别采用TBA法于532nm处检测MDA含量，WST-1法于450nm处检测SOD活性，比色法于412nm处检测GSH-px活性，钼酸铵法于405nm处检测CAT含量，考马斯亮蓝法检测组织蛋白浓度。
2.5SD大鼠心肌线粒体功能相关指标测定
称取约0.1g SD大鼠心肌组织，加入1.0mL提取液，用研钵于冰上匀浆。4℃600g离心10min。将上清液移至另一离心管中，4℃11000g离心15min。在上清及沉淀中分别加入1.0mL、0.4mL提取液，超声波破碎，用于复合体Ⅰ、复合体Ⅲ活性测定，并且用于蛋白含量测定。然后采用比色法，按照试剂盒说明书进行各组SD大鼠心肌线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性的检测。
2.6SD大鼠心肌能量代谢相关指标测定
准确称取SD大鼠心肌组织重量，按重量(g)：体积(mL)＝1：9的比例，加入生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500r/min，离心10min，取上清(即10％的匀浆上清液)，再用生理盐水10倍稀释成1％，同时用考马斯亮蓝法检测组织蛋白浓度。随后按照试剂盒说明书进行处理，通过定磷法检测各组SD大鼠心肌组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。
2.7数据分析
试验数据采用统计软件SPSS 21.0软件进行统计分析，采用one－way ANOVA选择Duncan's法进行单因素方差分析，以P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著，采用GraphPadPrism8.0绘图软件进行绘图。
3结果
3.1低氧环境下CA对SD大鼠心肌组织ROS活性的影响
由图2可知，与对照组相比，10mg/kg组显著降低ROS活性(P<0.05)，20mg/kg、40mg/kg组极显著降低ROS活性(P<0.01)；与10mg/kg组相比，40mg/kg组极显著降低ROS活性(P<0.01)；与20mg/kg组相比，40mg/kg组显著降低ROS活性(P<0.05)。
3.2低氧环境下CA对SD大鼠心肌组织抗氧化指标的影响
由图3可知，与对照组、10mg/kg、20mg/kg组相比，40mg/kg组显著降低MDA含量(P<0.05)。图4中，与对照组相比，20mg/kg组显著提高SOD活性(P<0.05)，40mg/kg组极显著提高SOD活性(P<0.01)；与10mg/kg组相比，40mg/kg组显著提高SOD活性(P<0.05)。图5中，与对照组、10mg/kg组相比，20mg/kg、40mg/kg组极显著提高GSH-px活性(P<0.01)；与20mg/kg组相比，40mg/kg组显著提高GSH-px活性(P<0.05)。图6中，与对照组相比，20mg/kg、40mg/kg组极显著提高CAT活性(P<0.01)；与10mg/kg组相比，20mg/kg组显著提高CAT活性(P<0.05)，40mg/kg组极显著提高CAT活性(P<0.01)。
3.3低氧环境下CA对SD大鼠心肌线粒体功能相关指标的影响
由图7可知，与对照组相比，10mg/kg组显著提高呼吸链复合体Ⅰ活性(P<0.05)，20mg/kg、40mg/kg组极显著提高呼吸链复合体Ⅰ活性(P<0.01)。图8中，与对照组相比，不同浓度CA组极显著提高呼吸链复合体Ⅲ活性(P<0.01)；与10mg/kg组相比，20mg/kg、40mg/kg组极显著提高呼吸链复合体Ⅲ活性(P<0.01)。
3.4低氧环境下CA对SD大鼠心肌能量代谢相关指标的影响
由图9可知，与对照组、10mg/kg组相比，40mg/kg组极显著提高Na+K+-ATP酶活性(P<0.01)；与20mg/kg组相比，40mg/kg组显著提高Na+K+-ATP酶活性(P<0.05)。与对照组、10mg/kg组相比，20mg/kg、40mg/kg组显著提高Ca2+-ATP酶活性(P<0.05)。
4讨论
4.1低氧环境下菊苣酸对SD大鼠心肌组织ROS活性的影响
ROS是机体内一类氧的单电子还原物，包括H2O2、O2-等，可参与血管内皮细胞通透性的调节过程。一定量的ROS有利于机体的自身调节，正常环境下，ROS产生后会被相应的自由基清除剂清除，使其在机体内保持稳定的状态。当机体受到低氧等刺激时，组织器官中ROS产生过多导致自由基清除剂不能完全清除而使其大量蓄积，从而引起脂质过氧化、线粒体功能损伤等。本发明结果表明，低氧环境下加入CA后，10mg/kg组ROS活性显著降低(P<0.05)，20mg/kg、40mg/kg组ROS活性极显著降低(P<0.01)。提示低氧可能引起SD大鼠心肌组织ROS过量产生，导致心肌损伤，而CA可通过降低ROS活性起到保护心脏的作用，且40mg/kg组作用效果最好。
4.2低氧环境下菊苣酸对SD大鼠心肌组织抗氧化指标的影响
MDA是脂质过氧化反应的终产物，具有细胞毒性，其含量变化不仅能反映ROS生成量还能间接反映机体低氧损伤的程度。有研究表明，机体发生氧化应激时血清MDA含量升高。SOD是生物体系中抗氧化酶系的主要成员之一，是机体内重要的抗氧化酶，具有特殊的生理活性，可清除体内多余的ROS，拮抗因ROS大量升高对机体造成的损伤。GSH-px、CAT是机体中广泛存在的重要的过氧化物分解酶，亦是反映机体抗氧化能力的关键指标，具有清除ROS的作用。本发明结果表明，与对照组相比，低氧环境下不同浓度CA组显著降低MDA活性(P<0.05)，20mg/kg、40mg/kg组显著提高SOD、GSH-px、CAT活性(P<0.05)。提示低氧可能引起ROS过量产生进而导致SD大鼠心肌组织脂质过氧化损伤，而CA可通过增强SD大鼠心肌组织抗氧化能力，减弱脂质过氧化程度及ROS活性，发挥心肌保护作用，且40mg/kg组作用效果最好。
4.3低氧环境下CA对SD大鼠心肌线粒体功能相关指标的影响
线粒体是组织细胞内氧化磷酸化和ATP产生的主要场所，是心肌细胞最重要的细胞器，在维持心肌正常生命活动方面具有重要作用。线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ是ROS产生的主要部位，长期低氧引起机体内多种抗氧化机制破坏，ROS生成增加导致线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性降低，从而影响线粒体功能。现有研究表明3400m的高海拔环境下应用药物美托洛尔后能通过提高大鼠心肌线粒体呼吸链复合体活性来减弱ROS产生，缓解低氧损伤。现有研究表明中药健脾化痰祛瘀方能增加心肌线粒体呼吸链复合体活性，维持氧化磷酸化的功能，保护心脏。本发明结果表明，与对照组相比，低氧环境下不同浓度CA均可显著提高心肌线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性(P<0.05)。提示低氧可能引起ROS过量产生进而导致SD大鼠心肌线粒体功能障碍，而CA可通过促进线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性抑制ROS产生，改善SD大鼠心肌线粒体功能，保护心脏，与现有研究相符。
4.4低氧环境下CA对SD大鼠心肌能量代谢相关指标的影响
ATP酶主要存在于组织细胞膜及细胞器膜上，是生物膜上的关键蛋白酶。其功能主要是催化ATP水解为ADP和磷酸，并释放能量满足机体生命活动所需。ATP酶主要有：Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶。Na+-K+-ATP酶主要表达于细胞膜，Ca2+-ATP酶在细胞膜和肌浆网均有表达。心肌缺氧时，ATP生成迅速减少，钠泵活性降低，慢钠通道増加，导致细胞内钠离子增多。同时，Ca2+-ATP酶活性受到抑制，使心肌细胞内外钙离子失衡，最终导致心肌损伤。因此，保持Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性能更好的维持细胞内Na+、Ca2+浓度的稳定，起到保护心脏的作用。本发明结果表明，与对照组相比，低氧环境下40mg/kg组极显著提高Na+-K+-ATP酶活性(P<0.01)，20mg/kg、40mg/kg组显著提高Ca2+-ATP酶活性(P<0.05)。提示低氧可能引起SD大鼠心肌组织能量代谢障碍，而CA可通过提高SD大鼠心肌组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性，维持心肌内外离子平衡，改善能量代谢，起到保护心脏的作用，且40mg/kg组作用效果最佳。
综上所述，CA可通过抑制SD大鼠心肌组织ROS活性，增强其抗氧化能力、线粒体功能及能量代谢水平，起到心肌保护作用，且以40mg/kg组作用最佳。为解析CA对SD大鼠心肌保护潜在的影响作用及开发高海拔低氧地区动物心肌保护饲料添加剂提供了一定的理论基础。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂，其特征在于，所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂按照质量分数由100％的紫锥菊提取物组成。
2.如权利要求1所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂，其特征在于，所述紫锥菊提取物为菊苣酸。
3.一种制备如权利要求1-2任意一项所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂的方法，其特征在于，所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂制备方法包括：
步骤一，对紫锥菊进行清洗后再利用烘干装置进行烘干处理，并利用粉碎装置对紫锥菊进行粉碎，得到紫锥菊粉末；
步骤二，向得到的紫锥菊粉末中加入10倍量的去离子水，并进行蒸馏，过滤，得到初次滤液与滤渣；
步骤三，向滤渣中加入8倍量的乙醇溶液浸泡15分钟，利用微波提取装置进行微波提取，过滤得到二次滤液与滤渣；
步骤四，对所述二次滤液利用大孔树脂吸附回收乙醇，吸附后的二次滤液与初次滤液混合得到混合液；对所述混合液进行减压蒸发得到基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂。
4.如权利要求3所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂制备方法，其特征在于，所述微波提取包括：于1800MHz、65℃下提取30分钟。
5.如权利要求3所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂制备方法，其特征在于，所述乙醇浓度为75％。
6.一种添加有如权利要求1-2任意一项所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂的高海拔低氧地区动物饲料。
7.如权利要求6所述高海拔低氧地区动物饲料，其特征在于，所述高海拔低氧地区动物饲料按照质量份数由苜蓿20-25份、麦麸15-20份、蚯蚓粉15-20份、青稞10-15份、油菜粕8-10份、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂8-10份以及复合维生素5-8份组成。
8.一种制备如权利要求7所述高海拔低氧地区动物饲料的方法，其特征在于，所述高海拔低氧地区动物饲料的制备方法包括：
按比例称取苜蓿、麦麸、蚯蚓粉、青稞、油菜粕、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂以及复合维生素，利用粉碎装置分别对苜蓿、麦麸、蚯蚓粉、青稞、油菜粕、基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂以及复合维生素进行粉碎、过筛、搅拌、造粒得到高海拔低氧地区动物饲料。
9.如权利要求8所述高海拔低氧地区动物饲料的制备方法，其特征在于，所述过筛包括：过20-30目筛。
10.一种如权利要求1-2任意一项所述基于高原环境的菊苣酸饲料添加剂在用于保护动物心肌的动物保健品中的应用。
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